Examen Curso urso de Cromatografía Liquida - HPLC
Nombre :Elard Pedro Vilca Cutimbo
Observacion Posible: Si la
columna analítica está
obstruida, columna se haya
ensuciado con contaminantes
1. Se aprecia Picos partidos y picos muy juntos. altamente retenidos.
Disolvente de la muestra incompatible
con la fase móvi
2. Disolvente de la muestra incompatible con la fase
móvil, Sobrecarga de muestra, Interacciones
secundarias, en fase reversa
3. Cambiar el disolvente. Siempre que sea posible,
disolver las muestras en fase móvil, Disminuir la
cantidad de muestra, Reducir el volumen de inyección,
Utilizar un disolvente de inyección más débil.
Justificacion:
Deriva de la linea base:
Fluctuación de la temperatura
de la columna (Incluso pequeños
Grafico 1 cambios producen subidas y
caídas cíclicas de la línea base.
En su mayoría, suelen afectar a
los detectores de índice de
refracción y de conductividad, o
a los detectores de UV en alta
sensibilidad o en modo
fotométrico directo).
Fase móvil no homogénea. (La
Grafico 2 deriva suele deberse a una
mayor absorbancia y no a un
patrón cíclico debido a la
auctuación de la temperatura),
1. Se aprecia tiempos de retencion distinto para el mismo pico, y
Problema de mezcla de la fase
se aprecia el area mas simetrica en el grafico 1 el grafico 2 móvil o cambios en el Flujo Los
presenta area asimetrica mas ancha y presenta cola, en el materiales muy retenidos en la
grafico 1 la linea base presenta ruido, volumen de inyeccion de muestra (valor de k’ alto)
pueden eluirse como picos muy
5μL y % de Columna en volumen de 0.625
anchos y parecer que son una
Grafico 2 linea base mas linea, volumen de inyeccion de 500μL línea base que se eleva o fluctua.
y % de Columna en volumen de 62.5 Los volumen de inyeccion suelen
En el grafico 1 y 2 en la primera campana se ve uno su base del ser pequeños si se varia el
volumen a concentraciones
pico es mas angosta que la base del pico en el grafico 2
mayores exsite la posibilidad de
Disolvente de la muestra incompatible obtener picos anchos debido a
con la fase móvi que estos quedan mas retenidos
2. Disolvente de la muestra incompatible con la fase móvil, en la fase estacionaria
Sobrecarga de muestra, Interacciones secundarias, en fase produciendo colasy areas mas
reversa grandes.
3. Cambiar el disolvente. Siempre que sea posible, disolver las
muestras en fase móvil, Disminuir la cantidad de muestra,
Reducir el volumen de inyección, Utilizar un disolvente de
inyección más débil.
Los picos que no
tienen cabeza son
Deriva de la línea base causados por
logeneral las alta
concentracion de la
señal que presenta la
muestra , en el caso
Pico sin cabeza de la linea base que
se eleva debido al
balor K´produciodo
por la fase movil
1. Picos sin cabeza y linea base que se eleva
inadecuada o el ruido
quese pueda generar
por intergferencia
electrostaticas de
otros equipos,
La fluctuación de la
temperatura de la
columna (Incluso
pequeños cambios
producen subidas y caídas
cíclicas de la línea base,
afecta la eficiencia de la
columna por lo que
produce un aumento en la
señal,
El solapamiento de picos
debido ala fase movil de
metanohol agua afectada
por las proporciones de
inyeccion dentro de la
columna, ya que esta
Diferencias observadas: mezcla al llevar
Temperaturas diferentes metanohol esta expuesta
Alturas de los picos diferentes ala variacion de la
Solapamiento de picos temperatura, el tiempo de
Tiempo de retencion distintos retencion diferente
Tiempo muerto diferentes prodcuido por la variacion
de los platos teoricos
Ultimo pico con cola
afectados por la afinidad
del analito en la fase
estacionaria,
Se puede inferir que la influencia del platos teoricos sobre el facotr de retencion donde a mayor factor de
retencion mejor efciiencia de separacion debido al factor k¨
En la curva fucsia el tiempo de retencion a 4000 (N) enpieza a tener una mejor separacion tras lo largo de
tiempo en la curva verde los (N) teoricos son mas bajos y el tiemo se extiende mas.
