TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO
MICROBIOLOGÍA
TEMA: DISEÑO EXPERIMENTAL
IDENTIFICACION DE COCOS POSITIVOS
DOCENTE: MIGUEL ANGEL DIAZ ALDAY
NOMBRE DEL ALUMNO:
LEONEL TRANSITO MONDRAGON - 21320893
GRUPO: IB3
ESPECIALIDAD: INGENIERÍA BIOQUÍMICA
FECHA DE ENTREGA: 17 - ABRIL - 2024
Tabla de contenido
Introduccion ..................................................................................................... 2
Planteamiento Del Problema ............................................................................3
Justificación ......................................................................................................3
Objetivos .......................................................................................................... 4
Materiales ......................................................................................................... 4
Procedimiento ...................................................................................................4
1. Prueba Catalasa ...........................................................................................4
2. Prueba De La Coagulasa .............................................................................5
4. Prueba De Camp ..........................................................................................5
Referencias Bibliograficas ............................................................................... 6
Introduccion
Los cocos Gram positivos tienen en común su forma esférica, su reacción a la
tinción de Gram y la ausencia de endoesporas. La presencia o ausencia de
actividad catalasa es una prueba sencilla que se utiliza para subdividirlas en
varios géneros, por ejemplo Staphylococcus son catalasa-positivos, mientras que
Streptococcus son catalasa-negativos (Murray, Rosenthal, & Pfauer, 2009). Las
cepas de S. pneumoniae son diplococos o cocos en cadenas Gram positivos. En
placas de agar sangre, las colonias de S.pneumoniae aparecen pequeñas,
grisáceas y mucoides, y están rodeadas de una zona verdosa de alfahemólisis (α
hemólisis). Las colonias jóvenes de neumococo y del estreptococo viridans α-
hemolítico aparecen levantadas, después de 24 a 48 horas, el centro de las
colonias de neumococos se vuelve deprimido, mientras las colonias de
estreptococo viridans conservan su apariencia.
La diferenciación entre las cepas de S. pneumoniae y de estreptococo viridans se
completa con las pruebas de optoquina y prueba de solubilidad en bilis: los
neumococos son susceptibles a la optoquina y a la solubilidad en bilis, mientras
los estreptococos viridans no lo son (Perilla, s.f.). Entre los cocos Gram positivos
en sentido amplio se cuentan las bacterias cocoidales del ácido láctico (como
Streptococcus) que pueden obtener energía por fermentación, no contienen
pigmentos hemínicos (con excepciones), y son micro aerotolerantes. Frente a
estos se encuentran los géneros aeróbicos y anaeróbicos facultativos como
Staphylococcus (Schlegel,1992)
Planteamiento Del Problema
Debido a que es muy frecuente la contaminación de medios de cultivo y áreas de
trabajo con microorganismos ambientales, el trabajo en el laboratorio de
microbiología debe controlar las diferentes fuentes de contaminación para evitar
errores en los resultados de los diferentes análisis que se realizan en él, por ello
es necesario asegurar la completa eliminación de todas las formas de vida
microbiana mediante un buen control de calidad llevado a cabo en los procesos
de esterilización.
El paso más importante en la identificación de las bacterias Gram positivas es la
tinción de Gram, que tiene cuatro pasos básicos, pero aun así es complicada la
identificación directa de alguna especie del genero Staphylococcus por lo que son
necesarias las pruebas bioquímicas.
Por esta razón, en última instancia la identificación de las bacterias se basa
principalmente en las diferencias de sus actividades bioquímicas. Cada especie
de bacteria tiene un conjunto bien definido de actividades metabólicas diferentes
de todas las demás especies. Estas “huellas” bioquímicas son propiedades
controladas por las enzimas bacterianas.
Justificación
Las tinciones de Gram son muy útiles para la identificación de microrganismo
Gram positivos, pero existen más pruebas que ayuden para la total identificación
de la bacteria patógena. La identificación bioquímica de microorganismos ofrece
una idea de lo que estos microorganismos son capaces de hacer, siendo posible
la discriminación de diferentes cepas de la misma especie por perfiles
bioquímicos específicos. el género Staphylococcus es no exigente en cuanto a
sus requerimientos nutricionales, por lo tanto, crece en medios de cultivo pobres,
y para seguir adquiriendo conocimiento se realizarán diversas pruebas
bioquímicas para una buena identificación de Gram positivos.
