OBTENCION, EXTRACCION E IDENTIFICACION DE QUINONAS
Las quinonas son compuestos carbonílicos α-β insaturados; los cuales se
clasifican en benzoquinonas, naftoquinonas y antraquinonas. Se encuentran
especies vegetales superiores, hongos, animales y bacterias.
1. EXTRACCION QUINONAS
Los productos elaborados por animales y vegetales son complejos naturales, y
para la extracción deben ser secados disgregados antes de ser sometidos a
procesos de extracción general no selectivos.
Para la extracción de quinonas se emplean solventes orgánicos volátiles, con
soluciones alcalinas diluidas, con agua sola o por destilación en corriente de
vapor de agua.
1.1 Extracción con solventes
Las benzoquinonas y naftoquinonas no hidroxiladas se extraen por medio
de solventes orgánicos volátiles como el éter de petróleo y el benceno. El
extracto crudo obtenido es concentrado y el residuo crudo “goma cruda”
puede ser sometido a procedimientos de separación de sus componentes,
por cristalización fraccionada, por cromatografía en columna o capa.
Las benzoquinonas y naftoquinonas también pueden ser separadas por
destilación en corriente de vapor de agua.
1.2 Extracción con soluciones alcalinas
Las soluciones alcalinas diluidas se emplearán en la extracción de las
quinonas de naturaleza acida.
Las quinonas a-hidroxiladas son ácidos débiles, solubles en soluciones 5%
de hidróxido de sodio, e insolubles en soluciones al 5% de bicarbonato de
sodio y de carbonato de sodio-
Las quinonas b-hidroxiladas son ácidos fuertes solubles en soluciones
acuosas de bicarbonato de sodio y carbonato de sodio.
1.3 Cromatografía en columna
Es una técnica de separación basada en un establecimiento de un
equilibrio, por adsorción de un sólido en fase estacionaria y un líquido como
fase móvil.
La columna cromatográfica que contiene el adsorbente puede ser de vidrio
o de nilón.
1.3.1 Adsorbentes
Los adsorbentes mas empleado son: gel de sílice, acido silícico, oxido
de aluminio, oxido de magnesio calcinado, celulosas en polvo, resinas,
etc.
La cantidad de adsorbente a emplearse es de veinte partes de
adsorbente por una parte de goma cruda a ser cromatografiada.
La preparación de la columna cromatográfica se inicia introduciendo en
la parte inferior un tapón de la de vidrio, el cual se cubre con una capa
de arena blanca y a continuación se añade el solvente hasta la mitad de
la columna.
1.3.2 Solventes
La elección de solventes para la cromatografía es un factor importante.
Empleando mezclas de solventes con polaridad diferente se puede
obtener una buena resolución para la separación de los componentes de
la mezcla.
1.3.3 Elusión
La elusión se inicia con un solvente de baja polaridad, como el benceno.
Si el benceno no separa bien la mancha se ensaya una mezcla de
solventes que contenga uno que desplace la mancha y otro que lo
mueva.
1.4 Técnicas de extracción aislamiento y purificación
1.4.1 Benzoquinonas
Las benzoquinonas se extraen en hexano caliente o por medio de una
destilación en corriente de vapor de agua.
Procedimiento:
De 4kg a 5 kg de muestra seca y triturada se somete a extracción con
hexano en un soxhlet hasta su agotamiento. El extracto hexanico se
destila a presión reducida en un evaporador de tipo rotatorio; y el
concentrado se deja en refrigeración durante 48hrs.
El concentrado se deja en frio, y si no hay formación de cristales, se
lleva al seco. El residuo se solubiliza con cloroformo, luego se mezcla
con ge de sílice desactivado y se deja secar. La mezcla seca se coloca
en una columna cromatográfica, preparada con 1000 gr de sílice de
benceno.
1.4.2 Naftoquinonas
Las naftoquinonas que no tengan un grado alto de hidroxilación, son
extraídas con benceno caliente.
Procedimiento:
Dos kg de caparazones de erizos de mar son tratados con una solución
acuosa 5N en acido clorhídrico durante 24 horas; a continuación, se filtra
y la solución acida se extrae con éter etílico.
Se prepara el extracto etéreo a, cual se añade una solución de
bicarbonato de sodio en una cantidad suficiente; se mezcla bien y se
deja en reposo. Se toma la fase acuosa, acidula con acido clorhídrico y
luego se sacude con éter etílico en atmosfera de nitrógeno. Se prepara
la fase etérea que es desecada con sulfato de sodio anhidro.
El extracto seco de etéreo se pasa por una columna empacad con gel de
sílice, para la separación de pigmentos naftoquinonicos.
1.4.3 Antraquinonas
Para la extracción de antraquinonas se empleará metanol o acetona
caliente.
Procedimiento:
En 300gr de taos secos y triturados de liquen Teloschistes Flavicans se
extraen con acetona en un soxhlet hasta su agotamiento. Si el extracto
acetónico a enfriar forma un precipitado cristalizado, este es separado y
recristalizado en acetato de etilo-metanol y acetona-metanol. Los
cristales son sometidos en un ensayo de comportamiento cromatográfico
en capa fina se toma su punto de fusión y registra sus espectros.
