SEMANA 6
PROCESO DE
APLICACIÓN DE
TÉCNICAS PARA
IDENTIFICAR Y AISLAR
ENTEROBACTERIAS.
Enterobactericeae
INTRODUCCIÓN
Las enterobacterias son bacterias Gram negativas del orden
Enterobacterales que contienen más de 30 géneros y más de 100 especies
que pueden tener morfología de cocos o bacilos. Los miembros de este
grupo forman parte de la microbiota del intestino y de otros órganos del
ser humano y de otras especies animales.
Este grupo incluye una gama completa de microorganismos, incluidas
todas las bacterias Coliformes. Sus miembros abarcan desde bacterias
como la Salmonella y la E. coli, bien conocidas por causar enfermedades
transmitidas por los alimentos, hasta agentes de deterioro de los
alimentos y diversos microorganismos que normalmente se encuentran en
el tracto intestinal humano como parte de la flora intestinal. Su
distribución ubicua hace que sea casi inevitable que algunos miembros de
Enterobacteriaceae ingresen a la cadena alimentaria.
CARACTERIZADAS POR:
Las Enterobacterias se caracterizan por ser anaerobios facultativos, con
forma de varilla, negativos a la oxidasa, que fermentan la glucosa en ácido
y / o dióxido de carbono.
Generalmente móviles, tienden a tener una longitud de 1-5 µm.
Las Enterobacterias no patógenas se consideran "organismos indicadores"
en la industria alimentaria, ya que su detección y enumeración (utilizando
medios selectivos como las placas de recuento de Enterobacterias
Petrifilm ™ 3M ™) puede indicar un procesamiento inadecuado y un
saneamiento deficiente en el entorno de procesamiento.
Los profesionales de la garantía de calidad han descubierto que las
pruebas para un grupo de organismos en lugar de un género o especie
específica proporcionan un objetivo más grande para la detección. Además,
las Enterobacterias son buenos indicadores cuando se monitorean las
condiciones ambientales y la higiene general en una instalación porque
los desinfectantes las inactivan fácilmente, pero cuando el saneamiento es
inadecuado, pueden colonizar una variedad de nichos en la planta de
procesamiento.
IDENTIFICACIÓN
Las enterobacterias más importantes se incluyen en la familia
Enterobacteriaceae, la cual está constituida por bacilos Gram negativos.
Hay especies móviles e inmóviles y para la identificación de las
enterobacterias, todas fermentan glucosa con producción de ácido y gas,
reducen los nitratos a nitritos y dan resultado negativo en la prueba de
indofenol oxidasa. Esta familia comprende bacterias patógenas y no
patógenas. Conviene recalcar que las características de patogenicidad
relativa en las enterobacterias en su hábitat natural, que es el tracto
gastrointestinal, se modifican radicalmente cuando estas bacterias
alcanzan una localización extra intestinal, en sitios como el tracto
genitourinario, líquido cefalorraquídeo, torrente sanguíneo, médula ósea
o la cavidad peritoneal.
En vista de lo anterior, es posible aislar y cultivar miembros de la familia
Enterobacteriaceae tanto a partir de muestras fecales y productos que
pudieron haber sufrido una contaminación fecal como el agua, alimentos,
utensilios, etc.
Es muy importante recordar que las muestras de cualquier tipo que se
envían al laboratorio para investigar la presencia de estas bacterias,
deben ser colectadas en condiciones asépticas transportadas y
procesadas con la mayor rapidez. Con la finalidad de de evitar
alteraciones de muestras y pérdida de viabilidad de las bacterias que se
buscan, o crecimiento excesivo de gérmenes banales que pudieran
entorpecer el estudio.
1.- Prueba de oxidación fermentación: Determinar el metabolismo
oxidativo o fermentativo de un hidrato de carbono. Por estas vías
pueden utilizarse disacáridos y polisacáridos que son llevados
previamente a glucosa o a otro intermediario.
Componentes
Fundamento
Consistencia del medio
Inoculación
Condiciones de incubación
Resultados
Interpretación
Aplicaciones
2.- Prueba Movilidad, indol, ornitina
Medio de cultivo ampliamente utilizado para la diferenciación de
bacilos Gram negativos entericos, sobre la base de la producción de
Indol, la actividad de la enzima Ornitina decarboxilasa y la capacidad
de motilidad.
Composición
Fundamento
a. Descarboxilación de ornitina
b. Prueba de la producción de indol
c. Movilidad
Consistencia del medio
Inoculación
Condiciones de incubación
Reactivos adicionales
Interpretación
Aplicaciones
3.- Prueba Reacción de Voges-Proskauer (VP):
Consiste en determinar la capacidad que tiene un microorganismo para
producir el metabolito acetilmetil carbinol (acetoína) como producto
intermediario derivado del metabolismo de la glucosa (fermentación
butanodiólica).
Medio de cultivo
Composición
Fundamento
Consistencia del medio
Inoculación
Condiciones de
incubación
Reactivos adicionales
Precauciones
Interpretación
Aplicaciones
4-Prueba reacción de rojo de metilo (RM):
Determinar la capacidad de un microorganismo de fermentar la glucosa
con producción de ácido por la vía ácido mixta o con producción de un
producto final neutro (acetoína) por la vía butanodiólica.
