PATENTES Y MARCAS

ESPAÑA © Número d e publicación: 2 913 574

(21 Número de solicitud: 202031200

@ Int. CI.:
A61L 27/44 ( 2006 . 01 )

A61L 27/50 ( 2006 . 01 )

© SOLICITUD D E PATENTE A1

(2 i Fecha de presentación: (71 Solicitantes:

02.12.2020 FUNDACIÓN UNIVERSIDAD CATÓLICA DE

VALENCIA SAN VICENTE MÁRTIR (100.0%)
© Fecha de publicación de la solicitud: C/ Quevedo, 2
46001 Valencia (Valencia) ES
02.06.2022
© Inventor/es:
SERRANO AROCA, Ángel;
SERRA AGUADO, Claudio Iván y
LLORENS GÁMEZ, Mar
© Agente/Representante:
ARIZTI ACHA, Monica

(51 Título: ANDAMIO BIODEGRADABLE Y ANTIMICROBIANO PARA INGENIERÍA TISULAR ÓSEA Y

PROCEDIMIENTO PARA SU OBTENCIÓN

(51 Resumen:
La presente invención se engloba dentro de la
producción de andamios, (scaffolds) biodegradables
con aplicación en ingeniería tisular ósea en el
tratamiento, regeneración y recuperación de defectos
óseos. En concreto, la presente invención se refiere a
un andamio biodegradable con estructura porosa con
capacidad ósteoinductora y propiedades mecánicas y
de absorción de agua óptimas para su uso en
ingeniería tisular ósea, que además presenta
actividad antibacteriana para combatir infecciones en
el lugar del defecto óseo a regenerar, incluidas
aquellas causadas por patógenos multiresistentes a
antibióticos. Dicho andamio comprende un cuerpo,
soporte o estructura porosa con forma tridimensional
(3D) constituido a partir de un material polimérico, y
un hidrogel de alginato de calcio y zinc, caracterizado
porque dicho hidrogel de alginato de calcio y zinc se
encuentra integrado en la estructura anterior
recubriendo o rellenando la estructura o cuerpo
poroso de material polimérico y porque el hidrogel de
alginato de calcio y zinc comprende entre 4% a 7% en
peso de iones de zinc y 3% a 6% en peso de iones de
calcio.
 DESCRIPCIÓN

ANDAMIO BIODEGRADABLE Y ANTIMICROBIANO PARAINGENIERIA TISULAR OSEA Y

PROCEDIMIENTO PARASU OBTENCIÓN

Campo de la invención

La presente invención se engloba dentro de la producción de andamios, (scaffolds)

biodegradables con aplicación en ingeniería tisular ósea en el tratamiento, regeneración
y recuperación de defectos óseos. En concreto, la presente invención se refiere a un
andamio biodegradable con estructura porosa con capacidad ósteoinductora y
propiedades mecánicas y de absorción de agua óptimas para su uso en ingeniería
tisular ósea, que además presenta actividad antibacteriana para combatir infecciones
en el lugar del defecto óseo a regenerar, incluidas aquellas causadas por patógenos
multiresistentes a antibióticos. La presente invención comprende igualmente un proceso
para la obtención de dichos andamios con aplicación directa en ingeniería tisular ósea y
el uso de estos andamios como componente de implantes, injertos y sustitutos de
injerto óseo.

Antecedentes

Un defecto óseo es una pérdida de hueso en cualquier parte del cuerpo, donde en
condiciones normales, tendría que estar presente [1]. Los defectos óseos pueden surgir
a partir de anomalías congénitas como una hemimelia fibular [2], o anomalías
adquiridas como fracturas, enfermedades (osteoporosis y osteosarcomas), cirugías
(remoción quirúrgica tumoral) e infecciones [2-8]. Un defecto óseo es crítico cuando,
habiendo una biología adecuada, hay una incapacidad de reemplazar una pérdida ósea
abundante y que, a pesar una estabilización adecuada, no osifica de manera
espontánea [5,7,9,10-13]. Esto ocurre generalmente cuando el tamaño del defecto es
mayor a 1-2 cm o cuando hay una pérdida de más del 50% de la circunferencia del
hueso. Del mismo modo, las condiciones biomecánicas, la edad del paciente, el estado
metabólico y sistémico del mismo y las lesiones relacionadas que afectan a la
osificación del defecto son otras condiciones que influyen en su determinación [7]. Hay
que destacar que un defecto óseo crítico no puede osificar de manera adecuada sin la
ayuda terapéutica o con materiales diseñados para favorecer la regeneración ósea [5].
Teniendo en cuenta todos los factores enumerados anteriormente, el método de
tratamiento no es universal, sino que se selecciona de manera individual para cada
paciente. Antes de nada, es necesario conocer las condiciones que deben darse para
una correcta cicatrización ósea, para poder entender el por qué los defectos óseos
críticos no siguen una cicatrización adecuada. La cicatrización de un hueso, también
llamada osificación, se asemeja a la cicatrización de un tejido, con la fase inflamatoria,
de proliferación y de remodelación. El hueso es un tejido que tiene capacidad de
remodelación tanto a nivel funcional como estructural [5]. El objetivo de la osificación de
un hueso es alcanzar una capacidad funcional y una estructura histológica lo más
parecida a la inicial. Es decir, regenerar el tejido mineralizado en el lugar de la lesión y
también, restaurar la resistencia mecánica [14]. Existen dos tipos de osificaciones, la
osificación primaria o directa y la osificación secundaria o indirecta. Por una parte, en la
osificación primaria se forma hueso directamente en el foco de fractura. Para ello, los
dos requisitos que se deben dar son: tener un máximo de 1 mm entre los fragmentos
óseos y menos de un 2% de micromovimientos en el foco de fractura [15]. Por otra
parte, la osificación secundaria o indirecta, se caracteriza por la formación de tejido
conjuntivo denominado callo, que evoluciona de un tejido fibroso a cartilaginoso, para
finalmente generar el tejido óseo en el foco de fractura. A este último estado, le
continúa una fase de remodelación que puede continuar durante años hasta lograr la
estructura y resistencia original del hueso [5-7,10,14,15]. Por estos motivos, se
considera que los defectos óseos críticos no siguen una osificación primaria, sino una
osificación secundaria; pero que requieren un apoyo externo, ya que ellos por si
mismos no pueden resolverlo [5].
Por consiguiente, existen diversos métodos terapéuticos para tratar los defectos óseos
críticos. A tal fin existen métodos terapéuticos naturales y sintéticos. Por un lado, dentro
de los métodos terapéuticos naturales, se encuentran: autoinjertos (trasplantes de
hueso desde una zona donante del mismo individuo, pero alejada de la región
patológica, para reconstruir un defecto dentro del mismo paciente [2,16]); aloinjertos
(injertos de cadáveres o donantes vivos de la misma especie, pero genéticamente
diferentes[16,17]) y xenoinjertos (son injertos de origen natural, pero proceden de otra
especie como la especie bovina o derivados del coral [14,17-19]). Dentro de los
autoinjertos, se encuentran de hueso esponjoso y de hueso cortical. Los autoinjertos
esponjosos tienen las propiedades osteogénicas y osteoinductoras deseadas
[2,6,10,11,16-18] y los autoinjertos corticales son mayoritariamente injertos
osteoconductores con muy poca capacidad de osteoinducción pero facilitan un gran
soporte mecánico [18,19]. Por estos motivos, los autoinjertos corticales son los óptimos
para defectos óseos críticos ya que requieren un elevado soporte mecánico estructural
[18]. Por otra parte, en contraposición a los métodos terapéuticos naturales, se
encuentran los sintéticos para solucionar defectos óseos críticos. Dentro de éstos
podemos diferenciar los implantes o prótesis y los scaffolds. En primer lugar, los
implantes o prótesis sustituyen la presencia de material natural en el defecto óseo, pero
no pretenden que el organismo aproveche el implante para poder osificar. Dentro de los
implantes tradicionales, los materiales clásicos que se han empleado son: acero
inoxidable, aleación de cromo y cobalto, titanio o aleación de titanio. Pero estos
materiales no pueden replicar mecánicamente el hueso, lo que puede derivar en que no
se integren de manera adecuada en el receptor [4,10,16]. Por este motivo, ha habido
una evolución de estos implantes que sustituyen tejido por biomateriales sintéticos que
se integran en el mismo. Actualmente, las opciones principales para tratamientos
regenerativos de defectos óseos son tratamientos autólogos, alogénicos o implantes
sintéticos, pero ninguna de estas técnicas ha demostrado ser completamente
satisfactoria [2,8,16]. Estas limitaciones han llevado a los científicos y clínicos a centrar
su investigación en aspectos de ingeniería tisular y medicina regenerativa como la
reconstrucción ósea y en el desarrollo de soportes, andamios y/o matrices también
denominados scaffolds" para favorecer la regeneración ósea [2,3,6,8]. Estos scaffolds
están compuestos por biomateriales y se pueden utilizar para el tratamiento de defectos
óseos. Para llevar a cabo esto, deben cumplir las siguientes funciones específicas:
actuar como sustrato celular, suministrar una nutrición, administrar moléculas bioactivas
y proporcionar estímulos para dirigir a las células a su destino [6]. Para realizar dichas
funciones, estos scaffolds deben tener las características ideales de ser osteogénicos,
biocompatibles, biodegradables, capaces de proporcionar soporte estructural, fáciles de
implantar y rentables [1,6]. Los materiales con los que se fabrican los scaffolds son
bioactivos y reabsorbibles en el tiempo. Se degradan gradualmente y son reemplazados
por tejidos del huésped, lo que facilita la reparación in situ. Para esto, los ingenieros
deben inspirarse en la composición y estructura natural del hueso [16]. Estos
biomateriales no deben ser mutagénicos, antigénicos, cancerígenos o teratogénicos, ni
tóxicos, además deben permitir la osteointegración sin provocar una reacción
inmunológica adversa [4,6].

