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Comportamiento antioxidante y polifenólico del Sacha Ajo (Mansoa allicea L)
en extracción seca y húmeda
Article in FABICIB · December 2022
DOI: 10.14409/fabicib.v26i2.12274
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Miguel Angel Enríquez Andres Pelusa Torres
Universidad Estatal Amazónica Universidad Estatal Amazónica
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Vol XXVI, N° 26, DOI 10.14409/fabicib.v26i2.12274. Diciembre 2022. ISSN 2362-5546
Universidad Nacional del Litoral. Fac. de Bioquímica y Cs. Biológicas
Comportamiento antioxidante y polifenólico del Sacha Ajo
(Mansoa allicea L) en extracción seca y húmeda
………………….
Enríquez, M.; Torres, L.A.; López, R.; Checa, X.
Cómo citar este artículo: Enríquez, M.; Torres, L.A.; López, R.; Checa, X. (2021). Comportamiento antioxidante y polifenólico del Sacha
Ajo (Mansoa allicea L) en extracción seca y húmeda, en FABICIB, 26. DOI 10.14409/fabicib.v26i2.12274
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COMPORTAMIENTO ANTIOXIDANTE Y POLIFENÓLICO DEL SACHA AJO (MANSOA ALLICEA L)
EN EXTRACCIÓN SECA Y HÚMEDA
Enríquez, M.1; Torres, L.A.1; López, R.2; Checa, X.3
1 Universidad Estatal Amazónica – Departamento de Ciencias de la Tierra – Escuela de Ingeniería Agroindustrial - Ecuador
2 UE José Calixto - Ecuador
3 Gobierno Autónomo Provincial de Chimborazo - Ecuador
menriquez@[Link]
10.14409/fabicib.v26i2.12274
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Recibido 05/10/22 - Aceptado 14/11/22
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Resumen
Evaluar el comportamiento antioxidante y polifenólico de la especie (Mansoa alliacea L) conocido co-
múnmente como sacha ajo, que es un arbusto de la región amazónica que tiene usos medicinales por
parte de la población, en nuestra investigación se aplicó el método de Folin-Ciocalteau y actividad anti-
oxidante total según FRAP (Ferric ion reducing antioxidant Power) y ABTS (Ácido 2,2 – azinobis (3-etil-
benzotiazolin)-6-sulfónico). El método de extracción de aceites esenciales utilizado para esta investiga-
ción fue la destilación por arrastre con vapor, empleando reflujo con una trampa de Clevenger para
separar los aceites más ligeros que el agua. Se determinó cuantitativamente el rendimiento para cada
uno de los aceites esenciales a partir del peso húmedo y seco de la planta. Se empleó un diseño Simplex-
Lattice para determinar los puntos de medición de actividad antioxidante (proporciones de los aceites
esenciales) Se encontró como resultado que la hoja húmeda en relación a la seca genera más compo-
nentes en esta especie vegetal, luego de generar el análisis estadístico definimos que existe una disper-
sión entre los factores de análisis, generándose diferencias significativas.
Palabras clave: Ajo sacha, aceites esenciales, Folin-Ciocalteua, FRAP, ABTS
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Abstract
Antioxidant and polyphenolic behavior of Sacha garlic (Mansoa allicea L) in dry and wet extraction
To evaluate the antioxidant and polyphenolic behavior of the species (Mansoa alliacea L) commonly
known as sacha ajo, which is a bush of the Amazonian region that has medicinal uses by the population,
in our research the Folin-Ciocalteau method was applied and total antioxidant activity according to FRAP
(Ferric ion reducing antioxidant Power) and ABTS (2,2-Azinobis (3-ethylbenzthiazolin) -6-sulfonic acid). The
method of extraction of essential oils used for this investigation was steam distillation, using reflux with a
Clevenger trap to separate oils lighter than water. The yield for each of the essential oils was determined
quantitatively from the wet and dry weight of the plant. A simplex-lattice design was used to determine
the measuring points of antioxidant activity (proportions of essential oils). It was found that the wet leaf
in relation to the dry generates more components in this plant species, after generating statistical analysis
we define that there is a dispersion among the analysis factors, generating significant differences.
