INFORME DE PRÁCTICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR.
PRESENTADO POR:
DIANA KATERIN GUERRA JOJOA
AMANDA LUCELY PAZ ROSALES
MAIRETH ALEIRA CARDENAS
YARPAZ
REYVEN YAIR CHAVES ORDOÑEZ
PRESENTADO A:
OSCAR EDUARDO CHECA CORAL I.A PH.D
UNIVERSIDAD DE NARIÑO
FACULTAD DE CIENCIAS AGRÍCOLAS
PROGRAMA DE INGENIERÍA AGRONÓMICA
SEXTO SEMESTRE
SAN JUAN DE PASTO
2024.
PRÁCTICA N.1 BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO
INTRODUCCIÓN
Los laboratorios constituyen medios ambientes de trabajo especiales, que pueden
presentar riesgos químicos, físicos o biológicos. Uno de los aspectos que debe
considerarse en el trabajo de los laboratorios es el cumplimiento de los requisitos de
calidad relacionados con la bioseguridad. Para el cumplimiento de ello es necesario
establecer e implementar procedimientos estándares generales y particulares para cada
laboratorio, disponer de equipos de bioseguridad, y establecer el diseño e instalaciones
del laboratorio que den suficientes garantías para ejecutar un trabajo seguro y con la
calidad requerida.
La Bioseguridad se debe entender como una doctrina de comportamiento encaminada a
lograr actitudes y conductas que disminuyan el riesgo del personal del laboratorio durante
el desempeño de sus actividades. Compromete también a todas aquellas otras personas
que de alguna manera entren en contacto con el ambiente laboratorio, el que debe estar
diseñado en el marco de una estrategia de disminución de riesgos.
OBJETIVOS
Objetivo general.
Conocer acerca del laboratorio en el que se va trabajar para evitar riesgos y proteger al
personal docente, administrativo y estudiantes.
Objetivos específicos
● Aprender sobre las normas de bioseguridad y de esta manera aplicar lo aprendido
evitando problemas de salud.
● Conocer la utilización de materiales, equipos, para un buen desarrollo del trabajo.
● Identificar los principales niveles de bioseguridad en el laboratorio y los agentes de
riesgo a los que puede estar expuesto
METODOlOGÍA
En el laboratorio de biología molecular se realizó la práctica de Bioseguridad y con esto se
determinaron diferentes aspectos que se deben tener en cuenta cuando se ingrese y se
encuentren dentro de este, para esto la laboratorista Vanesa nos brindó información de
las pautas que se tienen en cuenta ahí en el laboratorio para evitar posibles efectos
secundarios y que las prácticas se desarrollen correctamente sin tener inconvenientes.
Por lo tanto es necesario el conocimiento de los materiales y los equipos que son
esenciales para la seguridad en el laboratorio. En lo que se observaron que dentro del
laboratorio había los siguientes elementos:
Estaciones de lavado de ojos
Aunque siempre se utilice protección ocular adecuada cuando trabaje en un laboratorio,
no estamos exentos de que puedan ocurrir accidentes. Si alguna sustancia química o vidrio
roto entra en los ojos de alguien, hay que eliminar el material extraño inmediatamente
para reducir las posibilidades de quemaduras químicas, ceguera y otras formas de daño
permanente, para posteriormente recibir la atención médica adecuada.
Regaderas de seguridad
En el caso de que productos químicos peligrosos entren en contacto con su piel, es
extremadamente importante tener una forma de enjuagar las sustancias que así lo
permitan, rápidamente para reducir el efecto de una quemadura química, además que
muchos de estos productos pueden ser inflamables. Como tal, todos los laboratorios
deben incluir una ducha de seguridad.
Extintores
Los incendios pueden ocurrir siempre que se manipulen equipos eléctricos y materiales
inflamables, por lo que un extintor de incendios es de suma importancia. Como tal no se
trata de un material de laboratorio, pero sí es indispensable para cualquier laboratorio. Es
clave que seleccionen el tipo de extintor adecuado que evite cualquier reacción ante los
productos químicos y debe mantenerse en un lugar de fácil acceso.
Campanas para extracción de humos
En caso de que en los laboratorios se trabaje con productos químicos de cualquier tipo, las
campanas de extracción química se convierten en un equipo esencial de seguridad. Estos
equipos están diseñados para extraer todos los gases que se generan en los espacios
químicos y así evitar posibles problemas de intoxicación, incendios o corrosión de diversos
materiales que hay en el laboratorio.
