Transcripción
Dogma de la Biología celular:
Conceptos básicos:
• GENOMA: Es la totalidad de información genética que posee un
individuo o una especie.
En las células el genoma es ADN (en algunos virus puede ser ARN).
El genoma está organizado en moléculas llamadas CROMOSOMAS.
GEN: Toda secuencia de ADN que puede ser transcripta y genera un
producto con cierta función celular específica.
Los genes están contenidos en los cromosomas.
Existen genes «mudos», es decir que no generan productos celulares,
porque son reguladores o son sitios de reconocimiento para algunas
proteínas y enzimas y suelen ser transcriptos pero no traducidos.
Organización del genoma
eucariota:
SECUENCIAS ALTAMENTE REPETIDAS:
• Se repiten en tandem (en forma consecutiva sin interrupción).
• Forman parte de la heterocromatina por lo tanto no se expresan.
• ADN satélite: hasta 100 pb (Ej. centrómero).
• ADN minisatélite: Aprox. 15 pb.
• ADN microsatélite: hasta 5 pb.
SECUENCIAS MEDIANAMENTE REPETIDAS:
• Dispersas a lo largo del genoma. No en tandem.
• Secuencias codificadoras: Ej. genes que informan para ARNr, ARNt e
histonas.
• Secuencias no codificadoras: Se desconoce su función.
SECUENCIAS DE COPIA UNICA:
• Genes que codifican proteínas.
Flujo de la información genética:
Transcripción:
Formación de una cadena de ARNm complementaria a
la cadena “molde” del ADN
Factores involucrados:
ENZIMA: ARN polimerasa.
• Se une a la secuencia de ADN llamada Promotor y cataliza la
formación del ARNm. Sintetiza ARN en dirección 5’ a 3’.
PROMOTOR: secuencia del ADN a la cual se debe unir la ARNpol
para iniciar la transcripción.
TRANSCRIPCIÓN ASIMÉTRICA: solo se transcribe una cadena del gen.
CADENA MOLDE: es la cadena del gen que lee la ARNpol desde 3’ a
5’ (la que se transcribe). También llamada NO CODIFICANTE ó
NEGATIVA.
CADENA ANTIMOLDE: es la cadena del gen que NO es leída (no se
transcribe) También llamada CODIFICANTE ó POSITIVA (tiene «casi»
la misma secuencia que el ARN transcripto)
TOPOISOMERASA I: elimina las tensiones
Unión de ribonucleótidos:
• La ARN polimerasa une el fosfato de cada ribonucleótido
entrante al OH 3’ libre del ARN en crecimiento.
• Los ribonucleótidos se unen por UNION FOSFODIESTER
• SUSTRATOS:
• ATP= AMP + PPi
• GTP=GMP + PPi
• CTP= CMP + PPi
• UTP= UMP + PPi
• Los mismos sustratos aportan
la energía necesaria para
este proceso anabólico.
• PIROFOSFATASA: Hidroliza
los PPi.
Transcripción en procariontes:
• Tienen solo una ARNpol (transcribe todos los tipos de ARN).
• Esta enzima en procariontes tiene varias subunidades (que
componen la enzima completa u holoenzima).
• La subunidad sigma reconoce al sitio PROMOTOR, e inicia
la transcripción.
• La enzima se une al ADN en regiones específicas llamadas
secuencias consenso: TATAAT y TTGACA.
• La ARNpol separa las dos cadenas del ADN.
• Complejo promotor cerrado pasa a complejo promotor
abierto
• Una vez incorporados los primeros 8 nucleótidos el factor
sigma se disocia.
Características de la transcripción:
• Siempre es asimétrica, se transcribe la hebra 3’—5’
del ADN río abajo del inicio de la transcripción. El
sentido de la síntesis del ARNm es de 5’ a 3’
• La burbuja de transcripción avanza a medida que
avanza la transcripción.
• La hebra ya trascripta de atrás se vuelve a plegar
generando un super enrrollamiento que la
TOPOISOMERASA I corrige.
• Se llama hebra antimolde o codificante a la 5’—3’
del ADN que será igual al ARNm excepto por la U. La
hebra que se copia se denomina molde.
Etapas de la Transcripción:
1) Iniciación: la ARN pol reconoce y se une a un sitio
PROMOTOR en el ADN, abre la hebra y se alinea para comenzar
su trabajo.
