Gutiérrez Rodríguez Estrella Mariel

García Reyes Ian DaretT

REACTIVOS
CONSTITUYENTES DEL TÉCNICA DE SIEMBRA NECESARIOS QUE
NOMBRE DEL MEDIO / ENZIMA QUE SE INDICADOR Y pH AL y CANTIDAD DE TIEMP/TEMP DE DEBERAN INTERPRETACIÓN Y
MEDIO EVALÚA CUAL VIRA ESTADO FÍSICO INÓCULO INCUBACIÓN ADICIONARSE REPORTE DE RESULTADOS

Color del Medio:

Rojo: Indica un pH alcalino, lo

que sugiere que no ha ocurrido
fermentación de carbohidratos.

Amarillo: Indica un pH ácido, lo

que sugiere fermentación de
carbohidratos con producción
de ácidos orgánicos.

Gas:
g/L
Si se observa la formación de
Peptona de caseína 10 Rojo burbujas o desprendimiento de
fenol 0,018 gas, indica producción de gas.

Cloruro sódico 5 Sedimentación:

Enzimas: bacterias ● La formación de

fermentadoras de sedimentos en el
Caldo rojo de carbohidratos, como, fondo del tubo puede
Glucosa-6-fosfato ser un indicador de
fenol más deshidrogenasa, crecimiento
carbohidrato. Hexoquinasa, Enzimas de bacteriano o de
Indicador: Rojo fenol
la glucólisis, Lactato precipitación de
deshidrogenasa, Alcohol Con una pipeta productos
Prueba de deshidrogenasa, Ácido pH: 7.4 +- 2, vira de rojo automatica, transferir 0.1 Incubar a 35±2 °C Carbohidratos metabólicos.
fermentacion acético. a amarillo LIQUIDO mL al tubo con caldo. durante 18-48 horas. 5-10g
Positivo para fermentación:
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○ Cambio de
color del
medio a
amarillo.
○ Posible
formación
de gas
(indica
producción
de gas
durante la
fermentaci
ón).
○ Posible
formación
de
sedimento
s.

FUNDAMENTO DE LA PRUEBA:

​ El caldo rojo de fenol es un medio de cultivo líquido que contiene peptona, extracto de carne, fenol rojo y un carbohidrato específico, como la glucosa, la lactosa o la sacarosa.
​ El fenol rojo actúa como un indicador de pH en el medio de cultivo. En condiciones alcalinas, el fenol rojo presenta un color rojo, mientras que en condiciones ácidas se torna amarillo.
​ Si las bacterias presentes en la muestra son capaces de fermentar el carbohidrato presente en el medio, utilizarán este carbohidrato como fuente de energía. Durante la fermentación, las
bacterias producen ácidos como subproductos metabólicos.
​ La producción de ácidos durante la fermentación reduce el pH del medio de cultivo. Como resultado, el indicador fenol rojo cambia de color de rojo a amarillo en presencia de un pH ácido.
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REACTIVOS
CONSTITUYENTES TÉCNICA DE SIEMBRA NECESARIOS QUE INTERPRETACIÓN Y
DEL MEDIO / ENZIMA INDICADOR Y pH AL y CANTIDAD DE TIEMP/TEMP DE DEBERAN REPORTE DE
NOMBRE DEL MEDIO QUE SE EVALÚA CUAL VIRA ESTADO FÍSICO INÓCULO INCUBACIÓN ADICIONARSE RESULTADOS

TRIPTEÍNA.1.0
GLUCOSA 1.0
CLORURO DE SODIO.5.0
FOSFATO
MONOPOTÁSICO 2.0 Microorganismos que
ROJO DE FENOl 0.012 hidrolizan la urea: el
AGAR 15.0 A partir de un cultivo medio de cultivo es
puro del de color
microorganismo en rosado-rojizo.
Indicador:Rojo de fenol estudio, estriar la
Microorganismos que
superficie del medio en
Urea de Christensen Enzima: Ureasa pH: 8.2-8.6, de color el pico de flauta. no hidrolizan la urea:
amarillo a rosado-rojizo Se recomienda no En aerobiosis, a el medio de cultivo
punzar la capa profunda 33-37 oC, durante permanece de color
LÍQUIDO para controlar el color. 18-24 horas. N/A amarillo.