Botiquines de primeros auxilios
A pesar de tomar todas las medidas de seguridad para evitar accidentes al usar
instrumentos de laboratorio, es importante contar con un botiquín de primeros auxilios.
Cada laboratorio debe estar provisto de varios botiquines en caso de emergencia. Los
botiquines de primeros auxilios deben incluir vendas, pinzas, toallitas esterilizantes,
apósitos estériles, gasas, cremas antisépticas, tijeras y apósitos para ojos. Asegúrense de
que los botiquines de primeros auxilios se reabastecen con frecuencia y se almacenan en
áreas de fácil acceso.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Bioseguridad: Conjunto de medidas preventivas destinadas a mantener el control de
factores de riesgo procedentes de agentes químicos.
Normas de bioseguridad.
Algunas normas básicas que se deben tener en cuenta son:
Leer la guía de laboratorio antes de llegar a laboratorio, para comprender los objetivos, los
conceptos básicos y el procedimiento a seguir durante el desarrollo de la práctica.
No consumir alimentos ni bebidas en el laboratorio.
Se debe trabajar en un área con buena ventilación.
Lavarse las manos con agua y con jabón antes y después de la práctica.
La Bioseguridad tiene tres pilares que sustentan y dan origen a las normas generadas.
Estos son: Universalidad, Barreras de protección y Medidas de eliminación.
Universalidad: Todo el personal debe seguir las precauciones estándares rutinariamente
para prevenir accidentes que puedan ocurrir dentro del laboratorio, sin importar el grado
de complejidad del mismo.
Uso de barreras: Comprende el concepto de evitar la exposición directa al material
manipulado, mediante la utilización de materiales adecuados que se interpongan al
contacto de los mismos. Dentro de estos está la utilización de cofia, bata, tapabocas,
guantes estériles, zapatos de suela antideslizante.
Fig 1. Elemento de protección personal.
Medios de eliminación de material contaminado: Comprende el conjunto de dispositivos
y procedimientos adecuados a través de los cuales los materiales utilizados en el
desarrollo de prácticas académicas, investigación y proyección social son depositados y
eliminados sin riesgo.
SÍMBOLOS DE PELIGROSIDAD DE LOS PRODUCTOS QUÍMICOS
Fig 2. Símbolos que se deben tener en cuenta.
SUSTANCIAS FÁCILMENTE INFLAMABLES
Sustancias auto inflamable. Precauciones: Evitar todo contacto con el aire.
Gases fácilmente inflamables. Precauciones: Evitar la formación de mezclas inflamables
vapor-aire y el contacto con todas las posibles fuentes de ignición.
Sustancias sensibles a la humedad. En contacto con el agua algunos de estos productos
desprenden gases que son fácilmente inflamables. Precauciones Evitar el contacto con la
humedad o el agua.
Líquidos inflamables. Líquidos cuyo punto de inflamación se sitúa por debajo de
21ºC.Precauciones: Mantener estos productos separados de llamas, chispas y de cualquier
clase de fuente de calor.
IDENTIFICACIÓN DE MATERIALES PELIGROSOS
Fig 3. Información de los materiales peligrosos dentro del laboratorio.
MANEJO DE RESIDUOS DENTRO DEL LABORATORIO.
El objetivo principal de la gestión integral de residuos, es reducir tanto como sea posible
los riesgos que se derivan del manejo inadecuado de los diferentes tipos de residuos, en
especial de aquellos residuos que por sus características de peligrosidad pueden causar
daño a la salud humana y/o al medio ambiente. La separación en la fuente es la base
fundamental de la adecuada gestión de residuos y consiste en la separación selectiva
inicial de los residuos procedentes de cada una de las áreas de la Institución. Para la
correcta separación de los residuos se instalan recipientes en cada una de las áreas de la
Institución,
en las cantidades necesarias según la clase de residuos que se va a depositar en ellos y
rotulados
Fig 4. Recipientes para los desechos.
Recipientes para residuos corto punzantes
Este tipo de residuos, se depositan en guardianes de seguridad herméticos y resistentes a
rupturas que cumplen con las características técnicas adecuadas. El guardián se sellará
una vez se hayan llenado hasta el límite indicado en el recipiente 3/4 partes de su
capacidad o cuando hayan permanecido máximo dos meses.
De lo anterior se puede decir que las prácticas de bioseguridad son esenciales tanto para
docentes, estudiantes y personas exteriores, debido a que al tener todos la misma
información se pueden evitar daños y no solo a nivel material sino también en cuanto a
salud.
CONCLUSIONES.