Se pueden elegir varios biomateriales según el objetivo (resistencia mecánica o relleno)

y el enfoque (percutáneo o quirúrgico) que se seleccionan de entre polímeros,
cerámicas o mezclas de los mismos. Además, algunos biomateriales están compuestos
por factores de crecimiento como las proteínas morfogénicas óseas (BMP) para inducir
la reparación ósea [16]. Idealmente, los biomateriales deben ser absorbibles a una
velocidad variable dependiendo de su función biomecánica anticipada y deben permitir
el crecimiento de vasos sanguíneos recién formados de los tejidos vecinos, siendo la
vascularización de buena calidad del tejido en contacto con el scaffold un aspecto
crucial [10,16].

Igualmente, estos scaffolds pueden fabricarse de manera precisa, reproduciendo las

características anatómicas del hueso nativo, manteniéndose la integridad estructural
suficiente durante el proceso de crecimiento y remodelación in vitro y/o in vivo [8]. Del
mismo modo, la construcción adecuada de un scaffold debe poseer una red
tridimensional altamente porosa, con poros interconectados y con propiedades de
superficie, que estén optimizadas para la unión, migración, proliferación y diferenciación
de los tipos de células de interés y que permitan el transporte de nutrientes y desechos
metabólicos. Además, deben poseer una tasa de biocompatibilidad y biodegradabilidad
definida para complementar el crecimiento tisular [8].

No menos importante a los requisitos anteriores es el hecho de que la implantación del

scaffold en la zona dónde se debe regenerar el hueso requiere necesariamente cirugía,
la cual, según se conoce puede comprometerse por la fácil aparición de infecciones
bacterianas. Se conoce que al menos el 10% de estas intervenciones están asociadas
a la aparición de infecciones bacterianas, que comprometen la eficacia y utilidad del
scaffold a los fines deseados.
Las infecciones asociadas a dispositivos implantables están caracterizadas por la
adhesión bacteriana, colonización y desarrollo de un biofilm. Los organismos más
comunes asociados a las infecciones en dispositivos implantables incluyen, las cepas
Gram-positivas: Staphylococcus epidermis, Staphylococcus aureus, and
Propionibacterium acnes, así como las cepas Gram-negativas Pseudomonas
aeruginosa. La osteomielitis es la inflamación del hueso y puede aparecer como
consecuencia de la formación del biofilm, causando un incremento sustancial de la
resorción del hueso y formación de hueso reactivo.
El biofilm está compuesto por sustancias secretadas por las bacterias, tales como,
proteínas, lípidos, lipopolisacaridos y DNA formando una matriz alrededor de la bacteria
que le proporciona protección frente a la acción del antibiótico y las defensas inmunes.
Las bacterias presentes en el biofilm tienen además una tasa de mutación superior
pudiendo presentar una mayor virulencia cuando se exponen a los antibióticos y
favoreciendo la generación de fenotipos resistentes a los antibióticos.
Sin embargo, las medidas que actualmente se contemplan para tratar de evitar la
aparición de infecciones asociadas al uso de scaffolds no son del todo satisfactorias. De
una parte, éstas se limitan a la administración de altas dosis de antibióticos junto con la
implantación del scaffold en la zona afectada o directamente integrar la dosis de
antibiótico en el mismo scaffold. La administración de estas altas dosis de antibiótico
supone un considerable aumento de las posibilidades de efectos secundarios
provocados por el antibiótico, tales como reacciones alérgicas, así como en general la
toxicidad del scaffold. Alternativamente se describe la incorporación de distintos iones
en las matrices y estructuras que componen el scaffold, sin embargo, estas medidas
pueden resultar también tóxicas o la liberación de iones (osteoinductores y
antimicrobianos) no se produce a la velocidad adecuada para conseguir al mismo
tiempo inducir regeneración y prevenir infecciones

La patente ES2393602 describe materiales mesoporosos ordenados de sílice que

incluyen entre sus poros tres antibióticos distintos: linezolid, rifampicina y vancomicina.
La patente española ES2405774 describe un andamio en base a uno o más
polisacáridos y un agente reticulante que comprende antimicrobianos seleccionados de
entre: alquilparabenos, tales como metilparabeno, etilparabeno, propilparabeno y
butilparabeno, cresol, clorocresol, hidroquinona, benzoato de sodio, benzoato de
potasio, triclosano, clorhexidina, rifampicina, minociclina, clorhexidina, agentes de iones
de plata y composiciones con una base de plata.
La patente japonesa JP5882997 describe un injerto óseo que comprende un
componente inorgánico sólido y un hidrogel que contiene iones de silicio.
Opcionalmente puede contener otros iones, por ejemplo, estroncio, magnesio, potasio,
cobre cobalto, níquel, cinc, selenio, plata y flúor.

La presente invención propone una solución a los problemas técnicos identificados

anteriormente a través de la definición de un andamio, (scaffold) con aplicación en
ingeniería tisular ósea para el tratamiento y recuperación de defectos óseos, incluidos
los críticos, con capacidad ósteoinductora que además previene infecciones, incluidas
aquellas causadas por bacterias multiresistentes a antibióticos. Es decir, la presente
invención propone una solución técnica efectiva a una necesidad existente en el campo
técnico de la ingeniería tisular ósea, proporcionando un andamio capaz de regenerar un
defecto óseo, incluido un defecto óseo crítico, y tratando al mismo tiempo cualquier
infección patógena, incluidas las infecciones multiresistentes que pudieran
comprometer el proceso de regeneración ósea en el lugar del defecto óseo a tratar.

Descripción de la invención

La presente invención se refiere a un andamio, (scaffold) biodegradable con aplicación

en ingeniería tisular ósea para el tratamiento, regeneración y recuperación de defectos
óseos en mamíferos, así como un método para la obtención de dichos dispositivos
médicos.
El andamio con aplicación en ingeniería tisular ósea de acuerdo con la presente
invención se presenta en forma de estructura tridimensional (3D), porosa,
biodegradable y biocompatible y presenta una resistencia mecánica a la compresión
adecuada al lugar del implante. La estructura que conforma el andamio permite el
desarrollo del nuevo tejido óseo en el defecto óseo a recuperar. De forma ventajosa, la
estructura y componentes que conforman el andamio presentan una acción
osteoinductora y a la vez antibacteriana durante el proceso de regeneración ósea,
resultando altamente efectivo a los fines deseados.

Es por ello un objeto de la presente invención, un andamio para su utilización en

ingeniería tisular ósea que comprende:
- un cuerpo, soporte o estructura porosa con forma tridimensional (3D) constituido a
partir de un material polimérico, y
- un hidrogel de alginato de calcio y zinc,
caracterizado porque dicho hidrogel de alginato de calcio y zinc se encuentra integrado
en el cuerpo, soporte o estructura porosa, y porque el hidrogel de alginato de calcio y
zinc comprende entre 4% a 7% en peso de iones de zinc y 3% a 6% en peso de iones
de calcio.

Es también un objeto de la presente invención un andamio de acuerdo con el párrafo

anterior, caracterizado por que el hidrogel de alginato de calcio y zinc integrado en el
cuerpo, soporte o estructura porosa se dispone a modo de recubrimiento o relleno de la
estructura o cuerpo poroso de material polimérico.

Es también un objeto de la presente invención un andamio de acuerdo con los párrafos

anteriores, caracterizado por que el cuerpo, soporte o estructura porosa con forma
tridimensional (3D) está constituida a partir de un material polimérico seleccionado del
grupo que comprende: poliésteres alifáticos, poli(aminoácidos), copoli(éter-ésteres),
oxalatos de polialquilenos, poliamidas, policarbonatos derivados de tirosina,
poli(iminocarbonatos), poliortoésteres, polioxaésteres, poliamidoésteres, polioxaésteres
que contienen grupos amino, poli(anhídridos), polifosfacenos, biomoléculas, tales como
colágeno, elastina, ácido hialurónico, almidones bioabsorbibles, y mezclas de los
mismos, poliésteres alifáticos, tales como, homopolímeros y copolímeros de lactida,
incluyendo ácido láctico, D-, L- y mesolactida, glicólido,incluyendo ácido glicólico),
\varepsilon-caprolactona, p-dioxanona (1,4-dioxan-2-ona), carbonato de trimetileno (1,3-
dioxan-2-ona), derivados de alquilo de carbonato de trimetileno, \delta-valerolactona,
\beta-butirolactona, \gamma-butirolactona, \varepsilon-decalactona, hidroxibutirato
(unidades de repetición), hidroxivalerato (unidades de repetición), 1,4-dioxepan-2-ona,
incluyendo su dímero 1,5,8,12-tetraoxaciclotetradecan-7,14-diona, 1,5-dioxepan-2-ona,
6,6-dimetil-1,4-dioxan-2-ona, 2,5-dicetomorfolina, pivalolactona, alfa, alfa-
dietilpropiolactona, carbonato de etileno, oxalato de etileno, 3-metil-1,4-dioxan-2,5-
diona, 3,3-dietil-1,4-dioxan-2,5-diona, 6,8-dioxabicicloctan-7-ona y mezclas de
polímeros de los mismos.

Es también un objeto de la presente invención un andamio de acuerdo con los párrafos

anteriores, caracterizado por que el cuerpo, soporte o estructura porosa con forma
tridimensional (3D) está constituido a partir de ácido poli-láctico (PLA).
Es también un objeto de la presente invención un andamio de acuerdo con los párrafos
anteriores, caracterizado por que el recubrimiento de alginato de calcio y zinc
comprende entre el 1,5 - 2% p/p (respecto al peso total del andamio)

Es también un objeto de la presente invención un andamio de acuerdo con los párrafos

anteriores, caracterizado por que el volumen de poros es de 20 a 30% con un tamaño
medio de poro de 400 a 600 pm.