Keywords: Garlic sacha, essential oils, Folin-Ciocalteua, FRAP, ABTS.
INTRODUCCIÓN
El ajo de monte es un arbusto enredadera de hojas perennes, nativo de la región amazónica. Su nombre
científico es Mansoa alliacea y sus nombres comunes, ajo de monte o sacha ajo, que significa “ajo falso” de-
bido a su fuerte olor a ajo y al sabor de sus hojas cuando es picado o machacado (Silva, 1995). En los trópicos
y en la selva amazónica sus hojas se utilizan como condimento o especia debido a sus características organo-
lépticas (López y Pérez, 2010).
La práctica de la medicina herbaria se basa en el uso terapéutico de las plantas medicinales como sustitu-
tas de las medicinas farmacéuticas o en combinación. El ajo sacha es un arbusto de hojas perennes, nativas de
la selva amazónica que existen alrededor de dos años o más, en habitual florece y produce semillas más de
una vez en su vida. Sus hojas no se caen a lo largo de un año. A esta planta se le puede considerar como un
arbusto semipredador de aproximadamente 25 m de altura (Calero, 2012). De las plantas se usa sus extractos
en diversas formas de preparación, para mejorar el estado de salud (Naczk & Shahidi, 2006). La especie
Mansoa alliacea, también es conocida en la región amazónica como sacha ajo, esta especie vegetal es un
arbusto de hojas perennes, su ciclo vegetativo oscila entre 2 años o más, floreciendo y produciendo semillas
más de una vez en su vida (Olivera et al., 2013) Sus hojas no se caen a lo largo de un año, y los comuneros las
utilizan para las curaciones shamánicas así como también emplean sus raíces como condimento en los alimen-
tos tales como ayampaco, maito, chiachiano, tilapias, asados, ahumados, guaña, costilla y guanta. Las plantas
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medicinales juegan un papel muy importante en el cuidado de la salud de las personas (Hasperué et al., 2016).
La Mansoa alliacea es una planta común del norte de Sudamérica en países como Ecuador, Colombia y Vene-
zuela, usada por la población indígena para contrarrestar los dolores, conocido por su olor a ajo y sus com-
puestos sulfúricos, esta especie contiene alcaloides, cumarinas, quinonas, esteroides, triterpenoides, alifáti-
cos, compuestos, aminoácidos, aceites esenciales y flavonoides (Itokawa et al., 1992). Los componentes
bioactivos, entre los que están los polifenoles, representan un conjunto importante, y cada año se presentan
más estudios que relacionan esta clase de moléculas con funciones benéficas para la salud humana (CYTED
1996). Los alimentos funcionales en la actualidad son un tema interesante y controversial, ya que es innegable
el acceso a la información y aun así gran parte de los consumidores expresan su molestia con los términos, y
de un fraude en la oferta de productos avalados por un gran aparato de mercadotecnia, por lo que es funda-
mental recalcar que este tipo de alimentos deben estar enlazados con una dieta equilibrada y un estilo de
vida saludable (Enríquez Estrella et al., 2022). La metodología aplicada para la determinación del contenido
total de polifenoles es el ensayo de Folin-Ciocalteau (Faustin et al., 2011). Existen otras técnicas para la deter-
minación actividad antioxidante total, entre estas se encuentran el método FRAP (Ferric ion reducing antioxi-
dant Power (Benzie & Strain, 1996). Actualmente, en la región amazónica del Ecuador se ha iniciado investi-
gaciones sobre las propiedades funcionales de algunas especies vegetales de la zona, que serán utilizados en
la industria de alimentos (Enríquez, 2021) con este antecedente el objetivo de la investigación es determinar
el comportamiento antioxidante y polifenólico del sacha ajo en base seca y húmeda.
MATERIALES Y MÉTODOS
El estudio se realizó en los laboratorios de Química y Biología de la Universidad Estatal Amazónica, de la
ciudad del Puyo, ubicada en el Km 2 ½ paso lateral vía al Tena.