● En el laboratorio se debe conocer y ser consciente de cada una de las normas de
bioseguridad con el fin de evitar o prevenir accidentes.
● Cuando estamos trabajando dentro del laboratorio, debemos tener las prendas
adecuadas para la labor que estamos realizando. La higiene es un factor importante,
del cual depende el buen desempeño de las actividades que se realizan durante la
práctica.
● Se aprendió acerca de todos los equipos que hay en el laboratorio, su respectiva
utilización y todo lo que se puede hacer dentro de estas instalaciones, como también
los factores que se deben tener en cuenta y las respectivas recomendaciones acerca de
qué es lo que no se puede hacer dentro de este lugar. y cómo atender a cualquier tipo
de emergencia que se llegara a presentar.
CUESTIONARIO
1. ¿Qué riesgos se pueden presentar al desarrollar un procedimiento en el laboratorio?
En un laboratorio especialmente de biología molecular, es importante ser consciente de
los diversos riesgos que pueden presentarse. Estos riesgos pueden ser de diferentes tipos:
Físicos:
● Cortes y pinchazos: Manipulación de material de vidrio, agujas y jeringas.
● Quemaduras: Contacto con sustancias químicas calientes o equipos eléctricos.
● Caídas: Pisos mojados o desordenados, tropiezos con cables.
● Ruidos: Equipos centrífugas y agitadores.
Químicos:
● Inhalación: Vapores y gases tóxicos.
● Ingestión: Sustancias químicas por contacto con la piel o la boca.
● Contacto con la piel: Irritaciones y quemaduras químicas.
● Explosiones: Mezclas incompatibles de sustancias químicas.
Biológicos:
● Infecciones: Manipulación de agentes patógenos (bacterias, virus, etc.).
● Alergias: Reacciones a proteínas o polen de plantas utilizadas en procedimientos.
Ergonómicos:
● Lesiones musculoesqueléticas: Posturas incómodas al trabajar con pipetas,
microscopios o equipos pesados.
● Fatiga visual: Uso prolongado de microscopios o pantallas de computadora.
2. ¿Cuáles son las sustancias químicas de interés relacionadas con la generación de
residuos o desechos peligrosos en Colombia?
En Colombia, la generación de residuos peligrosos es una problemática que va en
aumento, afectando diversos sectores industriales y actividades económicas. La
exposición a estas sustancias químicas nocivas no solo representa un riesgo para la salud
humana, sino también para el medio ambiente.
Sustancias de alto interés:
1. Metales pesados:
● Plomo: Baterías, pinturas, municiones. Afecta el sistema nervioso central y la sangre.
● Mercurio: Amalgamas dentales, termómetros, lámparas fluorescentes. Daños
neurológicos, renales y pulmonares.
● Cadmio: Baterías, pigmentos, estabilizadores de plásticos. Daños en riñones, huesos y
pulmones.
● Cromo: Curtiembres, metalmecánica, cromado. Irritación en piel y ojos, problemas
respiratorios.
● Arsénico: Industria del vidrio, conservantes de madera, pesticidas. Cáncer, problemas
dermatológicos y neurológicos.
2. Compuestos Orgánicos Volátiles (COV):
● Benceno: Combustibles fósiles, pinturas, diluyentes. Leucemia, problemas respiratorios
y del sistema nervioso central.
● Tolueno: Solventes, pinturas, adhesivos. Daños en el sistema nervioso central,
reproductor y respiratorio.
● Etilbenceno: Resinas, diluyentes, combustibles. Irritación en piel, ojos y mucosas,
problemas respiratorios.
● Xileno: Pinturas, barnices, disolventes. Daños en el sistema nervioso central, problemas
respiratorios y reproductivos.
● Metileno cloroformo: Removedores de pintura, desengrasantes. Cáncer, daños en el
hígado y riñones.
3. Hidrocarburos:
● Petróleo crudo: Combustibles, lubricantes. Contaminación del aire, agua y suelo.
● Gas natural: Combustible, materia prima para productos químicos. Emisiones de gases
de efecto invernadero.
● Aceites y grasas: Industria alimentaria, textil, metalúrgica. Contaminación del agua y
suelo.
4. Sustancias Tóxicas:
● Cianuro: Minería, electroquímica, tratamiento de metales. Muerte por paro cardíaco y
respiratorio.
● Dioxinas: Incineración de residuos, procesos industriales. Cáncer, problemas del
sistema inmunológico y reproductivo.
● Pesticidas: Agricultura, control de plagas. Intoxicaciones, problemas neurológicos y
reproductivos.
