ENZIMAS

Son catalizadores biológicos macromoleculares, capaces de acelerar la velocidad de una reacción química
específica (para un determinado sustrato). En su mayoría son proteínas, sin embargo, también se encuentran
las ribozimas, moléculas de RNA que también funcionan como catalizadores biológicos.
IMPORTANCIA
➢ Tienen un papel importante en el metabolismo celular
➢ Cada paso de una vía metabólica está catalizado por una enzima
➢ Los niveles de enzimas en sangre son importantes para el diagnóstico de enfermedades
➢ En farmacología, muchos fármacos son inhibidores de la actividad enzimática
➢ Industria de la alimentación y agricultura
ESTRUCTURA DE LAS ENZIMAS. Puede estar formada por:
A. Una cadena peptídica (estructura terciaria)
B. Varias cadenas peptídicas (estructura cuaternaria)
Sitio Activo. Es el sitio de unión del sustrato a la enzima y donde se lleva a cabo la catálisis. Es una región
específica de la enzima donde se une el sustrato.
Características del Sitio Activo:
A. Especificidad para el sustrato
B. Es una pequeña región 3D de la proteína. El sustrato interactúa con residuos
de aminoácidos. Los residuos pueden estar lejos en la secuencia primaria de
las proteínas.
C. Se enlaza al sustrato a través de diferentes reacciones (no covalentes)
D. Hay regiones de contacto y regiones catalíticas
E. Puede estar conformado por residuos distantes en la estructura primaria de
la proteína
F. Es necesario el arreglo tridimensional adecuado de los aminoácidos que
forman la cadena polipeptídica de la enzima para lograr una actividad
funcional óptima
Tipos de aminoácidos del Centro Activo:
➢ Estructurales: No establecen enlaces con el sustrato. Son los responsables de la forma de la proteína.
En la lisozima, de los 129 aa 124 son estructurales
➢ De Fijación: Establecen enlaces débiles con el sustrato y lo fijan
➢ Catalizadores: Son los que al fijarse al sustrato provocan el rompimiento de algunos enlaces en la
proteína. Son los responsables de la transformación del sustrato
AMINOÁCIDOS FORMA ÁCIDA FORMA BÁSICA

Glutamato y Aspartato R - COOH R – COO-

Lisina y Arginina R – NH3+ R – NH2
Cisteína R - SH R – S-
Histidina NH+ N
Tirosina R – OH R – O-
MODELOS DE UNIÓN DE ENZIMA-SUSTRATO
➢ Modelo de la llave y la cerradura (Fisher, 1890). Explicaba que el centro activo y
el sustrato son perfectamente complementarios. DESMENTIDO.
➢ Modelo de Ajuste inducido (Koshland, 1958). Explica que la unión del sustrato
induce un cambio en el centro activo que aumenta la complementariedad.
Reconocimiento molecular dinámico. Inicialmente, el sustrato es
semicomplementario al sitio activo (forma un complejo de transición ES),
posteriormente se vuelve completamente complementario. En el estado de
transición las interacciones débiles que se forman entre la enzima y el sustrato
son óptimas.
CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS. Existe una clasificación estructural y una internacional.
Clasificación Estructural
A. Simples: Son proteínas conformadas sólo por aminoácidos
B. Conjugadas: Son proteínas conformadas por aminoácidos y por una porción no aminoacídica
C. Ribozimas: Enzimas formadas por RNA catalítico
En una enzima conjugada:
✓ Apoenzima: Porción proteica de la enzima
✓ Holoenzima: Es el conjunto de la proteína unida a la porción no proteica, que
puede ser un cofactor (coenzima y/o ion metálico) o un grupo prostético
(componente orgánico unido covalentemente a la apoenzima)

