GENÉTICA MOLECULAR: REPLICACIÓN Y TRANSCRIPCIÓN DEL ADN

HISTRORIA DEL ADN

• 1869 FRIEDRICH MIESCHER: identifica la molécula de ADN
• 1920’s LEVENE: analiza el ADN
• 1953 ROSALIND FRANKLIN (ayuda identificar estructura del ADN), WATSON Y CRICK:
descubren la doble hélice en el ADN.
• 1963 SANGER: método para secuenciar el ADN

EXPERIENCIAS DE F. GRIFFITH (1928)

La primera evidencia de que el ADN es el material hereditario fue obtenida en 1928, cuando
se buscaba la vacuna contra la neumonía provocada por una bacteria. Se descubrieron
dos cepas:
- CEPAS S: bacterias con cápsula gelatinosa capaces de producir la enfermedad cuando
se inoculan a un animal sano.
- CEPAS R: no provocan la enfermedad y carecen de cápsula gelatinosa.
Lo que se hizo fue un experimento con ratones:
- Tipo S: de ratones muertos se extraen bacterias vivas de la cepa S (que se introducen
anteriormente), de los ratones inoculados no se extraen bacterias vivas (muertas por
calor)
- Tipo R: de ratones inoculados no se extraen bacterias vivas, pero no crecen en el
animal, de los ratones muertos se extraen bacterias vivas de la cepa S (bacterias R
vivas y S muertas por calor)
Los resultados del experimento llevaron a deducir que en las bacterias muertas existía un
“principio transformante” que era captado por las bacterias vivas no virulentas, y
transformaba sus caracteres hereditarios convirtiéndolas en virulentas.

GENÉTICA MOLECULAR
En la genética molecular si se conoce la secuencia de BN de un gen (genotipo) se puede
deducir la secuencia de aa de la proteína codificada, que se pone de manifiesto en el
fenotipo.

REPLICACIÓN DEL ADN

Proceso por el cual el ADN crea o fabrica una copia de sí mismo; tiene lugar en la fase S.
Surgen 3 hipótesis, modelos de replicación plausibles (Meselson y Franklin W. Stahl):
 - REPLICACIÓN CONSERVATIVA: se produciría un ADN completamente nuevo durante
la replicación. De 1 cadena de ADN se consiguen 2: una completamente nueva y otra
vieja.
- REPLICACIÓN DISPERSIVA: ruptura de hebras de origen durante la replicación que se
reordenarían en una molécula con una mezcla de fragmentos nuevos y viejos en
cada hebra de ADN.
- REPLICACIÓN SEMICONSERVATIVA: cuando el ADN se replica da lugar a 2 moléculas
de ADN con una 1 hebra nueva y otra hebra vieja.
Meselson y Stahl demostraron en 1958 que el modelo válido era el semiconservativo. Para
ello utilizaron nucleótidos marcados con nitrógeno pesado.

REPLICACIÓN EN PROCARIOTAS
Esta duplicación se produce
según el modelo
semiconservativo: las dos
cadenas complementarias del
ADN original, al separarse, sirven
de molde cada una para la
síntesis de una nueva cadena
complementaria de la cadena
molde.
ETAPAS:
-INICIACIÓN: Consiste, básicamente, en el desenrollamiento y apertura de la doble hélice.
1. En el cromosoma bacteriano se inicia en una región del ADN denominada oriC o
PUNTO DE INICIACIÓN. Es una zona donde abundan las secuencias de BASES GATC
(en eucariotas hay múltiples orígenes de replicación)
2. A partir de que se inicie la replicación, el punto de iniciación (oriC)es reconocido por
una serie de proteínas que se van uniendo.