● Herbicidas: Eliminación de malezas. Contaminación del agua y suelo, daños a la
biodiversidad.
5. Otras Sustancias:
● Ácidos y bases fuertes: Diversas industrias. Quemaduras graves, daños en ojos y
pulmones.
● Desechos radiactivos: Energía nuclear, medicina nuclear, industria. Cáncer,
malformaciones congénitas.
● Residuos hospitalarios: Infecciones, enfermedades transmisibles.
3. ¿Cuál es el aprovechamiento o valorización de residuos peligrosos en Colombia?
En Colombia, el aprovechamiento o valorización de residuos peligrosos es un tema
complejo que se encuentra en desarrollo. Si bien la normativa ambiental promueve su
práctica, aún existen desafíos para su implementación efectiva.
¿Cuáles son los tipos de aprovechamiento o valorización?
1. Reciclaje:
● Recuperación de materiales a partir de residuos peligrosos para su reutilización.
● Ejemplos: Reciclaje de metales, plásticos, vidrio y aceites usados.
2. Reutilización:
● Empleo de residuos peligrosos en su forma original o con modificaciones menores.
● Ejemplos: Reutilización de solventes en procesos industriales, reutilización de
materiales de construcción.
3. Valorización energética:
Obtención de energía a partir de residuos peligrosos.
Ejemplos: Coincineración de residuos peligrosos con combustibles fósiles, generación
de biogás a partir de residuos orgánicos.
4. ¿Cuál es el procedimiento que realiza tu institución para la disposición final de los
residuos obtenidos de los diferentes procedimientos de laboratorio?
Para la disposición final de residuos se tienen en cuenta los códigos de colores logrando
de esta manera hacer la respectiva separación y almacenamiento de los desechos.
Residuos no peligrosos.
Residuos no aprovechables: Papeles y cartones contaminados con comida, servilletas,
papel higiénico.
Residuos orgánicos aprovechables: Restos de comida, desechos agrícolas.
Residuos aprovechables: Plástico, cartón, vidrio, papel y metales.
Residuos peligrosos:
Dentro de este se pueden encontrar los infecciosos o de riesgo biológico, químicos, y pos
consumo.
Guardián.
En este se depositan residuos corto punzantes. Como agujas, lancetillas y otros elementos.
Fig 5. Guardián del laboratorio Udenar.
5. ¿consulta cuales empresas de recolección de residuos existen en tu ciudad?
En Pasto
Empresas públicas:
● Empresa Metropolitana de Aseo de Pasto S.A. E.S.P. (EMAS):
○ Recolección de residuos sólidos ordinarios y peligrosos
Empresas privadas:
● Eco Limpieza Nariño S.A.S.:
○ Recolección de residuos sólidos ordinarios, escombros y poda.
● Ambiental del Pacífico S.A.S.:
○ Recolección de residuos sólidos ordinarios, escombros y poda.
● Serviambiental del Pacífico S.A.S.:
○ Recolección de residuos sólidos ordinarios, escombros y poda.
En Colombia: Algunas de las empresas más reconocidas son:
● Colombia Limpia S.A.S.:
○ Recolección de residuos sólidos ordinarios, peligrosos y hospitalarios.
● Veolia Colombia:
○ Recolección de residuos sólidos ordinarios, industriales y peligrosos.
● Proambiente S.A.S.:
○ Recolección de residuos sólidos ordinarios, peligrosos y de construcción.
BIBLIOGRAFÍAS.
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Residuos Sólidos en Colombia. Listado de empresas de Residuos Sólidos en Colombia. (s.f).
Empresite Colombia - Buscador de Empresas Y Negocios de Colombia.
https://empresite.eleconomistaamerica.co/Actividad/RESIDUOS-SOLIDOS/
PRACTICA N°2 METODOLOGÍA EXPERIMENTAL - MANEJO DE LA MICROPIPETA.
INTRODUCCIÓN
Las micropipetas son instrumentos de laboratorios diseñados para conseguir una alta
precisión y exactitud en la medida y dosificación de líquidos. Para garantizar mediciones
precisas y exactas es necesario evitar errores asociados a un manejo inadecuado y a un
funcionamiento deficiente de estos instrumentos. Además, es una herramienta esencial
en el ámbito científico, particularmente en el laboratorio, ya que es empleado para
absorber y transferir pequeños volúmenes de líquidos. Su uso se da desde el cultivo
celular y la manipulación de ADN hasta la dosificación de reactivos en ensayos de
investigación y formación.