Las hebras del ADN se disocian y las bases de la hebra molde
quedan disponibles: burbuja de trascripción
2) Elongación:
• La ARN pol se disocia del promotor para comenzar la
transcripción.
• Las moléculas de ARN se sintetizan en dirección 5’-3’ pero la
hebra molde de ADN se lee de 3’-5’
• Los ribonucleótidos trifosfatados se van uniendo de a uno en el
extremo 3’ del ARN (los grupos fosfato de las rNPTs se rompen
por acción de una PIROFOSFATASA)
• Los mismos sustratos aportan la energía para la polimerización,
no se requiere de ATP «extra».
• En la burbuja de trascripción el primer tramo transcripto genera
una hebra híbrida transitorio (ADN-ARN), a medida que se
alarga el ARNm se separa.
• En caso que se enrosque una TOPOISOMERASA corrige el
superenrrollamiento.
3) Terminación:
• INDEPENDIENTE DE rho: Secuencias repetidas GU (señal de
terminación) determinan la formación de un bucle en el 3’ del
ARN transcripto. Esto impide el avance de la ARNpol poniendo
fin a la transcripción.
• DEPENDIENTE DE rho: la proteína denominada Rho se une el
ARN y llega al extremo 3´ donde lo libera de la ARN
polimerasa. La proteína Rho interactúa con el ARN procarionte,
causando su separación del ADN, y finaliza la transcripción.
• Mientras se realiza la transcripción los ribosomas ya comienzan
la traducción del ARNm en el extremo 5’ (traducción
cotranscripcional) Esto sucede en procariotas, ya que los
ARN no maduran. En Eucariotas NO sucede esto.
LOS ARNm PROCARIONTES PUEDEN SER
POLICISTRONICOS
• El ARNm policistrónico es el que lleva información para varias
proteínas (contiene varios cistrones).
• Los ARNm policistrónicos son exclusivos de procariontes
TRANSCRIPCION EN EUCARIOTAS
• Existen tres tipos de ARN polimerasa en eucariontes, todas compuestas por
varias subunidades, que se unen a regiones específicas promotoras:
TATAbox, CAAT y CG:
• - ARN polimerasa I: transcribe ARNr
• - ARN polimerasa II: transcribe ARNm y ARN pequeños
• - ARN polimerasa III: transcribe ARNt y algunos ARN pequeños (pn y pc)
Las ARN polimerasas se unen al promotor por medio de péptidos
llamadas FACTORES BASALES DE TRANSCRIPCION
FACTORES DE TRANSCRIPCION BASALES Y
ESPECIFICOS
• FACTORES BASALES: Se unen a las ARN pol para que éstas
reconozcan el sitio promotor.
• FACTORES ESPECIFICOS: Se unen a secuencias reguladoras del
gen.
Los factores específicos interactúan con los basales para regular la
transcripción.
a) FACTORES ESPECIFICOS ACTIVADORES: Se unen a secuencias
intensificadoras activando la transcripción.
b) FACTORES ESPECIFICOS REPRESORES: Se unen a secuencias
silenciadoras frenando la transcripción del gen.
La señal de terminación suele ser una secuencia de
adeninas (poliadenilación).
Transcripción: Diferencias
TRANSCRIPCIÓN
Características PROCARIONTES EUCARIONTES
Tres tipos: I, II y III.
Única. Formada por
ARN polimerasa Formadas por varias
cinco subunidades
subunidades.
Secuencias
TATAAT y TTGACA TATA box, CAAT y CG
promotor
Directa: no requiere
Unión de la Requiere Factores de
factores de
ARNpol al ADN Transcripción (TFI, II y III)
transcripción
Realizada por la
Apertura ADN Realizada por la Helicasa
ARNpolimerasa
-Proteína Rho
Finalización Señal de poliadenilación
-Independiente de Rho
MADURACION DE LOS ARN EUCARIOTAS
• ARN transcripto primario ARN maduro
• Exclusivo en eucariotas (los ARN procariotas NO maduran).
• Son modificaciones post-transcripcionales en las moléculas
de todos los tipos de ARN eucariotas.
• Todos los ARN eucariotas maduran en el núcleo antes de
pasar al citoplasma.
