CONTROL DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

1°C 2020- Aula Virtual

Ludmila Lopez Arias – Vanina Saraullo

ESTERILIZACIÓN: es el uso de procedimientos físicos o químicos para destruir, matar o eliminar
completamente los microorganismos, incluyendo las endosporas bacteriana.

DESINFECCIÓN: es un proceso menos letal que la esterilización. Elimina prácticamente todos los
microorganismos vivos reconocidos como patógenos, pero no necesariamente todas las formas microbianas
(endosporas bacterianas).

DECONTAMINACIÓN: es el término usado para describir el proceso o tratamiento al que se someten los
dispositivos e instrumentos médicos o las superficies, de manera de garantizar su seguridad para la posterior
manipulación. La decontaminación puede requerir esterilización, desinfección o simplemente limpieza con
agua y jabón.

ANTISEPSIA: es el uso de germicidas sobre la piel o el tejido vivo, con el propósito de inhibir o eliminar los
microorganismos.
 CONTROL DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

El control del crecimiento microbiano tiene como finalidad reducir la carga o el número de microorganismos
viables presentes en un material, alimento o en una solución.
Este control puede realizarse mediante diversos métodos (químicos o físicos) que permiten la eliminación
total del microbio o la inhibición de su crecimiento.

Bactericidas y Bacteriolíticos  Destrucción total microbiana

Bacteriostáticos  inhibición crecimiento microbiano

Resistencia natural de los

microorganismos a diversos
desinfectantes
RESISTENCIA
AGENTES ANTIMICROBIANOS
 Eliminación de microorganismos

 Esterilización por calor seco y calor húmedo

 Tratamientos industriales de esterilización:
# Pasteurización: Tratamientos HTST y LTLT
# Tindalización
 Esterilización por radiación
 Esterilización por tratamiento químico
 Esterilización por filtración
 Sensibilidad de los microorganismos a la temperatura

 Esterilización por alta temperatura (calor): método más utilizado para controlar el crecimiento de
microorganismos
 Sensibilidad diferencial frente a distintas temperaturas
 Las esporas son las formas más resistentes a las altas temperaturas

Crecimiento
vs.
Temperatura

Temp. Mínima Temp. Óptima Temp. Máxima

 Esterilización por calor seco en Horno Pasteur

El calor seco se utiliza principalmente para esterilizar material de vidrio y otros materiales sólidos
estables al calor.

• Material termotolerante
• Material sale seco del horno
• Para el material de vidrio del
laboratorio se consideran suficientes
dos horas de exposición a 160° C.
• Destrucción de pirógenos
 Esterilización por calor húmedo en Autoclave

El calor en la forma de vapor saturado y a presión es el agente más práctico para esterilizar ya
que el vapor a presión proporciona temperaturas superiores a las que se obtienen por ebullición.
El autoclave es básicamente una olla que regula la presión interna y el tiempo.
Los autoclaves de laboratorio se emplean generalmente a una presión de vapor de una atmósfera
por encima de la presión atmosférica lo cual corresponde a una temperatura de 120° C.
 Control de calidad
Sistema diseñado para incrementar la probabilidad de que cada resultado reportado por el
laboratorio sea válido y pueda ser utilizado con confianza por el médico para la toma una decisión
diagnóstica o terapéutica.
Control de calidad de equipos
Autoclaves: procedimiento por corrida diaria, semana, mensual.
Se examina registro de temperatura y precisión
Se utilizan indicadores de esterilización
Se chequea el nivel de agua.
Se realiza la limpieza externa e interna
Indicadores controles
Control biológico Cintas de autoclave
Esporas de Bacillus
*Los tiempos de esterilización variaran según el volumen (tamaño) del recipiente, con el fin de que ese tiempo
sea el suficiente para que todo el recipiente alcance la temperatura adecuada de esterilización.

En un autoclave los líquidos presentan ebullición energética de manera que los recipientes en general se
llenan hasta el 75% de su capacidad.
 Pasteurización
Tratamientos de calor controlado que sólo matan a ciertos tipos de microorganismos pero no a
todos (Listeria monocytogenes, Escherichia coli, Campylobacter spp. y Salmonella spp.).
Se usa en general para alimentos (leche, ciertas bebidas alcohólicas, jugos, sopas, etc.)

La temperatura seleccionada para la pasteurización se basa en el tiempo de

termodestrucción de microorganismos patógenos:

1. Tratamiento LTLT (low temperature/long time)

# Pasteurización a 62,8°C durante 30 minutos.

2. Tratamiento HTST (high temperature/short time)

# Pasteurización a 71,7 °C durante 15 segundos.

3. Proceso UHT (ultra high temperature)

# proceso en flujo continuo en el que el producto alcanza 140-150°C
durante unos pocos segundos y permite una conservación mucho más larga del alimento (hasta 8 semanas).
 Tindalización

Permite la eliminación de las formas de resistencia que poseen algunas bacterias.

Se utiliza cuando las sustancias a esterilizar no pueden calentarse por encima de
100°C sin que resulten dañadas.
Consiste en el calentamiento del material de 80 a 100°C hasta 1 hora durante 3 días
con sucesivos períodos de incubación. Las esporas resistentes germinarán durante
los períodos de incubación y en la siguiente exposición al calor las células
vegetativas son destruidas. John Tyndall
(1820-1893)
 Esterilización por filtración
La esterilización por filtración se utiliza para eliminar
microorganismos de los medios líquidos que son susceptibles al
calor. Por ej., las disoluciones enzimáticas o de vitaminas.

