BIO 101 BIOLOGÍA GENERAL I

PRÁCTICA Nº 1
MICROSCOPÍA Y MANEJO DE MICROSCOPIOS
I.- INTRODUCCIÖN

El conocimiento de la estructura del ser vivo está basado casi totalmente en estudios que
requieren el uso del microscopio. El microscopio óptico es un instrumento que permite la
observación de objetos y detalles de estructuras tan pequeñas que no podrían ser observadas
a simple vista. Con éste, nuestro grado de visibilidad se amplía en cientos o miles de veces,
gracias a un conjunto de lentes dispuestos convenientemente. Las principales dificultades en
la observación y estudio de estructuras biológicas son su REDUCIDO TAMAÑO Y SU
TRANSPARENCIA a la luz visible, dado que el microscopio permite superar estas dos
dificultades, su uso y el conocimiento de los principios y técnicas en microscopía, resultan
fundamentales para el desarrollo de la investigación en ciencias biológicas.

El conocimiento y manejo del microscopio es indispensable para reconocer las partes más
pequeñas que conforman a los seres vivos y la unidad microscópica de éstos: la célula, cuya
forma y estructura varían según el tipo de ser vivo que se estudia, ya sea unicelular o
pluricelular, sin embargo como factor de unidad, en esta gran diversidad, se encuentran
componentes celulares comunes.

La gran variedad de aplicaciones de la microscopia en diferentes áreas de la ciencias

biológicas, involucra el uso de diversos tipos de microscopios, como el electrónico,
ultramicroscopio, de fluorescencia, de contraste de fases y otros.

En esta práctica se pretende solo familiarizar al estudiante con el manejo y uso adecuado del
microscopio óptico y del estéreomicroscopio, equipos que frecuentemente utilizarán durante
su formación en la carrera. Por tanto los objetivos de la práctica son:

Objetivo General:
 Conocer y usar adecuadamente los materiales y equipos para la observación
microscópica

Objetivos Específicos:
 Identificar las partes del microscopio y comprender sus características.
 Manejar los microscopios correctamente
 Observar estructuras para aplicar el conocimiento de las partes del equipo óptico.

II. FUNDAMENTO TEÓRICO

TIPOS DE MICROSCOPIO A USAR.

Existen dos tipos de microscopios de uso común:

1. El microscopio estereoscópico, el cual es binocular, con aumentos de 4 a 8 (10) veces,

permite observar muestras opacas y realizar disecciones de estructuras en organismos
pequeños, ya que en él puede manipularse la muestra mientras se observa. Proporciona una
imagen tridimensional.

2. El microscopio compuesto, que puede ser monocular o binocular, permite obtener

aumentos de 40 a 1000 veces. Los objetos a observar deben ser muy pequeños o cortados
en láminas tan delgadas que la luz pueda atravesarlos. Estos se colocan en láminas de vidrio
especiales denominadas porta-objetos y cubre-objetos. Las imágenes que se obtienen son
bidimensionales e invertidas.

PARTES DEL MICROSCOPIO ESTEREOSCÓPICO, ESTÉREOMICROSCOPIO O

MICROSCOPIO DE DISECCIÓN

Consiste básicamente en dos microscopios de poco aumento, montados uno al lado del otro
y con cierta oblicuidad entre sí, para dar la imagen de efecto estereoscópico. Da al objeto una
orientación directa, lo que permite ver correctamente cualquier movimiento ejecutado debajo
de él y esto facilita el trabajo de disección.

Consta de dos partes:

Parte superior: Oculares, objetivos, Revólver, tornillo macrométrico
Parte inferior: Columna, base o pie, platina, pinzas.
La explicación de cada una de estas partes se detalla en la descripción del microscopio
compuesto, pues son piezas comunes a ambos equipos

PARTES DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

1. PARTE MECANICA. Comprende los siguientes dispositivos.

 Pie. Base que da soporte y estabilidad al microscopio.

