Lunes, 15 de abril del 2024
PRÁCTICA # 11
PERFIL LIPÍDICO
Laboratorio de Bioquímica Gral.
I
Índice
Portada………………………………………………………………………………………I
Índice………………………………………………………………………………………..II
Índice de tablas y figuras…………………………………………………………………II
Introducción ............................................................................................................. 1
Determinación de colesterol total ......................................................................... 2
Objetivos ................................................................................................................. 2
Materiales y métodos .............................................................................................. 2
Materiales ............................................................................................................ 2
Métodos ............................................................................................................... 3
Resultados .............................................................................................................. 4
Discusión ................................................................................................................. 6
Conclusión............................................................................................................... 7
Cuestionario ............................................................................................................ 8
Bibliografía .............................................................................................................. 9
II
Introducción
El perfil lipídico lo constituye una serie de análisis en las cuantificaciones séricas de
diferentes lípidos como lo son las lipoproteínas localizadas en la sangre, tales como
el colesterol total, el HDL colesterol, los triacilglicéridos, las LDL, y las VLDL, mismas
que sirven para el diagnóstico y seguimiento en las enfermedades metabólicas. El
colesterol es el lípido más asociado a enfermedades cardiovasculares y factor de
riesgo coronario, sobre todo el unido a las LDL (Túnez y Galván, 2006).
Sin embargo, existe una relación entre la elevada concentración de los
triacilglicéridos asociada a la acumulación de LDL y una menor cantidad de HDL
colesterol situación que evidentemente predispone a un individuo a presentar las
enfermedades cardiovasculares (Pinto, 2008).
El colesterol es uno de los lípidos que se encuentran en mayor concentración
en la sangre, se puede afirmar que la fracción lipídica del colesterol es la segunda
en cuanto a concentración y ésta se localiza principalmente formando parte de las
lipoproteínas. Químicamente el colesterol es un compuesto cíclico con estructura
básica de perhidrofenantreno con un total de 27 carbones, un radical OH en el
carbono 3 y un doble enlace entre los carbonos 5 y 6 (Devlin, 2006) (figura 1).
Figura 1.- Estructura del colesterol
El colesterol es un lípido muy poco soluble en agua (0.2 mg/100 ml). La
concentración de colesterol en el plasma de individuos sanos es de 150 a 200
mg/100 ml, lo que constituye una concentración doble de la concentración normal
de glucosa sanguínea. El colesterol existe en dos formas: como colesterol libre en
muy pequeñas cantidades y como colesterol esterificado mediante la unión de un
ácido graso no saturado de cadena media al carbono 3. Este tipo de colesterol es
el más frecuente tanto en sangre como en tejidos (Devlin, 2006).
La mayor parte de colesterol que existe en el organismo es sintetizada en el hígado,
esto implica que el colesterol exógeno tenga menor importancia metabólica. La
síntesis de colesterol endógeno es activada en primera instancia ante el excedente
de Acetil-S-CoA que haya en el hepatocito, ya que éste funciona como metabolito
precursor y en segunda instancia ante la presencia de efectores
1
hipercolesterolémicos que aumentan la síntesis de colesterol o bien disminuyen el
catabolismo del colesterol ya formado.
Determinación de colesterol total
Existen dos métodos para la determinación del colesterol: los químicos y los
enzimáticos. Los primeros se basan en la clásica reacción de Lieberman – Burchard
y posterior medición colorimétrica. Estos métodos han quedado obsoletos y
abandonados por su imprecisión, inexactitud, complejidad y frecuentes
interferencias analíticas.
Los métodos enzimáticos se basan en el empleo de la enzima colesterol esterasa
que hidroliza los esteres de colesterol, y el colesterol libre es el substrato de la
enzima colesterol oxidasa, que oxida específicamente al colesterol según la
siguiente reacción;
Colesterol Colestona + H2O2
Determinándose a continuación el agua oxigenada liberada mediante unas
reacciones enzimáticas auxiliares. Entre ellas las más difundidas son las que
emplean la enzima peroxidasa y el sistema cromogénico fenol – antipirina. La
mayoría de los métodos enzimáticos incorporan todas las enzimas en un solo
reactivo, facilitándose su utilización y automatización en el laboratorio (Díaz, et al.,
1997).
Objetivos
Determinar el nivel de riesgo coronario y aterogénesis mediante la evaluación clínica
de los metabolismos de los lípidos a partir de reacciones séricos enzimáticos de un
paciente.
