LINFOCITOS B
ACTIVACIÓN
Los anticuerpos constituyen un componente esencial de lo Inmunidad adaptativa. Con ellos se combate a
los patógenos que se replican en los espacios extracelulares, que presentan un estadio extracelular o que
se diseminan a través del espacio extracelular.
Existen tres tipos de LB:
LB2 foliculares LB1 LB ZM
Órganos linfoides
Ubicación Cavidad peritoneal y pleural Zona marginal del bazo
secundarios
Desarrollo embrionario en
hígado fetal Precursores de MO
Origen Precursores de MO Se autorenuevan, favorecido Vida prolongada
por interacción con Ag Pueden autorenovarse
propios y microbianos
Diversidad de la Restringida, en desarrollo
Muy diversa Un poco restringida
región V fetal no está TdT
Hipermutación
Si No No
somática
Requerimiento de
Si No No
ayuda de células T
IgM > IgA
IgG, IgD, IgM, IgE, IgA, IgM > IgG
Isotipos de Ac Produce Ac naturales IgM
IgD Baja afinidad
Baja afinidad
Respuesta a Ag
Capaz Si Si
carbohidratos
Respuesta a Ag
Si Capaz Capaz
proteínicos
Memoria Si No se sabe No se sabe
IgD de superficie
Si Poco, nada Poco, nada
sobre células maduras
Cinética de los Ac Lento Rápido Rápido
Tipos de respuesta según el Ag
T-dependiente
Las respuestas de anticuerpos a los antígenos proteínicos requieren que los linfocitos B específicos
interiorícen el antígeno, lo procesen y presenten los péptidos a los linfocitos T cooperadores CD4+, que
después activan a los linfocitos B.
T-independiente
Las respuestas de anticuerpos a antígenos multivalentes no proteínicos con determinantes repetitivos,
como los polisacáridos, algunos lípidos y los ácidos nucleicos, no requieren linfocitos T cooperadores
específicos frente al antígeno. Los antígenos multivalentes (así llamados porque cada molécula de
antígeno contiene múltiples epítopos idénticos) se llaman, por tanto, antígenos independientes de T. Estas
respuestas las desencadena la unión del receptor de linfocitos B (BCR) a su antígeno, y pueden
potenciarse mediante las señales de otros receptores de los linfocitos B.
LB Activación - 1
Los linfocitos B foliculares en los
órganos linfáticos periféricos
producen, sobre todo, respuestas de
anticuerpos a antígenos proteínicos
que requieren la colaboración de los
linfocitos T cooperadores. Los
linfocitos B de la zona marginal en el
bazo y otros tejidos linfáticos
reconocen antígenos multivalentes,
como polisacáridos de transmisión
hemática, y montan, sobre todo,
respuestas de anticuerpos
independientes del linfocito T. Los linfocitos B1 en los tejidos mucosos y el peritoneo también median en
gran medida respuestas independientes del linfocito T.
El tipo y cantidad de anticuerpos producidos varía en función del tipo de antígeno que dirija la respuesta
inmunitaria, la implicación de los linfocitos T, el antecedente de exposición al antígeno y el lugar anatómico
en el que tiene lugar la activación.
Receptor BCR
El BCR está formado por:
Una inmunoglobulina: IgM monomérica o IgD. Ambos
tienen la misma especificidad ya que comparten las
cadenas livianas. Está encargada de reconocer el Ag.
Heterodímero formado por Igɑ e Ig. Tiene la función
de transducir la señal al interior de la célula. La IgM o
D no lo pueden hacer porque su cola citoplasmática
es muy corta.
El BCR puede interactuar con:
Correceptor de LB: formado por CD21 (CR2, reconoce productos de degradación de c3b), CD19 y
CD81. Este correceptor amplifica la señal de activación. Si el Ag esta opsonizado por el
complemento, CR2 también lo reconoce y permite la activación de los LB con concentraciones
menores de Ag.
RFcIIB: es un receptor para el Fc de la IgG. Cuando el Ag está opsonizado por IgG, este receptor
lo reconoce e inhibe la señal de activación del BCR.
