UNIVERSIDAD DEL MAGDALENA

Programa de Ingeniería Pesquera

Bioquímica

INFORME DE LABORATORIO: SOLUCIONES

Einer Barbosa 2022113033, Tejeda A. Konny 2020213048, Ortiz M. Estefany
2022176014 & García C. Daniel 2021211025.
BIOQUÍMICA
UNIVERSIDAD DEL MAGDALENA
Carrera 32 #22-18, Santa Marta, Magdalena.
[email protected]

Resumen

Este estudio se centra en el método analítico de espectrofotometría, que utiliza la

interacción de la materia y la energía radiante para calcular la cantidad de sustancias
químicas presentes en una muestra. La intensidad de la luz absorbida por la muestra se
mide aplicando la ley de Burg-Lambert-Behr. En el transcurso del experimento, usted debe
aprender las habilidades para operar adecuadamente los equipos y recursos del
laboratorio. Al finalizar, podrá determinar la concentración de una solución mediante
espectrofotometría y determinar la relación entre absorbancia y concentración.

Palabra clave; espectrofotometría, concentración, ley de Lambert-Behr, absorción,

concentración, espectro y soluciones.

Introducción
La espectrofotometría es una técnica realizar experimentos
analítica común en la ciencia que utiliza espectrofotométricos, contribuyendo así
las interacciones de sustancias químicas al desarrollo de competencias básicas en
con la radiación electromagnética para química analítica.
estimar la concentración de esas
Objetivos
sustancias en soluciones. Este informe de
laboratorio investiga la aplicación de la  Aprender, comprender la
ley de Beer-Lambert, que establece la funcionalidad del
conexión fundamental entre la espectrofotómetro.
concentración química y la absorción de  Determinar la absorbancia y
luz. La espectrofotometría es crucial para Tramitancia de soluciones y su
la investigación y el análisis químicos aplicación.
porque permite mediciones precisas de la  Mejorar la implementación de
concentración, la identificación de equipos en prácticas.
compuestos y la comprensión de cómo se
 Afianzar conceptos químicos.
comportan los compuestos en relación
con la longitud de onda. A través de Materiales
experimentos prácticos, adquirirá
habilidades en el uso de equipos de
laboratorio, aprenderá a interpretar los
espectros de absorción y desarrollará una
comprensión más profunda de la teoría y
las aplicaciones de esta técnica. Este
informe describe los procedimientos,
resultados y conclusiones obtenidos al
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Implementos de Laboratorio
Material de Beaker, tubos de
vidrio ensayo y pipetas.
Material de Gradillas y
plástico pipeteador.
Equipos Espectrofotómetro.
Rojo de fenol
2mg/l
Reactivos
HCL O,1M
NaOH O,1M

Marco teórico
La espectrofotometría es un método muy utilizado en química analítica y bioquímica
basado en la interacción de la luz con la materia. Permite la cuantificación de
concentraciones químicas, determinación de absorbancia y transmitancia de soluciones e
información sobre la composición de la muestra basada en espectros de absorción.

Metodología
Preparación del espectrofotómetro: destilada y luego 0,1 ml de HCl 0,1
M y mezcle la solución
Para garantizar la estabilidad, encienda el suavemente en el tubo. tubo de
espectrofotómetro al menos 20 minutos ensayo 2
antes.
 Agregue 3 ml de solución de rojo
Preparación de la solución estándar en de fenol al 2,5 mg%, 7 ml de agua
ambiente ácido: destilada y luego 0,1 ml de HCl 0,1
M y mezcle la solución
 Tome 5 tubos de ensayo limpios y suavemente en el tubo. tubo de
secos y calíbrelos en ensayo 3
consecuencia.  Agregue 1 ml de solución de rojo
 Agregue 10 ml de solución de rojo de fenol al 2,5 mg%, 9 ml de agua
de fenol al 2,5 mg% seguido de 0,1 destilada y luego 0,1 ml de HCl 0,1
ml de HCl 0,1 M y mezcle la M y mezcle la solución
solución suavemente en el tubo. suavemente en el tubo. tubo de
tubo de ensayo 1 ensayo 4
 Agregue 5 ml de solución de rojo
de fenol al 2,5 mg%, 5 ml de agua
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Preparación de pintura blanca en medio

ácido:
Coloque 10 ml de agua destilada en otro
tubo de ensayo.
Mediciones de permeabilidad en medios
ácidos:
Vierta las soluciones estándar y en blanco
en cubetas de espectrofotómetro
separadas.
Selección de longitud de onda:

 Primero ajuste la longitud de

onda del espectrofotómetro a 380
nm.
Mediciones de permeabilidad en
medios ácidos:

 Insertar una cubeta

correspondiente al material de
partida en el espectrofotómetro y
ajustar la transmisión al 100%
(100%T).
Registro de datos en ambiente ácido:

 Retire la cubeta vacía y coloque la

cubeta de muestra estándar. •
Registre la lectura de
transmitancia registrada por el
espectrofotómetro. 8. Cambios de
longitud de onda:
 Repita los pasos para otras
longitudes de onda de 380 nm a
620 nm en incrementos de 20 nm.
Registre el valor de transmitancia
para cada longitud de onda. 9.
Cálculo de la absorción en medio
ácido:
 Calcular la absorbancia en cada
longitud de onda medida en
medios ácidos usando la fórmula:
A = 2 - log(%T).
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 Después de calcular la cómo el ambiente afecta el impacto del

absorbancia máxima, se repite la
medición con la longitud de onda
que produjo el valor máximo en el
espectrofotómetro. Asegúrese de
tomar una muestra de cada tubo
preparado previamente y registrar
la lectura de transmitancia de
cada tubo. pH en la absorción de rojo de fenol.

Repita el experimento en un ambiente

alcalino: Resultados
 Repita todo el procedimiento 1. Determinación del espectro de
anterior, pero utilice una absorción para un colorante en medio
solución de NaOH 0,1 M en ácido y alcalino:
lugar de HCl 0,1 M para
preparar soluciones estándar y
blancos.
Registro de datos en ambiente
alcalino:

 Registre la lectura de
transmitancia y calcule la
absorbancia para cada
longitud de onda medida en
medios alcalinos.
 Para cada longitud de onda
medida en medios alcalinos,
anote la lectura de
Resultados en un ambiente ácido: A
transmitancia y calcule la
partir de
absorbancia.
experimentos
 Anote la lectura de realizados en
transmitancia y calcule la un ambiente
absorbancia para cada ácido, es
longitud de onda que se evidente que el valor máximo de
detectó en un medio alcalino. absorción del rojo fenol cambia
 Para cada longitud de onda significativamente cuando se cambia la
medida en medios alcalinos, longitud de onda en un ambiente ácido.
anote la lectura de En longitudes de onda más cortas (380–
transmitancia y determine la 480), las soluciones absorben más
absorbancia. energía. Es importante recordar que la
Análisis de los datos: absorbancia máxima en el medio ácido se
midió con precisión y se utilizó como
Compare la absorción de rojo de fenol punto de referencia para comparar con
obtenida en medios alcalinos y ácidos en los resultados en el medio alcalino. La
varias longitudes de onda, y observe longitud de onda con mayor espectro de
absorción en medios ácidos es 420 nm.
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Resultados en un ambiente 3. Construcción de la curva de

alcalino: calibración del rojo de fenol en medio
Al repetir alcalino:
este proceso
en este Concentración
medio
alcalino, las La tabla muestra que hay una
mediciones de absorbancia se realizan a disminución significativa en la
la misma longitud de onda que se usó concentración de rojo de fenol desde la
anteriormente en el medio ácido. Estas
mediciones revelan un patrón interesante Concentración
de cambios en la absorbancia del rojo de Numero de tubo 1 2 3 4 5
fenol en medios alcalinos en comparación Solución rojo de fenol 2,5
mg/l
10 5 3 1 0
con medios ácidos, donde se produce una Agua destilada 0 5 7 9 10
mayor absorción en el rango de 100 nm NaOH 0.1 M 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
Volumen final en mL 10.1 10.1 10.1 10.1 10.1
(500-600). Este fenómeno proporciona Concentración final de rojo
2.48 mg/L 1.24 mg/L 0.74 mg/L 0.25 mg/L 0 mg/L
información valiosa sobre el efecto del pH de fenol

