BIOQUIMICA
CÓDIGO: 201103
INFORME PRACTICAS DE LABORATORIO.
PRESENTADO A LA TUTORA:
Astrid Roxanna Moreno Marenco
PRESENTADO POR LOS ESTUDIANTES:
Carlos Yesiel Gonzalez Murcia C.C. 1013654709
Wyrkxon Eduardo Gómez Gallego C.C. 79980457
Deisy Johana Turriago Varela C.C. 1012383481
UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA - UNAD
ESCUELA DE CIENCIAS BÁSICAS TECNOLOGÍA E INGENIERÍA
NOVIEMBRE 2023
BOGOTÁ
Práctica No. 2. Identificación de Lípidos
Propósito: Relacionar los conceptos de los lípidos a partir de procedimientos de laboratorio que describen el
comportamiento químico de los estos.
Objetivo general: Identificar propiedades de los lípidos
Procedimiento de cada práctica elaborado en un diagrama de flujo:
Análisis y resultados obtenidos
Parte I. Emulsificación:
Se tomaron 2 tubos de ensayo con 5 ml de agua cada uno, el de la derecha contiene 10 gotas de aceite de oliva
y el de la izquierda 10 gotas de aceite vegetal, luego de agitarse fuertemente tomaron entre 5 a 7 minutos en
emulsionarse.
En el caso de nuestros tubos de ensayo, la mezcla del tubo de la derecha, que contiene aceite de oliva, se
emulsionó más lentamente que la mezcla del tubo de la izquierda, que contiene aceite vegetal, esto se debe a
que el aceite de oliva es más viscoso que el aceite vegetal. La emulsión más estable será la que se forme con el
aceite vegetal.
El aceite de oliva y el aceite vegetal son ambos aceites no polares, lo que significa que no se mezclan bien con
el agua, sin embargo, el aceite vegetal tiene una menor tensión superficial que el aceite de oliva, esto significa
que las gotas de aceite vegetal son más pequeñas y más fáciles de dispersar en el agua.
Además, el aceite vegetal suele tener un punto de fusión más bajo que el aceite de oliva, lo que significa que, a
temperatura ambiente, el aceite vegetal está más líquido que el aceite de oliva, esto también ayuda a que las
gotas de aceite vegetal se dispersen más fácilmente en el agua.
En resumen, las gotas de aceite vegetal son más pequeñas, más fáciles de dispersar y más líquidas que las gotas
de aceite de oliva, por lo tanto, la emulsión que se forma con el aceite vegetal será más estable; para
comprobar esto, podemos observar las dos emulsiones después de un tiempo, la emulsión con aceite vegetal
debería mantenerse estable durante más tiempo, sin que las gotas de aceite se separen del agua, como se ve
en la imagen 2, que el aceite de oliva ya se ha empezado a separar del agua.
Imagen 1. Imagen 2.
Parte II. Saponificación:
Se tomaron 2 tubos den ensayo con 5 ml de agua cada uno, el de la derecha contiene 10 gotas de aceite de
oliva y el de la izquierda 10 gotas de aceite vegetal, al agitarse fuertemente tomaron entre 5 a 7 minutos en
emulsionarse, la emulsión del aceite de oliva fue la que más tardó en separarse, mientras que la emulsión de
manteca fue la más rápido se separó.
Imagen 1.
Parte III. Índice de Yodo.
Se tomaron los 3 tubos de ensayo con la solución de etanol y el lípido, depositándolos en el baño maría y después
de les realizó prueba de yodo con Lugol, arrojando los siguientes resultados tal como se puede ver las siguientes
imágenes:
Imagen 1. Imagen 2.
Se tomaron los 3 tubos y analizar los resultados de esta prueba cuyo principal objetivo es ver cualitativamente
el número de insaturaciones presentes en los ácidos grasos y se utiliza para demostrar la pureza y calidad de un
aceite/grasa, entre más oscura se torne la muestra, mayor es la presencia de dobles enlaces en la muestra, para
este caso la manteca tiene menos dobles enlaces, seguido del aceite vegetal y la mayor pureza está en el aceite
de oliva.