Los volúmenes captables por estos instrumentos varían según el modelo: los más
habituales, denominados p20, p200 y p1000, admiten un máximo de 20, 200 y 1000 μl,
respectivamente.
Es de destacar que el uso de micropipetas permite emplear distintos líquidos sin tener que
lavar el aparato: para ello, se emplean puntas desechables, de plástico, que habitualmente
son estériles. Existen varios tipos de puntas: por ejemplo, las amarillas para pipetear
volúmenes pequeños (por ejemplo, 10 μl), y las azules para pipetear volúmenes grandes
(por ejemplo, 800 μl). ( Artedinamico. s.f. )
OBJETIVOS
Objetivo general.
Evaluar la precisión y exactitud en el manejo de la micropipeta, mediante la transferencia
de volúmenes específicos de líquidos.
Objetivos específicos.
● Aprender a calibrar las diferentes micropipetas, su manejo, las puntas que se
deben utilizar y el medio en el cual se deben hacer los respectivos pesos de los
volúmenes.
● Identificar posibles errores en el manejo de la micropipeta.
METODOLOGÍA
El ejercicio realizado en laboratorio consistió en el reconocimiento de micropipetas y sus
partes (émbolo, puntas, diferentes calibraciones puntos de resistencia y su objetivo) se
pudieron evaluar diferentes volúmenes 100µL, 1000µL; 20µL, 200µL; de 10µL, 100µL y de
0.5µL, 10µL, con el uso de las distintas micropipetas, En la práctica realizada se conoció las
diferentes micropipetas, puntas (blancas o amarillas) según lo requiera la micropipeta por
su volumen, los topes que se deben dar o tener en cuenta para su respectivo uso. Además
la práctica se realizó tomando pequeñas cantidades de agua que se encontraban en un
beaker, posterior a esto se tomaron 5 medidas con la misma micropipeta y se pesaron
esto con la finalidad de entender su funcionamiento (exactitud y precisión).
Estas son algunas técnicas de pipeteo para volúmenes líquidos.
a) Se presiona el botón superior suavemente hasta el primer tope.
b) Se sumerge la punta, en la solución que se necesita pipetear estando seguros que
la punta esté bien colocada y que no haya ningún tipo de residuos entre la punta y
El cuerpo de la pipeta.
c) Mantenga la pipeta verticalmente mientras toma la solución.
d) Para descartar la solución de la punta presione el botón hasta el segundo tope.
e) Descarte las puntas utilizando el eyector que traen las pipetas
Continuo a esto se realizan operaciones para cálculo de la exactitud (E%) y del coeficiente
de variación (CV%) como se observa en las siguientes fotos:
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
En los resultados podemos apreciar el cómo se hizo el proceso de toma con las
micropipetas, además, se apreció las cantidades de volúmenes aplicables dentro de
estos, con lo que también se notó sobre las grandes y pequeñas diferencias de volúmenes
que se pueden tomar con las micropipetas.
En los resultados de las pipetas
1000 uL da un valor de coeficiente de variación de 1,22% está por fuera de los rangos
aceptables 0.2%.
500 uL da un valor de coeficiente de variación de 0% está dentro de los valores normales
ya que se acepta hasta 0,2%..
100 uL da un valor de coeficiente de variación de 0% y se acepta 0,2% está dentro de los
valores normales.
200 uL da un valor de coeficiente de variación de 0% y se acepta 0,2 % está dentro de
valores normales.
100 uL da un valor de 0,22% .y se acepta 0,2% estaría dentro de valores normales.
50% da un valor de 0% y se acepta 0,4% estaría dentro de valores normales.
5 uL un valor de 5,69% y se acepta 0,8% estaría por fuera de los valores permitidos.
Pipeta de 10 uL valor de 0,75% se permite 0,8 % estaría dentro de los valores permitidos.
Como regla general se debe elegir la pipeta más pequeña capaz de manejar el volumen de
transferencia requerido. Esto es importante porque la precisión disminuye cuando el
volumen establecido está cerca de la capacidad mínima de la pipeta.Por ejemplo si se
dispensa 50 uL con una pipeta de 5000 uL los resultados pueden ser deficientes, usar una
más pequeña capacidad e incuso una de 50 uL le dará mejores resultados. La calibración
es también importante ya que ayuda a la exactitud y precisión, por lo que algunas pipetas
se
pueden configurar electrónicamente. Y no solo la pipeta también las puntas ya que si no
están las correctas para la pipeta puede haber errores en su medición.