LINFOCITO B2 FOLICULAR: ACTIVACIÓN POR Ag T-DEPENDIENTE
Ciclo de vida
Generación de los LB inmaduros en médula ósea tolerancia central. Si no reconocen Ag propios van al
bazo para convertirse en LB maduros tolerancia periférica (se eliminan los que reconocen Ag propios).
Los LB vírgenes maduros van a los órganos linfoides secundarios. Deben ingresar a estos para poder
sobrevivir. Si no reciben señales de sobrevida, mueren a los 3d. Si entran a los órganos linfoides 2 y
reciben señales de sobrevida, viven 3-8 semanas. Allí se encuentran con el Ag y se diferencian a células
de memoria de larga vida y células plasmáticas de corta y larga vida.
LB Activación - 2
Ubicación en órganos linfoides secundarios
Los linfocitos B vírgenes que ingresan en el ganglio atravesando las vénulas de endotelio alto (HEV) son
atraídos hacia los folículos primarios por la quimiocina CXCL13 secretada por las células dendríticas
foliculares, presentes en los folículos primarios. La CXCL13 se une al receptor para quimiocinas llamado
CXCR5 situado en los linfocitos B vírgenes recirculantes, y atrae a estas células a los folículos.
Por su parte, los linfocitos T vírgenes ingresan en la zona paracortical de los ganglios atravesando las
HEV, donde se encuentran las células dendríticas que han capturado el antígeno en la periferia, lo han
procesado y han presentado los péptidos antigénicos sobre moléculas de clase II. Los linfocitos TCD4+
que reconocen el péptido antigénico presentado por las células dendríticas son retenidos y activados,
produciéndose su expansión clonal y diferenciación en perfiles efectores, entre ellos, el perfil Tfh.
Ganglio linfático Bazo MALT Quemoquina Receptor de quemoquina
LB Folículo Folículo Folículo CXCL13 CXR5
LT Zona paracortical Zona T Zona T CCL21 – CCL19 CCR7
La activación de los LB puede ocurrir en cualquiera de estas zonas dependiendo por donde ingrese el
antígeno.
Proceso de activación
Los antígenos proteínicos suelen poseer una sola copia de cada epítopo por molécula. Tales Ag no
pueden unirse de forma simultánea a múltiples moléculas de Ig y entrecruzarlas y por eso su capacidad
para activar al BCR es limitada (no suelen inducir proliferación y diferenciación). Sin embargo, estos Ag
pueden ser interiorizados y ser procesados para activar los LThf que si son estimuladores de la
proliferación y de la diferenciación.
1. Reconocimiento del Ag por la Ig del BCR y entrecruzamiento de BCR. Esto produce:
Transducción de señales al interior de la célula.
Endocitosis del Ag y procesamiento por vía exógena.
2. Expresión en la membrana del LB péptidos del Ag sobre moléculas del CMH clase II.
LB Activación - 3
3. Presentación de los péptidos a un LThf previamente activado por una
CD. El LThf debe reconocer epitopos presentes en el Ag. El LThf
reconoce estos péptidos por medio de su TCR. También hay
interacción por medio del CD40(LB)-CD40ligando(LThf).
4. Los LThf expresan citoquinas que se unen a receptores de los LB.
5. LB prolifera y se diferencia a células plasmáticas de corta vida (va a
cordones medulares) y a plasmoblastos (van a médula ósea).
La interacción del LB con el Ag induce estas modificaciones en el LB:
Expresión de proteínas que fomentan la supervivencia y proliferación
celular.
Presentación del antígeno a los LThf: mayor expresión de mCMH II y coestimuladores B7.
Aumento de la expresión de receptores para citoquinas.
Aumento de la expresión del receptor CCR7 (receptor de una quemoquina que se expresa en la zona
T). Esto hace que el LB migre desde la zona B a la zona T para encontrarse con el LThf.
Llegada del antígeno
En el ganglio linfático los linfocitos B se agrupan y forman los folículos primarios que se encuentran por
debajo del seno subcapsular, separados de este por una capa rica en macrófagos subcapsulares.