FUNDAMENTO DE LA PRUEBA:

En el medio de cultivo, la tripteína y la glucosa, aportan los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el rojo
de fenol es el indicador de pH. El agar es el agente solidificante.
Las bacterias hidrolizan la urea por medio de la enzima ureasa liberan amoníaco y dióxido de carbono. Estos productos alcalinizan el medio de cultivo haciendo virar el
indicador rojo de fenol del color amarillo al rojo.
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REACTIVOS
CONSTITUYENTES TÉCNICA DE SIEMBRA NECESARIOS QUE INTERPRETACIÓN Y
DEL MEDIO / ENZIMA INDICADOR Y pH AL y CANTIDAD DE TIEMPO/TEMP DE DEBERÁN REPORTE DE
NOMBRE DEL MEDIO QUE SE EVALÚA CUAL VIRA ESTADO FÍSICO INÓCULO INCUBACIÓN ADICIONARSE RESULTADOS

Extracto de carne 3 g/L

Inocular los tubos
gelatina 120 g/L y Indicador: tornasol
punzando con una
peptona de gelatina 5 (puro)
aguja, Si se utilizan
gelatina nutritiva g/L Tiosulfato de sodio al
placas de gelatina
pH 6.8 - 7.0 de rojo a nutritiva, se pueden a 22 -25°C o 35°C 0.05% en ciertos
Enzima :Gelatinasa azul Sólido estriar. durante 24 hrs- 14 días casos

FUNDAMENTO DE LA PRUEBA:

La gelatina, una proteína derivada del colágeno animal, se incorpora a diferentes medios de cultivo para determinar la capacidad de un microorganismo de producir enzimas proteolíticas
(proteínas), detectadas por digestión o licuefacción de la gelatina. las enzimas capaces de producir gelatinolisis de denominan gelatinasas. Estas enzimas son importantes factores de
virulencia de algunos microorganismos. El catabolismo de las proteínas por parte de las gelatinasas es un proceso de dos pasos: el resultado final es una mezcla de aminoácidos aislados, la
gelatina es hidrolizada por la gelatinasa en sus aminoácidos constitutivos, con pérdida de sus características gelificantes

REACTIVOS
CONSTITUYENTES TÉCNICA DE SIEMBRA NECESARIOS QUE INTERPRETACIÓN Y
DEL MEDIO / ENZIMA INDICADOR Y pH AL y CANTIDAD DE TIEMP/TEMP DE DEBERAN REPORTE DE
NOMBRE DEL MEDIO QUE SE EVALÚA CUAL VIRA ESTADO FÍSICO INÓCULO INCUBACIÓN ADICIONARSE RESULTADOS
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Fermentacion: color
amarillo en tubos con o
sin gas

Oxidacion: colo amarillo

solo en el tubo sin
aceite
Peptona de caseína 2 g,
Con asa recta, inocular
Cloruro de sodio 5 g
el medio de cultivo, Sin
Hugh Leifson (O/F) Fosfato dipotásico 0.3 g Indicador: azul de
picando el fondo y oxidacion/fermentacion:
Agar 2-3 g bromotimol
extendiendo sobre la a 37 °C durante de 18 a no hay cambio de color
Azul de bromotimol pH 7,2 +- 0.2 de
Sólido superficie del mismo. 24 hrs N/A en los tubos
0,03-0,08 g amarillo a azul de prusia
oscuro

FUNDAMENTO DE LA PRUEBA:

Es una prueba que indica del tipo de metabolismo energético: respiratorio (O) o fermentador (F). Se suele utilizar glucosa como sustrato. Se detecta la acumulación de ácidos con un
indicador ácido-base (azul de bromotimol). La bacteria se inocula con el hilo recto (por picadura ) y se incuban en condiciones de aerobiosis (sin parafina) y de anaerobiosis (con
parafina, tubo cerrado), simultáneamente.

REACTIVOS
CONSTITUYENTES TÉCNICA DE SIEMBRA NECESARIOS QUE
DEL MEDIO / ENZIMA INDICADOR Y pH AL y CANTIDAD DE TIEMPO/TEMP DE DEBERÁN INTERPRETACIÓN Y REPORTE
NOMBRE DEL MEDIO QUE SE EVALÚA CUAL VIRA ESTADO FÍSICO INÓCULO INCUBACIÓN ADICIONARSE DE RESULTADOS
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Observar el color del medio de

cultivo y la producción de gas.
FÓRMULA (en gramos
por litro) 1- Superficie
EXTRACTO DE CARNE alcalina/profundidad ácida (pico
3.0 rojo/fondo amarillo): el
PLURIPEPTONA 20.0 microorganismo solamente
CLORURO DE SODIO fermenta la glucosa.
5.0 2- Superficie ácida/Profundidad
LACTOSA 10.0 ácida (pico amarillo/fondo
SACAROSA 10.0 amarillo): el microorganismo
GLUCOSA 1.0 fermenta glucosa, lactosa y/o
SULFATO DE HIERRO sacarosa.
Y AMONIO 0.2 3- Superficie
TIOSULFATO DE alcalina/Profundidad alcalina
SODIO 0.2 (pico rojo/fondo rojo): el
ROJO DE FENOL 0.025 microorganismo es no
AGAR 13.0 fermentador de azúcares.
4- La presencia de burbujas o la
Con asa recta, inocular
ENZIMA ruptura del medio de cultivo
el medio de cultivo,
TSI indican que el microorganismo
picando el fondo y En aerobiosis, a
produce gas.
glucosa oxidasa, extendiendo sobre la 33-37°C durante 18
5- El ennegrecimiento del medio
lactasa, sacarasa pH FINAL: 7.3 ± 0.2 Sólido superficie del mismo. a 24 horas. N/A
indica que el microorganismo
produce ácido sulfhídrico.