2
 3. Introducción de la enzima HELICASA (en cada
extremo de la horquilla) que rompe los
puentes de H entre las bases nitrogenadas,
separando las hebras/doble hélice como una
cremallera.
4. Al abrirse la doble hélice → desenrollamiento
→ se crean tensiones en zonas próximas que
provocan superenrollamientos; para evitarlos
se unen las enzimas TOPOISOMERASA Y
GIRASAS: “cortan” la cadena para que se deshaga el superenrollamiento y la vuelven
a soldar por los extremos del ADN
5. Para evitar que se enrollen las hebras de nuevo, se unen las PROTEINAS SSBP
(proteínas de unión a la cadena sencilla), dejando libre la hebra que lleva las bases
de modo que estas sean accesibles para otras moléculas.
-PARTES QUE SE DIFERENCIAN DURANTE EL INICIO DE LA REPLICACIÓN:
- BURBUJA DE REPLICACIÓN: alrededor del oriC; se distinguen dos zonas. Se va extendiendo a
lo largo del cromosoma en amos sentidos → replicación bidireccional.
- HORQUILLAS DE REPLICACIÓN: dos zonas con forma de Y donde se van a sintetizar nuevas
hebras de ADN
- ELONGACIÓN: fase en la que se sintetiza una nueva hebra de ADN sobre cada hebra de la
doble hélice original. Además de las enzimas que actúan en la iniciación, en esta fase
intervienen las ADN POLIMERASAS. Hay varios tipos y se nombran como I, II y III. Su función
es doble:
- ACTIVIDAD POLIMERASA: Unen entre sí los nucleótidos que formarán el ADN:
recorren la hebra molde, seleccionan el desoxirribonucleótido cuya base es
complementaria con la de la hebra molde, y lo unen. Las nuevas cadenas de ADN se
sintetizan por unión de desoxirribonucleótidos trifosfatos. La energía para el nuevo
enlace se obtiene de la hidrólisis de los dos grupos fosfato del nucleótido entrante.
- ACTIVIDAD EXONUCLEASA: Eliminan nucleótidos, cuyas bases nitrogenadas están
mal apareadas, así como fragmentos de ARN cebador.
*FUNCIONES DE CADA POLIMERASA:
- POLIMERASAS I Y III: se encargan de la replicación y corrección de errores. Casi todo el
proceso se lleva a cabo en la polimerasa III.
- POLIMERASA II: va a cabo la corrección de errores causados por determinados agentes
físicos.
*ETAPAS DE LA ELONGACIÓN:
1. CEBADOR O PRIMER: Las ADN polimerasa no pueden iniciar de cero la síntesis de una
nueva cadena de ADN, necesitan un fragmento de 10 nucleótidos de ARN
complementario (primer), con extremo HIDROXILO 3’ LIBRE al que añadir
nucleótidos. Primer → sintetizado por PRIMASA (ARN polimerasa). Una vez
comenzada la síntesis, la propia cadena de ADN ya sintetizada actúa como cebador.

3
 2. DEPENDIENDO DEL SENTIDO DE LA CADENA
a. PARA CADENA SENTIDO 3’-5’ (HEBRA CONTINUA/LÍDER): la ADN polimerasa III
recorre las hebras molde en sentido 3´- 5´ y va uniendo los nuevos
nucleótidos en el extremo 3´ hasta que se forman las hebras replicadas.
Cuando se forma la horquilla de replicación la ADN polimerasa III sólo puede
sintetizar nucleótidos en uno de los dos sentidos; la hebra 3´- 5´ se realiza sin
interrupciones → conductora o líder
b. PARA CADENA SENTIDO 5’-3’ (HEBRA DISCONTINUA/RETARDADA): síntesis
discontinua de pequeños fragmentos de ADN de unos mil nucleótidos
(FRAGMENTO DE OKAZAKI). Cada uno de los fragmentos requiere de un
cebador de ARN sintetizado por la primasa cada ciertos intervalos.
3. ELIMINACIÓN DE ARN Y SOLDADURA DE FRAGMENTOS DE ADN: la ADN polimerasa I va
eliminando el cebador (ARN) y sustituyéndolo por ADN (alarga la cadena).
Finalmente la ADN LIGASA suelda todos los fragmentos obtenidos, con lo que se
termina el proceso de la replicación.