Materiales y métodos
Materiales
- 7 tubos de ensayo
- 1 gradilla
- 2 pipetas de 5 ml
- 1 propipeta verde
- Micropipeta de 10 microlitros
- Micropipeta de 50 microlitros
- Puntillas blancas
- Celdas para espectrofotómetro
- Tubo Eppendorff
- Vortex
- Espectrofotómetro
- Microcentrífuga
- Incubadora
2
- Solución reactiva de colesterol (enzimático)
- Estándar de colesterol
- Solución reactiva de triacilglicéridos (enzimático)
- Estándar de triacilglicéridos
- Reactivo precipitante para HDL
- Suero no hemolizado
- Agua destilada
Métodos
a) Obtención de la fracción HDL colesterol para cuantificación
Fundamento: Las lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) y de baja densidad
(LDL) presentes en la muestra, precipitan en presencia de fosfotungstato y iones
magnesio. El sobrenadante contiene las lipoproteínas de elevada densidad (HDL),
cuyo colesterol puede ser cuantificable espectrofotométricamente.
1. Se colocó 0.5 ml de suero problema no hemolizado en un tubo Eppendorff
que contenía 1ml de reactivo precipitante.
2. Seguido a esto se homogenizó en un vortex por 2 minutos.
3. Luego se centrifugó en una microcentrífuga a 10000 rpm.
4. Se trabajó con el sobrenadante etiquetándolo como HDL colesterol.
b) Cuantificación del Colesterol Total y HDL Colesterol
Fundamento: Los métodos enzimáticos se basan en el empleo de la enzima
colesterol esterasa que hidroliza los esteres de colesterol, y el colesterol libre es el
substrato de la enzima colesterol oxidasa, que oxida específicamente al colesterol
liberando agua oxigenada y con la reacción secundaria de la peroxidasa oxidasa
transfiriendo el oxígeno del peróxido de hidrogeno a un aceptor cromogénico de
oxígeno, el cual puede ser cuantificable espectrofotométricamente.
1. Se preparó una serie de tubos de acuerdo con la Tabla I.
Tabla I. Preparación de tubos para cuantificar el colesterol total y el HDL colesterol.
Problema Problema
Tubo Blanco Patrón o control
Colesterol HDL Colesterol
Reactivo Enzimático
1 ml 1 ml 1 ml 1 ml
de Colesterol
Agua destilada 0.010 ml ---------------------- ------------------- ----------------------
Patrón o control de
0.010 ml --------------------- ----------------------
Colesterol
Suero Problema no
------------ ---------------------- 0.010 ml ----------------------
hemolizado
Problema HDL
------------- ---------------------- --------------------- 0.010 ml
Colesterol
3
2. Se homogenizaron todos los tubos y se dejaron reposar por 10 minutos
mínimo a temperatura ambiente.
3. Se calibró el espectrofotómetro a cero de absorbancia a 500 NM con el tubo
blanco y posteriormente se tomo la absorbancia de cada uno de los tubos.
c) Cuantificación de Triacilglicéridos
Fundamento: Al hidrolizar los triglicéridos por medio de enzimas como
lipoproteinlipasa, glicerol quinasa y peroxidasa oxidasa el cual transfiere oxígeno
del peróxido de hidrogeno a un aceptor cromogénico de oxígeno, dando una
coloración roja que puede ser cuantificable espectrofotométricamente. (Bucolo and
David, 1973).
1. Se preparó una serie de tubos de acuerdo con la Tabla II.
Tabla II. Preparación de tubos para la cuantificación de triacilglicéridos.
Tubo Blanco Patrón o control Problema
Reactivo enzimático de
1 ml 1 ml 1 ml
Triacilglicéridos
Agua destilada 0.010 ml ------------------------ -----------------
Solución patrón o control ----------------- 0.010 ml -----------------
Suero no hemolizado ----------------- ------------------------ 0.010 ml
2. Se homogenizaron todos los tubos y se dejaron reposar por 10 minutos
mínimo a temperatura ambiente.
3. Se calibró el espectrofotómetro a cero de absorbancia a 500 nm con el tubo
blanco y posteriormente se tomó la absorbancia de cada uno de los tubos.
