UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR
CARRERA DE INGENIERIA AGRONÓMICA
TEMA:
técnicas moleculares en agricultura
AUTORES:
KARINA BONE GUERERO
KAREN CABELLO CABELLO
KATTY PAGUAY FERNANDEZ
MISHEL TORRES PONCE
DOCENTE
ING DANIEL MANCERO
PERIODO:
2019 – 2020
GUAYAQUIL-ECUADOR
técnicas moleculares en
agricultura
Mejoramiento Vegetal
Establecimiento de cultivos de
tejidos vegetales
INTRODUCCION
El cultivo de tejidos –en su acepción amplia– puede ser definido como un conjunto muy heterogéneo de
técnicas que presentan en común el hecho de que un explane (una parte separada del vegetal que
pueden ser protoplastos – células desprovistas de pared celular– células,
tejidos u órganos) se cultiva asépticamente en un medio artificial de composición química definida y se
incuba en condiciones ambientales controladas.
Para el establecimiento de los cultivos utilizando cualquiera de los sistemas es necesario tener en cuenta
algunos aspectos generales comunes relacionados con el ex plante, la asepsia, el medio de cultivo y las
condiciones de incubación. La discusión de estos aspectos constituye el objetivo de este
capítulo. Adicionalmente se incluye el tema de la aclimatación de las plantas regeneradas in
vitro, que es de gran importancia en la mayoría de las aplicaciones del cultivo de tejidos en la
agricultura
Objetivo del cultivo: si bien es difícil tratar de clasificar las aplicaciones que se persiguen con el
cultivo de tejidos, se podría esquematizarlas en aplicaciones para:
• Estudios básicos. En este caso, los explantes cultivados pueden ser diversos. Si lo único que se
quiere lograr es un sistema de callos
para estudiar algún proceso fisiológico, se puede cultivar cualquier órgano, tejido o célula viva. En
este caso –en que lo único que se busca es la inducción de callos– lo ideal es cultivar explantes
jóvenes, derivados de semillas en germinación, donde se obtienen respuestas rápidas y, en general,
hay menores problemas de contaminación con microorganismos.
• Obtención de plantas con sanidad controlada. Es muy común la utilización del cultivo de tejidos para
la obtención de plantas libres de virus (ver VIII.-9). El explante ideal para ello es el meristemo
(dependiendo de la especie, de0,2-0,5mm de longitud) consistente del domo y de un par de primordios
foliares.
• Micropropagación. En este caso dependerá del sistema que se quiere utilizar. Si lo que se quiere
explotar es la brotación de meristemos, los ápices terminales y los segmentos uninodales de ramas
jóvenes constituyen excelentes explantes. En este caso el cultivador de tejidos debe conocer
perfectamente la biología de la reproducción de la planta para
aprovechar aquellos explantes que en forma natural son propágadas.
• Obtención de plantas de semillas con embriones rudimentarios. Para esta finalidad
los explantes pueden ser semillas (por ej. orquídeas) o bien, se aíslan los embriones
en un estado temprano de desarrollo («corazón») como en el caso de yerba mate o de
algunas variedades de duraznero.
• Obtención de plantas haploides (considerando como haploide a un esporofito que
contiene el complemento gamético de cromosomas). En este caso, los explantes más
utilizados son las anteras, aunque también pueden emplearse microsporas aisladas,
óvulos y ovarios no fertilizados.
• Obtención de híbridos somáticos. Para esta finalidad se recurre a la fusión de
protoplastos. En la mayoría de los casos se aíslan los protoplastos de mesó filos de
hojas y de suspensiones celulares.
• Conservación e intercambio de germoplasma. Los meristemos son los explantes
preferidos para el desarrollo de sistemas de conservación a mediano y largo plazo
(crío conservación con nitrógeno líquido) y para el
intercambio de material genético.
2 Explante
Varios factores deben ser tenidos en cuenta en la elección del explante apropiado para el
establecimiento de los cultivos in vitro, entre ellos:
2. Posibilidad de contaminación con microorganismos. De ser posible, se deben cultivar explantes
de plantas donantes que crecen en condiciones de invernadero, con ello se
reduce sustancialmente las tasas de contaminación. Por otra parte, es recomendable evitar
el uso de «explantes sucios» (raíces, rizomas) que provienen de plantas crecidas en macetas
o en el campo, dado que en la mayoría de los casos no es posible conseguir una buena
desinfección de los mismos.