Exactitud: error sistemático. Qué tan cerca está el valor medido real del valor objetivo.
Precisión: error aleatorio. Medida de reproducibilidad.
Maneras de mejorar eficiencia de pipeteo:
Pipetas multicanal o electrónica: ofrecen pipeteo inverso, dosificación variable, diluciones
en series programadas entre otros.
Imagen No 1 Imagen No2 Imagen No3
En la imagen No 1 se muestra una micropipeta de calibración 100 µL - 1000 µL siendo una
de las micropipetas con mayor rango de medición.
En la imagen No 2 se observa una micropipeta de capacidad de 10µL a 100 µL.
En la imagen No 3 se muestra una balanza para mediciones más exactas como de 10 µL -
100 µL.
Imagen No 4 Imagen No 5 Imagen No 6
En la imagen No 4 se muestra una micropipeta con calibre de 10µL a 100µL.
En la imagen No 5 se muestra una micropipeta con calibre de 20µL a µL
En la imagen No 6 se muestran las micropipetas con diferentes calibres.
Imagen No 7 Puntas para pipetear
Los resultados pueden afectar la solución si no se prepara con la precisión requerida, las
concentraciones de los componentes pueden no estar exactamente como se esperaba.
Esto puede tener un impacto significativo en la composición del gel de electroforesis y,
por lo tanto, en la separación de las moléculas durante la corrida y pueden tener impacto
en la movilidad electroforética si la concentración de Tris base es menor de lo esperado,
podría resultar en un pH del gel diferente al deseado, lo que a su vez podría afectar la
movilidad
de las moléculas durante la corrida electroforética. Esto podría llevar a una separación
inadecuada de las muestras y dificultar la interpretación de los resultados.
Los errores en la dispensación de muestras utilizando micropipetas: son las inconsistencias
en el volumen dispensado: Si las micropipetas no dispensan el volumen exacto deseado,
esto puede llevar a diferencias en la concentración de las muestras cargadas en el gel. Por
ejemplo, si una muestra contiene una cantidad precisa de ADN y se carga menos de lo
esperado en el gel debido a una dispensación inexacta, la banda resultante podría ser más
débil o incluso no detectable.
Impacto en la resolución y la interpretación de las bandas: Las variaciones en el volumen
de muestra cargado pueden afectar la densidad de las bandas en el gel. Esto puede
dificultar la comparación de las muestras y la interpretación de los resultados,
especialmente cuando se busca diferenciar entre muestras con cantidades similares de
material genético.
CONCLUSIONES
● La precisión en la preparación de la solución madre es crucial para garantizar la
reproducibilidad y fiabilidad de los experimentos de biología molecular. Pequeñas
desviaciones en las concentraciones de los componentes pueden tener un impacto
significativo en los resultados de la corrida electroforética, afectando la separación
y la interpretación de las muestras.
● La calibración y verificación periódica de las micropipetas son fundamentales para
garantizar una dispensación precisa de muestras y reactivos. Los errores en la
dispensación pueden introducir variabilidad en los resultados de la corrida
electroforética, afectando la resolución y la interpretación de las bandas en el gel.
Además se debe tener en cuenta que antes de empezar a pipetear debemos elegir
la micropipeta según el volumen que vayamos a dosificar y las puntas
adecuadas.
● Basado en los resultados y las conclusiones obtenidas, es importante considerar
posibles mejoras en el protocolo experimental para aumentar la precisión y la
reproducibilidad de los resultados. Esto puede incluir ajustes en los
procedimientos de preparación de soluciones, calibración más frecuente de las
micropipetas o el uso de controles de calidad adicionales durante la corrida
electroforética.
CUESTIONARIO
1. ¿Qué volúmenes puedes operar con las micropipetas disponibles en la práctica?
Los volúmenes que se pueden operar son con micropipetas que van desde 100 hasta 1000
µL, de 20 a 200 µL, de 10 a 100 µL y de 0.5 a 10 µL.
2. ¿Qué cuidados debes tener cuando manipulas la micropipeta?
Cuidados al manipular la micropipeta
Antes de usar la micropipeta:
● Lavarse las manos cuidadosamente con agua y jabón.
● Seleccionar la micropipeta adecuada para el volumen que se desea pipetear.
● Inspeccionar la micropipeta para detectar cualquier daño visible.
● Calibrar la micropipeta si es necesario.
Durante el uso de la micropipeta:
● Sostener la micropipeta con firmeza con una mano en el émbolo y la otra en la
boquilla.
● Ajustar el volumen deseado con cuidado.