 Columna. Estructura que une el pie con la platina y el tubo. Sostiene además el
condensador y el diafragma.
 Platina. Superficie plana para sostener el porta objetos y el cubre-objetos que
contienen a las preparaciones.
 Carro de movimiento. Dispuesto sobre la platina y sirve para mover la preparación.
 Tubo. Proporciona soporte a los lentes oculares y objetivos.
 Cremallera. Asociada a dos tornillos, permite el movimiento vertical del tubo o de la
platina para obtener la distancia a la cual el objeto puede ser observado nítidamente;
es decir, el enfoque preciso para el observador.
 Tornillos macrométrico o de aproximación y micrométrico o de precisión. Permite
movimientos muy cortos en un ajuste fino del enfoque para lograr una observación
precisa.
 Revólver. Sistema giratorio relacionado con el tubo, que porta los lentes objetivos
para diversos aumentos, pudiendo utilizarlos alternativamente.

Partes de un microscopio óptico

  Pinzas. Par de láminas rectangulares, situadas sobre la platina, para mantener al
porta-objetos.

2. PARTE OPTICA: Comprende los lentes oculares, los lentes objetivos y los dispositivos de
iluminación.

 Oculares. Lentes dispuestos en la parte superior del tubo cercano al ojo del
observador. Su aumento puede ser de 10X y 15X.
 Objetivos. Son lentes de diferentes aumentos situados en el otro extremo del tubo,
en el revólver. El de menor aumento es más corto (3.2X, 4X, 8X y 10X) y el de mayor
aumento es más largo (40X y 44X). Puede existir además un objetivo de inmersión de
100 a 150 aumentos.
 Condensador. Lente que concentra el haz luminoso hacia la preparación.
 Diafragma. Abertura que regula la cantidad de luz que ingresa hacia la preparación.
 Fuente de luz, foco: Proporciona la luz que llega hasta el objeto a estudiar y el
sistema óptico del microscopio. Antiguamente existía un espejo plano por un lado y
cóncavo por el otro, para ser usados cuando se disponga de abundante o escasa luz,
respectivamente. En los microscopios modernos, la luz incorporada corresponde a un
foco de luz eléctrica adaptado en el lugar que ocupaba el espejo.

Partes de un estereomicroscopio

CARACTERISTICAS DE LAS OBSERVACIONES CON EL MICROSCOPIO

1.- Formación de imágenes en el microscopio compuesto: El microscopio está constituido

por dos sistemas de lentes, las del ocular y las del objetivo, Las lentes del objetivo forman
una imagen real mayor e invertida dentro del foco del ocular y esta lente convierte esa imagen
en una virtual de mayor tamaño que es captada por el observador.

2.- Grado de Aumento: Es la magnificación total que sufre la imagen del objeto debido al
efecto de las lentes oculares y objetivos. Se obtiene multiplicando el número de veces que
aumenta el lente ocular por el número de veces que aumenta el lente objetivo. Si el objetivo
aumenta la imagen de un objeto 40 veces, ésta al pasar por la lente ocular será nuevamente
aumentada.
Si el ocular aumenta 10 veces, la magnificación total en este caso será:

10X x 40X = 400X.

Este resultado permite saber cuántas veces más grande estamos viendo la imagen de un
objeto.

3.- Poder de Resolución. Es la posibilidad de distinguir separados dos puntos muy cercanos
entre sí. Cuanto mayor sea el poder de resolución, menor será la distancia entre dos puntos
a la cual pueden distinguirse como tales. La distancia límite en la cual dos puntos pueden ser
todavía distinguibles se denomina Límite de Resolución. El poder de resolución de un
microscopio compuesto depende de la longitud de onda de la fuente luminosa y de la apertura
numérica (propiedad óptica de la lente).

 Apertura numérica (AN): Es el poder de reunión de la luz que tiene la lente del
objetivo. Es constante en cada tipo de microscopio (1,2-1,4). El límite de resolución
se calcula conociendo la apertura numérica y la longitud de onda de la iluminación,
mediante la ecuación de Abbé.

