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CATALISIS POR APROXIMACION
Hay 4 mecanismos de catálisis:
• Catálisis por aproximación.
• Catálisis covalente.
• Catálisis ácido-base.
• Catálisis por distorsión.
Catálisis por aproximación.
Se trata de un mecanismo de
catálisis que poseen todas las
enzimas. Se divide en los
siguientes
pasos:
• Aproximación de reactantes.
Se facilita el acercamiento de los
sustratos.
• La frecuencia de encuentro
depende de la concentración.
• La velocidad de reacción
depende de los “choques
eficaces”
El ión metálico puede interaccionar con el sustrato orientándolo en la posición más
adecuada para que se de la catálisis o bien puede estabilizar intermediarios de reacción
cargados.
INHIBIDORES REVERSIBLES COMPETITIVOS
Este tipo de inhibidores tienen la característica de
ser químicamente muy parecidos al sustrato, de tal
manera que pueden ocupar el sitio activo de la
enzima, pero ésta no los transforma, mientras el
inhibidor esté dentro del sitio activo el verdadero
sustrato no puede entrar y por lo tanto no es
posible que se forme ES y no hay formación de
producto. Si usamos el ejemplo de la cerradura y la
llave, podemos pensar en una llave que entra en la
chapa pero no puede abrirla porque no es la
correcta. Sin embargo, mientras la llave
inadecuada esté dentro de la chapa, no es posible
que entre la llave correcta. Figura 6.18.
Los inhibidores reversibles se estudian en el
laboratorio disponiendo series de recipientes. Por
ejemplo, suponga que se tienen tres series, cada
una con cinco tubos. Los tubos de cada serie se
numeran: 1, 2, 3, 4, y 5 para la primera serie; 1',
2', 3', 4', y 5' para la segunda y 1'', 2'', 3'', 4'' y 5'' la
tercera. En los quince tubos se dejan constantes
los siguientes factores: temperatura, tiempo de
incubación, pH y [E]. La concentración de sustrato
va en ascenso en cada uno de los tubos de cada
serie, pero será igual en sus homólogos, por
ejemplo: a los tubos 1, 1' y 1'' no se les agrega
sustrato y van a ser los controles. A los tubos 2, 2' y
2'' se les agrega una determinada cantidad de
sustrato pero la misma en todos estos tubos. A los
recipientes 3, 3' y 3'' se les agrega más sustrato que
los anteriores por lo que los tubos 5 de cada una de
las series son los que tienen una concentración
mayor de sustrato. Finalmente, a los tubos de una
serie no se les agrega inhibidor, a todos los tubos
de otra serie se les pone inhibidor a la misma
concentración y a la tercera serie se les agrega
inhibidor a una concentración mayor de la que se
les puso en la serie anterior.
Una vez concluido el tiempo de incubación se
detiene la reacción y se mide cuantitativamente la
cantidad de producto que se formó en cada uno de
los tubos, con lo que se puede obtener la velocidad
de la reacción. Así se pueden formar parejas de
puntos ([S], v0), la primera serie (tubos 1,2,3,4 y
5), representa los datos de la acción de la enzima
sobre el sustrato sin la presencia de inhibidor. En
los datos obtenidos con los tubos 1', 2', 3', 4' y 5', se
tiene la actividad de la enzima con la presencia de
una determinada concentración de inhibidor y con
los resultados de la serie 1'', 2'', 3'', 4'' y 5'', se tiene
la acción de la enzima con una concentración de
inhibidor mayor que en la serie anterior. A los
datos de cada uno de los tres experimentos se les
calcula el recíproco (1/[S], 1/v0) y se grafican. Si el
inhibidor es competitivo se obtiene la gráfica
característica que se presenta en la Figura 6.19:
Figura 6.19 Inhibición competitiva. (Figura elaborada por el autor).
Del análisis de la gráfica de la Figura 6.19 se
obtienen varias características que presentan los
inhibidores competitivos:
1. Observe el lector que las rectas obtenidas con la
presencia, o ausencia de inhibidor, interceptan al
eje y (1/v0), en el mismo punto, y como, de
acuerdo con la ecuación de Henderson -
Hasselbach, el intercepto es igual a 1/Vmax, se
puede concluir que un inhibidor competitivo no
modifica la velocidad máxima de la enzima. El
que una enzima encuentre un inhibidor, o un
sustrato, para formar los complejos respectivos,
depende de la concentración de estas substancias.
Si la concentración de sustrato se hace mucho
mayor que la de inhibidor, es mucho más probable
que la enzima casi siempre colisione con sustrato y
la inhibición se hace imperceptible, por lo que la
enzima puede llegar a su velocidad máxima.
2. Por otro lado, las rectas tienen una pendiente
más grande a medida que la concentración del
inhibidor aumenta. De acuerdo con la ecuación de
Henderson - Hasselbach, la pendiente de una recta
sin inhibidor es igual a Km/Vmax, si los inhibidores
competitivos no modifican Vmax la única forma de
aumentar el quebrado anterior es aumentando la
Km, de tal manera que los inhibidores
competitivos producen un aumento de la K m de la
enzimaun inhibidor competitivo disminuye la
afinidad de la enzima por el sustrato. Esto mismo
expresado en términos más sencillos, es
equivalente a decir que .
INHIBIDORES REVERSIBLES NO COMPETITIVOS
A diferencia de los inhibidores competitivos, los no
competitivos se unen a la enzima en un sitio
específico diferente al activo. De esta propiedad se
deriva su nombre, pues no compiten con el
sustrato para ocupar el sitio activo. Aún más, este
tipo de compuestos puede tener una estructura
química totalmente diferente a la del sustrato. Se
piensa que al unir a la enzima un inhibidor de este
tipo, se produce un cambio en su estructura
tridimensional que altera la configuración del sitio
activo, imposibilitando el reconocimiento del
sustrato. Cuando EI se rompe, la enzima adquiere
su conformación activa. Figura 6.20.
Figura 6.21 Inhibición no competitiva. (Figura elaborada por el autor).
Se supone que la gráfica que se presenta en la
Figura 6.21 fue obtenida de un experimento similar
al que se describió en la sección anterior,
solamente que el inhibidor usado es no
competitivo. En este caso se puede hacer énfasis
en lo siguiente:
1. Las rectas con o sin inhibidor interceptan al
eje x (1/[S]), en el mismo punto y de acuerdo a la
ecuación de Michaelis - Menten, ese punto vale -
1/Km, por lo que se puede concluir que: los
inhibidores no competitivos no afectan la K m de
la enzima, es decir, no alteran la afinidad de la
enzima por su sustrato.
2. Las rectas sin inhibidor interceptan al
eje y (1/v0), en puntos más bajos que las que sí
tienen. A mayor concentración de inhibidor, el
intercepto está más arriba. Cuando no hay
inhibidor, el punto de intersección es igual a
1/Vmax. Para que este punto se desplace hacia
arriba y coincida con los puntos de intersección de
las rectas con inhibidor, Vmax debe ser más
pequeña. Esto significa que la presencia de un
inhibidor no competitivo disminuye la velocidad
máxima de la enzima.