La mayoría de los antígenos procedentes de los tejidos llegan a los ganglios linfáticos a través de los
vasos linfáticos aferentes que drenan en el seno subcapsular de los ganglios.
Sólo las moléculas solubles de pequeño tamaño pueden difundir al atravesar la capa de macrófagos
para ponerse en contacto con los linfocitos B del folículo primario.
Los antígenos de mayor tamaño o particulados unidos a Ac son transportados por los macrófagos
mediante diversos receptores de membrana, como CR3, CR4, DCSIGN y receptores Fc de Ig. Estos
macrófagos manifiestan una capacidad fagocítica limitada, lo que ayuda a mantener intacto el antígeno
sobre su membrana por períodos prolongados (hasta 72 horas). El antígeno retenido por los
macrófagos es posteriormente reconocido por los linfocitos B.
En todos estos casos, el antígeno que se presentó a los linfocitos B está generalmente en su estructura
tridimensional original intacta y no ha sido procesado por las células presentadoras de antígenos. Esta es,
por supuesto, una distinción importante entre las formas de los antígenos reconocidas por los linfocitos B
y T.
Activación de los LB y LT vírgenes
La interacción entre los linfocitos T cooperadores y los linfocitos B empieza con el reconocimiento del
mismo antígeno proteínico por los dos tipos de células.
- Los linfocitos T CD4+ vírgenes se activan en las zonas de los linfocitos T mediante el antígeno en
forma de péptidos procesados presentados por células dendríticas por medio de mCMH II. Si las CD
secretan IL21 e IL6 y si la afinidad entre el TCR-Ag es alta, el LT CD4+ se diferencia en linfocito Thf.
LThf expresa IL21, que actúa sobre el mismo LThf y hace que exprese CXCR5.
- Los linfocitos B vírgenes se activan en los folículos por el mismo antígeno (en su conformación original)
que ha sido transportado hasta allí. Tienen un aumento en la expresión de moléculas del CMH-II, un
aumento de moléculas coestimuladoras (CD86/CD80 o B7-2), un aumento de ICOSL y un aumento de
receptores para citoquinas que producen los LT y quemoquinas.
LB Activación - 4
Encuentro con Thf
Las células Thf disminuyen la expresión del receptor de quimiocinas CCR7 y aumentan la expresión de
CXCR5 y, como resultado, dejan la zona T y migran hacia el folículo, en respuesta a CXCL13 secretado
por FDC y otras células en el folículo. Los LB reducen la expresión en la superficie celular del receptor de
CXCR5 y aumentan la expresión de CCR7. Como resultado, las células B activadas migran hacia la zona
T por un gradiente de CCL19 y CCL21, los ligandos para CCR7. El resultado neto de estos cambios es
que los LThf y LB activados son atraídos y se encuentran en la zona T-B.
Los antígenos proteínicos que fueron reconocidos por receptores específicos del linfocito B y que fueron
interiorizados por endocitosis, son procesados para generar péptidos que se unen a moléculas de la clase
II del MHC y son presentados a los linfocitos Thf. Estos lo reconocen por medio de su TCR. Solamente
los Ag proteínicos o Ag asociados a proteínas pueden generar péptidos para cargar en el CMH.
Los péptidos presentados por el linfocito B al linfocito Thf son los mismos péptidos que inicialmente
activaron al linfocito T CD4+ virgen precursor cuando le fueron presentados por las células dendríticas en
la zona de los linfocitos T.
El LTh y el LB reconocen epitopos presentes
en el mismo Ag. No reconocen el mismo
determinante antigénico ya que el LB
reconoce el epitopo en conformación nativa
de la proteína y el LTh reconoce péptidos
derivados de su procesamiento
La interacción (sinapsis inmunológica) entre el LB y el LThf se da por:
La unión del CD40-CD40L induce la proliferación del LB y la transcripción de genes que codifican para
proteínas como la AID. La inducción de ICOS termina el proceso de diferenciación de los LTh en LThf.
Los LThf se caracterizan por la expresión sostenida de CXCR5, de IL21 (actúa sobre el LThf y sobre los
LB) y de el factor de transcripción Ccl-6.
