Manual interno de procedimientos de laboratorio: Componente Plancton
Separación Muestras Ictioplancton
METODOLOGIA PARA MUESTRAS DE ICTIOPLANCTON
FASE DE CAMPO
Consideraciones
-Es importante tener en cuenta los objetivos planteados en el proyecto de investigación a
ejecutar. Esto permite delimitar espacialmente el área de estudio o zona de toma de
muestras, las cuales pueden ser: aguas costeras, aguas oceánicas y ciénagas. Lo anterior
implica variaciones en el trabajo de campo, así como en los materiales y equipos a utilizar.
-La vía más efectiva de preparar una salida consiste en organizar una lista denominada
“lista de chequeo”, que ha sido diseñada en la Coordinación de Servicios Científicos (CSC)
para cumplir con los requerimientos del proyecto a ejecutar, este listado debe identificar los
materiales y equipos que serán utilizados para la recolección de las muestras en campo y las
cantidades requeridas para llevar a cabalidad las actividades propuestas para el
componente.
-El tipo y número de recipientes a utilizar en el muestreo deben encontrarse rotulados con
la siguiente información: nombre del proyecto, número de estación, jornada de muestreo,
componente, fecha y análisis.
-Verificar el buen estado de los equipos (redes, aros y flujómetro).
Materiales Equipos
Frascos plásticos 1 litro Red
Preservante (formol 4%) Flujómetro
Máscara de seguridad
Guantes
Embudo
Frasco lavador - atomizador
Cabo
Nevera de fibra de vidrio
Procedimiento
Preparación de la solución fijadora
En la preparación de cada salida, el investigador deberá calcular el volumen de formol
necesario para el número de muestras que se van a tomar. Adicionalmente, debe saber que
la solución fijadora que se lleva a campo es pura (37%), en base a eso deben hacerse dichos
cálculos. La solución fijadora se debe preparar de la siguiente forma: concentración de la
formolina al 4%, neutralizado con bórax (2 gr por litro) y teñido con rosa de bengala (0,01
g por litro).
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Calibración flujómetro
El investigador debe cerciorarse y verificar que el flujómetro se encuentre calibrado. El
valor que se obtiene con un flujómetro luego de un lance no es más que el número de
revoluciones, valor que es proporcional a la cantidad de agua que ha entrado en la red. Este
número debe ser transformado en un valor de volumen y la transformación requiere el
conocimiento de la relación revoluciones/cantidad de líquido.
Dicha calibración se logra mediante arrastres del aro de la red con el medidor de flujo
instalado (sin el paño de red) a una velocidad y profundidad conocida en un cuerpo de agua
inmóvil. La diferencia entre la lectura inicial y final del medidor equivale a la cantidad de
metros recorridos. Este procedimiento se deberá repetir aproximadamente 20 veces, para
constatar la normalidad de los datos arrojados por el equipo. La lectura obtenida en un
lance real se comparará correspondientemente (Boltovskoy, 1981)
Si los medidores presentan como resultados lecturas erradas y que no se correlacionan con
los cambios en la profundidad del arrastre, el ángulo de la línea, o muestren evidencia de
obstrucción, inmediatamente deberá consultarse al jefe de crucero, pues él tomará la
decisión si el medidor necesita ser limpiado o en su defecto reemplazado. Es importante
calibrar los medidores después del servicio.
Ángulo del cable
La línea de cable debe ser casi vertical para obtener buenos resultados. El investigador debe
tener cuidado ya que el ángulo al cual se debe hacer el arrastre oscila en el rango entre 45-
50°. Si dado el caso, el arrastre es interrumpido, la embarcación se detiene o cambia la
velocidad, la muestra se deberá descartar, lavarse la red, y repetir el arrastre.
Procedimiento para el arrastre
Es muy importante realizar correctamente el procedimiento de toma de muestra, pues de
ello depende en gran parte, la representatividad de los resultados esperados. Por ello, previo
al embarque (actividad en tierra) se debe disponer las redes, las cuales deben encontrarse
sujeta firmemente al aro.
Las muestras se colectan mediante arrastres superficiales oblicuos, haciendo uso de una red
bongo de 65 cm de diámetro para muestreos oceánicos y una red cónica simple para
muestreos costeros, cada una de 500 μm de poro de malla, equipadas con copos colectores
duros, flujómetro en el centro del aro de la red (teniendo en cuenta que el equipo debe estar
calibrado previamente para calcular el volumen de agua filtrada) y pesos plomo. Dadas las
condiciones de la red para el arrastre, debe disponerse hasta lograr contacto con el agua,
luego del lance, se toma el ángulo de inclinación de la guaya para obtener la corrección de
la profundidad. No obstante, se debe registrar el tiempo de bajada de la red y la lectura
inicial del flujómetro para proceder a dar la señal de inicio del arrastre y en el mismo
instante se debe tener listo el cronómetro para tomar el tiempo de arrastre (10 minutos).