El concentrado del cual fueron separados los cristales se lleva al seco y
luego se pasa por una columna empacad con ge de sílice y se eluye en
forma sucesiva con los solventes: benceno, benceno -acetona.
1.5 Extractores
Para la extracción de solidos se requerirá aparatos para una extracción
continua, que utilizan mínima cantidad de solvente con el máximo
rendimiento en la extracción y recuperación del solvente.
El extractor clásico es el aparto de soxhlet que consta con tres partes:
matraz, cámara de extracción y refrigerante de reflujo.
[Link] DE QUINONAS
Para la identificación de quinonas esta será determinada mediante métodos
químicos, constantes físicas, comportamiento cromatográfico comparados con
una muestra autentica.
2.1 Ensayos preliminares
Los ensayos preliminares dan información del compuesto quinonico.
2.1.1 Solubilidad en carbonato de sodio y Bicarbonato sódico
Las quinonas β-hidroxiladas son solubles en soluciones acuosas al 5% de
bicarbonato de sodio y carbonato de sodio.
Las quinonas α- son insolubles en bicarbonato de sodio y carbonato de sodio.
2.1.2 Solubilidad en solución de hidróxido de sodio al 5%
Las quinonas α- β hidroxiladas con la solución hidróxido de sodio al 5%, como
resultado se obtiene soluciones coloreadas que van del amarillo pasando por el
rojo al violeta con máximo de absorción en la región.
Esta reacción se utiliza para conocer si un extracto vegetal contiene pigmentos
quinonicos.
2.1.3 Acetato de magnesio
Las antraquinonas hidroxiladas al ser tratadas con la solución metanólica de
acetato de magnesio dan colores característicos. La formación de un color
indicara positivo violeta para las quinonas 0-hidroxiladas, anaranjado con las
m-hidroxiladas y púrpura para las p-hidroxiladas.
2.1.4 Reacción por Borntraguer
Las antraquinonas y naftoquinonas libres al ser tratados con hidróxido de
amónico forman complejos de color rojo cereza. Esta reacción es utilizada para
detección directa de quinonas en los extractos vegetales.
2.2 Reducción
Las quinonas por reducción se transforman en compuestos incoloros. Los
compuestos reducidos e transforman en quinonas por oxidación con aire.
2.2.1 Ensayo de Beilstein
Método rápido para investigar halógenos. Se emplea un alambre de cobre y
calor, que con la muestra halogenada produce un halogenuro de cobre volátil
que a la llama da un color verde azulado.
2.3 Reacciones químicas
Estos procedimientos son empleados cuando se dispone una cantidad
suficiente de muestra que permita la identificación de los productos mediante
reacción.
2.3.1 Reacciones por oxidación
La oxidación de quinonas hidroxiladas se produce con apertura del anillo
quinonico y degradación del anillo oxigenado más lábil.
[Link]. Oxidación por permanganato de potasio
Realizadas en soluciones acuosas neutras, alcalinas, en frio o a reflujo.
[Link] Oxidación con ácido crómico
Este procedimiento se realiza en condiciones suaves de tipo selectivos o
energéticas.
[Link] oxidación con peróxido de hidrogeno
En este procedimiento se produce la ruptura del anillo quinonico.
2.3.2 Desmetoxilación
Los grupos metileteres de las quinonas cuando son tratados con el acido
yodhídrico en acido acético, se produce la ruptura de la unión etérea.
Procedimiento:
En un Erlenmeyer de 50ml provisto de un condensador en posición de reflujo y
con entrad de anhidrido carbónico, se introduce 50ng de quinona, 20ml de
acido acético y 20ml de acido yodhídrico y en corriente de anhidrido carbónico,
se empieza a calentar el reflujo durante dos horas. Se diluye con agua y e
precipitado es separado lavo con solución tiosulfato de sodio y recristalizado en
alcohol.
2.3.3 Destilación seca con cinc en polvo
Las quinonas cuando son destiladas en secos a temperatura en rojo con cinc
en polvo, se transforman en hidrocarburos aromáticos. Esta degradación
permite determinar al esqueleto carbonado de la quinona.
2.4 Métodos Espectroscópicos
Los métodos espectroscópicos permitirán establecer la estructura de la
quinona.
2.4.1 Ultravioleta-visible
Se emplean como solvente el etanol, cloroformo o dioxano.
Las benzoquinonas presenta máximo de absorción: entre 240-290 nm fuerte,
cerca 280 nm intermedia, y entre 380-400 nm débil.
Las naftoquinonas presenta máximo absorción: 240-290 nm fuerte, cerca de
335 nm mediana y en la región 400-510 nm.
Las antraquinonas presentan máximos de adsorción entre 240-260 nm
(bencenoide), a 260-300 nm (quinonico) y otra región 360-520 nm.
2.4.2 Infrarrojo
Los máximos de absorción se registran como datos g Max (Kbr) cm-1
2.4.3 Resonancia magnética nuclear
En las benzoquinonas, naftoquinonas y antraquinonas presentan señales en
las zonas de los protones aromáticos