3. Edad fisiológica. Este es un aspecto de gran influencia en la morfogénesis. Como regla
general se puede decir que cuando más joven e indiferenciado se encuentre el explante a cultivar,
mejor será su respuesta in vitro. Es por ello que los meristemos apicales y axilares son
ampliamente usados en numerosas especies.
En el caso de la micro propagación de plantas leñosas, la edad del explante es un factor
crítico. Si los tejidos son jóvenes, la micro propagación tiene mayores posibilidades de ser
exitosa que con tejidos maduros. Este hecho genera la necesidad de realizar tratamientos
de rejuvenecimiento de las plantas donantes de explantes.
4. Tamaño. En general, cuanto más grande
sea el explante mayores serán las posibilidades de inducir la proliferación de callos o la
regeneración directa de órganos. Sin embargo, a mayor tamaño de explante también
son mayores las probabilidades de que los cultivos se contaminen con
microorganismos. También es necesario tener en cuenta que existe un tamaño mínimo
del explante, que depende de la especie y del material vegetal, por debajo del cual no
es fácil lograr el establecimiento de los cultivos.
5. Época del año. Es un factor que suelen tener mucha importancia en la
micro propagación y que generalmente está asociado al Biotecnología y Mejoramiento
Vegetal II 19 grado de dormición que presentan ciertos explantes (yemas, por ejemplo)
y también con la posibilidad de mayor o menor proliferación de microorganismos.
3 Asepsia
Uno de los principales problemas que se presentan cuando se tratan de establecer los
cultivos es el de la contaminación de los mismos con diversos tipos de microorganismos
(hongos, levaduras, bacterias, fitoplasmas, virus).
1) Conocer el material vegetal con que se trabaja y los posibles contaminantes específicos.
2) Realizar una adecuada preparación de la planta dadora de explantes, cultivándola
preferentemente en invernaderos tratadas con productos químicos que eliminen patógenos
y eventuales microorganismos endófitos.
3) Proceder a la desinfección superficial de los explantes mediante el uso de compuestos
químicos con el objeto de eliminar los microorganismos con el menor daño posible para el
explante.
4 Medios de cultivo
Un medio de cultivo puede ser definido
como una formulación de sales inorgánicas y
compuestos orgánicos requeridos para la nutrición y
manipulación de los cultivos. Existen numerosas
formulaciones, cada una de las cuales comprende
entre 6 y 40 compuestos.
Básicamente, los medios de cultivo se componen de
compuestos que suministran:
• Una fuente de carbono
• Nutrientes minerales
• ·Sustancias vitamínicas
• Sustancias reguladoras del crecimiento
• Agente gelificante (en el caso de medios
semisólidos)
• Otros compuestos.
Fuente de carbono: Prácticamente todos los
cultivos son heterótrofos (comparativamente
unos pocos son autótrofos) y por ende necesitan del suministro de una fuente de
carbono.
La sacarosa, en concentraciones de 2 al 5%, es el azúcar más utilizado. En algunos
medios se la reemplaza por glucosa. En casos particulares se cita el empleo de
maltosa o galactosa. También myo-inositol (100 mg/L) suele ser incorporado a los
medios resultando un mejor
crecimiento de los cultivos.
Nutrientes minerales: Los medios de cultivo
deben suministrar los mismos macro y micronutrientes que son esenciales para el
crecimiento de las plantas enteras. En general se destacan las concentraciones
relativamente altas de nitrógeno y potasio.
Sustancias vitamínicas: De todas las que comúnmente se incorporan a los medios,
pareciera que la tiamina es la única realmente imprescindible para el buen crecimiento
de los cultivos.
5. Condiciones ambientales para la incubación.
La incubación de los cultivos se debe llevara cabo en condiciones controladas. Por lo menos en lo que
se refiere a temperatura, calidad de intensidad de luz, fotoperiodo, humedad atmosférica e higiene. Estas
condiciones se logran con el empleo de cámaras climatizadas o cuartos especialmente preparados con
aire acondicionado (frío-calor) y una buena y uniforme circulación de aire en el interior y dotados de un
buen sistema de alarma para cortar la iluminación en caso de no funcionar el aire acondicionado.
6 Aclimatación de las plantas regeneradas in vitro.
Durante el período de incubación, los cultivos son expuestos a condiciones ambientales disímiles al
ambiente externo. La atmósfera interna se caracteriza por presentar una considerable
variación diurna en la concentración de CO2, humedad relativa elevada, temperatura constante e
intensidad lumínica baja.