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Transcurrido el tiempo del arrastre, se da aviso para que se detenga la embarcación y
empezar a izar la red y se registra el tiempo de subida y la lectura final del flujómetro.
Al finalizar el arrastre, se procede al lavado la red con un sistema de agua de mar filtrada
con cuidado procurando que los organismos que estén adheridos en la parte interna de la
red caigan en el copo colector, luego se procede a desmontar el copo de la red para retirar la
muestra con ayuda de un atomizador. La muestra es almacenada en un frasco debidamente
rotulado al cual se le agregan 100 ml de formol al 37%, neutralizado con boráx y teñido con
rosa de bengala (APHA, AWWA y WEF, 2005) y completando el volumen del recipiente
con agua de mar filtrada. Posteriormente, se guardan en neveras de fibra de vidrio para ser
transportadas al laboratorio hasta su análisis.
FASE DE LABORATORIO
Consideraciones para el trabajo en laboratorio
1. Organizarlas muestras biológicas de trabajo (muestras de red).
2. Revisar que todo los materiales y equipos estén limpios y funcionando (vidriería,
estereoscopio).
3. Diligenciar el formato de uso de equipos.
4. Hacer uso de los elementos de protección personal (EPP) requeridos para la actividad:
bata, zapatos cerrados, máscara de gases y guantes.
5. Marcar y/o identificar el material de trabajo con información del grupo de interés (e.g.,
fito, zoo, ictio), así como el proyecto del cual derivan.
6. Después de terminada la actividad, dejar todo el material limpio y organizado en sus
respectivos sitios de ubicación. Informar a los responsables, sobre cualquier daño o pérdida
de los diferentes materiales y equipos usados.
BIOMASA
Materiales Equipos
Formatos Balanza
Filtros whatman o de papel Estufa
Probetas Manifol
Pinzas Bomba de vacio
Cajas petri Trampa de agua con mangueras
Desecador
Tamiz
Embudo
Tamiz 40-60um
Pincel
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Cinta
Papel aluminio
Máscara de seguridad
Guantes
Sharpie
Libreta de notas
Tijeras
Toallas absorbentes
Recipiente para reciclar formol (5 Litros)
Frasco lavador
Observaciones:
-Diligenciar permisos en el laboratorio de química con la persona encargada para la
utilización del espacio y de los equipos.
-Inspeccionar el estado de funcionamiento de los equipos.
-Verificar el estado de la silica gel del desecador, ya que debe exhibir un color azul, si se
muestra café ésta debe ingresarse a la estufa por 24 horas.
-Revisar que el material a utilizar se encuentre limpio y seco.
NOTA: Se debe tener en cuenta que de la muestra para el procedimiento de biomasas se
deben haber retirado medusas, ctenóforos, salpas, sifonóforos, megalopas, larvas de
calamar, pulpo, gelatinosos de gran tamaño, etc. (Goswami, 2004).
Procedimiento
Biomasa Volumétrica
Se toma la muestra que se obtuvo con la red de 300 µm de la cual se han retirado larvas y
huevos, ésta debe ser lavada con abundante agua haciéndola pasar por el tamiz para retirar
el exceso de formol, luego se debe retirar toda la muestra del tamiz con un pincel
cuidadosamente y envasarla en una probeta (250 ml), luego completar el volumen de la
probeta con agua, y dejar en reposo por un tiempo de 10-15 minutos. (Goswami, 2004).
Preparar la bomba de vacio junto con la trampa de agua y el manifol, se toma el filtro y se
coloca cuidadosamente en el manifol con una pinza, luego ir pasando la muestra agitada
por el filtro, teniendo cuidado que no quede la muestra en las paredes de la probeta, ya que
ésta luego no se puede lavar. Es importante tener en cuenta el volumen de la muestra,
cuando ésta es muy abundante se utilizan de 5-6 filtros, y si es poco abundante 1-2 filtros
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serán suficientes, todo depende de su volumen, la idea es que el filtro no quede tan cargado
y que al momento de su manipulación en la balanza no ocurra algún tipo de incidente.