● Utilizar puntas de pipeta nuevas y libres de burbujas.
● Sumergir la punta de la pipeta en el líquido a pipetear sin tocar el fondo del
recipiente.
● Aspirar el líquido lentamente hasta alcanzar el volumen deseado.
● Mantener la punta de la pipeta en ángulo durante la aspiración y la dispensación.
● Dispensar el líquido lentamente en el recipiente de destino.
● Expulsar la punta de la pipeta de forma segura en un recipiente adecuado.
Después de usar la micropipeta:
● Desechar las puntas de pipeta de forma segura en un recipiente adecuado.
● Limpiar la micropipeta con un desinfectante adecuado.
● Almacenar la micropipeta en posición vertical en un lugar limpio y seco.
Precauciones adicionales:
● No pipetear directamente en la boca o en los ojos.
● No pipetear con la boca.
● No tocar la punta de la pipeta con las manos.
● Tener cuidado de no contaminar la micropipeta con líquidos o muestras.
● No utilizar la micropipeta si está dañada.
3. ¿Qué precauciones debes tomar para evitar la descalibración de la micropipeta?
Para mantener la precisión de la micropipeta y evitar su descalibración, es importante
seguir estas precauciones:
● Sostenga la micropipeta con firmeza con una mano en el émbolo y la otra en la
boquilla.
● Evite golpes y caídas de la micropipeta.
● No desmonte la micropipeta sin la debida capacitación y autorización.
● Utilice las puntas de pipeta adecuadas para el volumen que va a pipetear.
● No fuerce el émbolo ni la boquilla.
● No pipetee con la punta de la pipeta inclinada en excesoGuarde la micropipeta
en posición vertical en un lugar limpio y seco.
BIBLIOGRAFÍAS.
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PRACTICA N°3 PREPARACIÓN DE SOLUCIONES
INTRODUCCIÓN
Es importante el conocimiento de las preparaciones de soluciones, una solución es una
mezcla homogénea de un solvente y un soluto. La unión entre dos o más sustancias se le
denomina solución, la cual está formada por un soluto que es la sustancia disuelta, que
generalmente se encuentra en pequeña cantidad, en comparación con el solvente que es
la sustancia donde se disuelve el soluto.
Las soluciones se pueden encontrar en su forma física como sólidos, líquidos y gaseosos.
Para poder preparar correctamente las soluciones es necesario realizar cálculos
estequiométricos ya que para la preparación es necesario conocer la concentración de las
soluciones que se tienen y de la que se quiere preparar. También podemos observar que
la concentración es en términos de molaridad, normalidad y porcentajes de peso-peso,
volumen-volumen o peso-volumen. Es importante manejar todas estas formas de
expresar las concentraciones puesto que, en muchas ocasiones en los laboratorios, es
necesario utilizar unas soluciones ya preparadas de una manera determinada para
preparar las soluciones requeridas para nuestro experimento. Para hacer una preparación
de soluciones, se debe tener en cuenta que estas concentraciones también vienen para
algunos reactivos de PCR y llegan a un stock en diferentes concentraciones, generalmente
se debe identificar en qué concentración y medida está la concentración. Con volúmenes
de medida de milimoles y moles que es lo mismo que mililitros a litros, el Buffer Tae viene
en x y este es de 40x se utiliza en investigación, es importante la calidad de los productos y
que sea g/mol. Por tanto se maneja a 1x. En el presente laboratorio se va a utilizar este y
otros reactivos para la realización y aplicación de los respectivos cálculos.
OBJETIVOS
Objetivo general.
Determinar un protocolo preciso y reproducible para la preparación de soluciones
utilizadas en técnicas de biología molecular, asegurando la calidad y la consistencia de las
soluciones para su uso en experimentos posteriores.
Objetivos específicos.
● Analizar la importancia de la precisión en la preparación de soluciones para
garantizar resultados confiables y reproducibles en experimentos de biología
molecular, destacando la influencia de las soluciones en técnicas como la
electroforesis y la extracción de ácidos nucleicos.
● Identificar posibles fuentes de error durante el proceso de preparación de
soluciones y proponer estrategias para minimizar o corregir estos errores, con el
objetivo de mejorar la calidad y la consistencia de las soluciones preparadas.