Conclusiones
Analizar la calidad de estas macromoléculas, nos permite conocer su nivel de pureza, la posibilidad de realizar
emulsiones estables y de saponificar con el fin de hacer sustancias de limpieza, salsas, u otros compuestos hechos
a base de lípidos, así poder aplicar los conocimientos adquiridos en la asignatura de bioquímica.
Práctica No. 3. Extracción y cuantificación espectrofotométrica del ADN.
Propósito: Relacionar los conceptos de los ácidos nucleicos a partir de procedimientos de laboratorio que
describen el comportamiento químico de los mismos.
Objetivo general: Analizar el ácido nucleico ADN obtenido a partir de células vegetales.
Procedimiento de cada práctica elaborado en un diagrama de flujo
Análisis y resultados obtenidos
Parte I. Extracción de ADN:
Se prepara una solución de lisis para realizar la extracción del ADN del kiwi, primero se pela la fruta, se corta en
trozos pequeños y se maceran en un mortero durante 10 minutos, terminado este tiempo, se filtra la solución
obtenida y se transfiere 3 ml a un tubo de ensayo, se agrega 1 ml de zumo de piña y se adiciona 1,5 ml de
alcohol isopropílico, se deja reposar hasta que se formen las hebras de ADN.
Imagen 1. (Macerar la fruta) Imagen 2. (Filtrado de la muestra)
Imagen 3. (3 ml de la muestra en tubo de ensayo) Imagen 4. (Adición de alcohol isopropílico)
Imagen 5. (Formación del botón de ADN)
Parte II. Cuantificación espectrofotométrica:
Se retira el botón de ADN obtenido en el paso anterior y se mide la absorbancia a 260 nm y a 280 nm en el
espectrofotómetro obteniendo los siguientes resultados:
A 260 nm: 0,031
A 280 nm: 0,078
Relación A260/A280: (0,031/0,078) = 0,397
Preguntas
1. ¿Cuál es la función de los componentes de la solución de Lisis?
La solución de lisis es una solución que se utiliza para romper las membranas celulares de las células vivas,
liberando el contenido celular, incluido el ADN. En el proceso de extracción de ADN de kiwi, la solución de lisis
se utiliza para romper las paredes celulares y las membranas plasmáticas de las células del kiwi, lo que permite
que el detergente en la solución disuelva las membranas nucleares y libere el ADN.
2. ¿Para qué se usa el zumo de piña, cuál es el compuesto clave y su función durante el proceso de
extracción de ADN?
El zumo de piña se utiliza en el proceso de extracción de ADN del kiwi para romper las células vegetales, liberando
el ADN. El compuesto clave en el zumo de piña que tiene esta función es la bromelina. La bromelina es una
enzima proteolítica que descompone las proteínas, incluyendo las que se encuentran en la pared celular
vegetal. Cuando la bromelina se agrega al zumo de kiwi, rompe las paredes celulares, liberando el ADN.
3. Explique las diferencias de solubilidad del ADN en medio salino y alcohólico.
El ADN es una molécula polar, lo que significa que tiene una carga eléctrica neta, esta polaridad hace que el
ADN sea soluble en agua, que también es una molécula polar.
El medio salino es una solución que contiene sales, éstas son moléculas polares que pueden interactuar con las
moléculas de ADN, y ayudan a estabilizar la estructura del ADN, haciéndolo más soluble en el medio salino.
El medio alcohólico es una solución que contiene alcohol, ésta es una molécula no polar, lo que significa que no
tiene una carga eléctrica neta, estas interacciones pueden desestabilizar la estructura del ADN y hacerlo menos
soluble en el medio alcohólico.
En el caso del ADN de kiwi, el medio salino aumenta la solubilidad del ADN, mientras que el medio alcohólico la
disminuye, esto se debe a que las sales pueden interactuar con las moléculas de ADN y ayudan a estabilizar su
estructura, mientras que el alcohol no puede interactuar con las moléculas de ADN y puede desestabilizar su
estructura.
En términos más específicos, las sales pueden interactuar con las moléculas de ADN a través de interacciones
electrostáticas, las cargas positivas de las sales pueden interactuar con las cargas negativas del ADN, y
viceversa, estas interacciones pueden ayudar a estabilizar la estructura del ADN, lo que hace que sea más
soluble en el medio salino.
