LABORATORIO N° 3
USO DE LA MICROPIPETA
Objetivo General
Aprender el uso de la micropipeta de manera correcta
Objetivo Específicos
Observar las diferentes partes de una micropipeta.
Calibrar adecuadamente una micropipeta.
Competencias para desarrollar
Identificar las aplicaciones de la micropipeta.
Manejo y uso de equipos y materiales de laboratorio.
Materiales y Equipos
Materiales Reactivos Equipos
Micropipeta Vaso precipitado 100 ml. Agua Balanzas
Punteras Vaso precipitado de 50 ml.
termómetro Pipeta Pasteur
Piseta con H20 destilada
Embudo simple
Desarrollo de la clase
Introducción
El estudiante conocerá las diferentes partes de la micropipeta, los usos en el laboratorio y la
aplicación en las practicas.
Generalidades
La medida de volúmenes de los líquidos se puede llevar a cabo mediante diferentes
instrumentos como buretas, probetas o pipetas. Estas últimas se pueden encontrar en distintos
formatos, fabricadas con materiales diferentes y con tamaños muy diversos. Entre los diferentes
tipos de pipetas encontramos las pipetas graduadas o aforadas, las pipetas Pasteur o las
micropipetas. La técnica mediante la cual se dosifica un volumen de un líquido utilizando una
pipeta se denomina pipeteo. Cuando queremos medir y transferir pequeños volúmenes de un
líquido, en el rango desde unos pocos microlitros a mililitros, es muy aconsejable el uso de
micropipetas. Existen diferentes tipos de micropipetas según si son manuales o electrónicas, de
volumen fijo o variable, monocanal o multicanal, de desplazamiento de aire o de
desplazamiento positivo, etc. La técnica utilizada para pipetear con cada una de ella requiere
unas condiciones específicas de uso. En este objeto de aprendizaje nos centraremos en el uso
de las micropipetas de desplazamiento de aire de accionamiento manual, por ser las más
utilizadas en el trabajo rutinario de laboratorio.
Actividad
EXPERIENCIA Nº 1
CALIBRACIÓN DE MICROPIPETA
TIPOS DE MICROPIPETAS
Los tipos: P1000, P200, y P20.
P1000 es útil para volúmenes de 200 hasta 1000 µL
P200 es útil para volúmenes de 20 hasta 200 µL.
P20 es útil para volúmenes de 0.5 hasta 20 µL.
Asegúrese que está usando la micropipeta correcta para el volumen que necesita. También,
asegúrese que la micropipeta está realmente lista para el volumen que necesita revisando la
“ventana de volumen”, y, si es necesario, cambiando el volumen mediante el “dispositivo” del
control o mando del volumen hasta que la micropipeta corrija el volumen (la micropipeta no
lee su mente; varias personas usarán las pipetas, no siempre se encontrará como usted la
necesita). No Trate de colocar la micropipeta para volúmenes mayores que el máximo, o para
volúmenes menores del cero, esto descalibrará y dañará la micropipeta. Toda micropipeta
utiliza puntas desechables (no utilice la pipeta sin usar la punta apropiada, hacer esto
contaminará la micropipeta y la puede dañar). No utilizar la micropipeta con líquidos que atacan
el polipropileno. No utilizar líquidos que estén emitiendo vapores. La temperatura de los
líquidos debe estar entre 15 y 40 º C. Al poner la punta, asegúrese que la punta sea del tipo
correcto y que esta correctamente ajustada. Generalmente para P1000 las puntas son azules,
para P200 son amarillas y para P20 pueden ser amarillas o blancas.
MANEJO DE LA MICROPIPETA
Llenado de la pipeta
Colocar el pulgar sobre el mando o émbolo de pipeteado.
Oprimir el émbolo. Cuando el émbolo se presiona sentirá un punto de resistencia. Éste es el
primer “alto” o "tope". Si continúa presionando encontrará un punto donde el émbolo ya no se
mueve hacia abajo, este corresponde al segundo “alto” o "tope".