METODOLOGÍA
En el laboratorio identificamos las soluciones madre o stock necesarias para preparar las
soluciones requeridas en el laboratorio de biología molecular. Para hacer una preparación
de soluciones hijas por solución el cual utilizamos pipetas y matraces volumétricos
calibrados para medir con precisión los volúmenes necesarios de las soluciones madre y
agua destilada o disolvente adecuado para realizar las diluciones, Transferir el volumen
correcto de la solución madre a un matraz volumétrico y agregar el agua destilada hasta
alcanzar el volumen final requerido, de acuerdo con los cálculos de dilución previamente
realizados, Mezclar bien la solución hija para garantizar una distribución uniforme de los
solutos.
Proporcionaron ejercicios prácticos de cálculo de concentración a los estudiantes, que
involucren la preparación de soluciones hijas a partir de soluciones madre y la dilución de
estas soluciones para obtener concentraciones específicas. Incluyendo problemas que
requieran cálculos de volumen y concentración, así como la interpretación de los
resultados obtenidos después de la dilución.
CUESTIONARIO
El jefe de su Laboratorio de Biología Molecular le pide que prepare los reactivos que han
de utilizar para una corrida electroforética, entregándole los siguientes datos:
TBE 10 X (Buffer de Corrida Electroforética)
Tris base 0,89 M (Solución madre: Tris 1 M)
Ácido bórico 0,89 M (PM=61 g/mol)
EDTA 0,02 M (Solución madre: EDTA 0,5 M)
H2O destilada csp 1000 mL
Buffer de carga para preparación de muestras de electroforesis en geles de agarosa
Glicerol 60% (Solución madre: Glicerol al 100%)
Azul de Bromofenol 0,01 % (reactivo en polvo)
Solución de Tris 10 mM y EDTA 1mM csp 1,5 mL
Indique (a modo de “fórmula”) cuanto ha de agregar de soluciones madre, o cuánto
pesará de solutos, y la cantidad de solvente que ha de agregar para preparar las
soluciones requeridas.
Además, le pide que prepare 50 mL de agarosa al 1,5 % p/v.
¿Qué significa “agarosa al 1,5% p/v”? ¿Cómo prepara el volumen de agarosa solicitado?
Contestar esta pregunta en formato de fórmula, tal como hemos visto en los ejemplos
anteriores.
a continuación en las siguientes imágenes se muestra detalladamente el desarrollo de los
ejercicios.
Resultados y discusión
Los resultados obtenidos son los adecuados ya que aplicando la ecuación de
concentración nos permite obtener los resultados deseados que nos ayuda a la diluciòn y
calibraciòn, lo que nos garantiza resultados precisos y reproducibles. Con esto se garantiza
precisión y exactitud, eficiencia en tiempo y costos con la utilización de soluciones madre
los científicos pueden garantizar que la concentraciones de las soluciones diluidas se
determinan con datos precisos y conclusiones fiables.
Con estos datos nos permite encontrar los resultados de las concentraciones de nuestros
solutos lo que es una característica de las soluciones madre ya que nos permite trabajar
con soluciones concentradas y preparadas con precisión. Al poder diluirlas estas
concentraciones nos permiten tener diversas concentraciones para cualquier aplicación, lo
que facilita un control preciso sobre su concentración. También su uso nos permite tener
una eficiencia en tiempo y costos, ya que nos dan una cantidad fija de sustancia y nosotros
utilizamos lo que es necesario para formar dicha concentración.
Para datos obtenidos previamente se recomienda utilizar: mediciones precisas con la
utilización de balanzas analíticas, matraces volumétricos para garantizar mediciones
precisas tanto de soluto como solvente.
En nuestro caso, ya las sustancias estaban medidas por lo que los datos obtenidos de
nuestras operaciones eran confiables, cuando se lleva a práctica es de tener muy en
cuenta la mezcla adecuada para lograr una buena homogeneidad tanto del soluto como
del solvente.
CONCLUSIONES
● La preparación de soluciones en el laboratorio de biología molecular es un proceso
fundamental que requiere precisión, atención a los detalles y adherencia estricta a
protocolos estandarizados. Durante este estudio, hemos demostrado la
importancia de seguir procedimientos precisos para garantizar la calidad y la
consistencia de las soluciones preparadas.
● En general el estudio destaca la importancia de la preparación cuidadosa de
soluciones en el laboratorio de biología molecular y proporciona una base sólida
para futuros experimentos que requieran el uso de estas soluciones. Se
recomienda continuar evaluando y mejorando los procedimientos de preparación
de soluciones para garantizar resultados confiables y reproducibles en la
investigación científica.
BIBLIOGRAFÍAS.
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https://www.studocu.com/ec/document/universidad-san-francisco-de-
quito/biologia-molecular/preparacion-de-soluciones/64827106