Objetivos
Objetivo General:
Identificar los distintos tipos de cocos gram positivo
Objetivo Especifico:
Conocer las características macroscopicas y microscópicas de los cocos positivos
Aislar e identificar los distintos tipos de cepas que se localicen
Establecer la diferencia de géneros entre cocos
Materiales
Hisotopos
Torundas
Jeringa
Cajas petri
Tubos de ensayo
Matraz elenmeyer
Mechero
Vaso de precipitado
Ligadura
Procedimiento
1. Prueba Catalasa
Consiste en separar la Flia. Micrococacceae (catalasa +) de los Géneros Streptococcus y
Enterococcus (catalasa -). La enzima catalasa descompone el peróxido de hidrógeno
(H2O2) en agua y oxígeno bajo la fórmula 2 H2O2----2 H2O + O2. De esta manera las
bacterias se protegen del efecto tóxico del H2O2, que es un producto final del
metabolismo aerobio de los azúcares.
Procedimiento: Se coloca una gota de H2O2 al 3% sobre un portaobjetos y luego se
transfiere una porción de colonia sobre el H2O2 realizándose una emulsión. En lo posible
debe tomarse la colonia a partir de un medio sin sangre ya que los eritrocitos tienen
actividad de catalasa y pueden falsear los resultados. Esta prueba también puede
realizarse en un aislamiento en tubo, simplemente colocando unas gotas de H2O2
dentro del mismo
2. Prueba De La Coagulasa
Permite separar S.aureus, que posee coagulasa, de las otras especies de estafilococos
que genéricamente se denominan coagulasa negativos
La S.aureus posee dos tipos de coagulasa:
a) Una endocoagulasa o coagulasa ligada o "clumping factor" que está unida a la
pared celular.
b) Una exocoagulasa o coagulasa libre que actúa mediante la activación de un factor
(CRF), formándose un complejo coagulasa-CRF
Test en lámina:
Se emulsionan una o más colonias en una gota de suero fisiológico hasta formar una
suspensión lechosa sobre un portaobjetos. Luego se agrega una gota de plasma
citratado de conejo y se mezclan.
Test en tubo:
Se emulsionan varias colonias en un tubo con 0,5ml de plasma citratado de conejo. Se
incuba a 35º y se chequea la formación del coágulo a las 4 horas. Si es negativo se
reincuba toda la noche y se procede a su lectura a las 18 horas. La lectura a las 4 horas,
es fundamental porque en alguna oportunidad puede suceder que las fibrinolisinas de
S.aureus lisen el coágulo luego de 18 horas de incubación y de esta manera se
produzcan un test falso negativo.
3. Presencia De Desoxirribonucleasa (DNAsa)
Permite diferenciar S.aureus que es la única especie dentro del Género Staphylococcus
que posee DNAsa de las otras especies. Se basa en la presencia de la enzima
termoestable DNAsa que es capaz de clivar los enlaces fosfodiester internos de la
molécula de DNA. Se utiliza un medio sólido que contiene verde de metilo el cual se
combina con DNA altamente polimerizado. Cuan-do la combinación no ocurre, por
acción de la enzima DNAsa, se produce una decoloración del medio.
Procedimiento: Se siembra una colonia de estafilococo en forma de moneda en una
placa de medio sólido que contiene DNA y verde de metilo. Se incuba 18 horas a 35º
4. Prueba De Camp
Separar Str.agalactiae de los demás estreptococos ß-hemolíticos. Se basa en que los
estreptococos del grupo B producen un factor llamado CAMP (factor de monofosfato de
adenina cíclica) que aumenta la zona de hemólisis producida por un estafilococo
productor de ßlisina.
Procedimiento: Se realiza estriando un cultivo de estreptococo ß-hemolítico en forma
perpendicular a una estría de un estafilococo productor de ß-lisina en agar sangre. Se
incuba 18-24 horas a 37ºC
Referencias Bibliograficas
Tortora GJ, Funke BR, Case CL (2007). Introducción a la Microbiología. 9º
Edición. Editorial Médica Panamericana S.A. Buenos Aires.