Resultados
Para calcular las concentraciones aplique la siguiente fórmula para cada uno de
los analitos trabajados:
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑝𝑟𝑜𝑏𝑙𝑒𝑚𝑎
𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎𝑠 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠 𝑜 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 = × 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 = 𝑋 𝑚𝑔/𝑑𝐿
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙
Valores de referencia:
Colesterol total
Hasta 30 años: 120-215 mg/dl
30- 39 años: 135-240 mg/dl
40-49 años: 140-280 mg/dl
50- 59 años: 145-295 mg/dl
Colesterol-HDL
Hombre > 55 mg/dl
Mujer > 65 mg/dL
Triglicéridos
36-165 mg/dl
4
Resultados Problema 1.
Datos: PACIENTE #1
Nombre: Pablo Armendáriz
Edad: 18 años
Peso: 80kg
Altura: 1.78m
Las siguientes tablas indican cuales fueron los valores de absorbancia para el
paciente 1.
Tabla III. Valores de absorbancia obtenidos para el control y el problema de triglicéridos.
Absorbancia triglicéridos
Blanco 0
Patrón o control 0.048
Problema triglicéridos 0.011
Concentración del control: 200mg/dL
Tabla IV. Valores de absorbancia obtenidos para el control y el problema de colesterol.
Absorbancia colesterol
Blanco 0
Patrón o control 0.452
Problema colesterol 0.418
Problema HDL 0.134
Concentración del control: 200mg/dL
Operación:
CT=0.418/0.452 x200mg/dL=
CT= 0.924 x 200mg/dL=
CT= 184.95 x 2=
CT= 369.91mg/dL
HDL= 0.134/0.452 x 200 mg/dL=
HDL= 0.296 x 200mg/dL
5
HDL= 59.29 x 2=
HDL= 118.58 mg/dL
Triglicéridos= 0.011/0.048 x 200mg/dL
Triglicéridos= 0.229 x 200mg/dL
Triglicéridos= 45.833mg/dL
En base a los resultados se pudo determinar que el paciente presenta altos
niveles de colesterol total tomando en cuenta los niveles de referencia de acuerdo
con edad, por consiguiente, presento altos niveles de colesterol-HDL y se
encuentra dentro del rango normal de triglicéridos.
Discusión
Dentro de esta práctica de perfil lipídico se utilizó la sangre de dos estudiantes del
laboratorio de bioquímica.
El paciente 1 fue el estudiante Pablo Iván Armendáriz, el cual se encontraba en una
ingesta de alimentos de menos de 1 hora después de la toma de la muestra. De su
muestra se analizaron los niveles de colesterol y triglicéridos, y para saber esto se
debe de tener en cuenta que los triglicéridos son un tipo de lípidos (grasas) que se
utilizan como energía que se almacena dentro de las células grasas (lipocitos). Los
alimentos ricos en carbohidratos si son consumidos en exceso se convierten en
lípidos los cuales son los triglicéridos debido a que se están consumiendo más
calorías de las que se queman pudiendo así provocar una hipertrigliceridemia. Para
saber esto se debe de toar en cuenta que los niveles normales de triglicéridos son
de menos de 150 mg/dl o menos de 1.7 milimoles por litros (mmol/l), cuando se está
al límite es de 150 a 199 mg/dl, alto de triglicéridos 200 a 499 mg/dl y muy alto de
500 mg/dl o más. Se debe medir y controlar bien porque los triglicéridos altos están
ligados al endurecimiento de las arterias o engrosamiento de estas, pueden
provocar problemas cerebrovasculares, ataques al corazón, pancreatitis, además,
puede ser un indicio de patologías como la diabetes tipo 2, hormonales tiroideas. El
colesterol es una sustancia cerosa encontrada en la sangre necesaria para crear
células sanas, tener el colesterol alto puede obstruir las vías sanguíneas
provocando la dificultad de fluir la sangre a través de estas, y también se pueden
desprender estos depósitos, provocando un ataque al corazón o un problema
cerebrovascular. El problema del colesterol alto puede ser algo hereditario por
causa de un mal estilo de vida de los padres. El colesterol es un tipo de lipoproteínas
y obtiene esta clasificación porque es un tipo de lípidos que se mueven pegados a
las proteínas que circulan en sangre, aunque hay otros como el LDL y el HDL. Hay
factores dentro del control de los triglicéridos que se pueden controlar como lo es la
inactividad física, la obesidad y una dieta no saludables, pero al igual que existen
6
factores controlables hay factores que no se pueden controlar, como lo es la
genética y una descomposición del hígado, u afecciones crónicas como lo es la
diabetes, el VIH, enfermedades renales crónicas son un ejemplo de ellas. Dentro de
los factores de riesgo que entran en cuanto a provocar niveles altos de colesterol
esta la mala alimentación el tabaquismo, sedentarismo, consumir alcohol y la edad.