El alcohol, por otro lado, no puede interactuar con las moléculas de ADN a través de interacciones
electrostáticas, las moléculas de alcohol son no polares, lo que significa que no tienen una carga eléctrica neta;
esta falta de interacciones puede desestabilizar la estructura del ADN, lo que hace que sea menos soluble en el
medio alcohólico.
En resumen, las diferencias de solubilidad del ADN de kiwi en medio salino y alcohólico se deben a las
interacciones entre las moléculas de ADN y las moléculas de solución, las sales pueden interactuar con las
moléculas de ADN a través de interacciones electrostáticas, lo que ayuda a estabilizar su estructura y aumentar
su solubilidad. El alcohol, por otro lado, no puede interactuar con las moléculas de ADN a través de
interacciones electrostáticas, lo que puede desestabilizar su estructura y disminuir su solubilidad.
4. ¿Qué significa la relación A260/A280 en la cuantificación de muestras de ADN?
La relación A260/A280 es una medida de la pureza de las muestras de ADN, se calcula dividiendo la
absorbancia de la muestra a una longitud de onda de 260 nm por la absorbancia a una longitud de onda de 280
nm.
El ADN puro absorbe la luz a una longitud de onda de 260 nm debido a la presencia de los grupos pirimidinas;
las proteínas, por otro lado, absorben la luz a una longitud de onda de 280 nm debido a la presencia de los
grupos tiol, por lo tanto, una relación A260/A280 alta indica que la muestra es pura, mientras que una relación
baja indica que la muestra está contaminada con proteínas u otros compuestos que absorben la luz a 280 nm.
En general, se considera que una relación A260/A280 de 1,8 a 2,0 indica una muestra de ADN pura. Un valor
inferior a 1,8 indica una posible contaminación por proteínas u otros compuestos.
5. ¿Qué procedimientos se pueden utilizar para purificar el ADN?
Existen diversos procedimientos para purificar el ADN, que se pueden clasificar en dos grandes grupos:
Métodos físicos: estos métodos se basan en las propiedades físicas del ADN, como su solubilidad en diferentes
solventes, su densidad o su tamaño.
Métodos químicos: estos métodos se basan en las reacciones químicas que se producen con el ADN, como su
desnaturalización o su precipitación.
Algunos de los métodos más utilizados para purificar el ADN son los siguientes:
Extracción alcalina: este método es el más utilizado para la purificación de ADN plasmídico, se basa en la
desnaturalización del ADN en presencia de una base alcalina, como el NaOH, que provoca la separación de las
dos cadenas de ADN, posteriormente, el ADN se precipita con alcohol.
Extracción en fenol-cloroformo: este método es similar al anterior, pero utiliza fenol y cloroformo para la
desnaturalización y precipitación del ADN.
Centrifugación en gradiente de densidad de cloruro de cesio (CsCl): este método se basa en la separación del
ADN en función de su densidad, el ADN se coloca en una solución de cloruro de cesio de densidad creciente, y
se centrifuga a alta velocidad. El ADN se acumula en la zona de la solución con la densidad adecuada.
Cromatografía de intercambio aniónico: este método se basa en la interacción entre el ADN y una resina de
intercambio aniónico. El ADN se une a la resina en función de su carga eléctrica, posteriormente, se puede eluir
el ADN cambiando el pH o la concentración de sal de la solución.
Cromatografía de exclusión por tamaño: este método se basa en la separación del ADN en función de su
tamaño. El ADN se coloca en una columna de gel de agarosa o poliacrilamida, y se aplica una corriente
eléctrica, el ADN se mueve a través de la columna a una velocidad que depende de su tamaño.
La elección del método de purificación de ADN depende de una serie de factores, como el tipo de ADN que se
desea purificar, la cantidad de ADN que se dispone, y la pureza final que se requiere.
En general, los métodos físicos son más sencillos de realizar y requieren menos equipo, pero pueden ser menos
eficientes que los métodos químicos. Los métodos químicos pueden ser más eficientes, pero requieren más
experiencia y equipo.
6. Consulte dos métodos de extracción de ADN
Hay muchos métodos diferentes para extraer ADN, pero dos de los más comunes son el método de fenol-
cloroformo y el método de bromuro de cetiltrimetilamonio (CTAB).