Es una investigación tipo aplicada, la cual se fundamenta en la experimentación. Se emplearon métodos
cuantitativos que permitieron controlar las variables independientes, se realizaron cálculos numéricos y aná-
lisis estadísticos para establecer modelos de comportamiento.
La recolección del tejido vegetativo se realizó en el Cantón Santa Clara ubicado geográficamente a 700
msnm, 1o 13' 33.267'' latitud Sur y a 78° 01' 0'' longitud Oeste, se encuentra en un ambiente tropical, un clima
cálido húmedo, donde la precipitación anual alcanza los 4000 mm, una humedad relativa de 80 % y tempera-
tura promedio de 25 °C. la materia prima vegetal fue lavada con agua potable, secado en estufa, con recircu-
lación de aire a una temperatura de 45 °C, pulverizado en molino y posteriormente tamizarlo, con el objetivo
de garantizar un tamaño de partícula inferior a 0,5 mm, óptimo para la obtención de los extractos (1). La
obtención del extracto se la realizo con el método de Extracción Asistida por Ultrasonido. Para la extracción
se utilizó una mezcla etanol y agua en proporción 9 a 1, con una relación de 250 mL de disolvente por cada 50
g de muestra pulverizada. Las extracciones fueron realizadas por triplicado. Se trabajó a 35 °C durante 1 hora
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y posteriormente la mezcla fue filtrada a través de un filtro de Gooch y el extracto crudo obtenido fue concen-
trado con evaporador rotatorio a temperatura de 45°C y presión reducida de 600 mm Hg hasta un volumen
final de 50 mL.
DETERMINACIÓN DE FENOLES TOTALES
Para la implementación del ensayo de Folin-Ciocalteu (15). Previamente se construyó una curva de cali-
bración haciendo diluciones sucesivas a partir de una disolución concentrada de 1000 mg.L-1 de ácido gálico
(que se hace referencia en la tabla 1). A partir de esta disolución se prepararon 10 ml de cada una de las
disoluciones diluidas de concentraciones crecientes de ácido gálico entre 5 y 25 mg.L-1. Para esta determina-
ción se tomaron 40 μl de la muestra en un matraz aforado de 10 ml y se añadieron 500 μl de reactivo Folin
Ciocalteu. Se llevó a reposo protegido de la luz por 10 minutos. finalizado este tiempo, se añaden 500 μl de
disolución de carbonato de sodio al 10%. Se homogeniza y se coloca en oscuridad por 2 horas, para finalizar
con la medida de la observancia a 765 nm contra blanco de reactivos.
Tabla 1. Preparación de la curva patrón de ácido gálico a partir de una disolución concentrada de 1 000 mg.L -1.
Volumen final 10 mL (agua destilada).
Componentes Concentración de ácido gálico (mg.L-1)
añadidos
5 10 15 20 25
Ácido gálico (uL) 50 100 150 200 250
Reactivo Folin- Ciocalteau (uL) 500 500 500 500 500
Disolución de carbonato de sodio 10% (uL) 500 500 500 500 500
DETERMINACIÓN DE ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Se la realizó con el método FRAP (Ferric ion reducing antioxidant Power), este consiste en medir la reduc-
ción de 2,4,6-Tripiridiltriazina Férrica (TPTZ) a un producto coloreado por la actividad de compuestos antioxi-
dantes (2).
Para esto se generó una curva de calibración haciendo diluciones sucesivas a partir de una disolución con-
centrada de 1000 mg.L-1 de ácido gálico (que se hace referencia en la tabla 2). A partir de esta disolución se
prepararon 10 ml de cada una de las disoluciones diluidas de concentraciones crecientes de ácido gálico entre 5
y 25 mg.L-1. Para esta determinación se tomaron 80 μl de la muestra en un matraz aforado de 10 ml y se añadie-
ron 5 mL de disolución de FRAP, aforandolos con agua destilada, seguido de un reposo, en una estufa a 37ºC,
por 30 minutos, transcurrido esto se genera la absorbancia a una longitud de onda de 593 nm contra blanco.