Las células T colaboradoras también secretan citoquinas que contribuyen a las respuestas de las células
B. Las citoquinas derivadas de células T son esenciales para las reacciones del centro germinal.
Algunos linfocitos B abandonan este primer foco de proliferación, se dirigen a los cordones medulares del
ganglio linfático y se diferencian en plasmocitos de vida media corta, que producen los primeros
anticuerpos de la respuesta humoral, que son de clase IgM.
La mayoría de ellos vuelven a la zona folicular junto con los LTfh y forman el centro germinal (CG). En el
centro germinal ocurre el cambio de clase, la hipermutación somática y la maduración de la afinidad de los
LB.
Centro germinal
La mayoría de los LB migran al folículo (que ahora se denomina folículo secundario)
por atracción a CXCL13 y continúan proliferando, dando lugar al centro germinal. A
estos linfocitos B proliferantes se los conoce como centroblastos. Debido a su rápida
expansión desplazan a los linfocitos B vírgenes, los cuales se disponen formando la
zona del manto, alrededor del núcleo de células proliferantes. En el centro germinal
también se encuentran las CD foliculares y los LThf.
Los sucesos que ocurren en el centro germinal son:
LB Activación - 5
Hipermutación somática
En la zona oscura del centro germinal, los LB (centroblastos) están en proliferación rápida y sufren un
proceso llamado hipermutación somática. En la hipermutación somática ocurren mutaciones al azar en las
regiones variables de las cadenas livianas y pesadas de las Ig y es llevada a cabo por la enzima citidina
deaminasa inducida por activación o AID. Esta enzima se expresa en los centroblastos por interacción
entre CD40-CD40L (por eso se da solo en reacciones T-dependientes).
Estas mutaciones ocurren al azar en los hot spots con una frecuencia muy alta. AID deamina la citidina del
ADN convirtiéndolo en uracilo y actúa únicamente sobre ADN simple cadena, lo que explica que la
transcripción sea crítica para la hipermutación somática y el cambio de isotipo.
Durante la transcripción en línea germinal, se forman híbridos de ADN-ARN y la AID desamina los
nucleótidos C para generar nucleótidos U en el ADN monocatenario. La uracilo Nglucosilasa (UNG)
elimina nucleótidos U para generar lugares abásicos donde la endonucleasa Apel crea muescas que lleven
a roturas de la doble cadena. El sitio abásico es reparado por otras enzimas, que cometen "errores" y dan
lugar a mutaciones.
Estas mutaciones pueden generar:
- Codón de stop: centroblasto muere por no expresar BCR.
- Alteración en el plegamiento de la Ig: centroblasto muere por no expresar BCR.
- Modificación en el paratope: BCR cambia su afinidad por el antígeno (sin afinidad, baja o alta afinidad).
Selección del LB con mayor afinidad.
Selección de centrocitos con mayor afinidad por el Ag
Luego los linfocitos B (ahora llamados centrocitos) migran hacia la zona clara del centro germinal, donde
están en estrecho contacto con las células dendríticas foliculares (CDF) y con los linfocitos Tfh. En este
momento ocurre la selección de los centrocitos con mayor afinidad por el antígeno y el cambio de isotipo.
Las CDF no procesan al Ag, sino que tienen receptores para las porciones Fc de las Ig y para el
complemento. Estos receptores se unen a los antígenos intactos
que son acomplejados con anticuerpos y productos del
complemento (formando icosomas, Ag-Ac, Ag-complemento) y luego
los presentan a los centrocitos.
Solo los centrocitos con receptores de alta afinidad por el antígeno
son capaces de captar el antígeno, procesarlo y presentarlo por
medio de mCMH II a los LThf. Sobreviven debido a que empiezan a
expresar proteínas antiapoptóticas (como las de la familia Bcl-2) y
porque reciben señales de supervivencia a través del CD40-CD40L.
Los centrocitos de baja afinidad no pueden captar el Ag y sufren
apoptosis debido a la falta de señales de supervivencia.
Esta interacción con el LThf también lleva a que los centrocitos
sufran al cambio de clase o switch.