Es también un objeto de la presente invención un andamio de acuerdo con los párrafos

anteriores, caracterizado por que incorpora opcionalmente componentes seleccionados
del grupo que comprende: grafeno, óxido de grafeno, nanofibras de carbono , grafito,
óxido de grafeno reducido, grafeno reducido, nanotubos de carbono de pared simple o
múltiple, fullereno, óxido de grafeno funcionalizado con alquilamina o con amoniaco,
grafeno dopado con boro, grafeno dopado con nitrógeno, grafeno dopado con fósforo,
grafeno dopado con azufre, grafeno dopado con boro y nitrógeno, grafeno dopado con
fósforo y nitrógeno, grafeno dopado con azufre y nitrógeno y óxido de grafeno reducido
sulfonado, nanocompuestos con nanomateriales de carbono como el grafeno/TiO2,
grafeno/Fe3O4, grafeno/Mn3O4, grafeno/Pd, grafeno/Pt, grafeno/PtCo, grafeno/PtPd,
grafeno reducido/TiO2, grafeno reducido/Fe3O4, grafeno reducido/Mn3O4, grafeno
reducido/Pd, grafeno reducido/Pt, grafeno reducido/PtCo y grafeno reducido/PtPd y
nanopartículas de polipirrol, nanopartículas y/o nanofibras como las nanopartículas de
plata, oro, nanocelulosa, nanoarcillas ocerámicas.

Es también un objeto de la presente invención un proceso para la obtención de un

andamio de acuerdo con los párrafos anteriores, que comprende las siguientes etapas:
a) Impresión 3D de un soporte, estructura o cuerpo poroso polimérico (1);
b) Inmersión a vacío de la estructura en una disolución acuosa de alginato de sodio
(2,3);
c) Sonicación (4);
d) Inmersión de la estructura de polímero + alginato sódico en una disolución acuosa de
cloruro cálcico (5,6);
e) Inmersión de la estructura de polímero +alginato cálcico en una disolución acuosa de
cloruro de zinc (7,8)
f) Purificación o lavado del andamio (10); y
g) Secado en horno (9).

Es también un objeto de la presente invención un proceso de acuerdo con el párrafo

anterior, caracterizado por que la impresión 3D del soporte, estructura o cuerpo poroso
se lleva a cabo con la técnica de modelado por deposición fundida.

Es también un objeto de la presente invención un proceso de acuerdo con los párrafos

anteriores, caracterizado por que la inmersión a vacío de la estructura en la etapa b) se
realiza en una disolución acuosa de alginato de sodio a una concentración de 2% p/v.

Es también un objeto de la presente invención un proceso de acuerdo con los párrafos

anteriores, caracterizado por que la inmersión de la estructura en la etapa c) se realiza
en una disolución acuosa de cloruro de calcio a una concentración de 0.5% p/v y la
inmersión de la estructura en la etapa d) se realiza en una disolución acuosa de cloruro
de zinc a una concentración de 0.5% p/v.

Es también un objeto de la presente invención un andamio según definido en los

párrafos anteriores para su uso en procesos reconstructivos de defectos óseos tales
como: defectos segmentarios, defectos producidos por trauma, tumores osteolíticos,
heridas de arma de fuego, defectos causados por osteoartrosis, cirugía, osteomielitis,
cirugía tumoral, defectos óseos estructurales, defectos causados por osteoporosis,
osteopenia y/o enfermedad ósea metabólica.

Es finalmente un objeto de la presente invención un implante, injerto y sustituto de

injerto óseo que comprende un andamio según definido en los párrafos anteriores y en
general en la presente invención.

Figuras

La Figura 1 representa la vista inferior y en alzada de un andamio de la invención.

La Figura 2 representa un esquema del proceso de fabricación del andamio de la
invención.

La Figura 3 ilustra un andamio de PLA de 10 mm de sección transversal asociado a la

placa de osteosíntesis por medio de ambos tornillos en vista caudal (A) y en vista lateral
(B).

La Figura 4 ilustra el procedimiento quirúrgico en el modelo animal. Abordaje

craneolateral al fémur de modo convencional (A), separación del vasto lateral de la
superficie del fémur para exponer la diáfisis femoral (B), señalización del hueso con la
sierra de corte posicionando en un lateral la placa con el andamio para seccionar la
longitud exacta que tiene el andamio (C), sujeción de la placa con pinzas de reducción
para evitar su movimiento (D), realización de orificio con la guía para brocas hasta
taladrar las dos corticales del hueso (E), fijación del implante al fémur (F).

La Figura 5 representa los resultados del grado de osificación del defecto óseo
siguiendo la escala descrita por Stacy y cols. [20]

La Figura 6 ilustra la reconstrucción 3D de las tomografías femorales. Fémur

correspondiente al grupo UCV-1 (A) y fémur correspondiente al grupo UCV-0 (B).

La Figura 7 ilustra los resultados del ensayo antibacteriano de difusión en agar frente a
la bacteria Gram-positiva MRSA y frente a la Gram-negativa P. aeruginosa.

La Figura 8 representa el espectro FTIR en la región de 4000-650 cm-1. Andamios de

PLA (a) y PLA con relleno alginato entrecruzado con cationes de calcio y zinc (b). El
andamio de PLA con relleno de alginato entrecruzado muestra la incorporación de
grupos OH típicos de hidrogeles con pico ancho entre 4000 y 3500 cm-1.

La Figura 9 (a, b) muestran dos imágenes de secciones histológicas H-E a 4X, de zona
de transición hueso-andamio, (ejemplo 2).
Descripción detallada de la invención

Como resultado de un intenso proceso de investigación, los inventores de la presente

invención han logrado diseñar un andamio, (scaffold) biodegradable y poroso para su
utilización en ingeniería tisular ósea que comprende:
- un cuerpo o estructura porosa con forma tridimensional (3D) constituido a partir de un
material polimérico, y
- un hidrogel de alginato de calcio y zinc,
caracterizado porque dicho hidrogel de alginato de cálcio y zinc se encuentra
recubriendo o rellenando la estructura o cuerpo poroso de material polimérico.

Material polimérico de la estructura 3D

Los materiales con los que se fabrican los andamios (scaffolds) de la presente
invención son bioactivos y reabsorbibles en el tiempo. Se degradan gradualmente y son
reemplazados por tejidos del huésped, lo que facilita la reparación del defecto óseo in
situ. Los materiales que conforman el cuerpo o estructura porosa del andamio según la
presente invención son biomateriales no mutagénicos, antigénicos, cancerígenos o
teratogénicos, ni tóxicos que además permiten la osteointegración sin provocar una
reacción inmunológica adversa.
Los ejemplos de polímeros biocompatibles bioabsorbibles adecuados que podrían ser
usados incluyen polímeros seleccionados del grupo constituido por poliésteres
alifáticos, poli(aminoácidos), copoli(éter-ésteres), oxalatos de polialquilenos, poliamidas,
policarbonatos derivados de tirosina, poli(iminocarbonatos), poliortoésteres,
polioxaésteres, poliamidoésteres, polioxaésteres que contienen grupos amino,
poli(anhídridos), polifosfacenos, biomoléculas (es decir, biopolímeros tales como
colágeno, elastina, ácido hialurónico, almidones bioabsorbibles, etc.) y mezclas de los
mismos. Para el objeto de la invención, los poliésteres alifáticos incluyen, pero no se
limitan a, homopolímeros y copolímeros de lactida (que incluye ácido láctico, D-, L- y
mesolactida), glicólido (incluyendo ácido glicólico), \varepsilon-caprolactona, p-
dioxanona (1,4-dioxan-2-ona), carbonato de trimetileno (1,3-dioxan-2-ona), derivados
de alquilo de carbonato de trimetileno, \delta-valerolactona, \beta-butirolactona,
\gamma-butirolactona, \varepsilon-decalactona, hidroxibutirato (unidades de repetición),
hidroxivalerato (unidades de repetición), 1,4-dioxepan-2-ona (incluyendo su dímero
1,5,8,12-tetraoxaciclotetradecan-7,14-diona), 1,5-dioxepan-2-ona, 6,6-dimetil-1,4-
dioxan-2-ona, 2,5-dicetomorfolina, pivalolactona, alfa, alfa-dietilpropiolactona, carbonato
de etileno, oxalato de etileno, 3-metil-1,4-dioxan-2,5-diona, 3,3-dietil-1,4-dioxan-2,5-
diona, 6,8-dioxabicicloctan-7-ona y mezclas de polímeros de los mismos.
De forma preferente se contempla la utilización de ácido poli-láctico (PLA) como único
polimero para formar la estructura, cuerpo o soporte poroso del andamio de la presente
invención. En este caso se prefiere la utilización de filamento comercial de PLA para
impresión 3D de la casa BQ (Madrid, Epaña) para la técnica de modelado por
deposición fundida (FDM) comercializada en bovinas con filamento de 1.75 mm y 1 Kg
de peso. Preferentemente, la estructura porosa está constituida por PLA con una
relación 1,44±0,01 (% en peso de carbón/% en peso de oxígeno) determinado por
análisis elemental con el microscopio electrónico de barrido de emisión de campo
(Modelo Zeiss Ultra 55) a un voltaje de 20KV, por ejemplo. Adicionalmente también se
contempla la utilización de otros polímeros, como son el policarbonato o el polivinil
alcohol para la formación de la estructura o cuerpo poroso.