Clasificación Internacional. Son clasificadas por la reacción que catalizan

➢ Oxidorreductasas: Transferencia de electrones. Oxidasas, peroxidasas, oxigenasas o reductasas.
Cofactores: NAD y FAD
➢ Transferasas: Transferencia de grupos. Transcarboxilasas, transaminasas, transmetilasas. Requieren
de PLP. Son enzimas conjugadas
➢ Hidrolasas: Transferencia de grupos al agua. Esterasas, fosfatasas y peptidasas.
➢ Liasas: Adición de grupos a dobles enlaces o formación de dobles enlaces por eliminación de grupos.
Descarboxilasas (liberan CO2), y las sintasas (unen dos moléculas sin usar ATP)
➢ Isomerasas: Transferencia de grupos dentro de la misma molécula. Racemasas, Epimerasas, Mutasas.
Forman isómeros.
➢ Ligasas: Formación de enlaces C-C, C-S, C-O y C-N por reacciones de condensación acopladas a la
hidrólisis del ATP. Sintetasas, carboxilasas (unen al CO2 con otra molécula). Usan ATP.
NOMENCLATURA DE LAS ENZIMAS. Usualmente se les da un nombre relacionado con la reacción catalizada,
el sustrato o su mecanismo de acción. Sufijo –asa. Ej: Glucoquinasa (fosforila la glucosa).
Características de las Enzimas
Poseen alta Especifidad por el sustrato. Pueden diferencias estereoisómeros e incluso diferencias átomos
similares alrededor de un carbono anomérico. La Especifidad puede ser:
A. Absoluta: Una enzima actúa sobre un solo sustrato.
B. Relativa: Una enzima actúa sobre diferentes sustratos que tienen el mismo tipo de enlace o un
determinado grupo.
C. Esteroespecífica: Algunas enzimas pueden catalizar la transformación de determinado sustrato que
tiene determinada configuración (cis/trans – L/D)
Nunca son afectadas por la reacción química global
Producen desolvatación del sustrato
1. El sustrato en disolución se encuentra rodeado de moléculas de agua que
se organizan a su alrededor mediante interacciones débiles
2. De igual manera, la enzima se encuentra rodeada por moléculas
organizadas de agua
3. Al formarse el complejo ES se desolvata el sustrato y se desorganiza más
el agua, incrementándose la entropía (desorden) del sistema

Nunca alteral el equilibrio químico de la reacción. No varía el G. Para una

reacción catalizada por enzima como para una sin enzima el G (variación de
energía libre de Gibbs) ES IGUAL.
Aceleran considerablemente las reacciones químicas reduciendo la energía de
activación (G ‡). La energía de activación es la diferencia entre la energía de
los reactivos y la del estado de transición. El estado de transición es una
estructura molecular transitoria, es menos estable.
¿Cómo reducen las enzimas la energía de activación?. Al sustrato unirse al
sitio activo (de manera semicomplementaria), establece interacciones débiles
y se produce una liberación de energía libre de Gibbs, cambiando el sustrato a un estado de transición mucho
más afín y complementario por el sitio activo; se libera entonces más energía libre (G) denominada energía
de fijación. Dicha energía de fijación reduce el nivel energético del estado de transición, permitiendo que éste
sea alcanzado más fácilmente.
La energía de fijación aporta gran parte de la energía necesaria para alcanzar el estado de transición,
disminuyendo por lo tanto la energía de activación. Una vez alcanzado el estado de transición, se ha superado
la cuesta energética y la reacción tenderá a generar producto hasta alcanzar su equilibrio químico.
FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
➢ PH
➢ Temperatura
➢ Concentración de cofactores
➢ Concentración de enzimas
➢ Concentración de sustratos
➢ Inhibidores
Varía el factor a estudiar y los demás permanecen constantes
 PH: Existen enzimas cuya actividad alcanza su punto máximo a pH ácido,
otras a pH neutro y otras a pH básico. Estas se desnaturalizan y pierden
su actividad si el pH varía más allá de unos límites estrechos.
Temperatura: A bajas temperatuas ocurre una disminuacion de la
actividad enzimática, mientras que a altas temperaturas se desnatuzaliza.
CINÉTICA ENZIMÁTICA
Es la rama de la química que se encarga del estudio de la velocidad de las reacciones catalizadas
enzimáticamente y aquellos factores que la modifican. Los principios generales de las reacciones químicas se
aplican también a las reacciones enzimáticas.
Velocidad de la reacción. Es el número de moléculas de SUSTRATO que se transforman en PRODUCTO por
unidad de TIEMPO.
Además,
Entonces la velocidad de reacción es proporcional a la [S] y a una
constante de velocidad (k)
Modelo de cinética enzimática de Michaelis y Menten

Sin embargo, al tratarse de tiempos muy cortos, la ecuación queda:

Agrupando las constantes:

Ecuación de Velocidad Inicial

Sustituyendo Km en la ecuación de velocidad inicial

se obtiene la ECUACIÓN DE MICHAELIS-MENTEN

• ALTO K-1 + K2 = ALTO KM = BAJA AFINIDAD

• ALTO K1 = BAJO KM = ALTA AFINIDAD

Al graficar esta fórmula nos da la curva de Michaelis-Menten

La Km indica:
1. La afinidad de la enzima por el sustrato
2. La [S] a la mitad de la VMAX
Kcat o CONSTANTE CATALÍTICA: Indica el número de recambio. Es el número de moléculas de sustrato
convertidas en producto por molécula de enzima en unidad de tiempo. Mide la velocidad de la reacción

• Kcat alta: alta velocidad

• Relación KCAT/Km: Mide la eficiencia de la enzima. Mayor valor = mayor eficiencia. KCAT ALTA – Km
Baja
Modelo de cinética enzimática de Lineweaver-Burk
O gráfica de dobles recíprocos, es la representación inversa de la gráfica de M-M. Sus valores son 1/X, es
decir, siendo divididos por 1.