FUNDAMENTO DE LA PRUEBA:
​En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano.
La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la
producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen
sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agar es el agente solidificante.
Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo
en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el
típico sulfuro de hierro de color negro.
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CONSTITUYENTES TÉCNICA DE SIEMBRA NECESARIOS QUE INTERPRETACIÓN Y
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NOMBRE DEL MEDIO QUE SE EVALÚA CUAL VIRA ESTADO FÍSICO INÓCULO INCUBACIÓN ADICIONARSE RESULTADOS

Citrato de sodio 2 g
cloruro de sodio 5 g
- Positivo: crecimiento
fosfato dipotásico 1 g
bacteriano con un
fosfato monoamonico 1
intenso color azul en el
g sulfato de magnesio
citrato de Simmons pico de flauta. -
0.2 g azul de
Negativo: ausencia de
bromotimol 0.08 g agar
crecimiento y
15 g
permanencia del color
pH: 6,8 de amarillo a Estriar la superficie del a 33-37 ºC durante verde del medio de
Enzima azul de prusia oscuro Solido medio de cultivo. 24-72 horas. N/A cultivo.

FUNDAMENTO DE LA PRUEBA:

En el medio de cultivo, el fosfato monoamónico es la única fuente de nitrógeno y el citrato de sodio es la única fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo
bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimático. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, el azul de bromotimol es el indicador de pH,
que vira al color azul en medio alcalino y el agar es el agente solidificante.

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NOMBRE DEL MEDIO QUE SE EVALÚA CUAL VIRA ESTADO FÍSICO INÓCULO INCUBACIÓN ADICIONARSE RESULTADOS
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PEPTONA DE
GELATINA (5.0), **Lisina
EXTRACTO DE Descarboxilasa: (+)
LEVADURA(3.0), pico violeta fondo
DEXTROSA (1.0), violeta (K/K)
L-LISINA (10.0), **Lisina
CITRATO DE descarboxilasa(-):
HIERRO Y AMONIO pico violeta, fondo
(0.5), TIOSULFATO amarillo ((K/A)
DE SODIO (0.04), **Lisina
AGAR (15.0), desaminasa (+) Pico
PÚRPURA DE MEDIO SIN SEMBRAR UN rojizo en la
BROMOCRESOL INOCULAR: pH:6.7 INÓCULO DENSO, superficie del
LIA Prueba de (0.02) ENZIMA: color lila Púrpura de POR PUNCIÓN Y medio fondo
descarboxilación de DESCARBOXILASA Bromocresol ESTRÍA amarillo H2S (+) :
LISINA en Agar O DESAMINASA DE amarillo a pH 5.2 y 35 - 37°C por 24 Hrs. Enegracimiento del
Hierro Lisina L-LISINA violeta a pH: 6.8 SÓLIDO En aerobiosis N/A medio

FUNDAMENTO DE LA PRUEBA: ES UN MEDIO QUE SE UTILIZA PARA LA DIFERENCIACIÓN DE MICROORGANISMOS ENTERICOS CON BASE EN SU CAPACIDAD ENZIMÁTICA DE
DESCARBOXILAR O DESAMINAR A LA L-LISINA, POR DESCARBOXILACIÓN DE LA LISINA, SE PRODUCE UNA DIAMINA LLAMADA CADAVERINA, QUE ALCALINIZA EL MEDIO (k), VIRANDO
EL INDICADOR AL COLOR VIOLETA, ESTA DESCARBOXILACIÓN SE DA SOLO EN MEDIO ÁCIDO, POR LO QUE ES NECESARIO QUE SE HAYA FERMENTADO LA GLUCOSA, SI NO HAY
LISISNA DESCARBOXILACIÓN, PERO SI HAY FERMENTACIÓN DE GLUCOSA, EL MEDIO SE TORNA AMARILLO A LAS 24 HORAS, PERO CON EL PICO COLOR VIOLETA POR EL CONSUMO
DE LAS PEPTONAS (DESAMINACIÓN AERÓBICA), LAS CEPAS DE LOS GÉNEROS PROTEUS, PROVIDENCIA Y ALGUNAS CEPAS DE MORGANELLA, DESAMINAN A LA L-LISINA,
PRODUCIENDO UN ÁCIDO ALFA-CETO-CARBÓNICO EL CUAL CON LA SAL DE HIERRO Y EN PRESENCIA DE OXÍGENO, FORMA UN COLOR ROJIZO EN LA SUPERFICIE DEL MEDIO

Referencias:

1. Macfaddin JF. Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia clínica. Madrid Etc.: Médica
Panamericana, Cop; 2003.