Cambio de clase o switch
El switch de clase permite la secreción de distintos tipos de Ig a
medida que transcurre la respuesta inmune.
En este proceso, hay una asociación de la porción liviana (codificada
por los genes VDJ) de la cadena H con una porción constante diferente
respecto de la cadena μ o δ, los dos isotipos de inmunoglobulinas que
expresa el linfocito B virgen maduro (IgM e IgD). Es decir, los
centrocitos cambian el isotipo del anticuerpo que producen al cambiar
las regiones constantes de las cadenas pesadas, dando lugar a la
producción de IgE, IgA o IgG. La especificidad de los anticuerpos
(determinada por las regiones variables) no se modifica.
LB Activación - 6
A nivel genómico se observa una región con secuencias ricas en G y C altamente repetidas en dirección 5'
(upstream) de los genes que codifican cada una de las porciones constantes de los diferentes isotipos
(menos para IgM e IgD). Estas regiones se denominan regiones de cambio o regiones S y son
imprescindibles para que se produzca la recombinación del DNA. La enzima AID también participa en el
cambio de isotipo.
1. AID actúa sobre el DNA convirtiendo la base citidina en uracilo, al quitarle el grupo amino. Esto ocurre
dos regiones S (Sμ y otra S)
2. El uracilo es eliminado.
3. Una enzima produce cortes en el DNA a nivel de las dos regiones S, que luego se unen, eliminándose
el DNA comprendido entre los extremos recombinados.
Como se elimina el ADN comprendido entre los extremos recombinados, el LB no vuelve a expresar el
isotipo de Ig que estaba codificado por ese ADN que se perdió. Por ejemplo:
Recombinación Sμ y Sɑ: se pierde Sμ, Sδ y S. No se vuelve a expresar IgM, IgD ni IgG. Se expresa IgA.
Para que se produzca el cambio de clase es importante la interacción CD40-CD40L dado que esta es la
que hace que se exprese la enzima AID.
Las señales de citoquinas recibidas de los LThf
determinan cuál clase de Ig se sintetizará. Ejemplo:
-El IFN- 7 induce en el linfocito B el cambio a la IgG
-La IL-4 induce el cambio a la IgE.
Los linfocitos B de diferentes zonas anatómicas
cambian a isotipos diferentes también por las
citocinas producidas en estos lugares. El cambio a la
IgA lo estimula el factor de crecimiento
transformador B (TGF-B), que producen muchos
tipos celulares, incluidos los linfocitos T
cooperadores, en los tejidos mucosos y de otros
tipos. Las citocinas de la familia del TNF, BAFF y
APRIL también estimulan el cambio a la IgA. Como
estas citocinas las producen las células mielocíticas,
pueden estimular las respuestas IgA sin la ayuda del
linfocito T.
Diferenciación en LB de memoria o en plasmablastos
Los centrocitos seleccionados, por último, se diferencian en plasmablastos (por influencia de la IL10
secretada por el LThf) y en células B de memoria (por influencia de la IL4 secretada por el LThf) y salen
del centro germinal.
PLASMABLASTOS
Los plasmablastos se dirigen hacia la médula ósea (homing), donde se diferencian en plasmocitos de
larga vida productores de anticuerpos.
Los plasmoblastos dejan de expresar CXCR5 y CCR7. Ello les permite abandonar el centro germinal.
Expresan CXCR4, el receptor para la quimioquina CXCL12 expresada por células estromales de la MO.
Esta atrae a los plasmoblastos a la médula ósea para su diferenciación final en plasmocitos en
microambientes particulares (nichos), que les permitirán continuar secretando anticuerpos por tiempos
prolongados y mantener así "niveles protectores" de anticuerpos en el suero por el término de meses o
años. CXCL12 no actúa sólo como quimioatractante para los plasmoblastos; también estimula la
supervivenda de los plasmocitos en sus nichos en la médula ósea.
