Reporte P8
ELISA
Resultados y observaciones
Absorbancias
Pozo Absorbancia (nm)
1 (Blanco) 0.070
2 (Control +) 1.379
3 (Control-) 0.085
4 (Calibrador) 0.827
5 (MP1) 0.134
6 (MP2) 0.251
7 (MP3) 0.249
Para poder obtener el índice de anticuerpos necesita obtenerse el punto de corte
el cual se obtiene de la siguiente manera:
Punto de corte= (Abs. del calibrador)(Factor del calibrador)
= (0.827)(0.3)= 0.2481
De acuerdo al inserto, para hacer válidos los resultados deben cumplirse los
siguientes 3 requisitos:
1) El calibrador debe dar una absorbancia mayor a 0.25
En nuestro caso dio 0.827 por lo que ya se cumple con un criterio
2) El índice de anticuerpos para el control negativo debe ser menor a 0.9
Índice de Ac´s= Abs de M/Punto de corte
Índice de Ac´s= 0.085/0.2481
=0.3426 Cumple con el segundo criterio
3) El índice de anticuerpos para el control positivo debe ser mayor a 1.2
Índice de Ac´s= 1.379/0.2481
=5.55 Cumple con el tercer criterio
Ahora pasando con las muestras, los resultados obtenido fueron los siguientes:
Muestra 1
Índice de Ac´s= Abs de M1/Punto de corte
=0.134/0.2481= 0.540
El resultado es menor a 0.9, por lo que la muestra es negativa y no
presenta anticuerpos IgG contra Helicobacter pylori
Muestra 2
Índice de Ac´s= Abs de M2/Punto de corte
=0.251/0.2481= 1.011
El resultado se encuentra entre 0.9-1.1, por lo que la muestra es
sospechosa con presencia de anticuerpos IgG contra Helicobacter pylori, lo
que podría realizarse una prueba con mayor sensibilidad o repetir con otro
kit para ser más exactos.
Muestra 3
Índice de Ac´s= Abs de M2/Punto de corte
=0.249/0.2481= 1.0036
El resultado se encuentra entre 0.9-1.1, por lo que la muestra es
sospechosa con presencia de anticuerpos IgG contra Helicobacter pylori, lo
que podría realizarse una prueba con mayor sensibilidad o repetir con otro
kit para ser más exactos.
Discusión de los resultados, caso clínico y la importancia de la práctica para
la profesión
Bojorquez Baez Marian Dolores:
Los resultados muestran que la muestra 1 es negativa para anticuerpos IgG contra
Helicobacter pylori, mientras que las muestras 2 y 3 caen en el rango sospechoso
(0.9 -1.1), lo que indica la posible presencia de estos anticuerpos. Se observa que
el cumplimiento de los criterios establecidos para los controles negativo y positivo
refuerza la validez de la técnica utilizada. Sin embargo, dado que las muestras 2 y
3 están en el límite del rango, es recomendable confirmar los resultados con
pruebas más sensibles o repetir el ensayo con otro kit para obtener una mayor
precisión y confirmar con certeza la presencia de anticuerpos contra H. pylori.
La detección de estos anticuerpos es crucial para el diagnóstico de infecciones
pasadas o presentes por esta bacteria, que se asocian con condiciones
gastrointestinales como úlceras y cáncer gástrico. La importancia de estos
resultados radica en la identificación de individuos que podrían estar en riesgo de
desarrollar complicaciones relacionadas con esta infección.
Pallarez Bázaca Gpe. Carolina:
La prueba ELISA indirecta para detectar anticuerpos de Helicobacter pylori es una
herramienta valiosa en el diagnóstico de esta infección bacteriana, que se asocia
con diversas enfermedades gastrointestinales, como la gastritis y las úlceras
pépticas.
En la práctica, dos de las tres muestras arrojaron resultados en el rango de
0.9-1.1, lo que se considera sospechoso de presencia de anticuerpos IgG contra
Helicobacter pylori. Esto indica que los niveles de anticuerpos IgG en esas dos
muestras sugieren la posible presencia de una infección pasada o actual por
Helicobacter pylori, pero no es concluyente para confirmar la infección por sí sola.