- CORRECCIÓN DE ERRORES: Es frecuente que se produzcan errores durante la replicación

y se incorporen nucleótidos con bases incorrectas. Las ADN polimerasas I y III actúan
como EXONUCLEASAS→ antes de incorporar un nucleótido comprueban que el anterior
esté correcto, eliminándolo si no lo es.
- CORRECCIÓN POSREPLICATIVA: Tras ella sólo queda 1 error por cada 1010 pares de
bases. La realiza un complejo enzimático llamado REPLISOMA:
o El replisoma recorre la cadena recién sintetizada detectando errores.
Identifica la cadena nueva porque la molde tiene metiladas las A de las
secuencias GATC
o Una endonucleasa corta el segmento donde hay un error, y lo elimina
o La ADN polimerasa I rellena el hueco
o La ADN ligasa une el nuevo fragmento

REPLICACIÓN EN EUCARIOTAS
La replicación del ADN en eucariotas es similar a procariotas salvo en algunas. diferencias:

4
 • Tiene lugar en el período S de la interfase, iniciándose simultáneamente en varios
puntos del cromosoma → REPLICONES
• Hay cinco tipos de ADN polimerasa
• Es semiconservativa y bidireccional.
• La hebra conductora se sintetiza de
manera continua y la retardada de
manera discontinua, por medio de
fragmentos de Okazaki que luego se
unen; las histonas se duplican durante la
replicación y junto al ADN formarán los
nucleosomas (que se reparten al azar entre las dos nuevas hebras del ADN, retarda y
continua)
• También se requiere un ARN cebador para iniciar la replicación.
→ Cuando se elimina el último cebador, la ADN polimerasa no puede rellenar el hueco al no
poder sintetizar en dirección 3’-5’, por tanto, cada hebra nueva de ADN será más corta que
la antigua; debido a esto el extremo del cromosoma/telómero se acorta cada vez que la
célula se divide → muerte celular y envejecimiento.
→ TELOMERASA: enzima que hace que una célula no pierda la capacidad de dividirse al
alargar la cadena larga

GEN, TRANSCRIPCIÓN Y TRADUCCIÓN

Gen: segmento de ADN que contiene la información necesaria para la síntesis de una cadena
peptídica. La información fluye del ADN al ARNm y de este a la proteína. La expresión de los
genes transcurre en dos etapas sucesivas:
- La transcripción o síntesis de ARN
- La traducción o síntesis proteica
TRANSCRIPCIÓN Y TRADUCCIÓN EN PRPOCARIOTAS: ambos procesos ocurren a la vez en el
citoplasma, ya que carecen de núcleo y el ADN está disperso por él, de manera que antes
incluso de que haya finalizado la formación del ARNm, los ribosomas ya pueden proceder a
su lectura, lo que conduce a la síntesis de proteínas.
TRANSCRIPCIÓN Y TRADUCCIÓN EN EUCARIOTAS: ambos procesos están separados en el
espacio y el tiempo, el ADN se transcribe en el núcleo, y los ARNm formados, junto con el
ARNt y ARNr, atraviesan la membrana nuclear y se dirige el citoplasma (al citosol y RE)
donde los ribosomas proceden a la traducción.

FORMAS DE EXPRESIÓN DE LAL INFORMACIÓN GENÉTICA

5
SINTESIS DE ARN O TRANSCRIPCIÓN
REQUISITOS PREVIOS
- CADENA DE ADN QUE ACTÚE COMO MOLDE
- ARN-POLIMERASAS
o ARN polimerasa I →ARNr
o ARN polimerasa II →ARNm
o ARN polimerasa III →ARNt y ARNr
- RIBONUCLEOTIDOS TRIFOSFATO DE A, G, C Y U
PROCESO DE TRANSCRIPCIÓN
-INICIACIÓN: La ARN-polimerasa reconoce los centros promotores. Luego abre la doble
hélice para que los ribonucleótidos se unan a la cadena molde.
1. El inicio tiene lugar cuando ciertos factores de transcripción activadores
interaccionan con las histonas y desempaquetan la cromatina (se separan las prote.
Asociadas aka histonas).
2. Otros factores activadores se unen por una parte a las secuencias potenciadoras y
por otra a moléculas coactivadores que actúan de intermediarias para ordenar el
correcto ensamblaje de los factores basales con la enzima ARN-polimerasa II