Método de fenol-cloroformo: El método de fenol-cloroformo es un método tradicional que se ha utilizado
durante muchos años, es un método eficaz para extraer ADN de una variedad de muestras, pero puede ser
peligroso y requiere el uso de equipos especializados.
El método consiste en romper las células de la muestra con un detergente, como la tiocianato de guanidina,
luego, se agrega fenol y cloroformo para separar el ADN de las proteínas y otros componentes celulares, el
ADN se precipita con etanol y se puede purificar adicionalmente si es necesario.
Imagen 1. (Método de fenolcloroformo para extraer ADN)
Método CTAB: El método CTAB es un método más reciente que es más seguro y fácil de usar que el método de
fenol-cloroformo, es un método eficaz para extraer ADN de una variedad de muestras, incluidas muestras de
tejidos, plantas y bacterias.
El método consiste en romper las células de la muestra con un detergente, como la tiocianato de guanidina,
luego, se agrega bromuro de cetiltrimetilamonio (CTAB) para precipitar el ADN, este se puede purificar
adicionalmente si es necesario.
Imagen 2. (Método CTAB para extraer ADN)
Conclusiones
Basado en los valores de absorbancia obtenidos, se puede concluir que la extracción de ADN de kiwi fue exitosa.
La absorbancia a 260 nm es un indicador de la concentración de ADN, mientras que la absorbancia a 280 nm es
un indicador de la pureza del ADN.
Un valor de absorbancia a 260 nm de 0,031 indica que la concentración de ADN en la muestra es de
aproximadamente 31 microgramos por mililitro, un valor de absorbancia a 280 nm de 0,078 indica que la
presencia de proteínas es relativamente baja.
Más la relación 260nm/280nm es muy baja por lo que se puede sospechar que existe una contaminación alta en
el medio y que la extracción no fue tan exitosa.
Práctica No. 4. Extracción de la caseína, determinación del punto isoeléctrico y precipitación salina de
proteínas.
Propósito: Relacionar las propiedades estructurales y químicas de los aminoácidos y proteínas, a partir de
procedimientos de laboratorio que describen su comportamiento bioquímico.
Objetivo general: Analizar el efecto del pH y la fuerza iónica sobre proteínas con solubilidad acuosa.
Procedimiento de cada práctica elaborado en un diagrama de flujo
Análisis y resultados obtenidos
Parte I. Extracción de caseína
Se realiza la extracción de la caseína agregando ácido acético a 150 ml de agua destilada + 50 ml de leche hasta
observar que se corta, cuando se sedimentó se hizo el filtrado sobre papel filtro usando un embudo y sobre
éste se lavó con etanol, luego se hace el secado quedando el precipitado blanco que es la caseína.
Imagen 1. (Calentamiento precipitado 38°) Imagen 2. (Filtración)
Imagen 3. (Sedimentación) Imagen 4. (Precipitado)
Parte II. Preparación de la solución de caseína
Se prepara la solución de caseína con 250mg del precipitado obtenido en el paso anterior agregando 20 ml de
agua destilada y 5 ml de NaOH 1N, se disuelve la caseína y se vierte en un matraz aforado de 50 ml, luego se
agregó 5 ml de ácido acético y 50 ml de agua destilada hasta obtener una solución clara y limpia.
Imagen 5. (Solución de caseína)
Parte III. Determinación del punto Isoeléctrico de la caseína.
Imagen 1.
Se toman 10 tubos de ensayo adicionando a cada uno los volúmenes de reactivos mostrados en la tabla + 1 ml
de disolución de caseína a cada tubo, obteniendo los siguientes resultados:
Tubo Acetato Acético Acético pH A 640nm
0.1N 0.1N 0.01N resultante
1 0.5 9.5 - 4,32 0,099
2 1 9 - 4,59 0,108
3 1.5 8.5 - 4,90 0,102
4 2 8 - 5 0,093
5 3 7 - 5,20 0,118
6 4 6 - 5,26 0,105
7 6 4 - 5,52 0,109
8 8 2 - 5,78 0,077
9 6 - 4 6,11 0,068
10 8 - 2 6,26 0,068
El punto isoeléctrico (pI) teórico de la caseína es de 4,6. En la práctica realizada en el laboratorio y según los
datos arrojados el punto isoeléctrico (pI) es de 5,2.