Límite de Resolución = 0.61 λ

A.N.
Donde λ es la longitud de onda de trabajo, y A.N es la apertura numérica

Existe una correspondencia entre el aumento de un objeto y su apertura numérica, de tal

modo que las lentes con mayores aumentos generalmente tendrán mayores aperturas
numéricas. El poder de resolución es quizá la característica más importante de un buen
microscopio ya que de nada sirve una imagen muy grande del objeto, si ésta se ve borrosa y
no puede distinguirse en sus detalles.

4.- Medición del campo visual: el campo visual es toda la superficie que se puede ver a
través del microscopio. Es el círculo visible que se observa con los oculares.

5.- Distancia de Trabajo. Es la distancia que existe entre el objeto en observación y el lente
objetivo. Esta distancia variará según el aumento de la lente objetivo con la cual se trabaje.
Es inversamente proporcional al grado de aumento; es decir, cuanto mayor sea el aumento
del lente objetivo menor será la distancia de trabajo. Cuando se trabaje con un lente de
inmersión la distancia de trabajo será mínima. En estos casos es necesario usar aceite de
inmersión entre el lente objetivo y la preparación debido a que el índice de refracción para
este tipo de lente es la del aceite y no la del aire. Esto permite obtener una imagen de gran
tamaño y al mismo tiempo de gran nitidez.

BASES DE MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

1. Limpiar el espejo, condensador y los lentes del microscopio.
2. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina
completamente. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería
estar en esas condiciones.
3. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.
4. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10
aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.

5. Para realizar el enfoque:

 a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo
macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya
que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar
alguno de ellos o ambos.
b. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la
preparación con el macrométrico y, cuando se aproxime a la observación nítida la
muestra, girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino.

6. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser
suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de
objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo
anterior y repetir la operación desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca
distancia de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances:
incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con
aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con el objetivo de
inmersión.

7. Empleo del objetivo de inmersión:

a. Bajar totalmente la platina.
b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica
la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.
c. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y
el de x40.
d. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.
e. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión.
f. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la
gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la
lente.
g. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo
de inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el
riesgo de accidente es muy grande.
h. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede
volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto,
si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operación desde el
paso 3.

III.- MATERIALES

Cada ESTUDIANTE debe ingresar al laboratorio con el siguiente material:

Material de disección
Material de limpieza
Dos cuadrados de 2x2 cm de papel milimetrado
Una tijera
Un fragmento de una hoja de periódico
Algodón (una pequeña porción)
Una flor pequeña y un insecto
Cristales de azúcar o sal

Material de laboratorio (Auxiliar de la materia)

Microscopios compuestos
Estéreomicroscopios
Pinzas
Porta y cubreobjetos
Cajas Petri
Goteros

IV.- PROCEDIMIENTO

1.- Reconocimiento de las partes:

Con el material virtual proporcionado y las explicaciones del docente, los estudiantes
aplicaran sus conocimientos e identificaran cada parte de los microscopios.

2.- Medición del campo visual: el campo visual es toda la superficie que se puede ver a
través del microscopio. Para esto tomar el papel milimetrado (1 cm/lado) colocarlo en el
portaobjetos, añadir una gota de agua y cubrir con el cubreobjetos. Observar esto con cada
uno de los objeticos, medir para cada uno el diámetro de todo el campo observado y calcular
las áreas observadas:

A = área, D = diámetro, π = 3.1416

A = π (D/2)2

3.- Manejo de los microscopios:

a. Manejo del estereomicroscopio: con la observación de fragmentos de papel periódico, la

flor y el insecto, bajo explicaciones del docente y auxiliar.

b. Manejo del microscopio compuesto, con la observación de fragmentos de periódico, fibras

de algodón, granos de polen y cristales de sal o azúcar, con los 3 primeros aumentos y
realizarán esquemas de sus observaciones, con los rótulos correctos.

c. Realizar mediciones, bajo explicación del docente.

Presentar el informe siguiendo las instrucciones dadas en clases y completando, bajo

revisión bibliográfica, lo siguiente:

 Breve historia del microscopio

 Luz y formación de las imágenes
 Lentes y aberraciones
 Otros tipos de microscopios

E. Valenzuela Celis
Marzo 2024