-ELONGACIÓN: La ARN polimerasa II recorre la hebra de ADN molde en dirección 3´→ 5´,
mientras que la cadena de ARNm crece, es sintetizada, en dirección 5´→ 3´

6
TERMINACIÓN: La ARN-
polimerasa se reconoce en el
ADN unas señales de
terminación que indican el
final de la transcripción. En
procariotas son secuencias
palindrómicas y en eucariotas
es una secuencia TTATTT → La
ARN pol II reconoce la
secuencia de terminación
TTATTT; puede seguir la
transcripción cientos de
nucleótidos más, que luego se
eliminan.
MADURACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL: Se trata del conjunto de modificaciones necesarias
para que los ARNm sean funcionales, en ambos extremos de la molécula y en la eliminación
de intrones. Durante la maduración se produce:
- ADICIÓN EN 5’ DE LA CAPERUZA (CAP) → METIL-GUANOSINA TRIFOSFATO: Se añade
poco después de iniciarse la transcripción. Protege al ARNm de las nucleasas y es
reconocida por el ribosoma como lugar de inicio de la traducción.
- ADICIÓN EN 3’ DE LA COLA DE POLI-A: tras la
secuencia AAUAAA (que proviene de TTATTT)
se añade una secuencia de 200 nucleótidos de
A que protege al ARNm de la degradación.
- ESPLICING→ELIMINACIÓN DE INTRONES Y SE
PEGAN LOS EXONES: se realiza con la ayuda del
espliceosoma, con pequeñas moléculas de
ARNsn. Hay organismos que no tienen
esplicesomas porque poseen intrones
autocataliticos (ribozimas) capaces de quitar los
intrones y pegar los exones. Posteriormente se
produce la edición del preARNm, introduciendo, eliminando o transformando unas BN
en otras.
* En ocasiones el splicing puede reordenar los exones, de forma que a partir de un único gen inicial
se pueden sintetizar distintas cadenas peptídicas (splicing alternativo).
SINTESIS DE ARNt
Los pre-ARNt sintetizados por la ARN-polimerasa III suelen sufrir cortes específicos en
diferentes lugares de la cadena y otras transformaciones, como la modificación de alguna de
sus bases o la adición de la secuencia CCA en el extremo 3’
SINTESIS DE ARNr
Los tres tipos de ARNr de la subunidad pequeña del ribosoma, sintetizados por la ARN-
polimerasa I, proceden de largas cadenas de ARNt primario llamado ARN nucleolar. Su
síntesis tiene lugar en el nucleolo y tras un proceso de maduración en el que sufre
diferentes cortes origina los tres tipos de ARNr citados.

7
DIFERENCIAS EN TRANSCRIPCION EN EUCARIOTAS Y PROCARIOTAS:
-PROCARIOTAS:
• ARNm sin caperuza (CAP) ni cola (poli-A)
• En el ARNm de procariotas no hay intrones, por lo que no requiere proceso de
maduración.
• La transcripción se produce a la vez que la traducción, al transcurrir ambos procesos
en el citoplasma.
• Los genes son policistrónicos, es decir, el ARNm contiene información para varias
cadenas peptídicas distintas.
-EUCARIOTAS:
• ARNm con caperuza y cola.
• ARNm con intrones y exones por lo que hay maduración donde son eliminados.
• En eucariotas son monocistrónicos; ARNm con info para la síntesis de una sola prote.
• Traducción y transcripción se producen separados en el tiempo y espacio.

UNIDAD TRANSCRIPCIONAL
*En la actualidad al gen se le tiende a
llamar unidad transcripcional que
comprende la secuencia que codifica
para un ARN incluyendo: promotor,
intrones, exones y secuencias
flanqueantes UTR (se transcriben pero
no se traducen)