• PERMITE OBTENER UN VALOR MUCHO MÁS EXACTO DE LA VELOCIDAD MÁXIMA

• SU VALOR SIEMPRE SERÁ MAYOR QUE EL DE M-M

CAATÁLISIS ENZIMÁTICA. Mecanismos de Catálisis Enzimática

Se debe garantizar que el complejo ES forme E+P y no retorne a la formación de E+S. Además de la energía
de fijación producida cuando se forma el complejo ES, existen otras contribuciones al mecanismo catalítico
en general.
1. Catálisis ácido-base específica
2. Catálisis ácido-base general
3. Catálisis covalente
4. Catálisis por iones metálicos
Catálisis Ácido-Base. Existen sustratos que al reaccionar originan
compuestos intermedios tan inestables que inmediatamente se
reconvierten en sustrato antes de transformarse en productos.
Catálisis Ácido-Base específica. El agua puede cederle o quitarle un
protón al intermedio inestable y transformarlo en otro compuesto
inestable que fácilmente se transforma en producto.
Catálisis Ácido-Base general. En una reacción catalizada por
enzimas, la transferencia del protón requiere de otro grupo. En
estos casos las cadenas laterales y de aminoácidos (catalíticos)
pueden actuar como dadores y aceptores de electrones. Pueden
intervenir grupos carboxilato, aminos, imidazol o guadinino.
Catálisis Covalente: Implica la formación de un compuesto intermediario que se une a la enzima de manera
covalentemente. En esta catálisis, el ataque de un grupo nucleófilo (-) o electrófilo (+) del centro activo de la
enzima sobre el sustrato conduce a la unión covalente transitoria del sustrato a la enzima.
ENZIMAS NO MICHAELIANAS. No obedecen a la ecuación de M-M. Se dice que su cinética es no michaeliana.
Ocurre en:
Enzimas Alostéricas: Una enzima alostérica presenta un sitio diferente al sitio activo donde se une el
modulador (sitio alostérico).

• Suelen ser enzimas multiméricas (con cooperatividad) o monoméricas (sin cooperatividad).

• Su gráfica no es hiperbólica, sino sigmoidal
Enzimas Multisustrato. Los mecanismos enzimáticos pueden ser:
1. Mecanismo de único sustrato (Michaeliana): Enzimas que solo unen un sustrato, pretenden medir la
afinidad con la que se une el sustrato y la velocidad con la que lo transforma en producto.
2. Mecanismos de múltiples sustratos (no Michaeliana): Enzima que une varios sustratos, la cinética
enzimática puede mostrar también el orden en el que se unen los sustratos y el orden en el que los
productos son liberados.
Dos mecanismos explican este tipo de comportamiento: Secuencial y de doble desplazamiento.
❖ Mecanismo Secuencial: Ambos sustratos se unen al centro activo
antes de que se libere cualquiera de los productos. Ambos
sustratos deben encontrarse simultáneamente en el centro activo
para poder formar el complejo terciario ES1S2. Puede ser:

▪ Al azar: No existe secuencia obligatoria en la entrada de sustrato ni en la salida de producto.