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Para esta determinación se añadieron, en un matraz de 10 mL, donde, 80 µL de muestra, se adicionaron
5 mL de disolución de FRAP. Se genera un reposo, en una cámara oscura a una temperatura de 37 °C, por 30
minutos. Para finalmente medir la absorbancia a una longitud de onda de 593 nm contra blanco.
Tabla 2. Preparación de la curva patrón de trolox a partir de una disolución concentrada de 1 000 mg.L -1.
Volumen final 10 mL (agua destilada).
Componentes Concentración de ácido gálico (mg.L-1)
añadidos
5 10 15 20 25
Ácido gálico (uL) 10 20 25 30 35
Disolución FRAP (mL) 5 5 5 5 5
El Método ABTS (Ácido 2,2 –azinobis (3-etilbenzotiazolin)-6-sulfónico) se fundamenta en la capacidad de
un antioxidante para estabilizar el radical catión coloreado ABTS, el cual es generado previamente por la oxi-
dación del ABTS (2,2 -́azinobis (3-etilbenzotiazolina-6- ácido sulfúrico) por metamioglobina y peróxido de hi-
drógeno. Los resultados son expresados como equivalentes de Trolox (19).
Para el experimento se construyó una curva de calibración haciendo diluciones sucesivas a partir de una
disolución concentrada de 1000 mg.L-1 de ácido gálico (que se hace referencia en la tabla 3). En base a esta
disolución se prepararon 10 ml de cada una de las disoluciones diluidas de concentraciones crecientes de ácido
gálico entre 5 y 25 mg.L-1.
En esta determinación se tomaron 40 µL de la muestra y se colocaron en la cubeta del espectrofotómetro.
adicionando 2 mL de la disolución del radical y se esperaron durante 7 minutos. La lectura de absorbancia a
una longitud de onda de 730,0 nm contra un blanco de etanol.
Tabla 3. Preparación de la curva patrón de trolox a partir de una disolución concentrada de 1 000 mg.L -1.
Volumen final 10 mL (agua destilada).
Componentes Concentración de ácido gálico (mg.L-1)
añadidos
5 10 15 20 25
Ácido gálico (uL) 20 30 40 50 60
Radical ABTS (mL) 2 2 2 2 5
MÉTODOS ESTADÍSTICOS
Se realizó un experimento con dos factores:
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Tabla 4. Factores de estudio
Factor 1 – Estado de las hojas Factor 2- Técnicas de análisis
Método Folin-Ciocalteua.
Hojas secas Hojas Húmedas FRAP (Ferric ion reducing antioxidant Power). ABTS (ácido
2,2 –azinobis (3- etilbenzotiazolin)-6-sulfónico).
Se obtuvieron un total de seis tratamientos por especies con la variable de salida polifenoles totales y
actividad antioxidante. Las técnicas de análisis usadas son ANOVA y prueba de Tukey, con la determinación de
intervalos de confianza para la media de la población.
Técnicas de análisis: El análisis estadístico fue desarrollado mediante el software IBM SPSS Versión 21.0.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
La tabla 5 presenta los resultados de actividad polifenólica por el método Folin-Ciocalteau y de actividad
antioxidante totales según los métodos de FRAP y ABTS. Se observan valores mayores en todas las determina-
ciones en los aceites esenciales obtenidos de muestras húmedas de hojas de Sacha Ajo.
Tabla 5. Actividad polifenólica total según Foli-Ciocalteau (mg equivalente de ácido gálico.L-1) y
actividad antioxidante total por FRAP y ABTS (mg equivalente Trolox.L -1) a aceites esenciales de
Sacha Ajo (Mansoa alliacea L) en muestras húmedas y secas.
Técnicas de análisis
Aceites esenciales Folin- Ciocalteau FRAP ABTS
765 nm 593 nm 730 nm
Aceite esencial muestra húmeda (mg/L) 6,58925 1,866616667 0,171816667
Aceite esencial muestra seca (mg/L) 2,0215 0,60795 0,084166667
Diferencia significativa en la columna para las técnicas empleadas en los análisis (p<0,05 según Tukey).