Hidrogel de alginato
El ácido algínico y sus sales son biopolímeros polielectrolitos. Está formado por dos
tipos de unidades monoméricas: el ácido beta-D-manurónico y el ácido alfa-L-
gulurónico. Típicamente, el ácido algínico está conformado como polímero en bloques,
con secciones de unidades manurónicas alternadas con secciones de unidades
gulurónicas. El alginato en forma de sal sódica, potásica o magnésica es soluble en
agua a pH mayores de 3.5. Por el contrario, al ácido algínico entrecruzado con cationes
divalentes como el calcio o zinc son insolubles en agua. La presencia de pequeñas
cantidades de cationes divalentes inhibe la hidratacióin de los alginatos y proporciones
elevadas de los mismos causan su precipitación. A los efectos de la presente invención,
el andamio comprende un cuerpo o estructura porosa con forma tridimensional (3D)
constituido a partir de un material polimérico que se halla recubierto o rellenado con un
hidrogel de alginato entrecruzado con iones de calcio y zinc.
Tal y como se detallará más adelante, el alginato entrecruzado con iones de calcio y
zinc se obtiene una vez el cuerpo o estructura porosa ha sido recubierto con alginato
sódico y éste se entrecruza. El entrecruzamiento de dicho alginato sódico se produce
cuando la estructura recubierta con alginato de sodio se pone en contacto con una
disolución de cloruro cálcico y seguidamente con una disolución de cloruro de zinc,
produciéndose el reemplazo de los iones de sodio por iones de calcio y zinc.
De esta forma, el alginato entrecruzado con calcio y zinc que forma parte del andamio
adquiere su consistencia sólida así como la estabilidad deseada del andamio.
Por ello el alginato de sodio seleccionado para la presente invención tiene un peso
molecular medio de 107.9±2.7 KDa, y está constituido con bloques galurónicos y
manurónicos pero con la cantidad adecuada de grupos galurónicos (FG = 0,436 en
tanto por 1) que son los que se entrecruzan para poder formar un gel consistente
físicamente pero sin tener excesivos puntos de entrecruzamiento que pudieran retener
demasiado zinc y por tanto se pudiera dar toxicidad en el producto final.

A los efectos de la presente invención es también esencial que la carga de cationes

calcio y zinc en el alginato entrecruzado que forma parte del andamio guarde unas
proporciones determinadas, ya que dicho equilibrio resulta ser la clave de la presente
invención en cuanto a proporcionar consistencia física al relleno de alginato y mediante
los cationes de zinc la biofuncionalidad (antimicrobiano e inductor de regeneración) en
la cantidad óptima para no producir toxicidad. De acuerdo con la correspondiente
medición realiza mediante análisis elemental en el microscopio electrónico de barrido
de emisión de campo (Modelo Zeiss Ultra 55) a un voltaje de 20KV, se ha calculado que
zinc está presente en el alginato en el rango de 4% a 7% en peso, preferentemente,
6,52% y 6,6 % en peso y la presencia de iones de calcio en el rango de 3% a 6% en
peso, de forma preferente, 4.07 y 4.23 % en peso. (El % en peso de zinc y calcio
indicado corresponde al porcentaje en peso de los átomos respecto al resto de átomos
presentes, esto es, C, H, O, Zn y Ca). De forma preferente, se considera que la relación
de carga óptima de ambos iones en el alginato es de 1,58±0,02 (%en peso de zinc/%en
peso de calcio).

En cuanto a la disposición del alginato de calcio y zinc en el cuerpo, estructura o

soporte poroso de material polimérico, el alginato entrecruzado con calcio y zinc se
encuentra recubriendo dicho soporte y/o rellenando parcialmente las oquedades
porosas del cuerpo, estructura o soporte. Es decir, la incorporación del alginato
entrecruzado en la estructura mantiene la estructura porosa del andamio, con un alto
grado de interconectividad de poros, necesario para que pueda ejercer su capacidad
osteoinductora. Es decir, la porosidad abierta e interconectada del andamio facilita la
colonización por parte de las células, la difusión de los nutrientes esenciales y oxígeno
para la supervivencia celular y productos de desecho.

En una realización de la presente invención un andamio cuya estructura porosa es de

PLA tiene un recubrimiento de alginato de calcio/zinc comprendido ente el 1.5 y el 2%
peso/peso determinado gravimétricamente.

Tal y como se muestra en la Figura 1, el soporte poroso que compone el andamio de la

presente invención tiene una estructura homogénea de poros, con un volumen de poros
de 20% a 30% y con un tamaño medio de entre 400 a 600 pm, de forma preferente, 500
pm.
En una realización de la presente invención un andamio cuya estructura porosa es de
PLA tiene una porosidad del 26,6%±0,05 en volumen. Cuando se rellena con el
recubrimiento de alginato de calcio/zinc esta porosidad disminuye ligeramente a
26,1%±0,05. Estas porosidades fueron determinadas gravimétricamente mediante
relleno de poros con agua destilada y a partir de las medidas de densidad del alginato
de calcio/zinc determinado en forma de film utilizando el mismo alginato de sodio y la
misma cantidad de entrecruzador de cloruro de calcio y cloruro de zinc determinado en
una balanza de precisión con accesorio para densidad mediante medida de la masa de
la muestra en el aire e inmersa en n-octano a 25°C. La densidad (n=6) fue: 2.022±0.012
g/cm3
A partir de la absorción de agua por gravimetría y la densidad medida del alginato de
calcio/zinc se calculó la porosidad de los scaffolds con y sin recubrimiento de alginato
de calcio/zinc.

Otros componentes opcionales

El andamio de acuerdo con la presente invención contempla la incorporación adicional

de otros componentes, si bien, estos componentes no son necesarios para que el

andamio ejerza su acción osteoinductora y antibacteriana. Estos componentes pueden
mejorar y facilitar las acciones deseadas en el andamio y pueden ser seleccionados de
entre: nanomateriales que aumentan la conductividad eléctrica del andamio, tales como
los nanomateriales de carbono conductores (grafeno, óxido de grafeno, nanofibras de
carbono , grafito, óxido de grafeno reducido, grafeno reducido, nanotubos de carbono
de pared simple o múltiple, fullereno, óxido de grafeno funcionalizado con alquilamina o
con amoniaco, grafeno dopado con boro, grafeno dopado con nitrógeno, grafeno
dopado con fósforo, grafeno dopado con azufre, grafeno dopado con boro y nitrógeno,
grafeno dopado con fóforo y nitrógeno, grafeno dopado con azufre y nitrógeno y óxido
de grafeno reducido sulfonado), nanocompuestos con nanomateriales de carbono como
el grafeno/TiO2, grafeno/Fe3O4, grafeno/Mn3O4, grafeno/Pd, grafeno/Pt,
grafeno/PtCo, grafeno/PtPd, grafeno reducido/TiO2, grafeno reducido/Fe3O4, grafeno
reducido/Mn3O4, grafeno reducido/Pd, grafeno reducido/Pt, grafeno reducido/PtCo y
grafeno reducido/PtPd)) y nanopartículas de polipirrol, nanopartículas y/o nanofibras
como las nanopartículas de plata, oro, nanocelulosa, nanoarcillas, cerámicas, etc. La
incorporación de estos componentes se realiza a través del relleno de alginato.

Una de las ventajas más apreciables de los andamios definidos en la presente

invención es que la incorporación de zinc en el andamio a través del alginato
proporciona una función osteoinductora además de antibacteriana, lo cual permite no
tener que incorporar necesariamente en la estructura del andamio factores de
crecimiento como factores osteogénicos, tal como la proteína morfogenética ósea 2
(BMP-2), que puede generar problemas asociados con la inmunogenicidad, riesgo de
cáncer y alteraciones en la homeostasis celular. Además de todo ello resulta un ahorro
en costes y facilidad del procedimiento de fabricación de los andamios.

Una ventaja adicional del andamio definido en la presente invención es que no requiere
la incorporación de células para promover la formación ósea, por lo que también resulta
en un ahorro en costes y facilidad del procedimiento de fabricación del mismo.