Por lo tanto, se recomienda la realización de pruebas adicionales para confirmar o
descartar la infección. En contraste, la tercera muestra, con un valor por debajo
del punto de corte (<0.9), se considera negativa en cuanto a la presencia de
anticuerpos IgG contra Helicobacter pylori. Esto sugiere que no hay evidencia de
infección por esta bacteria en esa muestra en particular.
Es importante tener en cuenta que la presencia de anticuerpos IgG indica una
respuesta inmunológica previa a la infección por Helicobacter pylori. Sin embargo,
no necesariamente implica que la infección esté activa en el momento de la
prueba, ya que los anticuerpos IgG pueden persistir en el organismo durante
mucho tiempo después de que la infección se haya resuelto.
Soto Sánchez Ariel Humberto:
En la prueba de elisa realizada para identificar la presencia de anticuerpos
IgG contra Helicobacter pylori, no se presentó anticuerpo para la primera
muestra, mas sin embargo para las muestras 2 y 3 se encontraron entre 0.9 y
1.1 resultado que muestra que si se presentaron dichos anticuerpos, pero de
acorde a los insertos se consideran sospechosos, por no estar dentro del
límite superior para poder ser considerado positivo, cuando se presenta un
caso así se puede proceder a volver a realizar la prueba o usar una que sea
más sensible.
Detectar anticuerpos es un método de gran importancia para el diagnóstico
de enfermedades, porque esta clase de métodos presentan una sensibilidad
muy elevada, por el tipo de interacción que existe entre anticuerpo-antígeno,
lo que permite diagnosticar infecciones latentes o que ya transcurrieron
asociadas a bacterias. En este caso en particular Helicobacter pylori está
asociado a gastritis, inflamación de las mucosas intestinales y puede
ocasionar ciertos tipos de cáncer por lo cual es de importancia su
diagnóstico y poder dar un tratamiento especifico.
Escobar Chávez Iván:
En primer lugar, podemos decir que el kit se encuentra en condiciones óptimas, lo
cuales muy importante, ya que de acuerdo a los controles y reactivos necesarios
nos darán resultados que pueden o no cumplir con las condiciones para validar
resultados, ya que si se llegara a reportar un resultado mientras los requisitos no
se cumplan generaría muchos problemas, ya que en primer lugar los reactivos
estarían fallando o posiblemente ya caducaron, que en la muestra sería el mismo
caso, ya que no serían resultados válidos debido al fallo de los controles.
Ahora en cuanto a los resultados, la muestra 1 tuvo un resultado negativo de
acuerdo a los valores del inserto, ya que el resultado en el índice de anticuerpos
fue menor a 0.9, lo que nos indica que no hay anticuerpos IgG y con ello se
deduce que el paciente no cursó ni cursa una infección reciente por Helicobacter
pylori, sin embargo el bajo índice de anticuerpos puede representar que se tuvo
contacto con la bacteria y no necesariamente presentó una infección. En cuanto a
la muestra 2 y 3, ambas presentaron un índice de entre 0.9-1.1, que de acuerdo al
inserto ambas pruebas pueden ser sospechosas, ya que el índice no alcanzo el
limite superior para considerarse como positiva, sin embargo en estos casos
pueden realizarse pruebas con mayor sensibilidad o repetir el ensayo con otro kit,
ya que entre estos mismos varían los valores e interpretaciones.
Una infección por Helicobacter pylori se presenta principalmente a nivel intestinal,
asociado a gastritis, úlceras, inflamación de mucosa intestinal e incluso en
infecciones crónicas a cáncer de estómago o linfomas. Por ello, la importancia de
esta prueba es poder detectar y determinar si la persona está presentando
patologías gastrointestinales asociadas a esta bacteria o no, ya que no hay
síntomas muy específicos y su sintomatología no se diferencia de otras patologías,
y por ello en muchas ocasiones se realiza para descartar o confirmar si el agente
etiológico es esta bacteria y otro, y que sobre todo la detección a tiempo, ya que a
diferencia de otras enfermedades, aunque el factor cronico si este presente, el
riesgo de desarrollar cáncer o linfomas es muy elevado si no se diagnostica y se
trata a tiempo.