Medio de cultivo
Composición
Fundamento
Consistencia del medio
Inoculación
Condiciones de incubación
Reactivos adicionales para
Rojo de Metilo
Interpretación de rojo de metilo
Aplicaciones
5.- Prueba de Citrato:
Sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como
única fuente de carbo- no y compuestos amoniacales como única fuente
de nitrógeno en su me- tabolismo, provocando una alcalini- zación del
medio.
6.- Prueba de sulfuro indol movilidad
se puede verificar la movilidad, producción de indol y de sulfuro de
hidrógeno en un mismo tubo. Es un medio semisólido que se utiliza
para el estudio de la forma- ción de indol, movilidad y SH2 en las
bacterias entéricas gram nega- tivas.
7.- Prueba de la reacción de la Ureasa
Método invasivo que se utiliza para diagnosticar la infección por H.
pylori: requiere una endoscopia del tracto digestivo superior y una
biopsia de la mucosa gástrica. Igual que en la endoscopia del tracto
→
digestivo superior ( cap.
8.- Prueba de Licuefacción de gelatina:
Esta prueba se utiliza para determinar la capacidad de un
microorganismo para producir enzimas proteolíticas que licúan la
gelatina (gelatinasas).
RESULTADOS
MEDIO SE DERRITE (LÍQUIDO) GELATINASA + (BACTERIA HIDROLIZÓ GELATINA)
MEDIO ESTÁ SÓLIDO GELATINASA - ( BACTERIA NO HIDROLIZÓ GELATINA)
9.-Prueba Agar Lisina Hierro: LIA
¿QUÉ PRUEBAS SE UTILIZA PARA LA IDENTIFICACIÓN DE
ENTEROBACTERIAS?
LAS PRUEBAS PRIMARIAS SON: GRAM, MORFOLOGÍA, CATALASA, OXIDASA,
OXIDACIÓN-FERMENTACIÓN, FERMENTACIÓN DE GLUCOSA, PRODUCCIÓN DE
ESPORAS, CRECIMIENTO EN AEROBIOSIS Y ANAEROBIOSIS Y MOVILIDAD.
Las enterobacterias crecen con rapidez bajo condiciones aerobias o
anaerobias y tienen actividad metabólica. Son, con mucho, la causa más
común de infecciones de vías urinarias (UTI) y un número limitado de
especies también son agentes causales de diarrea. La diseminación al
torrente sanguíneo causa choque endotóxico por bacterias gramnegativas,
complicación temible y a menudo letal. En la literatura y música del siglo
XIX solían referirse a una “muerte por fiebre” que por lo común se trataba de
una fiebre tifoidea (Salmonella ser. Typhi), que por su prolongada evolución
y la falta de signos locales, como parece haber ocurrido con la
desafortunada Molly Malone, parecían morir sólo de fiebre.
SU AISLAMIENTO
todas las enterobacterias se aíslan con facilidad en los medios de cultivo
habituales bajo casi cualquier condición de incubación. Medios indicadores
especiales, como el agar de MacConkey, se utilizan a menudo para el
aislamiento primario con el fin de acelerar el aislamiento de muchas
especies. Por ejemplo, los patógenos comunes E. coli y Klebsiella por lo
común fermentan lactosa con rapidez y producen colonias ácidas (de color
rosado) en el agar de MacConkey, en tanto que los patógenos intestinales
Salmonella y Shigella no lo hacen. El aislamiento de patógenos intestinales,
entre todas las demás enterobacterias en heces, requiere del empleo de
medios muy selectivos diseñados sólo con este fin. Esto se revisa conforme
se analizan los patógenos individuales. Las mejoras en la comprensión de
las bases moleculares y genéticas para la virulencia han conducido al
desarrollo de técnicas inmunodiagnósticas y de análisis directo de ácidos
nucleicos para la detección de proteínas o sus genes de toxinas, adhesinas o
invasinas en material clínico (p. ej., heces). Estos métodos, otrora muy
costosos para su uso en laboratorios clínicos, están comenzando a emerger
como herramientas diagnósticas primarias.
El agar de MacConkey muestra fermentación de lactosa.
Se requieren medios selectivos para el cultivo de Salmonella y Shigella en
heces.
Las sondas génicas permiten la detección directa.
TRATAMIENTO
El tratamiento antimicrobiano es fundamental para superar las infecciones
con enterobacterias. Por desgracia, las combinaciones de resistencia
determinada por plásmidos y cromosomas producen una gran variabilidad en
todas las bacterias en cuanto a la susceptibilidad a fármacos
antimicrobianos. Por lo común son resistentes a concentraciones elevadas de
penicilina G, eritromicina y clindamicina, pero pueden ser susceptibles a
betalactámicos de amplio espectro, aminoglucósidos, tetraciclina,
cloranfenicol, sulfonamidas, quinolonas, nitrofurantoína y antibióticos
polipeptídicos. La probabilidad de resistencia varía entre los géneros
bacterianos y en diferentes entornos epidemiológicos, pero la
susceptibilidad de una cepa individual debe estudiarse con pruebas de
susceptibilidad antimicrobiana. En el apéndice 23-1 se muestran los
patrones típicos de resistencia de algunas de las enterobacterias más
comunes.
FUENTES
BIBLIOGRÁFICAS:
[Link]
la/biblioteca-de-
documentos/microorganismos/enterobacterias/#
:~:text=Las%20Enterobacterias%20son%20una%
20gran,incluidas%20todas%20las%20bacterias%
20Coliformes.
[Link]
guia-de-identificacion-de-enterobacterias/
[Link]
aspx?
bookid=2169§ionid=162984036#1143536500