Método de fabricación del andamio

Para la fabricación del cuerpo o estructura porosa con forma tridimensional del ándamio
se contemplan distintos métodos y técnicas, entre los cuales se incluyen: espumado
con gas, técnicas de inyección en molde desde el fundido, extrusión, electrospinning o
electrohilado y preferentemente, técnicas de prototipadop rápido. Estas técnicas de
prototipado rápido comprenden la fabricación de las estructuras capa por capa en un
proceso controlado a través de un determinado software que define el diseño
previamente. Entre las tecnologías de prototipado rápido se encuentran: modelado por
deposición de material fundido (FDM), estereolitografía (SLA), impresión por
bioextrusión 3D (3D-P), fabricación por corte y laminado (LOM) y fotopolimerización por
luz UV (SGC).
De forma preferente, la presente invención contempla la utilización de la técnica por
deposición fundida (FDM). Esta técnica está basada en la deposición sobre una
plataforma de capas de material fundido proveniente del calentamiento y ablandamiento
de filamentos de polímeros para la fabricación del moldeo. Al mismo tiempo otros
filamentos blandos forman apoyo para las superficies libremente suspendidas del
moldeo, para poder ser construidas. La máquina de FDM posee una plataforma
recubierta por una espuma densa y flexible que se mueve en sentido vertical (eje z) y
un cabezal equipado con dos boquillas extrusoras del filamento calentado: una para la
alimentación de las capas de modelo diseñado y otra para la construcción de los
soportes. Los filamentos se almacenan en la máquina, la cual es calentada el vacío.
Las boquillas de extrusión son alimentadas a través de dos quías giratorias conectadas
a un motor que van transportando los filamentos almacenados en un rollo. El software
utilizado por el equipo FDM es una combinación de CAD/CAM no integrado a la
máquina, que se conecta al ordenador con el sistema CAM, que se encarga del
monitoreo de las órdenes de construcción.
Una vez se ha obtenido el cuerpo o estructura 3D de los materiales adecuados, se
procede a integrar en dicha estructura alginato de sodio que posteriormente se
entrecruzará con cloruro de calcio y cloruro de zinc para dar lugar al andamio de la
presente invención.
Esta parte del proceso de fabricación, según se muestra en la Figura 2, comprende en
de forma esquemática las siguientes etapas:
que comprende las siguientes etapas:
a) Impresión 3D de un soporte, estructura o cuerpo poroso polimérico (1);
b) Inmersión a vacío de la estructura en una disolución acuosa de alginato de sodio
(2,3);
c) Sonicación (4);
d) Inmersión de la estructura de polímero + alginato sódico en una disolución acuosa de
cloruro cálcico (5,6);
e) Inmersión de la estructura de polímero +alginato cálcico en una disolución acuosa de
cloruro de zinc (7,8)
f) Purificación o lavado del andamio (10); y
g) Secado en horno (9).
En concreto, una vez se ha obtenido el soporte poroso, el proceso comprende rellenar a
vacío la estructura o cuerpo poroso con alginato de sodio y posteriormente entrecruzar
con cloruro de calcio y cloruro de zinc. En este proceso de fabricación la cantidad de
calcio y zinc son clave en la exitosa biofuncionalidad del soporte: carácter
antimicrobiano y capacidad de regeneración ósea sin producir toxicidad. El zinc es un
compuesto muy tóxico que entrecruzado como cloruro de zinc debe de quedar en una
cantidad mínima que permita dotar al andamio con capacidad antimicrobiana y
regenerativa sin producir efectos tóxicos. Esto se consigue entrecruzando el soporte
inicialmente por inmersión en una disolución acuosa de cloruro de calcio poco
concentrada, 0.2 - 0.7% p/v, preferiblemente 0.5 % p/v, durante 7 - 15 minutos,
preferiblemente 10 minutos. De este modo, se consigue inicialmente enlazar gran
cantidad de cargas negativas presentes en las cadenas poliméricas del alginato de
sodio con los cationes divalentes del calcio y conseguir consistencia sólida del relleno.
A continuación, se procede a entrecruzar con cloruro de zinc para cargar el alginato con
una cantidad mínima que proporcione al soporte la biofuncionalidad deseada,
capacidad antimicrobiana y de regeneración ósea, sin producir toxicidad. Se utiliza para
ello una disolución acuosa de cloruro de zinc poco concentrada, 0.25 - 0.5 % p/v,
preferiblemente 0.5 % p/v durante 7- 15 minutos, preferiblemente 10 minutos.
Posteriormente, los soportes son purificados mediante al menos 3 lavados de cada
andamio, por ejemplo, en 200 mL de agua destilada durante 1 0 - 2 0 minutos,
preferiblemente 15 minutos cada vez con agitación magnética a una temperatura de
entre 20 - 35°C, preferiblemente 25°C. Posteriormente se secan los andamios durante
24 - 48 horas en estufa inferior a la de degradación de los andamios, preferiblemente a
una temperatura de entre 40 - 70°C, preferiblemente a 60°C.

Este método desarrollado presenta la gran ventaja respecto a cualquier otro tipo de
proceso en que mediante escáner 3D se puede determinar las dimensiones exactas de
un defecto óseo generado por accidente o enfermedad y así poder producir piezas 3D a
medida con las dimensiones y forma requeridas en cada caso para cada paciente. El
proceso de síntesis permite además la incorporación adicional de nanomateriales
conductores como los nanomateriales de carbono conductores (grafeno, óxido de
grafeno, nanofibras de carbono , grafito, óxido de grafeno reducido, grafeno reducido,
nanotubos de carbono de pared simple o múltiple, fullereno, óxido de grafeno
funcionalizado con alquilamina o con amoniaco, grafeno dopado con boro, grafeno
dopado con nitrógeno, grafeno dopado con fósforo, grafeno dopado con azufre, grafeno
dopado con boro y nitrógeno, grafeno dopado con fóforo y nitrógeno, grafeno dopado
con azufre y nitrógeno y óxido de grafeno reducido sulfonado), nanocompuestos con
nanomateriales de carbono como el grafeno/TiO2, grafeno/Fe3O4, grafeno/Mn3O4,
grafeno/Pd, grafeno/Pt, grafeno/PtCo, grafeno/PtPd, grafeno reducido/TiO2, grafeno
reducido/Fe3O4, grafeno reducido/Mn3O4, grafeno reducido/Pd, grafeno reducido/Pt,
grafeno reducido/PtCo y grafeno reducido/PtPd)) y nanopartículas de polipirrol, etc., a
través del relleno de alginato. Al introducir nanomateriales conductores se consigue
aumentar la conductividad eléctrica en el soporte que puede utilizarse para aumentar la
capacidad regenerativa y antimicrobiana al aplicar estimulación eléctrica. El proceso de
síntesis permite también la introducción adicional de otros tipos de nanomateriales,
nanopartículas y/o nanofibras como las nanopartículas de plata, oro, nanocelulosa,
nanoarcillas, cerámicas, etc.

La impresión 3D por tanto facilita la obtención de andamios personalizados con forma y

dimensiones específicas a la lesión ósea a reconstruir, incluidos los defectos óseos
críticos.
A modo de ejemplo, las dimensiones pueden abarcar desde 1. a 40.cm, y las formas
varían desde planas a cilíndricas o con la forma deseada según la aplicación ósea

Uso del andamio

El andamio objeto de la presente invención encuentra aplicación en la reconstrucción

de defectos o lesiones óseas producidas por diferentes causas ya sea aquellas

denominadas defectos segmentarios, producidos por trauma, tumores osteolíticos,
heridas de arma de fuego, por ejemplo, o los ocasionados como consecuencia de
procesos de osteoartrosis, cirugía por osteomielitis o incluso cirugía tumoral. También
se prevé la aplicación de los andamlos según la presente Invención para la
regeneración de defectos óseos estructurales, cuya causa pudiera ser osteoporosis,
osteopenia o enfermedad ósea metabólica. En particular los andamios de acuerdo con
la presente invención están especialmente destinados en procesos de reconstrucción
ósea de defectos óseos críticos, los cuales se definen como aquellos defectos donde el
organismo no consigue promover el reparo tecidual de tejido óseo formándose,
únicamente, un tejido cicatricial, hay una incapacidad de reemplazar una pérdida ósea
abundante y no osifica de manera espontánea. Esto ocurre generalmente cuando el
tamaño del defecto es mayor a 1 - 2 com o cuando hay una pérdida de más del 50% de
la circunferencia del hueso

Actividad regeneradora y antibacteriana

El andamio de la presente invención ejerce actividad osteoinductora así como
antibacteriana frente a infecciones causadas por específicamente las bacterias Gram
positivas, tal como Staphylococcus aureus. El andamio de la presente invención ha
mostrado tener gran capacidad antibacteriana incluso frente a la bacteria
multirresistente Staphylococcus epidermidis resistente a la meticilina.

En conclusión, la presente invención presenta un andamio poroso biodegradable

antimicrobiano de fácil, económica y reproducible fabricación con gran capacidad
antimicrobiana, incluso frente a patógenos multirresistentes, y con capacidad de
regeneración ósea y propiedades mecánicas y de absorción de agua adecuadas, su
proceso de fabricación y su aplicación en la ingeniería tisular ósea. El soporte poroso se
ha preparado inicialmente mediante impresión 3D por la técnica de Fuse
Deposition Modeling (FDM) de ácido poliláctico (PLA) resultando en un método de
preparación muy reproducible, automatizado y que permite el diseño específico para
cada defecto óseo con gran precisión (impresión 3D). Además, el proceso de
fabricación está de acuerdo con los principios de la química verde y desarrollo
sostenible utilizando agua como disolvente y empleando la mínima energía eléctrica en
la preparación. Los materiales seleccionados (ácido poliláctico y alginato) son
biomateriales aprobados por la FDA de Estados Unidos para su uso biomédico en
humanos. El material de relleno (alginato) es de origen natural y por tanto renovable.
Ambos polímeros son biodegradables y por tanto se espera que sean biodegradados
dentro del organismo humano conforme el hueso va regenerando. Son polímeros de
precio bajo comparado con otros existentes en el mercado. Además, la invención
presenta la gran ventaja de producir un andamio antimicrobiano que previene
infecciones, incluidas las multirresistentes como se ha comprobado por el grupo de
investigación in vitro y en los ensayos in vivo. La invención además proporciona la
posibilidad de incorporar nanomateriales de todo tipo a través del rellenado a vacío de
la fase de alginato. Por tanto, el material denominado UCV-1 presenta grandes ventajas
respecto a toda producido hasta ahora para regeneración de defectos óseos de gran
tamaño. La invención puede además ser utilizada para otras aplicaciones como la
regeneración de otro tipo de tejidos mediante el diseño de andamios con la morfología
requerida para cada tejido: regeneración neuronal, muscular, etc.; realizando otro tipo
de diseño por impresión 3D: apósitos reforzados antibacterianos para cura de heridas;
como materiales biodegradables para con capacidad antibacteriana para suministro
controlado de fármacos; fabricación de catéteres biodegradables antibacterianos;
materiales hidrogeles para inmovilización de células o enzimas en bioprocesado
eliminando el gran problema habitual de la contaminación bacteriana.