sobre la capacitancia. Absorber prueba 1 hasta la prueba 5. Esto respalda

sustancias la ley de Beer, que establece que la
absorbancia es directamente
La longitud de onda con mayor espectro proporcional a la concentración de una
de absorción en medios alcalinos es 560 sustancia en solución, al demostrar una
nm. relación inversa entre concentración y
absorbancia
2. Construcción de la curva de
calibración del rojo de fenol en medio Discusión de Resultados
ácido:
Estos hallazgos pueden influir en futuras
 La absorción tiende a disminuir a
investigaciones y aplicaciones del rojo de
medida que disminuye la fenol y otros materiales con propiedades
concentración de rojo fenol. Esto relacionadas. También tienen
se puede observar claramente implicaciones importantes para
comparando los valores de comprender la química del rojo de fenol
absorbancia en los tubos 1 al 5, en diversos entornos.
donde la concentración de rojo
Resultados en un ambiente ácido:
fenol varió de 10 mg/l a 0 mg/l.
 La permeabilidad aumenta a Ajustando la longitud de onda, es posible
medida que disminuye la observar variaciones significativas en la
absorción del rojo de fenol en un
concentración. Esto se puede ver
ambiente ácido. Esto muestra que el pH
observando los valores de
ácido afecta la capacidad de absorción de
transmitancia (%T), que aumentan la sustancia. Esto puede deberse a la
gradualmente a medida que diferencia en la ionización de los grupos
disminuye la concentración de funcionales de la molécula de rojo de
rojo de fenol. fenol a diferentes valores de pH.

Concentración Cabe señalar que el rojo de fenol tiene la

mayor eficiencia de absorción a 420 nm,
Concentración
Numero de tubo 1 2 3 4 5
Solución rojo de fenol 2,5
10 5 3 1 0
mg/l
Agua destilada 0 5 7 9 10
HCl 0.1 M 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
Volumen final en mL 10.1 10.1 10.1 10.1 10.1
Concentración final de rojo
2.48 mg/L 1.24 mg/L 0.74 mg/L 0.25 mg/L 0 mg/L
de fenol
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que corresponde a la longitud de onda del interacciones pueden investigarse

espectro de absorción máxima en un espectrofotométricamente. Este
medio ácido. experimento espectrofotométrico
demuestra inequívocamente el profundo
El resultado es un ambiente alcalino: impacto del pH medio en la absorción del
Los medios alcalinos, a diferencia de los rojo de fenol, lo que a su vez da como
medios ácidos, tienen una mayor resultado cambios significativos en la
absorción en una gama más amplia de capacidad del rojo de fenol para absorber
longitudes de onda, particularmente en el luz dependiendo de la longitud de onda.
rango de 500 a 600 nm. Los hallazgos son extremadamente
valiosos para la química analítica y la
La longitud de onda del espectro de bioquímica porque resaltan lo crucial que
máxima absorción en medio alcalino es es considerar los factores ambientales al
de 560 nm. o En comparación con la realizar mediciones espectroscópicas y
solución de rojo fenol en medio ácido, la cómo estos factores afectan la absorción
presencia de NaOH 0 punto 1 M en medio de compuestos. Finalmente, este
alcalino reduce significativamente la experimento demuestra cómo la
absorción a la misma longitud de onda. espectrofotometría puede proporcionar
Los resultados confirmaron que el valor información precisa y útil sobre las
del pH del medio es el factor características moleculares de sustancias
determinante para la absorbancia del rojo en diversos entornos químicos.
de fenol. El efecto del pH se manifiesta
como un cambio en la estructura Referencias
molecular, lo que resulta en un cambio en
las propiedades de absorción de la
Skoog, D. A., Holler, F. J., & Crouch, S.
sustancia. R. (2007). Principles of Instrumental
Analysis. Cengage Learning.
En determinadas longitudes de onda, la
absorción observada en medios alcalinos Harris, D. C. (2015). Quantitative
es mayor que en medios ácidos, lo que Chemical Analysis. W. H. Freeman.
indica que el rojo de fenol se encuentra
principalmente en forma alcalina en estos Christian, G. D. (2003). Analytical
medios y, por tanto, es capaz de absorber Chemistry. John Wiley & Sons.
longitudes de onda más largas, entre 500
Miller, J. N., & Miller, J. C. (2005).
y 600 nm. Luz fantástica. Los datos
obtenidos son importantes para Statistics and Chemometrics for
comprender cómo las condiciones Analytical Chemistry. Pearson Education.
ambientales afectan las mediciones Harris, D. C. (2015). Quantitative
espectrales y la absorción de sustancias.
Chemical Analysis. W. H. Freeman.
Esto es útil, por ejemplo, para determinar
el pH de una solución desconocida o Skoog, D. A., Holler, F. J., & Crouch, S.
estudiar reacciones químicas que R. (2007). Principles of Instrumental
implican cambios químicos en el pH. Analysis. Cengage Learning.
Conclusión Nassar, V. (1998). Química Médica y
Este experimento ilustra con éxito cómo Biológica (10ª ed.). Barranquilla.
el pH del medio influye en la absorbancia
del rojo de fenol y cómo estas
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Salve, M. L. (1997). Laboratorio de absorción determina la intensidad de