Los niveles normales del colesterol en una persona sana deben de ser menores a
los 200 mg/dl. La característica principal y que diferencia el colesterol de los
triglicéridos es que el colesterol es un tipo de lípido que se utiliza para la
construcción de células sanas y algunas hormonas mientras que los triglicéridos son
un tipo de lípidos de almacén los cuales ayudan a almacenas calorías en forma de
grasa que será convertida en energía para el cuerpo.
Anteriormente se mencionaron las lipoproteínas HDL y LDL. El HDL o lipoproteínas
de alta densidad (High Density Lipoprotein) es llamado colesterol “Bueno” debido a
que este se transporta de cualquier parte del cuerpo al hígado donde posteriormente
será eliminado y el LDL lipoproteínas de baja densidad (Low Density Liporotein) o
el llamado colesterol “malo” porque en un nivel alto de este conlleva a una
acumulación de colesterol en las arterias. Por otro lado, se tiene el VLDL que son
lipoproteínas de muy baja densidad (Very Low Density Protein) este se produce en
el hígado y se libera en el torrente sanguíneo para suministrar un tipo especifico de
grasa. Este VLDL está formado por triglicéridos, el exceso de este tiene
consecuencias muy similares a las consecuencias producidas por niveles altos de
los triglicéridos. Algo que hace peligroso al VLDL es el hecho de que no hay una
manera exacta de calcular el nivel de este por lo tanto se hace un porcentaje
derivado de los niveles de triglicéridos. Un porcentaje alto de esta lipoproteínaes de
30 mg/dl y de las mejores maneras para bajar los niveles de este, es una dieta sana,
ejercicio lo cual nos lleva a que la mejor manera de bajar estos niveles es teniendo
un peso adecuado para la altura.
Conclusión
Los alumnos comprendieron la utilidad de la centrifugación como técnica de
separación, en este caso de la sangre, separando las células sanguíneas sólidas
de la parte líquida donde se pudo trabajar con la parte que se necesitaba para
realizar esta práctica, que en este caso fue el suero, mediante las soluciones
realizadas y la posterior toma de la absorbancia de los tubos, se interpretó mediante
una ecuación, los niveles de colesterol total , de lipoproteínas de alta densidad y de
triglicéridos, donde se logró una aproximación realista a los valores de referencia.
7
Cuestionario
1. Factores predisponentes para un infarto
Existen varios factores que hacen más propenso un infarto como lo puede ser el
sedentarismo la edad, diabetes, sobrepeso, dieta no saludable.
2. Importancia clínica de la Hipercolesterolemia
Dentro de las importancias es que esta da mayores índices de riesgos
cardiovasculares además de que niveles excesivos de LDL genera que las arterias
se obstruyan pudiendo generar una embolia, hipertensión, etc.
3. Importancia clínica de la Hipertrigliceridemia
Al tener los triglicéridos elevados estos pueden provocar que se tenga un corazón
graso haciendo que se puedan padecer enfermedad coronaria, además, esto puede
llenar a generar diabetes tipo 2, prediabetes e hipertiroidismo.
4. ¿Qué otros órganos afectan las dislipidemias?
Principalmente el corazón, páncreas y el hígado.
5. ¿Qué tipos de colesterol hay?
Existe el colesterol HDL (lipoproteínas de alta densidad), LDL (lipoproteínas de baja
densidad), VLDL (lipoproteínas de muy baja densidad) y colesterol total el cual es
es una suma de HDL y LDL.
6. Mencione algunas enfermedades relacionadas con los niveles altos de colesterol
Lupus, hipertiroidismo, diabetes tipo 2 e hipertensión arterial.
7. ¿Cómo regula el colesterol su propia síntesis?
Principalmente una enzima llamada HMG-CoA reductasa
8. Resuma los acontecimientos químicos de la biosíntesis de colesterol
Se comienza sintetizando el Mevanolato, luego el Mevanolato se convierte en
Isopentenil-pirofosfato a través de dos fosforilaciones sucesivas y una
descarboxilación para luego 6 unidades del Ispentenil-pirofosfato se convierta en
Escualeno y del Escualeno a el lanosterol mediante reacciones de un Epóxido y
acumulación de sus moléculas y luego el lanosterol se convierte en Colesterol
mediante el retículo endoplasmático.
8
Bibliografía
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