Cada vez que el filtro se recargue, se debe montar uno nuevo en el manifold y anotar el
número y la estación a la que pertenece, con el fin de llevar el control. Terminado el
proceso de filtración, se procede a registrar 3 veces el peso del filtro con la muestra y se
calcula el promedio. Al finalizar el proceso de filtración se debe medir el volumen de agua
que queda en el manifol con una probeta y registrarlo en el formato.
Biomasa Húmeda
Para llevar a cabo este procedimiento se deben elaborar sobres en papel aluminio para
asegurar los filtros y rotularlos (F1, F2, F3, etc) para llevar un orden en cada formato a
diligenciar. Luego, calcular el total del filtros que se van a utilizar y llevarlos a la estufa en
pequeños lotes (20 filtros); la estufa que debe estar a una temperatura de 115°C y los filtros
se deben mantener allí por 60 minutos. A continuación, trasladarlos al desecador para
bajarles la temperatura, allí deberán permanecer aproximadamente 15-20 minutos
(Goswami, 2004).
Seguidamente el investigador debe cerciorarse del estado de la balanza, ésta debe
encontrarse calibrada y debe preparar el formato para diligenciar el peso de cada filtro. En
la balanza se ingresa una caja petri para ubicar el filtro, teniendo cuidado de que éste no
vaya a humedecerse o ensuciarse, seguidamente se cierra la ventanilla de la balanza y se
configura la balanza para que el peso quede en cero (0,0000), luego se saca cada filtro del
sobre de aluminio y muy ágilmente se lleva a la balanza, registrando 3 veces el peso de
cada uno en el formato para luego sacar un promedio. Se guarda nuevamente en el sobre
hasta el momento en que se le vaya a dar uso, este procedimiento se debe hacer con cada
uno de los filtros.
Para el proceso de filtración de la muestra se emplean los filtros necesarios de acuerdo a la
cantidad de muestra. Concluido este proceso, se retira el filtro del manifold y se lleva a la
balanza con el fin de registrar 3 veces el peso final del filtro con la muestra y
posteriormente calcular el promedio del mismo.
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SEPARACIÓN DE MUESTRAS
Materiales Equipos
Máscara de seguridad Estereoscopio
Guantes
Embudo
Tamiz 40-60um
Pinzas
Agujas
Pincel
Caja petri
Viales
Sharpie
Cinta
Libreta de notas
Tijeras
Toallas absorbentes
Recipiente para reciclar formol (5 Litros)
Frasco lavador
Procedimiento
En la fase de campo se hacen arrastres oblicuos con una red Bongo, la cual se encuentra
equipada con 2 redes que van juntas, cada una de diferente micraje, una de ellas de 500 µm
para con la cual se realiza el análisis de composición y abundancia y la otra de 300 µm
utilizada para calcular el análisis de biomasas.
Para llevar a cabo el proceso de separación, se toma inicialmente la muestra contenida en el
frasco que contiene la muestra tomada con la red de 500 µm, ésta debe ser lavada con
abundante agua haciéndola pasar por el tamiz para retirar el exceso de formol, luego se
debe retirar toda la muestra del tamiz con un pincel cuidadosamente y llevarla a una caja
petri y llevarla al estereoscopio su total separación. Luego, el investigador debe contabilizar
el número de huevos antes de guardarlos en los viales, es fundamental tener en cuenta que
todos los huevos sin excepción alguna deben ser separados y contados. Posteriormente, se
guardan las larvas y los huevos en su respectivo vial en formol 4-5% y se rotula el vial con
los datos que permitan al investigador su manejo.
Es importante tamizar poco a poco la muestra que va a ser separada y no tamizar toda la
muestra enseguida, ya que ésta se puede dañar si se encuentra mucho tiempo fuera del
formol. En la caja petri la muestra que se va a separar se trabaja con agua, teniendo cuidado
que no tenga muchos residuos de formol que pueda afectar al investigador que esté
llevando a cabo el proceso y los que se encuentren a su alrededor (Ahlstrom, 1976). La
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muestra que resulta de la separación de las larvas y los huevos puede ser guardada
nuevamente con formol y rotulada.
NOTA: algunos investigadores dividen la muestra con el fraccionador folsom, pero se debe
tener en cuenta que el ictioplancton no es tan abundante como el zooplancton, por lo cual
no se debería dividir la muestra, y para lo cual se aconseja analizar la muestra completa. Sin
embargo, la decisión del fraccionamiento de la muestra queda a criterio del investigador.
