Caracterización de lípidos y proteínas en
esculturas del siglo 18 al principio19
Estudiante: Nicole Ziegler
Docente: Norielys Herrera
Colegio del estudiante: Hölters schule
Departamento: Quimica Organica
Introducción:
En esta práctica hicimos una serie de análisis para la obtención de datos de diferentes lípidos y
proteínas. Para ello utilizamos diferentes técnicas.
En el caso de las proteínas las hidrolizamos, las volvimos volátiles por medio de la sililación y las
analizamos en el cromatógrafo gaseoso. Esto con el fin de saber cuáles son los aminoácidos que
las componen. Y en el caso de los lípidos les practicamos la transmetilación, que consiste en
hidrolizar y volver volátiles a los ácidos grasos que componen al lípido. Después se analizan en el
cromatógrafo gaseoso, para conocer la composición de ácidos grasos que tiene el lípido analizado.
El objetivo de esta práctica es lograr tener una base de datos sobre la composición de los
diferentes lípidos y proteínas que se pueden encontrar en las esculturas.
Metodología:
Análisis de Proteínas:
Extrajimos las proteínas de la leche, estás se llaman caseína. Para poder separarlas de la leche
tuvimos que usar un medio ácido. En este caso utilizamos ácido acético glasear. El ácido acético
glasear se llama así ya que es un ácido congelado, y como el agua que tiene se congela a menos
temperatura que el ácido podemos sacar el agua de ácido haciendo que sea más concentrado.
Ya separadas las proteínas hay que filtrarlas para sacar la mayor cantidad de agua que allá
quedado de la leche posible, también se pueden poner en la centrifugadora y sacar el agua con
una pipeta de Pasteur. Luego de sacar la mayor cantidad de agua posible congelamos las proteínas
y las colocamos en un extractor al vacío. Este es un aparato que saca el agua al vacío. Una vez
colocadas las proteínas congeladas en el aparato, este empieza a generar un vacío que succiona el
agua. Esto sucede ya que, las proteínas están congeladas y el agua ya se está empezando a
descongelar, entonces el aparato va succionando el agua dejando las proteínas totalmente secas.
Para que éstas permanezcan congeladas el tubo de ensayo con las proteínas se sigue manteniendo
en un baño de hielo. En este caso utilizamos un método de extracción mediante vacío y frío, ya
que, si extrajéramos el agua calentando las, el agua se evaporaría, pero desnaturalizaríamos las
proteínas causando que la muestra se arruine.
Una vez que las proteínas ya están secas, preparamos una solución se ácido clorhídrico 6N, para la
hidrólisis de las proteínas. Colocamos el ácido en las proteínas. Esto es para cortar los enlaces
peptídicos de las proteínas y obtener los aminoácidos libres. Una vez colocado el ácido lo llevamos
al horno durante 5 horas a 100°C.
Una vez hidrolizadas las proteínas hay que volverlas volátil, ya que en el cromatógrafo gaseoso
solo se pueden poner muestras volátiles. Para volver volátil nuestra muestra utilizamos la técnica
de la sililación. En esta se utiliza el reactivo MTBSTFA para derivar la muestra y volverla volátil.
Con nuestra muestra de ácidos grasos ya volátiles los podemos colocar en él cromatógrafo
gaseoso. Para eso aramos un micro litro de nuestra muestra de ácidos grasos y se lo colocamos al
cromatógrafo gracioso. El cromatógrafo gracioso se compone de diferentes partes, un punto de
infección, que está conformado por un septum que es una especie de goma donde, por más que
se lo pinche no pierde gas. Esto es importante ya que, sí se escapa el gas por el punto de inyección
1
se perdería parte de la muestra y el resultado no sería específico. Otro punto sería el horno en
donde se encuentra la columna cromatografía. Esta columna tiene 30 metros de largo y su
diámetro es menor a medio milímetro. Lo que distingue a una columna de otra es la fase
estacionaria, que es el polímero que recubre sus paredes internas. Esta fase va a ser la encargada
de interactuar con las sustancias que componen nuestra muestra. Esto lo logra ya que el horno va
calentando la muestra. La llama de alta temperatura ioniza las moléculas y éstas son detectadas
por los electrones que se encuentran en la columna cromatografía, gracias al gas portador que
recorre las columnas, transportando las moléculas y a medida que va pasando el tiempo en
diferentes puntos de la columna, Los electrones van reconociendo las moléculas que pasan por
allí. Finalmente, el detector es el último lugar del equipo. A éste le llega la información de en qué
punto de la columna se detuvieron las moléculas ionizadas. El director transfiere los datos
recolectados a la computadora creando un gráfico patrón en función de cuantas muestras hubo
por tiempo.
Análisis de Lípidos:
Pesamos la muestra de lípidos. Luego de tenerlos pesados preparamos el reactivo para la
transmetilación. Cómo el reactivo que preparamos es muy exotérmico, lo hicimos en un baño de
hilo. El reactivo lo hicimos mesclando 5,7 no de metanol y poco a poco le agregamos 0,3ml de
cloruro de acetilo, esto lo hicimos porque está mescla es exotérmica y si lo hacemos rápido y sin
baño de hielo el reactivo explotaría.
Una vez listo el reactivo agregamos 2ml a las muestras y los batimos en el bartex y lo calentamos a
70°C por una hora.
Una vez terminado el tiempo extrajimos los ésteres metílicos. Esto lo logramos agregando
cloroformo, para que esté atrapé a el asido clorhídrico que no metílico. Al mezclarlo con
cloroformo se separan los ésteres metílicos del resto y los podemos extraer con una pipeta de
Pasteur. Cómo ambas partes son transparentes para poder diferenciarlas se le agrega un choro de
agua y al ser polar se va con el cloroformo. Gracias a esto podemos saber cuáles son los ésteres
metílicos para separarlos. Ese procedimiento de agregar cloroformos se realiza 3 veces para
asegurarse que hallamos separado todos los ésteres metílicos.
Ya con los esteres metílicos separados agarramos 1 micro litro con una jeringa y lo colocamos en el
cromatógrafo gaseoso.
Resultados:
Mis resultados
2
Peak Area % Ret.Time Area
Number
#
1 6.5165 14.16 11310650
mi
2 4.8016 18.42 8334205
mi
3 22.6585 19.16 39328440
mi
4 14.8869 20.37 25839240
mi
5 51.1366 22.33 88758030
mi
Totals 100.0000 ---------- 173570600
Estos resultados son del aceite de lino en el cromatógrafo gracioso. El cromatógrafo nos muestra
diferentes picos, por donde pasaron las moléculas ionizadas. El primer pico es el del solvente, a
partir del segundo pico son los característicos del aceite de lino. Si en una muestra se muestran los
mismos picos se puede asumir que es aceite de lino.
Es importante saber cuántos cuántas moléculas pasaron en esa parte del cromatógrafo durante
cuánto tiempo, para poder calcular el área, en relación de cuántos hayan pasado. También va a
depender de la concentración que tengamos d el aceite vino y qué tal nuevo o viejo tú también
hija ves
Conclusión:
Luego de haber realizado todos los procedimiento postulados en la introducción obtuvimos los
resultados que queríamos.
3
Esta práctica la podemos considerar un éxito ya que, logramos armar una base de datos qué
podemos utilizar. Por ejemplo en una muestra x. El día de mañana cuando nos llegue esta muestra
podremos comparar los resultados de esta con nuestra base de datos y dependiendo con qué
lugar de la base de datos coincida vamos a poder decir que proteína o que lípido es .