Puede entrar tanto S1 primero como S2, y liberarse tanto P1 primero como P2.
▪ Ordenado: Existe una secuencia establecida de entrada de los sustratos y de salida de los
productos.
❖ Mecanismo de doble desplazamiento o ping-pong: La
enzima libre se activa con el primer sustrato, formando el
primer producto, esto genera una modificación temporal
en la enzima y reacciona con el segundo sustrato formando
un nuevo producto. NO SE FORMA COMPLEJO TERCIARIO.
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
Inhibidores: Son pequeñas moléculas químicas o iones que interfieren con las reacciones, ralentizándolas o
deteniéndolas.
Factores que afectan la actividad enzimática. Tipos de inhibición
Inhibición Irreversible: Inactiva irreversiblemente a la enzima porque el inhibidor queda unido
covalentemente a ella (principalmente en el sitio activo de la enzima). El efecto persiste hasta que el
organismo produzca más enzimas. Se puede unir tanto a la enzima libre como al complejo ES. Ej: aspirina,
cianuro, penicilina.
➢ Inhibidores Suicidas: Un compuesto reacciona con la enzima y se convierte en otro compuesto muy
reactivo que bloquea la enzima.
Inhibición Reversible: No covalente. Puede ser:
➢ Competitiva: Una molécula estructuralmente parecida al sustrato se une al sitio activo de la enzima
libre, pero no puede ser transformada en producto, sino que ocupa momentáneamente a la enzima.
Ej: estatinas y colesterol, metotrexato y ADN.
o En M-M: Misma VMAX. Aumenta la Km. Disminuye la afinidad de la enzima por el sustrato.
o En L-B: Las rectas se cruzan en el mismo punto del eje Y (misma VMAX). En el eje X, la recta del
inhibidor se encuentra más cerca del 0, lo que se traduce en menor afinidad al calcular la Km.

➢ No Competitiva: El inhibidor se une a otro sitio de la enzima que no es el sitio activo, lo cual distorsiona
la forma de la enzima impidiendo o dificultando el proceso catalítico. En este caso el inhibidor no se
parece al sustrato. El inhibidor puede unirse tanto a la E como al complejo ES.
o En M-M: Disminuye VMAX. Se mantiene igual la Km. No afecta la afinidad.
o En L-B: Las rectas se interceptan en el eje X (misma Km), en el eje Y pasa por arriba de la otra
recta (más alejada del 0) ya que disminuye la VMAX.

➢ Acompetitiva: El inhibidor se une a un sitio distinto al sitio activo, solo al complejo ES. Disminuye el
valor el valor de Km y de VMAX.
o En M-M: Disminuye Km (más cerca del 0) y la VMAX (se satura más rápido)
o En L-B: Las rectas son paralelas. La recta del inhibidor se encuentra más alejada del 0 en el eje
Y (menor Km) y se encuentra superior en el eje X (menor VMAX)
REGULACIÓN ENZIMÁTICA
➢ Las vías opuestas de las rutas metabólicas deben ser reguladas de manera independiente para evitar
ciclos fútiles.
➢ Por razones de economía, los puntos regulatorios suelen encontrarse al inicio de una ruta metabólica
➢ Dichos puntos regulatorios suelen corresponder a reacciones fisiológicamente irreversibles, para que
la regulación de la misma no afecte la vía opuesta.
Mecanismos de Regulación Enzimática
A. Compartimentación: Las reacciones químicas opuestas suelen producirse en compartimientos
celulares diferentes para evitar ciclos fútiles
B. Isoenzimas: Catalizan la misma reacción en diferentes tejidos. Poseen diferentes secuencias de
aminoácidos, diferentes cadenas y diferentes Km.
C. Modulación alostérica: El modulador se une a un sitio distinto al sitio activo y puede ocurrir activación
o inhibición enzimática. La unión es reversible, débil, e implica cambios conformacionales. Suele ser
en enzimas multiméricas, pero también puede ocurrir en monoméricas. Las multiméricas tienen
cinética sigmoidal.
a. Moduladores alostéricos positivos: Reducen la Km, aumentando la afinidad de la enzima por
el sustrato. Suelen ser los productos de vías opuestas o paralelas. Puede ser por modificación
de sitios activos o por liberación de subunidades catalíticas.
b. Moduladores alostéricos negativos: Aumentan la Km, reduciendo la afinidad de la enzima por
el sustrato. Suelen ser los productos de dicha vía metabólica (retroalimentación negativa).
D. Modulación covalente: Unión o eliminación de grupos que se unen covalentemente a la enzima. Es
diferente a la catálisis covalente. La unión o eliminación de estos grupos activa o desactiva a la enzima.
a. Altas concentraciones de glucosa: Insulina – desfosforilaciones
b. Bajas concentraciones de glucosa: Glucagón – fosforilaciones
E. Zimógenos: Son proenzimas que carecen de actividad enzimática, que posteriormente por un corte
proteolítico adquieren sus propiedades catalíticas (se activan). Ej: enzimas gástricas y pancreáticas
ENZIMAS EN EL DIAGNÓSTICO CLÍNICO. Pueden ser clasificadas en dos grupos:
➢ Plasma-Específicas: Secretadas por un grupo de células
➢ Plasma-No específicas: Producidas durante el recambio celular normal, no tienen utilidad fisiológica
en el plasma
o La actividad de enzimas puede aumentar por lesión tisular o alteración de la permeabilidad en
la membrana, lo que se traduce en un estado patológico