Agar Mueller Hinton Cat.
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Para pruebas de sensibilidad con antibióticos y sulfamidas, y para el aislamiento primario de Neisseria y otros patógenos de muestras clínicas
Información práctica
Aplicaciones Categorias
Pruebas de susceptibilidad antimicrobiana Uso general
Industria: Clínica
Principios y usos
Agar Mueller Hinton, junto con el Caldo Mueller Hinton (Cat. 1214), se usa para testar la susceptibilidad antimicrobiana de organismos aeróbicos de
crecimiento rápido a partir de muestras clínica y se ha convertido en el medio estándar para el método de Bauer Kirby de acuerdo a las normas de
Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) y European Committe and Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST).
El principal objetivo de las pruebas de susceptibilidad a antimicrobianos in vitro es el proporcionar una guía para el manejo terapéutico de las
enfermedades infecciosas a través de la sensibilidad o resistencia de bacterias patógenas aerobias y anaerobias facultativas a diferentes compuestos
antimicrobianos.
Debido a que es imposible predecir la susceptibilidad de una bacteria responsable de una determinada infección a los antimicrobianos, las pruebas de
susceptibilidad a antibióticos efectuadas en el laboratorio microbiológico se convierten en un instrumento esencial para el manejo terapéutico de los
pacientes.
En el medio, la infusión de carne y la peptona de caseína ácida (H) proporcionan nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos esenciales para el
crecimiento. El almidón absorbe cualquier metabolito tóxico producido por el crecimiento microbiano y el agar bacteriológico es el agente solidificante.
Fórmula en g/L
Peptona de caseína ácida (H) 17,5 Agar bacteriológico 17
Infusión de carne 2 Almidón 1,5
Preparación
Suspender 38 gramos del medio en un litro de agua destilada. Mezclar bien y disolver con calor y agitación frecuente. Hervir durante un minuto hasta
disolver por completo. Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 15 minutos. Enfriar a 45 o 50 ºC y agregar sangre
desfibrinada si se desea. La mezcla de sangre se debe chocolatear calentando a 80 ºC durante 10 minutos si se desea el desarrollo de Neisseria. NO
SOBRECALENTAR. Para volver a fundir el medio frío, calentar lo más brevemente posible.
Instrucciones de uso
Para diagnóstico clínico, el tipo de muestra es bacterias aisladas de la orina:
- Inocular según método Bauer-Kirby.
- Incubar en condiciones aeróbicas a 35±2 ºC durante 24-48 horas.
- Lectura e interpretación de los resultados.
Para pruebas de susceptibilidad de antibióticos:
- Dispensar el medio en placas Petri estériles para obtener una profundidad de 4±0,5 mm (aproximadamente 25 mL en una placa circular de 90 mm, 31
mL en una placa circular de 100 mm, 71 mL en una placa circular de 150 mm y 40 mL en una placa cuadrada de 100 mm).
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- Ajustar la densidad de la suspensión del organismo a 0,5 Mac Farland. Un inóculo más denso producirá zonas de inhibición más reducidas y un
inóculo menor dará lugar al efecto opuesto.
- La suspensión no debe usarse después de 15 minutos y siempre se usará antes de 60 minutos de preparación.
- Sumerge un hisopo de algodón estéril en la suspensión.
- Para evitar la sobreinoculación de bacterias gram negativas, elimine el exceso de líquido presionando y girando el hisopo contra el interior del tubo.
- Para bacterias gram positivas, no presionar ni girar el hisopo contra el interior del tubo.
- Aplique los discos antes de que pasen 15 minutos desde la inoculación.
- Incubar a una temperatura de 35±2 ºC durante 24 horas.
- Los resultados son tomados desde el borde donde se observa inhibición completa con la placa a unos 30 cm del ojo.
- Leer las placas de MH desde la parte posterior sobre un fondo oscuro iluminado con luz reflejada.
- En caso de colonias distintas dentro de las zonas, verificar la pureza y repetir la prueba si es necesario.
- Para Proteus spp., Ignorar el swarming y leer inhibición del crecimiento.
- En caso de zonas dobles, leer la zona interna.
Para el cultivo de Neisseria:
- Incubar las placas a una temperatura de 35±2 ºC en una atmósfera de CO2 durante 18-24 horas.
Control de calidad
Solubilidad Apariencia Color del medio deshidratado Color del medio preparado Final pH (25ºC)
Sin sangre: ámbar opalescente. Con sangre:
Ligeramente opalescente Polvo fino Crema 7,4±0,2
rojo
Test microbiológico
Prueba de sensibilidad de difusión de disco. Incubation conditions: (35±2 ºC / 24 h).
Diámetro del halo en mm.
Ampicilina 10 Polimixina B 300 SXT: Trimetoprim (1,25µg)+Sulfametoxazol
Microrganismos Gentamycin 10 µg Tetraciclina 30 µg
µg µg (23,75 µg)
Escherichia coli ATCC 25922
19-26 15-22 18-25 13-19 23-29
CLSI
Escherichia coli ATCC 25922
19-26 15-22 13-19 23-29
EUCAST
Staphylococcus aureus ATCC
19-27 27-35 24-30 24-32
25923 CLSI
Staphylococcus aureus ATCC
25923 EUCAST
Pseudomonas aeruginosa ATCC
17-23 14-18
27853 CLSI
Pseudomonas aeruginosa ATCC
17-23
27853 EUCAST
Enterococcus faecalis ATCC
29212 CLSI
Enterococcus faecalis ATCC
26-34
29212 EUCAST
Staphylococcus aureus ATCC
29213 CLSI
Staphylococcus aureus ATCC
19-25 23-31 26-32
29213 EUCAST
Almacenamiento
Temp. Min.:2 ºC
Temp. Max.:25 ºC
Bibliografía
EUCAST Disk Diffusion Method for Antimicrobial Susceptibility Testing - Version 6.0 (January 2017)
Reading guide. EUCAST disk diffusion method for antimicrobial susceptibility testing. Version 5.0 January 2017
Mueller and Hinton A. Protein-Free Medium for Primary Isolation of the Gonococcus and Meningococcus. Proc. Soc. Exp. Biol. and Med. 48:330. 1941.
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Procedures and Reagents. 4th Edition APH, Inc. New York, 1963.
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