Una posibilidad de la diferencia en el resultado es que la caseína que utilizamos en la práctica no estuviera
completamente pura, otra posibilidad es que la caseína que utilizamos estuviera contaminada con otras
proteínas, éstas pueden tener puntos isoeléctricos diferentes, lo que podría afectar al punto isoeléctrico
observado, es posible que en el momento que determinamos la absorbancia en el espectrofotómetro no lo
realizamos correctamente, también es posible que el punto isoeléctrico de la caseína que obtuvimos sea
simplemente una variación natural, el punto isoeléctrico de las proteínas puede variar ligeramente
dependiendo de factores como su origen, su procesamiento y su almacenamiento.
Parte IV. Precipitación salina de Proteínas.
Se prepara una solución de sulfato de amonio y en dos tubos de ensayo se agrega 1.5 ml de la solución
preparada anteriormente, a uno de los tubos se adiciona 1.5 ml del filtrado de la parte I de la práctica, al otro
1.5 ml de la solución de caseína preparada en la parte II, luego se centrifuga y se incuba en un baño de hielo
hasta observar el precipitado.
Imagen 2. (Filtrado parte I y Solución de caseina parte II) Imagen 2. (Observación del Pellet)
Preguntas
1. ¿Qué sucedería si se representa la transmitancia vs pH en lugar de absorbancia?
Si se representa la transmitancia vs pH, la curva obtenida sería inversamente proporcional a la de la absorbancia,
dado que la transmitancia es una función inversa a la absorbancia, y se calcula usando la formula 𝑇 = 10−𝐴
2. ¿Cuál es el punto isoeléctrico de la caseína?
El punto isoeléctrico de la caseína es un pH aproximado de 4,6.
3. ¿Por qué las proteínas tienen solubilidad mínima en el pI?
Las proteínas tienen solubilidad mínima en el punto isoeléctrico (pI) porque en este punto, las cargas positivas
y negativas de la proteína están equilibradas, esto significa que las fuerzas de repulsión entre las moléculas de
la proteína son mayores que las fuerzas de atracción, lo que hace que la proteína se agrupe y precipite.
4. Explique cuál es el fundamento de la precipitación salina y por qué aparece un precipitado en el filtrado
obtenido durante la extracción de la caseína.
La precipitación salina es un método de separación de proteínas basado en la disminución de la solubilidad de
las mismas en presencia de sales, la solubilidad de una proteína es una función de la fuerza iónica del medio,
que es la concentración total de iones en la solución, a medida que aumenta la fuerza iónica, la solubilidad de
las proteínas disminuye.
En el caso de la extracción de la caseína, la leche se trata con una solución de sal, como cloruro de calcio o
sulfato de amonio, la caseína es una proteína con carga eléctrica neta negativa, cuando se añaden iones
positivos a la solución, como los iones calcio o amonio, estos se unen a la caseína, neutralizando parcialmente
su carga negativa, esto provoca que las moléculas de caseína se agrupen entre sí, formando un precipitado.
El precipitado de caseína aparece en el filtrado obtenido durante la extracción porque la caseína es la proteína
más abundante en la leche, las demás proteínas, como la lactoalbúmina y la lactoglobulina, son menos
abundantes y tienen una menor afinidad por los iones calcio o amonio, por lo tanto, estas proteínas
permanecen en la solución, mientras que la caseína se precipita.
El precipitado de caseína se puede separar del filtrado por filtración o centrifugación, el precipitado se puede
lavar con agua para eliminar los iones de sal que quedaron unidos a la caseína, el precipitado de caseína se
puede utilizar para la producción de queso, caseinatos u otros productos alimenticios.
En resumen, el fundamento de la precipitación salina es que la solubilidad de las proteínas disminuye a medida
que aumenta la fuerza iónica del medio, en el caso de la extracción de la caseína, la caseína es la proteína más
abundante en la leche y tiene una alta afinidad por los iones calcio o amonio, por lo tanto, la caseína precipita
en presencia de estas sales, mientras que las demás proteínas permanecen en la solución.