A continuación, se grafica la actividad polifenólica total mediante Folin-Ciocalteua y la actividad antioxi-
dante según FRAP y ABTS, en el aceite esencial de Sacha Ajo (Mansoa alliace L) en muestras húmedas y seca.
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Figura 1. Actividad polifenólica total según Folin-Ciocalteau (mg equivalente de ácido gálico.L-1)
y actividad antioxidante total por FRAP y ABTS (mg equivalente Trolox.L -1) a aceites esenciales de
Sacha Ajo (Mansoa alliacea L) en muestras húmedas y secas.
En el análisis estadístico se determinó la homogeneidad de los seis tratamientos, para ello se realizó
prueba de hipótesis ANOVA con un nivel de significación de 0,05, se declaró las siguientes hipótesis.
Ho: Influye el estado de las hojas en la actividad antioxidante y polifenolica mediante las técnicas de análisis.
Ho: No influye el estado de las hojas en la actividad antioxidante y polifenolica mediante las técnicas de análisis.
Tabla 6. Anova del Sacha ajo.
Suma de cuadrados gl Media cuadrática F Sig.
Entre grupos 179,746 5 35,949 548,554 ,000
Dentro de grupos 1,966 30 ,066
Total 181,712 35
El nivel se significación de la prueba es 0,00, se rechaza las hipótesis nulas, se asume la alternativa, se
obtiene que el grupo no es homogéneo. Se aplica la prueba de Tukey donde se determinan los tratamientos
que muestran diferencias significativas.
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Tabla 7. Tukey del Sacha Ajo
Subconjunto para alfa = 0.05
Tratamiento N
1 2 3 4
ABTS seca 6 ,0842
ABTS húmeda 6 ,1718 ,1718
Frap seca 6 ,6080
Frap húmeda 6 1,8666
Folin seca 6 2,0215
Folin húmeda 6 6,5893
Sig. ,991 ,061 ,898 1,000
Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos.
a. Utiliza el tamaño de la muestra de la media armónica = 6,000.
De igual manera todos los tratamientos son significativamente diferentes entre sí. En este caso a excep-
ción de ABTS seca y ABTS húmeda, ABTS húmeda y Frap seca, Frap húmeda y Folin seca. Es de destacar que
Folin húmeda es significativamente diferente a las demás técnicas de análisis. Según el estudio (Enríquez y
Pérez 2019) realizado en Guaviduca (Piper Carpunya L) analizaron la actividad antioxidante y poli fenólica
donde determinaron que sometiéndole a un secado de 35 °C / 60 minutos, se extrae lamayor cantidad de
bioactivos (fenoles y flavonoides) que se convirtieron en aditivos naturales para alimentos, tomando en cuenta
la abundancia de especies vegetales en el Ecuador. Quiroga (2021) determina que el contenido de polifenoles
en Mansoa allicea fue de 18,57±0,64 g en extractos obtenidos de los tallos, con un contenido de antiocianinas
de 0,30±0,06 EAG/100g extraído de hojas húmedas y en el caso de la capacidad antioxidante de hojas y tallos
de base húmeda mediante los radicales libres DPPH fueron 1,21±0,09 IC50 (mg/mL) y 1,17±0,15 IC50 (mg/mL)
respectivamente y con el radical ABTS0+ fueron 0,45±0,13 IC50 (mg/mL) y 0,51±0,04 IC50 (mg/mL) respecti-
vamente, donde existió mayor capacidad en los tallos.
CONCLUSIONES
Mediante el análisis estadístico observamos que existe una dispersión, en relación al comportamiento
antioxidante y polifenolico de la especie Mansoa alliacea., esto se debe a los 2 factores tomados que son las
hojas arbustivas en estado natural y seco, se observaron valores elevados en estado húmedo en el método de
Folin y FRAP en estado húmedo mas no en el ABTS, y en estado seco los resultados son directamente
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proporcionales entre ellos, definiendo que si influye el estado de la hoja en los resultados. Este estudio nos
sirvió de inicio en la utilización de esta especie vegetal en procesos alimenticios.
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