FASE IDENTIFICACIÓN
Para identificar una larva se deben tener en cuenta datos morfométricos y meristicos de los
estadios larvales entre los que se encuentran:
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Caracteres morfológicos de la preflexión de la larva (Prakan, 2007)
Caracteres morfológicos de la postflexión de la larva (Prakan, 2007)
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Caracteres morfológicos en larvas de peces (Prakan, 2007)
Desarrollo embrionario de huevo a larva
La mayoría de los huevos pelágicos son esféricos con diámetros corion cerca de 1 mm. Las
especies de algunos grupos producen huevos con coriones elipsoidales (por ejemplo,
Engraulidae). Los huevos demersales tienden a ser esféricos (por ejemplo Blenniidae),
aplanado (por ejemplo Blenniidae) o en forma de urna (por ejemplo Gobiidae). El corion
puede ser liso o adornado con espinas y filamentos (por ejemplo Belonidae, Atherinidae),
redes hexagonales o poligonal de diferentes tamaños (por ejemplo, Callinonymidae,
Macrouridae) o una sola protuberancia o hinchazón (por ejemplo Centrachantidae). El
espacio entre el corion y la masa de huevo (espacio perivitelino) es generalmente pequeña,
pero en algunos grupos puede ser considerablemente grande (por ejemplo, Clupeidae,
Anguiliforms). La yema de huevo puede ser segmentada u homogénea.
Según Moser (1996), El período larval posterior a la etapa de saco vitelino se divide en tres
etapas relacionadas con la flexión de la notocorda durante el desarrollo de la aleta caudal.
Estas tres etapas se denominan preflexión-,-flexión y postflexión-etapa de las larvas.
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Figura __. Etapas de desarrollo del ictioplancton (Ahlstrom y Ball, 1954 En: Kendall,
Ahlstrom y Moser, 1983)
Para separar al nivel de familia las larvas se deben tener en cuenta características
como:
-Forma del cuerpo: (elongado, foliaceo, comprimido): las categorías siguientes, que se
refieren la profundidad del cuerpo (BD) a la longitud del cuerpo (LC) - que se refiere a la
longitud estándar en la larva de post-flexión, y la longitud total en la pre-flexión de la larva,
para la cual se han utilizado descripciones (Leis & Carson- Ewart, 2000):
Muy alargada: BD <10% BL
Alargado: BD 10-20% BL
Moderado: BD 20-40% BL
Profundo: BD 40-70% BL
Muy profundo:> 70% BL
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-Cabeza: Las siguientes categorías han sido definidas para medir la longitud cabeza (HL)
en relación con la longitud del cuerpo (Leis & Carson- Ewart, 2000):
Cabeza pequeña: HL <20% BL
Cabeza moderado: HL = 20-33% BL
Cabeza larga HL> 33%
-Forma y forma del ojo: Las siguientes categorías se han utilizado para definir el tamaño
ojo en relación con el diámetro de la longitud de cabeza (Leis & Carson- Ewart, 2000), y
las formas a presentarse puede ser redondo, ovoide vertical u horizontal.
Ojo pequeño: ED <25% HL
Ojo moderado-mediano: ED = 25-33% HL
Ojo grande: ED> 33% HL
-Longitud y forma del intestino: el tamaño del intestino se clasifica de acuerdo a la longitud
pre-anal relativa y las formas pueden ser corrugado, liso, estriado u piriforme.
Intestino pequeño: PAL <30% BL
Moderado: PAL = 30-50% BL
Largo: PAL = 50-50% BL
Muy larga: PAL> 70% BL
-Tipos de boca:
-Espinas en la cabeza: Se denominan de acuerdo con el hueso de la cual se originan, su
tipo, tamaño, forma, número, ornamentación, y la secuencia de desarrollo. que son
importantes para identificar las larvas hasta el nivel de la familia o fuera (Neira et al., 1998)
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-Número de miómeros: se ha identificado como una herramienta para la identificación
taxonómica (Araujo Lima, y Donald, 1988). El número de miómeros pueden variar de
especie a especie, no corren perpendiculares al eje del cuerpo, ellos están doblados en
forma de zig-zag.
-Pigmentos (Forma y distribución):
Punto
Asterisco
Dendritico
Mancha
Línea
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Figura . Principales pigmentos utilizados para describir las larvas (A:Vista ventral, B:
Vista lateral) (Neira et al (1998).
Aletas: son útiles, especialmente las posiciones y los números y tipos de radios que las
componen. Las aletas impares son la dorsal, adiposa (presente sólo en algunos grupos),
caudal y la anal; las aletas pares son las aletas pectorales y pélvicas (ventral). Hay dos tipos
básicos de radios de la aleta: verdaderas espinas y radios blandos.