Oprimir el émbolo hasta el primer tope y colocar la punta dentro del líquido hasta una
profundidad de 2 a 3 mm. De una manera lenta y controlada, disminuya la presión del émbolo
para permitir que se desplace hacia arriba. No suelte el émbolo abruptamente, al permitirlo
causará que el líquido pueda salpicar dentro de la punta produciendo volúmenes inexactos y
generando contaminación de la pipeta. Una vez el émbolo se haya desplazado hasta arriba
mantenga la micropipeta en el líquido durante un segundo, esto evita que se aspire aire en la
parte final.
Expulsión de la muestra
Llevar la micropipeta al envase en el cuál quiere añadir el líquido. Se apoya la punta en la pared
del recipiente sin evitar la salida de la muestra. Oprima el émbolo hasta el primer tope y luego
hasta el segundo tope. Haga este procedimiento a una velocidad moderada, hacerlo muy rápido
hará que queden gotas de muestra en la punta. Si observa cuidadosamente, entonces notará que
al oprimir hasta el segundo alto se expele todo el líquido de la punta.
Lo anterior es cierto para la mayoría de soluciones acuosas, excepto para las soluciones de alta
viscosidad. Para solventes orgánicos o para soluciones conteniendo grandes cantidades de
proteína (plasma y suero), es difícil sacar todo el líquido de la punta. En estos casos, es mejor
pipetear una vez la solución expeliéndola y luego llevando hacia arriba el líquido a medir en un
segundo tiempo. Para soluciones de alta viscosidad el llenado y la expulsión deben ser más
lentas. Si es usada inadecuadamente, la micropipeta transferirá volúmenes inexactos.
La micropipeta puede perder su calibración. Comprobar la calibración de la pipeta es un
procedimiento simple que puede ahorrar tiempo considerable, energía, y reactivos. En esta
práctica aprenderá a usar la micropipeta de tamaños diversos medir su exactitud, precisión y
calibración.
CÁLCULO DE LA EXACTITUD (E%) Y DEL COEFICIENTE DE VARIACIÓN
(CV%)
∑ 𝑿𝒊
Promedio = 𝒏
Valor medio = *Z
𝑿𝟏 +𝑿𝟐 +𝑿𝟑 +𝑿𝟒 +𝑿𝟓
= 𝒏
∗𝒁
𝒗𝒂𝒍𝒐𝒓 𝒎𝒆𝒅𝒊𝒐−𝒗𝒂𝒍𝒐𝒓 𝒏𝒐𝒎𝒊𝒏𝒂𝒍
Exactitud E% = ∗ 𝟏𝟎𝟎
𝒗𝒂𝒍𝒐𝒓 𝒏𝒐𝒎𝒊𝒏𝒂𝒍
∑(𝑿𝒊 −𝑿)𝟐
Desviación estándar S = 𝒁 ∗ √ 𝒏−𝟏
𝑺 ∗ 𝟏𝟎𝟎
Coeficiente de variación CV% = 𝑽𝒂𝒍𝒐𝒓 𝒎𝒆𝒅𝒊𝒐
VOLUMEN PESO
N
MEDIDO REGISTRADO
1
2
3
4
5
PROMEDIO
DATOS OBTENIDOS
PROMEDIO
VALOR MEDIO
EXACTITUD
DESVIACIÓN
ESTANDAR
COEFICIENTE DE
VARIACIÓN
TABLA DE FACTOR DE Z DEL AGUA
Aplicación práctica
Calibrar la micropipeta y entender la importancia de las partes de la micropipeta.
Discusión y Análisis crítico
Debate grupal de los resultados obtenidos.
Retroalimentación
El estudiante debe indicar los pasos de la práctica y la aplicación del uso de la micropipeta.
Evaluación y/o autoevaluación
1. ¿Qué es una micro pipeta y que usos tiene?
R.-
2. Porque los materiales volumétricos no se deben calentar o medir líquidos calientes?
R.-
3. ¿Cuál es la importancia de calibrar la micropipeta?
R.-
Referencias y/o recursos adicionales
Prácticas de biología molecular obtenido de: [Link]
[Link]
Calibración de micro pipetas obtenido de: [Link]
de-Micropipetas-1