Ejemplos:

Ejemplo 1:

1.1. Diseño y fabricación de los andamios

Se fabricaron andamios de ácido poli-láctico (PLA) con y sin relleno de alginato
entrecruzado con cationes de calcio y zinc mediante la tecnología de impresión 3D por
el Grupo de Investigación de Biomateriales y Bioingeniería del Centro de Investigación
Traslacional San Alberto Magno de la Universidad Católica de Valencia San Vicente
Mártir (UCV). Por tanto, los andamios fabricados con material de ácido poliláctico se le
denominará de aquí en adelante como andamios UCV-0 y andamios de acuerdo con la
presente invención constituidos a partir de PLA con relleno de alginato entrecruzado se
denominarán de aquí en adelante como andamios UCV-1. Los andamios se han
desarrollado para este estudio con una sección transversal de 10 mm de diámetro y
longitud de 20 mm (Figura 1). Para ambos diseños, se fabricaron por impresión 3D, 4
réplicas de andamios para el grupo UCV-0 y 4 réplicas para el grupo UCV-1.
La estructura, cuerpo o soporte porosode ácido poliláctico (PLA) se ha preparado
inicialmente mediante impresión 3D por la técnica de modelado por deposición fundida
(FDM). En la Figura 1 se presenta una imagen de las vistas del andamio de PLA
diseñado para impresión en 3D.
Posteriormente el soporte poroso ha sido rellenado a vacío con alginato de sodio que
posteriormente se entrecruzó con cloruro de cálcico y cloruro de zinc. El rellenado se
lleva a cabo mediante inmersión del soporte en las distintas disoluciones. El esquema
del proceso de fabricación del andamio puede observarse en el siguiente esquema de
la Figura 2.
En este proceso de fabricación la cantidad de calcio y zinc son clave en la exitosa
biofuncionalidad del soporte: carácter antimicrobiano y capacidad de regeneración ósea
sin producir toxicidad. Esto se consigue entrecruzando el soporte inicialmente por
inmersión en una disolución acuosa de cloruro de calcio poco concentrada (rango
óptimo de concentración de cloruro de calcio determinado experimentalmente 0.5 %
p/v) durante 10 minutos y posteriormente también por inmersión en una disolución
acuosa de cloruro de zinc poco concentrada (rango adecuado de concentración de
cloruro de zinc determinado experimentalmente 0.25 - 0.5 % p/v) durante 10 minutos.
De este modo, se consigue inicialmente enlazar gran cantidad de cargas negativas
presentes en las cadenas poliméricas del alginato de sodio con los cationes divalentes
del calcio y conseguir consistencia sólida del relleno. Posteriormente, los soportes son
purificados mediante al menos 3 lavados de cada scaffold en 200 mL de agua destilada
durante 15 minutos cada vez con agitación magnética a 25°C. Por último se secan los
andamios durante 48 horas en estufa inferior a la de degradación de los andamios,
preferiblemente a 60°C.

1.2. Ensamblaje in vitro del sistema de estabilización

Se realizó una prueba in vitro en cada uno de los dos diseños, en la cual el andamio se
fijó a una placa bloqueada de titanio de 2,7 mm de 10 orificios (PAX®, Securos
Surgical®, Estados Unidos) con dos tornillos de titanio de 2,7 mm de diámetro por 12
mm de longitud (PAX®, Securos Surgical®, Estados Unidos) (Figura 3).
Una vez revisada la correcta disposición de los implantes, se procedió a su
esterilización mediante el sistema ASP STERRAD® NX® (Estados Unidos), un sistema
de esterilización de baja temperatura con gas plasma. Cada implante estaba compuesto
por un andamio, 2 tornillos y una placa bloqueada, por lo que fueron empleados 8
Implantes en total; 4 para el grupo UCV-0 y 4 para el grupo UCV-1.

1.3. Diseño, elección y realización del modelo del defecto óseo crítico
En el presente estudio, se eligió un modelo de defecto óseo segmental de sección
completa de 20 mm en la diáfisis femoral media. Para la creación de este defecto óseo,
se realizó in vivo una ostectomía completa de 20 mm en la diáfisis femoral media de la
extremidad posterior izquierda de los individuos del modelo animal que se empleó en el
estudio, asegurando que dicha localización permitiera la correcta aplicación de los
implantes.

1.4. Modelo animal empleado

Para la realización del estudio piloto se han empleado 8 individuos lagomorfos
(Oryctolagus cuniculus) de raza New Zealand, hembras de 1 año de edad. Dichos
individuos fueron distribuidos de manera aleatoria en 2 grupos de tratamiento, grupo
UCV-0 y grupo UCV-1. Cada grupo constaba de 4 individuos. El tiempo total del estudio
estimado fue de 12 semanas (2 semanas de cuarentena + 10 semanas de evolución
postquirúrgica). El presente estudio experimental fue aprobado tanto por el Comité de
Ética del Instituto de Investigación de La Fe, así como por su Órgano Habilitado;
obteniendo la autorización de la Consellería de Agricultura, Ganadería y Pesca de la
Comunidad Valencia, de acuerdo con lo dispuesto en el artículo 31 del Real Decreto
RD53/2013.

1.5. Manejo pre-quirúrgico

En primer lugar, los individuos permanecieron en un periodo de cuarentena de 14 días
en el animalario del Instituto de Investigación de La Fe antes del procedimiento
quirúrgico. Transcurridos los 14 días de cuarentena, se procedió a la intervención
quirúrgica en la que se creó el defecto óseo crítico para la colocación posterior del
andamio con el sistema de estabilización.
Durante el manejo pre-anestésico, se realizó una exploración física completa en la que
se pesó a los individuos. Tras el pesaje, se calculó la pre-medicación para cada
individuo. La pre-medicación consistía en Medetomidina (50 g/kg, Domtor® 1mg/ml
solución inyectable, Ecuphar, Finlandia), Fentanilo (10 g/kg, Fentanest® 0,05 mg/ml
solución inyectable, Kern pharma, España), Ketamina (5 mg/kg, Imalgene® 100 mg/ml
solución inyectable, Merial, España) y Midazolam (0,5 mg/kg, Midazolam Normon® 15
mg/3 ml solución inyectable, Laboratorios Normon, España). Se administró vía
intramuscular una combinación de las anteriores en la misma jeringa. Una vez el
individuo estaba bajo sedación, se procedía a la cateterización de la vena marginal de
la oreja, y al rasurado de la extremidad posterior izquierda, así como a su lavado y
preparación aséptica. Posteriormente, se procedió a la inducción de los individuos
mediante la administración de Propofol (2 mg/kg, Propovet Multidosis® 10 mg/ml
emulsión inyectable, Ecuphar, España) vía intravenosa para, tras la intubación
endotraqueal, proceder al mantenimiento con Isofluorano inhalatorio (Isofluteck® 1000
mg/g, Karizoo, España) siguiendo la CAM referenciada para esta especie; 3,7 +/- 0,16%
29 vía inhalatoria. Como analgesia intraquirúrgica se administró en infusión continua
intravenosa, Fentanilo (0,01 mg/kg, Fentanest® 0,05 mg/ml solución inyectable, Kern
pharma, España). Del mismo modo, se administró el antibiótico Enrofloxacino (10
mg/kg, Baytril® 50 mg/ml solución inyectable, Bayer, España) vía intravenosa, también
en el periodo intraquirúrgico.

1.6. Procedimiento quirúrgico en el modelo animal

El individuo se colocó en decúbito lateral derecho una vez la extremidad estaba

preparada de manera aséptica. Se cubrió al paciente con paños quirúrgicos, dejando

libre la extremidad posterior izquierda.
En cuanto al abordaje, se realizó un abordaje craneolateral al fémur de modo
convencional, según lo descrito por Piermattei (2014) (Figura 4A). Tras la incisión
cutánea, se realizó una incisión en la lámina superficial de la fascia lata a lo largo del
borde craneal del músculo bíceps femoral de la longitud de la incisión. Se retrajo el
bíceps femoral caudalmente para exponer el músculo vasto lateral. Se hizo una incisión
en el tabique fascial del vasto lateral en su inserción en el borde lateral caudal del
fémur. Se retiró el vasto lateral de la superficie del fémur para exponer la diáfisis
femoral (Figura 4B).
En cuanto a la creación del defecto óseo crítico, una vez expuesta la diáfisis femoral, se
realizó una ostectomía de la diáfisis femoral media de 20 mm de longitud creando así el
defecto óseo crítico. Para realizar de forma correcta la ostectomía, se marcó primero el
hueso con la sierra de corte posicionando en un lateral la placa con el andamio para
seccionar la longitud exacta que tenía el andamio. (Figura 4C). Una vez eliminado el
segmento de hueso, se fijaron los dos extremos del hueso femoral con pinzas de
reducción para mantener la posición anatómica y se posicionó el andamio en el defecto
óseo crítico creado.
Respecto a la reducción de la fractura con andamio, una vez posicionado de manera
correcta, se redujo la placa con pinzas de reducción para evitar su movimiento (Figura
4D). Posteriormente, se taladró el orificio de la placa con la guía para brocas hasta que
se taladraron las dos corticales del hueso (Figura 4E).
Respecto a la fijación y estabilización de la fractura, se fijó la placa de titanio a los dos
fragmentos del fémur con dos tornillos colocados en los orificios más distales de ambos
extremos de la placa (Figura 4F).
Finalmente, respecto al cierre del abordaje, tras realizar un lavado de la zona con suero
salino fisiológico, se procedió al cierre del abordaje por planos con una sutura de
gliconato de 4/0 (Monosyn®, B. Braun, Alemania) en patrón continuo simple de
aposición.