Conclusiones
La práctica de extracción de la caseína, preparación de la solución de caseína, determinación del punto
isoeléctrico de la caseína y precipitación salina de proteínas permitió la comprensión de los siguientes
conceptos:
• La caseína es la principal proteína de la leche, representando alrededor del 80% de las proteínas
totales, se encuentra en forma de micelas, que son agregados de proteínas, lípidos y carbohidratos.
• La caseína se puede extraer de la leche mediante acidificación, a pH ácido, los grupos carboxílicos de la
caseína se protonan, adquiriendo una carga positiva, los grupos fosfato de la caseína, por otro lado, se
desprotonan, adquiriendo una carga negativa, como resultado, las micelas de caseína se repelen entre
sí y se dispersan en la solución.
• La solución de caseína se puede preparar mediante la dilución de la caseína extraída, la concentración
de la solución de caseína se puede controlar mediante la variación de la cantidad de caseína extraída o
de la cantidad de disolvente.
• El punto isoeléctrico de la caseína es de aproximadamente 4,6, a este pH, las cargas positivas y
negativas de la caseína se neutralizan, lo que resulta en una solubilidad mínima, aunque en la práctica
realizada en el laboratorio arrojó un pH de 5,2.
• Las proteínas se pueden precipitar mediante la adición de sales, las sales se unen a los grupos polares
de las proteínas, lo que reduce su solubilidad, la precipitación salina es un método común para
purificar proteínas.
Práctica No. 5. Cuantificación de proteínas.
Propósito: Relacionar las propiedades estructurales y químicas de los aminoácidos y proteínas, a partir de
procedimientos de laboratorio que describen su comportamiento bioquímico.
Objetivo general: Conocer métodos de cuantificación de proteínas y aplicar los conceptos de curva de
calibración.
Procedimiento de cada práctica elaborado en un diagrama de flujo
Análisis y resultados obtenidos
Procedimiento.
Paso 1. (0,1 g de caseina) Paso 2. (Disolucion de la proteina)
Paso 3. (preparación de la muestra de leche) Paso 4. (tubos de ensayo en dos grupos)
Paso 5. (adicion reactivo de Bradford) Paso 6. (soluciones en reposo)
Paso 7. (soluciones después de reacción en baño maría)
Resultados de la absorbancia para calibración
Tubo Solución ABS proteína (mg)
1 2 ml NaCl al 1%, 0 0
2 0.1 ml BSA y 1.9 ml NaCl al 1% 0,013 1
3 0.2 ml BSA y 1.8 ml NaCl al 1% 0,026 2
4 0.4 ml BSA y 1.6 ml NaCl al 1% 0,052 4
5 0.8 ml BSA y 1.2 ml NaCl al 1%, 0,144 8
6 1 ml BSA y 1 ml NaCl al 1% 0,172 10
Curva de calibración
12
y = 55,184x + 0,4234
10 R² = 0,9893
8
proteina (mg)
0
0 0,05 0,1 0,15 0,2
absorbancia
Resultados calculando la cantidad de proteína
Tubo Solución ABS Proteína (mg)
7 0.25 ml caseína y 1.75 ml NaCl al 1% 0,481 26,966904
8 0.5 ml caseína y 1.5 ml NaCl al 1% 0,409 22,993656
9 0.25 ml sobrenadante y 1.75 ml NaCl al 1% 0,002 0,533768
10 0.5 ml sobrenadante y 1.5 ml NaCl 1% 0,098 5,831432
11 0.25 ml leche diluida y 1.75 ml NaCl al 1% 0,407 22,883288
12 0.5 ml leche diluida y 1.5 ml NaCl al 1% 0,614 34,306376
Después de realizar los cálculos pertinentes, se puede identificar que en el sobre nadante la retención de
proteína es casi nula, por otro lado, se evidencia que la cantidad de proteína presente en la caseína es
prácticamente la misma que se encuentra en la leche, por lo que se puede suponer que se realizó una correcta
extracción de esta.
Preguntas
1. Explique la ley de Beer-Lambert
La ley de Beer – Lambert es el fundamento que rige el comportamiento de la absorción y emisión de luz de
todos los tipos de radiación, aplicable a disoluciones y también a gases y sólidos, en la cual la absorbancia de
radiación a una frecuencia especifica es igual a la emisión de radiación a esta misma frecuencia.