La aleta dorsal es rara vez ausente y puede presentar algunas variaciones distintivas. Es
única en la mayoría de los peces, aunque en bacalaos (Gadidae) puede tener múltiples
aletas dorsales suaves irradiadas. El borde posterior de la aleta dorsal puede estar conectado
o libre de la parte posterior. Otras condiciones a tener en cuenta es si la aleta dorsal está
oculta en la piel (como en algunos Zoarcidae) o se continúa con la aleta caudal. Algunos
grupos pueden tener una aleta adiposa dorsal del pedúnculo caudal.
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La aleta caudal es prominente en la mayoría de los peces, pero puede ser reducida o ausente
en especie en forma de anguila. Las formas comunes incluyen truncada (cuadrado),
emarginada (que tiene una pequeña hendidura en el centro), se bifurcan, semilunar (en
forma de media luna) y redondeado, las aletas caudales pueden ser continuas con una o
ambas de las aletas dorsal y anal.
La aleta anal es generalmente única y corta, situada entre el ano y la aleta caudal. Sin
embargo, puede ser excepcionalmente larga en especies que tienen el ano en una posición
anterior. Son relativamente pocos los peces tienen dos aletas anales, bacalaos y los de la
familia Carangidae, son excepciones. En los peces óseos "superiores", espinas están
presentes normalmente en la parte anterior de la aleta. Algunos peces de aguas profundas
tienen aletas anales adiposas que están compuestos por tejidos grasos y no contienen rayos.
Tunas (Scombridae), carángidos, y algunos otros grupos pueden tener pequeñas entradas
individuales de radios que siguen la aleta dorsal y anal o ambas cosas.
Las aletas pectorales se colocan normalmente detrás de la apertura opercular, pero la
ubicación y la forma de las aletas es muy variable entre las familias y los grupos más altos.
En la mayoría de los peces tienen suaves radios, las aletas pectorales se colocan bajo el
cuerpo, y la base de la aleta es oblicua de manera que los radios de las aletas superiores son
anteriores a la inferior. Peces con radios espinosos típicos en aletas pectorales se establecen
más arriba en el cuerpo, justo debajo o detrás de la curva exterior del opérculo. Muchos
perciformes y peces Scorpaeniformes pueden tener una base de la pectoral casi vertical.
Silversides (Atherinidae), peces voladores (Exocoetidae), y algunos otros grupos tienen
pectorales establecidos por encima de la línea media lateral.
Las pélvicas suelen colocarse una a cada lado de la línea media ventral, ya sea justo antes
del ano o justo detrás de las pectorales. Las aletas pélvicas están completamente ausentes
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en muchas familias, especialmente las de las anguilas y otros peces alargados, y carecen de
muchas especies de los grupos de baja diversidad, tales como peces espada (Xiphiidae) y
rapes (Lophiiformes).
Subabdominal pélvicas, como se ve en algunos peces Atheriniformes, están situados a
mitad de camino entre la posición abdominal típico y torácica y no hay conexión entre
ellas. Varios tipos de peces, como bacalaos, blennoides y Batrachoididae tienen las aletas
pélvicas colocados antes de los pectorales en una posición yugular. En algunos de éstos, las
pélvicas se reducen en tamaño o en gran medida alargadas como órganos táctiles. Los
gobios (Gobiidae), clingfishes (Gobiesocidae), y algunos otros grupos tienen aletas pélvicas
modificadas en estructuras adhesivas.
Apéndices axilares se alargan, triangular, escamoso o estructuras óseas encuentran en las
axilas de las aletas pares, por lo general las pélvicas. Ellos están ausentes en la mayoría de
los peces, pero son prominentes en algunas arenques (Clupeidae) y salmónidos.
-Línea Lateral
El sistema sensorial lateral (línea lateral) es una característica prominente del tronco y la
cola de la mayoría de los peces; sólo unos pocos grupos, tales como los arenques, presentan
ausencia de este sistema en el cuerpo. Los poros sensoriales del sistema están usualmente
asociados con filas particulares escala cuando se presenten las escamas. La línea lateral en
general, cursan la parte superior de la apertura opercular de la aleta caudal, pero puede
extenderse hasta la aleta caudal, como en los tambores (Sciaenidae), o puede estar
incompleta. Líneas laterales incompletas se describen señalando la posición del poro
terminal con respecto a otras características prominentes del cuerpo tales como aletas.
Líneas laterales ramificadas están presentes en varios grupos. En algunos grupos la
ramificación es múltiple, en otros, puede haber una sola rama.
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BIBLIOGRAFÍA
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