• Incluye 3 procesos:
• 1) Capping: en el extremo 5’
• 2) Poliadenilación: en el extremo 3’
• 3) Splicing: mecanismo de corte y empalme
1) CAPPING (en 5’)
• Cuando el ARNm transcripto
primario alcanza 30 nucleótidos
de longitud se le agrega un
“capuchón” en el extremo 5’.
• Capuchón= nuclótido
modificado (7-metilguanosina
trifosfato).
• Funciones del capuchón:
a) Protege al 5’ de las
exonucleasas.
b) Imprescindible para el
comienzo del splicing.
c) Marca el sitio de origen de la
traducción.
2) POLIADENILACION (en 3’):
Agregado de 250 nucleótidos
de Adenina en el extremo 3’ del
ARNm.
• Frente a una señal específica
de terminación (AAUAAA) una
endonucleasa corta el ARNm
transcripto primario.
• Una poliA-polimerasa
agrega la cola poli A
• Funciones de la cola poli A:
a) Protege al 3’ de las
exonucleasas (degradación).
b) Ayuda al ARNm a salir del
núcleo
3) SPLICING (corte y
empalme): corta los intrones,
los elimina y empalma los
exones. En esta eliminación
intervienen
ribonucleoproteínas que
forman el espliceosoma. El
resultado es un ARNm
maduro.
• INTRON: Secuencia no
codificante del ARNm
• EXON: Secuencia
codificante del ARNm
El splicing es mediado por RNPpn (ARNpn+proteínas).
• Las RNPpn se unen a los extremos de cada intrón
formando los SPLICEOSOMAS
• El spliceosoma cataliza el corte de intrones y empalme
de exones.
• La actividad catalítica del spliceosoma está en el
ARNpn !!
LOS ARNm EUCARIOTAS SON
MONOCISTRONICOS
• En eucariotas cada ARNm maduro informa para una
sola proteína
ARNt
• Cada ARNt transporta específicamente un aminoácido hacia el
ribosoma para que se incorpore a la proteína que se está
sintetizando.
• Existen 31 ARNt distintos, que difieren en la región 3´(sitio de
unión al aminoácido correspondiente) y la porción de tres bases
llamada anticodón, que se unirá al ARNm
• La especificidad por el AA se la da el ANTICODON (secuencia
de 3 bases nitrogenadas)
• La maduración incluye:
a) Modificaciones químicas en algunas bases nitrogenadas de
sus nucleótidos.
b) Eliminación de un intrón.
c) Agregado de CCA en el extremo 3’ donde se une el
aminoácido
Una vez transcripto,
el ARNt se pliega
sobre sí mismo
formando primero
una estructura en
forma de hoja de
trébol y luego
tomando la forma de
letra L. esto se
conoce como
“procesamiento del
ARNt”.
ARNr
• El ARN ribosomal se une a proteínas formando los ribosomas.
• Cada ribosoma está formado por dos subunidades: una mayor
y otra menor, que se unirán al ARNm para sintetizar una
proteína. Los sitios A, P y E intervienen en la unión de
aminoácidos y formación de la proteínas.
Maduración del ARNr en Eucariotas:
• Nucleoplasma: Se transcribe el ARNr 5S
• Zona fibrilar (central) del nucleolo: Se transcribe el
ARNr 45S y se fracciona (maduración)
• Zona granular (periférica) del nucleolo: Se
ensamblan las fracciones de ARNr con las proteínas
ribosomales llegadas del citoplasma y se arman las
subunidades ribosomales que salen por los complejos
del poro hacia el citoplasma
CODIGO GENETICO
• El ARNm maduro lleva la información para sintetizar una
proteína.
• Esa información está “escrita” en el lenguaje de los nucleótidos.
• El CODIGO GENETICO permite descifrar esa información y
traducirla al lenguaje de los aminoácidos
CODIGO GENETICO
• Se lee en grupos de 3 bases (codones)
• 64 CODONES presentes en el ARNm
• Codón de iniciación: AUG
• Codones de terminación o stop: UAA; UAG ;UGA
• Son 61 codones codificantes
• Cada CODON codificante del ARNm se apareará
con un ANTICODON complementario de un ARNt
durante la síntesis proteica (traducción)