Si en una semana no encuentran un nicho apropiado, mueren por apoptosis. El número de nichos
capaces de albergar plasmocitos de vida media larga es limitado. Cada plasmablasto que llega a la
médula ósea deberá desplazar a una célula plasmática ya establecida. De lo contrario, morirá. En otras
palabras, se establece una competencia entre los plasmocitos ya presentes en los nichos y los nuevos
plasmoblastos que intentan colonizarlos.
LB Activación - 7
Las células plasmáticas secretan Ac. La transición de la Ig de membrana a la secretada se debe al
procesamiento alternativo del ARN mensajero (ARNm) de la cadena pesada. El transcripto primario de
ARN en todos los LB tiene dos exones que codifican los dominios transmembranario y citoplásmico de las
Ig. Si en el procesamiento alternativo de este transcripto los exones transmembranario y citoplásmico se
excluyen en el ARNm maduro, la Ig no puede anclarse a membrana y debe ser secretada.
LB DE MEMORIA
Los LB de memoria recirculan entre los órganos linfoides secundarios y son los responsables de la rápida
respuesta humoral frente a la reintroducción del antígeno (sus receptores son de alta afinidad y de isotipo
cambiado). Tienen menores requerimientos de activación que los LB vírgenes.
Características de los LB de memoria
• Responden más rápidamente
• Mayor afinidad por el antígeno, por eso son más eficientes en captar el antígeno
• Expresan altos niveles de MHCII por eso son más eficientes en presentar el antígenos
• Expresan la molécula CD27. La mayoría está en reposo.
• Expresan TLR (2, 6, 7, 9 10)
Los linfocitos B de memoria se pueden activar por:
Estimulación del BCR por el Ag:
o Los LB de memoria interactúan con los LThf de memoria, proliferan y pueden volver a
generar plasmocitos de vida media corta sin volver a formar un centro germinal.
o Algunos pueden volver a formar centros germinales secundarios luego de interactuar con los
LThf. Allí se generan plasmablastos y nuevos LB de memoria con Igs de mayor afinidad por
el Ag. Puede o no haber cambio de isotipo.
Estimulación de receptores de reconocimiento de patrones o por citocinas: estimulación
“bystander”. El LB de memoria prolifera, se diferencia a plasmocito y genera anticuerpos.
Respuesta primaria y secundaria
En una respuesta inmunitaria primaria, los linfocitos B vírgenes son estimulados por el antígeno, se
activan y se diferencian en células secretoras de anticuerpos que producen anticuerpos específicos frente
al antígeno desencadenante. Se desencadena una respuesta inmunitaria secundaria cuando el mismo
LB Activación - 8
antígeno estimula a estos linfocitos B memoria, lo que lleva a la producción de mayores cantidades de
anticuerpos específicos que los que se producen en la respuesta primaria.
La memoria de la inmunidad humoral es mantenida por:
- Generación de plasmocitos a partir de células B de memoria activadas por el antígeno en forma
periódica.
- Generación de plasmocitos a partir de células B de memoria activadas por estimulación de RRP o por
citoquinas.
- Supervivencia sostenida de plasmocitos en microambientes particulares.
Respuesta primaria Respuesta secundaria
CD mieloide, LTh, LB vírgen, CDF, CD mieloide, LTh, LB vírgen, CDF,
Células que
plasmocito de vida corta, plasmocito de vida plasmocito de vida corta, LB de memoria,
participan
larga plasmocito de vida larga
LB de memoria reconoce al Ag y se
activa (respuesta rápida).
LB vírgenes se activan
CD activa a LTh LB vírgenes se activan
LTh interactúa con LB CD activa a LTh
LB se diferencia en plasmocito de vida LTh interactúa con LB
Fenómenos corta LB se diferencia en plasmocito de vida
que ocurren Se forma centro germinal donde ocurre corta
hipermutación somática, cambio de Se forma centro germinal donde ocurre
isotipo y selección de la afinidad hipermutación somática, cambio de
Se generan LB de memoria y isotipo y selección de la afinidad
plasmocitos de vida larga Se generan LB de memoria y
plasmocitos de vida larga
Tipo de Ig
Ppalmente IgM Ppalmente IgG
producida
LB Activación - 9
EXTRAAA
LB Activación - 10