1.7. Manejo post-quirúrgico en el modelo animal

Una vez finalizada la intervención, se administró vía intravenosa Metoclopramida (0,5
mg/kg, Primperan® 10 mg/2ml solución inyectable, Sanofi, España) y Ranitidina (2
mg/kg, Ranitidina Normon® 10 mg/ml solución inyectable EFG, Laboratorios Normon,
España); y vía subcutánea Meloxicam (0,4 mg/kg, Metacam® 2 mg/ml solución
inyectable, Boehringer, Alemania). Posteriormente, los pacientes volvieron a la sala de
estabulación del animalario. Cada individuo permaneció en un box individualizado con
restricción de movimiento durante 10 semanas.
Finalmente, los individuos se sacrificaron 10 semanas después del procedimiento
quirúrgico. Una vez el individuo estaba bajo sedación, siguiendo el protocolo
anteriormente descrito, se procedió a la cateterización de la vena marginal de la oreja,
para administrar posteriormente una sobredosis de solución comercial de Pentobarbital
sódico (Dolethal® 200 mg/ml solución inyectable, Vetoquinol, España).

1.8. Evaluación funcional del andamio: evaluación tomográfica

Tras el sacrificio de los individuos se realizó un estudio tomográfico con un scanner de
16 cortes (Siemens Somatom Scope® 16, Alemania). Para ello, los individuos se
posicionaron en decúbito dorsal y se escanearon con ajustes de 130 kVp, 170 mAs, en
algoritmo de tejido blando y hueso, con grosor de corte de 1 mm.
Para el análisis de las imágenes, se utilizó un software de visualización de imágenes
DICOM disponible comercialmente (Aycan Workstation v3.6) usando una ventana de
tejido blando (ancho: 350 UH; nivel: 40 UH) y una de hueso (ancho: 2000 UH, nivel: 600
UH).
La evaluación del grado de osificación de los defectos óseos se realizó de dos modos
independientes. El primer modo consiste en la valoración cuantitativa mediante la
medición de las Unidades Hounsfields (UH) y para ello se seleccionaron 6 puntos
independientes, en localización cortical media y medular a nivel proximal, medio y distal
del defecto óseo. El segundo modo consistió en la valoración semicuantitativa del grado
de osificación del defecto óseo, según la escala descrita por Stacy y cols. (2014). [20].

1.8. Caracterización físico-química de los soportes

Los soportes porosos UCV-0 y UCV-1 han sido caracterizados por espectroscopía
infrarroja por transformada de Fourier (FTIR), absorción de agua, ensayos mecánicos
de compresión en estado seco y en estado hinchado después de inmersión en agua
durante 24 horas a 37°C (temperatura del cuerpo humano).

1.9. Caracterización antibacteriana de los soportes

Las propiedades antibacterianas de los soportes han sido caracterizadas frente a una
bacteria Gram-positiva MRSA y una Gram-negativa Pseudomonas aeruginosa mediante
el método de difusión en agar.

2. Resultados
2.1. Evaluación del modelo experimental
El procedimiento de creación del defecto óseo crítico en fémur, así como la colocación
del andamio en dicha localización anatómica, se realizó de forma satisfactoria en todos
los individuos, sin que se evidenciaran complicaciones relevantes durante el

procedimiento quirúrgico. Uno de los individuos del grupo de UCV-0 falleció una hora
tras el procedimiento quirúrgico, por causas ajenas al modelo experimental o al objeto
de estudio. Asimismo, un individuo del grupo UCV-1 fue sacrificado a las dos semanas
después de la cirugía por una infección a nivel del foco quirúrgico, y otros dos también
del grupo CTR (grupo tratado con UCV-0) a las cuatro semanas por un colapso de la
fractura, que redundó en una pérdida del alineamiento y estabilización de la misma. Por
estos motivos, al periodo final del estudio llegaron un total de 4 individuos, 1
perteneciente al grupo CTR (25% de los individuos intervenidos y recuperados del
procedimiento anestésico) y 3 pertenecientes al grupo de TTO (grupo tratado con UCV-
1) (100% de los individuos intervenidos y recuperados del procedimiento anestésico)
(Tabla 1).

Tabla 1. Seguimiento de individuos

2.2. Evaluación funcional del andamio

2.2.1. Evaluación tomográfica
Como se ha comentado anteriormente, la evaluación del grado de osificación de los
defectos óseos se realizó de dos modos independientes: una valoración cuantitativa
mediante la medición de las UH, y una valoración semi-cuantitativa según la escala
descrita por Stacy y cols. (2014) [20]. A continuación, en la Tabla 2 se exponen los
resultados en UH para cada una de las regiones evaluadas, así como la media de cada
una de ellas para zona cortical (periférica) como medular (central).

Tabla 2. Resultados de las UH de 6 puntos independientes del defecto óseo de los 4

individuos.
De forma resumida, podemos observar como la media general en el grupo TTO fue de
578.67 UH en región cortical media, y de 176.56 UH en región medular, frente a 214.33
UH y 59 UH respectivamente del grupo CTR.
Para la valoración semi-cuantitativa, se valoró el grado de osificación del defecto óseo
crítico generado en los individuos a partir de la escala descrita por Stacy y cols. (2014)
[20]. Como se observa en la Tabla 3, el individuo CTR-1 obtuvo una puntuación de 3 en
la escala. En cambio, los individuos del grupo TTO, individuo TTO-1, TTO-2 y TTO-3
obtuvieron una puntuación de 4, 2 y 4, respectivamente.

Tabla 3 . Resultados del grado de osificación del defecto óseo siguiendo la escala
descrita por Stacy y cols.

Donde, de acuerdo con Stacy y cols. (2014) [20], la puntuación 2 indica signos que
sugieren una mínima o temprana osificación con una mineralización leve entre
fragmentos óseos sin contacto, un puente fino que conecta ambos fragmentos óseos, o
contacto cercano entre ambos fragmentos con márgenes de ostectomía esleróticos. La
puntuación 3 indica osteosíntesis leve con un puente a lo largo de menos del 50% de la
dimensión anteroposterior de ambos fragmentos, con los fragmentos óseos
desplazados o alineados en la dimensión anteroposterior. La puntuación 4 indica
osteosíntesis moderada con puente a lo largo del 50% o más de la dimensión
anteroposterior de ambos fragmentos, con los fragmentos óseos desplazados o
alineados en la dimensión anteroposterior con restos visibles de la ostectomía previa.
Del mismo modo, también se observa en una gráfica los resultados obtenidos del grado
de osificación del defecto óseo siguiendo la escala descrita por Stacy y cols. (2014) [20]
(Figura 5).
En la Figura 6 se puede observar una comparación tomográfica de la osificación de los
fragmentos óseos entre el grupo control UCV-0 y el grupo UCV-1. En esta figura se
observa un grado de maduración del callo más avanzado en el grupo UCV-1 que en el
grupo UCV-0.

2.2.2. Caracterización antibacteriana de los andamios

Los andamios UCV-1 mostraron capacidad antibacteriana frente a la bacteria Gram-
positiva multirresistente Staphylococcus aureus (MRSA) y frente a la Gram-negativa
Pseudomonas aeruginosa (ver Figura 7).
Tal y como se muestra en la Figura 7, se puede observar como el andamio UCV-1
produce un halo inhibitorio muy claro alrededor con la bacteria Gram-positiva MRSA y
no tan potente pero claramente observable frente a la bacteria Gram-negativa, a
diferencia del andamio UCV-0 que no inhibe el crecimiento bacteriano.

2.2.3. Caracterización físico-química de los andamios

Los resultados de espectroscopía FTIR confirman la síntesis del relleno de alginato
entrecruzado en el soporte de PLA, ya que en la figura 8(b) aparece un pico ancho
(entre 4000 y 3500 cm-1) en la zona característica de los grupos hidrófilos OH del
alginato en comparación con su ausencia en el soporte de PLA sin relleno, figura 8(a).

Además, según se muestra en la Tabla 4, el resultado de absorción en inmersión

muestra a temperatura del cuerpo humano (37°C) que el andamio UCV-1 absorbe agua
más rápidamente y mayor cantidad al contener el relleno de alginato entrecruzado.

Tabla 4 . Absorción de agua de equilibrio (h= (masa seca-masa hinchada/masa seca) en

inmersión a 37°C alcanzado en ambos tipos de andamios desde estado seco (tiempo
cero) hasta los 100 días.
Las propiedades mecánicas de compresión en estado seco e hinchado a 37°C
(temperatura del cuerpo humano), que son fundamentales para aplicaciones de
regeneración ósea, también mejoran con la incorporación del relleno de alginato
entrecruzado con los dos cationes de calcio y zinc (Tabla 5).

Tabla 5 . Ensayos mecánicos de compresión de los andamios UCV-0 (control) y UCV-1

en estado hinchado durante 24 horas a 37°C y en estado seco.
Por tanto, el relleno de alglnato tanto en estado seco como hinchado dentro del
andamio le proporciona integridad física al andamio de PLA mejorando sus propiedades
mecánicas de compresión.

En conclusión, se ha desarrollado un andamio poroso capaz de regenerar hueso

previniendo infecciones, incluidas las multirresistentes que tantos problemas están
causando actualmente y la Organización Mundial de la Salud estima que en el año
2050 será la causa principal de fallecimientos superando al cáncer. Es un proceso muy
reproducible y muy económico. Además, permite producir andamios a la carta para
cada paciente según las necesidades realizando un escaneo previo en el defecto óseo
del paciente. El 42% de los individuos fueron sacrificados por problemas de infecciones
en el foco de fractura; siendo el 100% de ellos pertenecientes al grupo UCV-0. Sin
embargo, se concluye que mediante la evaluación tomográfica, sobre todo en la
valoración cuantitativa, se puede observar la formación de callo más maduro en el
grupo UCV-1 que en el grupo UCV-0 sugiriendo una osificación más avanzada en el
grupo UCV-1 de andamios fabricados con PLA poroso por impresión 3D rellenos de
alginato entrecruzado con cationes divalentes de calcio y zinc en la proporción
adecuada. Además, estos soportes demostraron tener mayor capacidad de absorción
de agua y mejor comportamiento mecánico a compresión en estado seco e hinchados a
la temperatura del cuerpo humano. El éxito de la consistencia física para permanecer el
relleno de alginato entrecruzado dentro del andamio fue comprobado mediante
espectroscopía infrarroja FTIR.