Bioquímica. Editorial McGraw Hill- absorción de una sustancia específica
Interamericana. a una determinada longitud de onda y
es una propiedad característica de
Gobierno de México. (Sin fecha). esta sustancia.
Soluciones [Archivo PDF]. Recuperado
de Absorción molar (εmolar o ε): La
http://www.salud.gob.mx/csg/publica/pdf/ absorción molar es una variante de la
medicamentos/22_soluciones.PDF absorción y se refiere a la absorción
de una sustancia en una solución con
Universidad de Arizona. (Sin fecha). una concentración molar de 1 mol/L y
Líquidos y electrolitos [Archivo PDF]. una longitud de camino óptico de 1
Recuperado de cm. En otras palabras, es la tasa de
http://www.reeme.arizona.edu/materials/L absorción por mol por litro por
iquidos%20y%20electrolitos.pdf centímetro (L·mol^(-1)·cm^(-1)). Es
Asociación Española de Pediatría. (Sin una propiedad intrínseca de una
fecha). Alimentación parenteral [Archivo sustancia y se utiliza para cuantificar
PDF]. Recuperado de la concentración de una sustancia en
http://www.aeped.es/protocolos/neonatolo una solución cuando se conocen la
gia/alimen-parent.pdf absorbancia y la longitud del camino
óptico.
Geocities (sitio web). (Sin fecha). Manejo
de electrolitos. Recuperado de 2. Uso curvas de calibración:
http://www.geocities.com/medicos76/man Se utiliza una curva de calibración
ejoelectrolitos.html para relacionar la absorbancia (A) de
Ibarra, A. (Sitio web). (Sin fecha). una serie de estándares de
concentración conocida con su
Dietética - Enfermería - Líquidos.
concentración (C). Esto se hace
Recuperado de
midiendo la absorbancia de varios
http://www.arrakis.es/~aibarra/dietetica/E
estándares de concentración conocida
nfermeria/liquidos.htm
y luego trazando una curva que
Preguntas complementarias muestra cómo la absorbancia varía
con la concentración. Luego, esta
1. Tasa de absorción y absorción
curva se utiliza para determinar la
molar:
concentración de la muestra
Absorción (ε): La absorción es una desconocida en función de su
medida de la capacidad de una absorbancia. Las curvas de
sustancia para absorber luz de una calibración son fundamentales en
longitud de onda específica. La espectrofotometría para cuantificar la
unidad es L/(mol·cm), que expresa la concentración de una sustancia en
relación entre absorbancia (A), una muestra desconocida.
concentración molar (C) y longitud
3. Restricciones de la ley de cerveza:
del camino óptico (b) según la ley de
Beer-Lambert: A = ε·b·C. La
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La ley Beer-Lambert es válida bajo químicos como metales

ciertas condiciones, pero tiene pesados o sustancias tóxicas.
algunas limitaciones:  Control de calidad de pescados
y mariscos: La
 Linealidad limitada: esta ley es
espectrofotometría evalúa la
válida sólo en un rango de
frescura y calidad de pescados
concentración limitado. En
y mariscos midiendo
concentraciones muy altas, es
parámetros como la
posible que la absorción ya no
concentración de amonio o la
sea proporcional a la
formación de compuestos de
concentración debido a la
descomposición.
saturación.
 Análisis de nutrientes: Se
 Independencia de las Mezclas:
utiliza para cuantificar los
Esta ley supone que los solutos
nutrientes esenciales en el
son independientes e
alimento para peces y el agua
interactúan entre sí. En
de cultivo que son útiles para la
soluciones o mezclas
nutrición y reproducción de
complejas, esta suposición
organismos acuáticos.
puede no ser válida.
 Evaluación de pigmentos: se
 Coeficiente de extinción molar
utiliza en la industria de la
constante: la absorción molar
acuicultura para medir la
(ε) generalmente varía con la
concentración de pigmentos
longitud de onda, lo que
naturales o agregados en los
significa que no es constante en
alimentos para peces para
todo el rango de longitud de
garantizar el color correcto.
onda.
 Monitoreo de procesos de
 Matriz de muestra: Otras
extracción y purificación: La
sustancias en la muestra
espectrofotometría se utiliza en
pueden afectar la absorbancia
la producción de aceites y
y, si no se tienen en cuenta,
proteínas de pescado para
pueden provocar errores.
verificar la eficiencia de los
4. Aplicación de la
procesos de extracción y
espectrofotometría en la técnica de
purificación.
pesca:
La espectrofotometría tiene varias
aplicaciones en ingeniería pesquera,
entre ellas:
 Detección de contaminantes:
se puede utilizar para analizar
muestras de agua y tejido de
peces para detectar la
presencia de contaminantes