Conclusión del equipo
En esta práctica, se ha demostrado con éxito la aplicación de un ensayo
inmunológico para la detección de anticuerpos contra el Helicobacter pylori. Se
aprendió sobre la importancia de establecer criterios de validez basados en
controles y el punto de corte, permitiendo una interpretación confiable de los
resultados. La capacidad de distinguir entre muestras negativas, sospechosas y
positivas resalta la utilidad de este método diagnóstico. Esta experiencia refuerza
la importancia de la precisión en la identificación de anticuerpos, lo que podría
facilitar intervenciones tempranas para prevenir afecciones gastrointestinales
asociadas con H. pylori.
Cuestionario
Deberán diseñar una prueba de ELISA para el diagnóstico de COVID-19,
mediante la detección de anticuerpos IgM específicos contra antígenos de
SARS-COV- 2. Deberán esquematizar-dibujar las interacciones de cada uno de los
reactivos y muestra a utilizar e indicar lo siguiente:
a) Tipo de ELISA:
ELISA indirecto.
b) Antígeno que utilizarán:
Antígenos específicos de SARS-CoV-2 como la proteína S o N.
c) Características de los anticuerpos a utilizar primario y secundario (si los
hay) (especificidad, isotipo y cual tendrá la enzima acoplada):
● Anticuerpo primario (IgM): Debe tener alta especificidad para el antígeno de
interés, en este caso, proteínas específicas de SARS-CoV-2,
preferiblemente en su forma de IgM.
● Anticuerpo secundario (anti-IgM): Será específico para el isotipo IgM y
estará conjugado con una enzima, la peroxidasa de rábano picante, para
permitir la detección en el ensayo ELISA.
d) Forma de revelado (enzima, sustrato, cromógeno):
La enzima, como la peroxidasa conjugada al anticuerpo secundario (anti-IgM),
actúa sobre un sustrato cromogénico, TMB (Tetrametilbencidina). La interacción
de la enzima con el sustrato cromogénicoproduce un cambio de color, permitiendo
la detección visual de los anticuerpos IgM específicos contra el SARS-CoV-2.
e) Limitantes de la prueba:
Algunas limitaciones podrían ser la posible ventana de seroconversión de IgM, lo
que significa que podría haber un periodo de tiempo desde la infección hasta que
se detecten los anticuerpos. Además, la sensibilidad y especificidad de la prueba
podrían afectar la precisión de los resultados. Podría haber interferencia de otros
agentes infecciosos que generen respuestas de IgM similares.
f) Ventajas y desventajas contra las pruebas actuales oficiales para el
diagnóstico de COVID-19:
En comparación con las pruebas oficiales actuales, esta prueba ELISA para la
detección de IgM tiene la ventaja de detectar la respuesta inmune temprana (IgM)
y podría ser más útil en la detección de la infección en etapas iniciales. Sin
embargo, puede ser menos rápida que las pruebas de antígenos o PCR, y podría
requerir instalaciones y equipamiento más especializados. Las pruebas de PCR
suelen detectar la presencia del virus directamente, lo que las hace más
específicas en las primeras etapas de la infección, pero tienen limitaciones
similares en términos de ventana de detección y dependen de la carga viral. Las
pruebas de antígenos son rápidas, pero pueden ser menos sensibles en
comparación con una prueba de ELISA bien diseñada.
ESQUEMA
Referencias
● Luo, S., Xu, J., Cho, C. Y., Zhu, S., Whittaker, K. C., Wang, X., Feng, J.,
Wang, M., Xie, S., Fang, J., Huang, A. S., Song, X., & Huang, R. P. (2022).
Quantitative Detection of Anti-SARS-CoV-2 Antibodies Using Indirect
ELISA. Laboratory medicine, 53(3), 225–234.
[Link]
● Grupo MexLab. (s.f). Bio-Pilory en ELISA Helicobacter pilory con sus
variantes IgG.
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