Ejemplo 2: Ensayo histológico

1. Metodología
1.1. Obtención de muestras
Tras el sacrificio de los individuos se procedió a la extracción de las muestras
histológicas para lo que se expuso la región de la muestra femoral objeto de estudio
(diáfisis media de fémur), y mediante el empleo de una hoja de bisturí del número 11 y
una sierra oscilante se extrajo la región del andamio con su callo óseo, tomando un
margen de 1 cm proximal y distal al mismo.
1.2. Estudio histológico
La porción femoral que incluye el andamio queda fijada en paraformaldehído al 4% a
temperatura ambiente durante al menos 24h, para su posterior descalcificación en una
solución de EDTA comercial (Osteodec®, Bio-Óptica; Italia) durante 21 días, (hasta la
correcta descalcificación).
Transcurrido este periodo, las muestras fueron incluidas en bloques de parafina para su
sección y posterior conservación. De cada muestra se obtuvieron 3 secciones sagitales
de 5 micrómetros de espesor con un micrótomo para su posterior tinción con
Hematoxilina-Eosina (H-E). Los cortes histológicos fueron en primer lugar hidratados y
des-parafinados mediante el protocolo habitual de inmersiones en Xilol y alcoholes.

1.3. Valoración microscópica

La valoración microscópica se realizó con un microscopio óptico de alta resolución
equipado con diferentes objetivos (4X, 10X, 20X, 40X y 60X) (Olympus)
Las secciones teñidas con H-E, fueron sometidas a evaluación siguiendo la escala
semi-cuantitativa modificada descrita para evaluación histológica de defectos óseos
críticos (Oztürk et al., 2006) (Figura 9 a+b)

1.4. Resultados.
A continuación se muestra la Tabla 6 donde se expresan las valoraciones histológicas
para cada una de las muestras.

Tabla 6 : Valores obtenidos en la evaluación histológica para cada individuo: muestra

control de material de ácido poliláctico (UCV-0) y las tres réplicas de los andamios
constituidos a partir de PLA con relleno de alginato entrecruzado con calcio y zinc
(UCV-1)
Tal y como se ilustra en la Figura 9, en las muestras histológicas se observa una reglón
de transición en el individuo UCV-1 (Réplica 1) formada por tejido fibrocartilaginoso
estructurado que se introduce por los poros del andamio logrando una integración
adecuada del mismo con el callo fibroso. En otras secciones del mismo individuo (no
mostradas en la actual imagen), se encuentran fases de callo más avanzadas en
regiones periféricas con tejido cartilaginoso presente. Por el contrario, la muestra UCV-
0 evidencia una región de transición formada por un tejido fibroso desestructurado, que
no logra introducirse entre los poros del andamio, no logrando la integración esperada
del mismo.

En conclusión, el grupo UCV-1 parece mostrar un callo fibrocartilaginoso en alguna de

las regiones estudias, más avanzado que el observado en el individuo UCV-0. La
integración del andamio resultaría mayor en el grupo UCV-1, al permitir la formación de
callo fibroso en su trabeculado, además de en su región periférica.
Referencias:
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 REIVINDICACIONES

1 Un andamio para su utilización en ingeniería tisular ósea que comprende:

- un cuerpo, soporte o estructura porosa con forma tridimensional (3D) constituido a
partir de un material polimérico, y
- un hidrogel de alginato de calcio y zinc,
caracterizado porque dicho hidrogel de alginato de calcio y zinc se encuentra integrado
en el cuerpo, soporte o estructura porosa, y porque el hidrogel de alginato de calcio y
zinc comprende entre 4% a 7% en peso de iones de zinc y 3% a 6% en peso de iones
de calcio.

2. - Un andamio de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado por que el hidrogel de

alginato de calcio y zinc integrado en el cuerpo, soporte o estructura porosa se dispone
a modo de recubrimiento o relleno de la estructura o cuerpo poroso de material
polimérico.

3. - Un andamio de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores,

caracterizado por que el cuerpo, soporte o estructura porosa con forma tridimensional
(3D) está constituida a partir de un material polimérico seleccionado del grupo que
comprende: poliésteres alifáticos, poli(aminoácidos), copoli(éter-ésteres), oxalatos de
polialquilenos, poliamidas, policarbonatos derivados de tirosina, poli(iminocarbonatos),
poliortoésteres, polioxaésteres, poliamidoésteres, polioxaésteres que contienen grupos
amino, poli(anhídridos), polifosfacenos, biomoléculas, tales como colágeno, elastina,
ácido hialurónico, almidones bioabsorbibles, y mezclas de los mismos, poliésteres
alifáticos, tales como, homopolímeros y copolímeros de lactida, incluyendo ácido
láctico, D-, L- y mesolactida, glicólido,incluyendo ácido glicólico), \varepsilon-
caprolactona, p-dioxanona (1,4-dioxan-2-ona), carbonato de trimetileno (1,3-dioxan-2-
ona), derivados de alquilo de carbonato de trimetileno, \delta-valerolactona, \beta-
butirolactona, \gamma-butirolactona, \varepsilon-decalactona, hidroxibutirato (unidades
de repetición), hidroxivalerato (unidades de repetición), 1,4-dioxepan-2-ona, incluyendo
su dímero 1,5,8,12-tetraoxaciclotetradecan-7,14-diona, 1,5-dioxepan-2-ona, 6,6-dimetil-
1,4-dioxan-2-ona, 2,5-dicetomorfolina, pivalolactona, alfa, alfa-dietilpropiolactona,
carbonato de etileno, oxalato de etileno, 3-metil-1,4-dioxan-2,5-diona, 3,3-dietil-1,4-
dioxan-2,5-diona, 6,8-dioxabicicloctan-7-ona y mezclas de polímeros de los mismos.

4. - Un andamio de acuerdo con la reivindicación 3, caracterizado por que el cuerpo,

soporte o estructura porosa con forma tridimensional (3D) está constituido a partir de
ácido poli-láctico (PLA).

5. - Un andamio de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores,

caracterizado por que el recubrimiento de alginato de calcio y zinc comprende entre el
1,5 - 2% p/p (respecto al peso total del andamio)

6. - Un andamio de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores

caracterizado por que el volumen de poros es de 20 a 30% con un tamaño medio de
poro de 400 a 600 pm.

7. - Un andamio de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores,

caracterizado por que incorpora opcionalmente componentes seleccionados del grupo
que comprende: grafeno, óxido de grafeno, nanofibras de carbono , grafito, óxido de
grafeno reducido, grafeno reducido, nanotubos de carbono de pared simple o múltiple,
fullereno, óxido de grafeno funcionalizado con alquilamina o con amoniaco, grafeno
dopado con boro, grafeno dopado con nitrógeno, grafeno dopado con fósforo, grafeno
dopado con azufre, grafeno dopado con boro y nitrógeno, grafeno dopado con fósforo y
nitrógeno, grafeno dopado con azufre y nitrógeno y óxido de grafeno reducido
sulfonado, nanocompuestos con nanomateriales de carbono como el grafeno/TiO2,
grafeno/Fe3O4, grafeno/Mn3O4, grafeno/Pd, grafeno/Pt, grafeno/PtCo, grafeno/PtPd,
grafeno reducido/TiO2, grafeno reducido/Fe3O4, grafeno reducido/Mn3O4, grafeno
reducido/Pd, grafeno reducido/Pt, grafeno reducido/PtCo y grafeno reducido/PtPd y
nanopartículas de polipirrol, nanopartículas y/o nanofibras como las nanopartículas de
plata, oro, nanocelulosa, nanoarcillas ocerámicas.

8. - Un proceso para la obtención de un andamio de acuerdo con las reivindicaciones 1

a 7 que comprende las siguientes etapas:
a) Impresión 3D de un soporte, estructura o cuerpo poroso polimérico (1);
b) Inmersión a vacío de la estructura en una disolución acuosa de alginato de sodio
(2,3);
c) Sonicación (4);
d) Inmersión de la estructura de polímero + alginato sódico en una disolución acuosa de
cloruro cálcico (5,6);
e) Inmersión de la estructura de polímero +alginato cálcico en una disolución acuosa de
cloruro de zinc (7,8)
f) Purificación o lavado del andamio (10); y
g) Secado en horno (9).

9. - Un proceso de acuerdo con la reivindicación 8, caracterizado por que la impresión

3D del soporte, estructura o cuerpo poroso se lleva a cabo con la técnica de modelado
por deposición fundida.

10. - Un proceso de acuerdo con las reivindicaciones 8 - 9, caracterizado por que la

inmersión a vacío de la estructura en la etapa b) se realiza en una disolución acuosa de
alginato de sodio a una concentración de 2% p/v.

11. - Un proceso de acuerdo con las reivindicaciones 8 - 10, caracterizado por que la
inmersión de la estructura en la etapa c) se realiza en una disolución acuosa de cloruro
de calcio a una concentración de 0.5% p/v y la inmersión de la estructura en la etapa d)
se realiza en una disolución acuosa de cloruro de zinc a una concentración de 0.5% p/v.

12. - Un andamio de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para su uso

en procesos reconstructivos de defectos óseos tales como: defectos segmentarios,
defectos producidos por trauma, tumores osteolíticos, heridas de arma de fuego,
defectos causados por osteoartrosis, cirugía, osteomielitis, cirugía tumoral, defectos
óseos estructurales, defectos causados por osteoporosis, osteopenia y/o enfermedad
ósea metabólica.

13. - Un implante, injerto y sustituto de injerto óseo que comprende un andamio de

acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y 12.