08/03/24 Mariano Morán
Determinación de fenoles totales por el método de Folin-Ciocalteu
Fundamento
El método de Folin-Ciocalteu se basa en la capacidad de los fenoles para
reaccionar con agentes oxidantes. El reactivo de Folin-Ciocalteu contiene
molibdato y tungstato sódico, que reaccionan con cualquier tipo de fenol, formando
complejos fosfomolíbdico-fosfotúngstico (Peterson, 1979). La transferencia de
electrones a pH básico reduce los complejos fosfomolíbdico-fosfotúngstico en
óxidos, cromógenos de color azul intenso, de tungsteno (W 8O23) y molibdeno
(Mo8O23), siendo proporcional este color al número de grupos hidroxilo de la
molécula (Julkunen-Tiitto, 1985).
Fig. 1. Reacción en medio básico entre el ácido gálico y el reactivo de Folin-Ciocalteu
(Domínguez-López, Pérez & Lamuela-Raventós, 2023)
Materiales y reactivos
Matraz aforado de 100 mL
5 matraces aforados de 25 mL
Pipetas volumétricas
Tubos Eppendorf
Micropipeta
Tubos de ensayo de 150 mm
Celdas de vidrio
Balanza analítica
Agitador vórtex
Thermoblock
Espectrofotómetro UV-Vis
Agua destilada
Reactivo de Folin-Ciocalteu
Solución de carbonato de sodio al 20 %
Tartrato de sodio y potasio
Ácido gálico
Metodología
Fig. 2. Metodología para realizar la curva de calibración y la determinación del contenido
de polifenoles de la muestra
La técnica usada para medir polifenoles totales es de acuerdo con el método de
Folin-Ciocalteu (1927).
I. Preparación de soluciones
Pesar exactamente 1.1 (± 0.1) g de ácido gálico y transferir a un matraz
volumétrico de 100 mL. (Registrar el peso hasta 0.0001g).
Agregar alrededor de 75mL de agua destilada y agitar vigorosamente hasta
disolver.
Diluir al volumen de aforo con agua y mezclar bien.
Etiquetar como solución estándar stock (1000 mg/L de ácido gálico). Esta
solución puede utilizarse hasta por 1 mes cuando se almacena a 2-8°C.
II. Curva patrón de glucosa
Realizar 5 diluciones de la solución patrón. Dichas diluciones deben ser 40,
80, 120, 160 y 200 mg/L. Por ejemplo, para hacer el estándar de 200 mg/L
se debe tomar 1 mL de la solución patrón y aforar a 5 mL.
III. Preparación de la muestra
Realizar una extracción de 1.5 g de la muestra con solvente en una parrilla
con agitación magnética en un cuarto oscuro durante una hora.
IV. Técnica
1. Preparar una serie de tubos de ensayo, cada uno conteniendo 250 µL de
muestra, 250 µL de solución estándar de calibración o 250 µL de agua
destilada (blanco).
2. Mezclar con 250 µL de reactivo de Folin-Ciocalteu (diluido en agua
destilada 1:1 v/v).
3. Agregar 500 µL de Carbonato de Sodio saturado (20 % Na2CO3).
4. Agregar 4 mL de agua destilada.
5. Mantener la solución en un cuarto oscuro por 25 minutos a temperatura
ambiente.
6. Centrifugar por 10 min a 1638 g.
7. Medir la absorbancia a 725 nm en un espectrofotómetro.
Resultados
Tabla 1
Absorbancias de la curva de calibración número 1
Concentración (mg/L) Absorbancia
40 0.261
80 0.471
120 0.577
160 0.762
200 0.954
Curva de calibración Folin-C (Réplica 1)
1
0.9
f(x) = 0.0041925 x + 0.1019
0.8
R² = 0.991912205582557
0.7
Absorbancia
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 40 80 120 160 200 240
Concentración (mg/L)
Fig. 3. Curva de calibración de la réplica número 1
Tabla 2
Absorbancias de la curva de calibración número 2
Concentración (mg/L) Absorbancia
40 0.243
80 0.468
120 0.569
160 0.758
200 0.997
Curva de calibración Folin-C (Réplica 2)
1
0.9 f(x) = 0.004495 x + 0.0676000000000001
0.8 R² = 0.985124420255849
0.7
Absorbancia
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 40 80 120 160 200 240
Concentración (mg/L)
Fig. 4. Curva de calibración de la réplica número 2
Tabla 3
Absorbancias de la curva de calibración número 3
Concentración (mg/L) Absorbancia
40 0.262
80 0.453
120 0.562
160 0.739
200 0.94
Curva de calibración Folin-C (Réplica 3)
1
0.9
0.8 f(x) = 0.004105 x + 0.0986
0.7 R² = 0.991853756086507
Absorbancia
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 40 80 120 160 200 240
Concentración (mg/L)
Fig. 5. Curva de calibración de la réplica número 3
Tabla 4
Repeticiones de las curvas de calibración con promedios y desviaciones estándar
Concentración (mg/L) Curva 1 Curva 2 Curva 3 Abs. promedio
40 0.261 0.243 0.262 0.255 ± 0.009
80 0.471 0.468 0.453 0.464 ± 0.008
120 0.577 0.569 0.562 0.569 ± 0.006
160 0.762 0.758 0.739 0.753 ± 0.010
200 0.954 0.997 0.940 0.964 ± 0.024
Curva de calibración Folin-C (promedio)
1.000
0.900
f(x) = 0.00426416666666667 x + 0.0893666666666663
0.800 R² = 0.989933477373944
0.700
Absorbancia
0.600
0.500
0.400
0.300
0.200
0.100
0.000
0 40 80 120 160 200 240
Concentración (mg/L)
Fig. 6. Curva de calibración con los promedios de las réplicas y sus barras de error
Bibliografía
Dominguez-López, I., Pérez, M., & Lamuela-Raventós, R. M. (2023) Total
(poly)phenol analysis by the Folin-Ciocalteu assay as an anti-inflammatory
biomarker in biological samples. Critical Reviews in Food Science and
Nutrition. DOI: 10.1080/10408398.2023.2220031
Folin, O., & Ciocalteu, V. (1927). ON TYROSINE AND TRYPTOPHANE
DETERMINATIONS IN PROTEINS. Journal of Biological Chemistry, 73(2),
627-650. https://doi.org/10.1016/S0021-9258(18)84277-6.
Julkunen-Tiitto, R. (1985). Phenolic constituents in the leaves of northern willows:
methods for the analysis of certain phenolics. Journal of Agricultural and
Food Chemistry, 33(2), 213–217. doi:10.1021/jf00062a013
Peterson G. L. (1979). Review of the Folin phenol protein quantitation method of
Lowry, Rosebrough, Farr and Randall. Analytical Biochemistry, 100(2), 201–
220. https://doi.org/10.1016/0003-2697(79)90222-7