La muestra líquida se esteriliza a través de un filtro con un tamaño de poro de 0.42 μm (o menor).
Hay que tener presente que este sistema no elimina los virus ya que son de menor tamaño que el
poro.

Filtros de membrana son discos de ésteres de celulosa con poros que previenen el paso de los
microorganismos. Existen distintos tipos de filtro dependiendo del tamaño de poro. Estos filtros son
desechables. Además de utilizarse en la esterilización de líquidos se usan en el análisis
microbiológico de aguas ya que concentran los microorganismos existentes en grandes volúmenes
de agua.

Filtros HEPA (High Efficiency Particulate Air) está compuesto por pliegues de acetato de celulosa
que retienen las partículas (incluidos los microorganismos) que contiene el aire. Se utilizan en las
cabinas de bioseguridad (flujos laminares).
 Gabinetes de seguridad biológica

Estos gabinetes brindan seguridad al ambiente, al personal y al microorganismo que se manipula.

Existen diversos tipos de gabinetes de dependiendo del material con el cual se trabaja.
Continuación…
Esterilización por radiación
 Esterilización por radiaciones UV

Luz ultravioleta (UV): la porción ultravioleta del espectro incluye todas las radiaciones desde 200
a 390 nm. Las longitudes de onda alrededor de 265 nm son las que tienen mayor eficacia como
bactericidas (200-295 nm).

El mayor valor del tratamiento con radiaciones UV:

• Saneamiento del aire
• Esterilizar superficies de alimentos
• Reducir la población microbiana en quirófanos
• Esterilizar cuartos de llenado asépticos en la industria farmacéutica
• Superficies contaminadas en la industria de alimentos y leche

La radiación UV tiene poca capacidad para penetrar la materia por lo que sólo los microorganismos
que se encuentran en la superficie de los objetos que se exponen directamente a la acción de la luz
UV son susceptibles de ser destruidos.
 Esterilización por radiaciones ionizantes
Produce e- y radicales OH y H que destruyen moléculas vitales de los microorganismos,
sin producción de calor, por lo que los alimentos se conservan frescos. La mayoría de los
daños son a nivel ADN.

Sensibilidad Resistencia
Gram-negativas < Gram-positivas < esporas

Rayos gamma: Las radiaciones gamma de alta energía son emitidas por ciertos isótopos
radiactivos como es el Co60 pero son difíciles de controlar ya que este isótopo emite
constantemente los rayos gamma en todas direcciones. Son radiaciones muy penetrantes.

Rayos catódicos (Radiación con haz de electrones): Se usan para esterilizar material
quirúrgico, medicamentos y otros materiales. Una ventaja es que el material se puede
esterilizar después de empaquetado ya que éstas radiaciones penetran las envolturas a
temperatura ambiente.
 Esterilización por agentes químicos
Muchos germicidas químicos pueden ser perjudiciales para el ser humano o el medio ambiente.
Se deben seleccionar, almacenar, manipular, utilizar y eliminar con precaución, siguiendo las
instrucciones del fabricante.

En relación con la seguridad personal, se recomienda utilizar guantes, delantales y protección

ocular cuando se preparen diluciones de germicidas químicos.

FACTORES QUE INFLUYEN EN EL TRATAMIENTO GERMICIDA

 Número de microorganismos presentes

 Resistencia natural del microorganismo
 Cantidad de materia orgánica presente
 Tipo y concentración del germicida usado
 Duración y temperatura de exposición
Número de microorganismos presentes
Cuanto mayor es la biocarga, mayor es el tiempo que un desinfectante necesita para actuar. Por
ello, es fundamental realizar una escrupulosa limpieza de las superficies de los instrumentos, más
aún, cuando estos tienen componentes múltiples deben ser desarmados y limpiados pieza por
pieza.
Cantidad de materia orgánica presente
La presencia de materia orgánica como suero, sangre, pus, materia fecal u otras sustancias
orgánicas, pueden inactivar la acción de algunos desinfectantes comprometiendo su efectividad.
Tipo y concentración del germicida usado
Se relaciona con la potencia de acción de cada uno de los agentes para que produzcan la acción
esperada. Las concentraciones varían con respecto a los agentes desinfectantes y en algunos
casos pueden relacionarse con un efecto deletéreo sobre el material (corrosión).
Duración y temperatura de exposición
Cada método de desinfección y cada agente tiene un tiempo específico necesario para lograr el
nivel deseado. Además algunos desinfectantes tienen especificada la temperatura ambiente a la
que deben ser utilizados para su efectividad. El pH favorece la actividad de los desinfectantes.
 Agentes esterilizantes químicos

Óxido de etileno: Se usa en la industria para la esterilización de placas Petri, jeringas y otros
objetos de plástico que se funden a temperaturas superiores a los 100°C. El óxido de etileno actúa
en los microorganismos inactivando enzimas y otras proteínas que contienen grupos sulfidrilos
mediante reacciones de aquilación. Alto poder de penetración.

Glutaraldehído: Una solución acuosa al 2% presenta una amplia actividad antimicrobiana. Es

efectivo frente a virus, células vegetativas y esporas de bacterias y hongos. Se usa principalmente
para esterilizar instrumentos médicos.

Hipoclorito de sodio (lejía)

Continuación cuadro 7.8…
 El laboratorio de Microbiología: ciclo de materiales

Acondicionamiento del material de laboratorio para la esterilización:

Placas de Petri
Pipetas ¿cómo puedo
acondicionar y esterilizar
Tubos de ensayos (vidriería) este material?

Medios de cultivo
Ansa, Asas de Drigalski
Gasas
Soluciones de antibióticos (termosensibles)
Etc..