SIEMBRA PARA OBTENER AISLAMIENTO
Materiales:
-Mechero de alcohol
-Asa de platino
-Asa de un solo uso
-Placa de petri
-Tubos con las bacterias
Procedimiento:
-Abrimos el tubo con las bacterias proliferadas.
-Flameamos la boca del tubo y el asa de siembra.
-Introducimos el asa en el tubo, removemos y cerramos el tubo.
-Cogemos la placa de petri y realizamos la siembra.
Técnica de las 5 estrías
-Tomamos un inóculo y sembramos en la placa de petri en forma de estría.
-Flameamos el asa, giramos la placa y volvemos a sembrar en forma de estría.
-Repetimos el proceso 5 veces.
Técnica de los 4 cuadrantes
-Dividimos la placa en cuatro cuadrantes.
-Esterilizamos el tubo y el asa, y cogemos el inóculo.
-Sembramos el primer cuadrante en forma de estría.
-Sin flamear el asa repetimos el proceso en los cuadrantes restantes.
Técnica de los 3 giros
-Sembramos la mitad de la placa en estría
-Flameamos el asa
-Giramos la placa 90 grados y sembramos la mitad de la placa
-Volvemos a flamear, giramos otros 90 grados y volvemos a sembrar.
Estría simple
-Flameamos el asa y cogemos el inóculo.
-Sembramos la placa empezando con estrías juntas y grandes, y acabamos con estrías mas
alejadas y pequeñas.
-Dejamos las placas en la estufa para incubar
Resultados:
Una vez incubadas obtendremos bacterias aisladas.
TINCIÓN DE GRAM
Fundamento:
Divide a los microorganismos en Gram+ y Gram-. Los Gram+ son aquellos que resisten la acción
decolorante del disolvente alcohol-acetona, mientras que los Gram- son decolorados, siendo
posteriormente teñidos con un colorante de contraste.
Este hecho es debido a la diferente composición de la pared celular de ambos grupos de
microorganismos.
Materiales:
-Gradilla
-Cristalizador
-Mechero de alcohol
-Portaobjetos limpio y desengrasado
-Papel de filtro
-Solución salina estéril
-Asa de siembra
Procedimiento:
-Ponemos una gota de solución salina en el portaobjetos.
-Flameamos el asa, cogemos una colonia y la extendemos por el portaobjetos cubriéndolo
bien.
-Secamos al aire
-Fijamos la muestra cogiéndola con unas pinzas y pasándola 3 veces por el mechero.
-Teñimos la muestra con cristal violeta durante 3-4 minutos.
-Añadimos Lugo, un mordiente, durante 1-2 minutos.
-Decoloramos con alcohol acetona en proporción 7/3, durante 20 segundos.
-Teñimos con safranina durante 3 minutos.
-Eliminamos el exceso de colorante y lavamos con agua por los dos lados.
-Dejamos secar
-Observamos en el microscopio con el objetivo de inmersión
Resultados:
Bacterias gram+ se observarán de color azul y las gram- de color rosa.