Conclusiones
Al Realizar este laboratorio se puede evidenciar como se puede cuantificar e identificar las proteínas presentes
en un compuesto por medio de la curva de calibración.
Al extraer la caseína como principal proteína de la leche podemos identificar que el proceso no es eficiente al
100% y que en el sobrenadante queda proteína residual.
Práctica No. 6. Hidrólisis del Almidón
Propósito: Relacionar los conceptos básicos de enzimas y actividad enzimática a partir de procedimientos de
laboratorio que describen el comportamiento bioquímico de las enzimas.
Objetivo general: Relacionar el proceso de digestión con la actividad enzimática.
Procedimiento de cada práctica elaborado en un diagrama de flujo
Análisis y resultados obtenidos
Parte I hidrólisis de almidón en medio ácido
Se prepara la solución de almidón con HCL y se deposita Enel baño maría, se toman las muestras desde el
momento 0 hasta el minuto 60 cada diez minutos, se realiza la prueba de yodo y la prueba de Benedict, dando
los siguientes resultados cualitativos:
Tiempo 0 Tiempo 1 Tiempo 2 Tiempo 3
Tiempo 4 Tiempo 5 Tiempo 6
Tal como se logra evidenciar el Lugol en cada momento se fue oscureciendo cada vez más, desde el tiempo 1,
por otro lado, la prueba de Benedict arrojó solamente resultados después del tiempo 2 en la cual tomó tonos
más claros tiñéndose a verde, eso significa que el almidón se fue desagregando y que la presencia de azúcares
reductores fue incrementando confirmado por el cambio de color en el reactivo de Benedict.
Parte II hidrólisis enzimática del almidón
Se preparan las 4 soluciones en los tubos de ensayo, posteriormente se realizan las pruebas de yodo, y
Benedict, posteriormente se adiciona parte del tubo 1 al 4 y se realizan de nuevo las pruebas, dando los
siguientes resultados cualitativos:
Tiempo Resultado de la prueba
Tal como se logra evidenciar en el tubo 1 tenemos una desagregación de azúcares mayor que en el tubo 2, por
otra parte, la prueba de Benedict tubo una reacción muy baja en el tubo 3, pero en el tubo 4 se evidencia una
rección avanzada dando a entender que se tiene una concentración de azucares reductores entre el 1 y el 1,5 %
Preguntas
1. Compare los resultados entre los dos ensayos de hidrólisis del almidón.
En el primer ensayo se realiza por medio del uso de un ácido, a diferencia del segundo en el cual se utiliza una
enzima (amilasa) por lo que la primera puede ser más rápida, pero la desagregación puede incluso romper los
enlaces de los carbohidratos, por otra parte, en el segundo caso se puede llegar a requerir más tiempo, pero es
más especifica, esto se puede comprobar al evidenciar que la prueba de Benedict muestra presencia de azúcares
reductores.
2. Explique bioquímicamente las diferencias en el tiempo de hidrólisis entre los dos ensayos
La hidrolisis del almidón es el proceso por el cual este polisacárido se desagrega en azúcares simples como la
glucosa, esta desagregación se puede dar por muchos medios, pero en este caso se coparan una desagregación
por acidez y una con el apoyo de amilasa, en el primer caso el ácido rompe los enlaces del almidón en presencia
de agua, convirtiéndola en glucosa (C6H10O5)n+nHCl+nH2O→nC6H12O6 y en la segunda la enzima amilasa permite
que de manera más fácil la glucosa en presencia de agua se convierta de manera más fácil en glucosa(C6H10O5)n+
nH2O→nC6H12O6, teniendo en cuenta que se requiere menos energía y no es req2uerido la adición de ningún
otro compuesto para que esta reacción suceda Gracias a la acción de la enzima
Conclusiones
Al realizar estos ensayos se pueden apreciar los diferentes elementos que afectan una desagregación de
azucares, en este caso siendo una hidrolisis de almidón, afectada por el tiempo, y la existencia de una enzima
que acelere el proceso.
Realizar estos ejercicios nos permite conocer los requisitos necesarios para tener una hidrolisis optima.
Práctica No. 7. Efectos de la temperatura y el pH sobre la actividad enzimática
Propósito: Relacionar los conceptos de cinética e inhibición enzimática, a partir de procedimientos de laboratorio
que describen el comportamiento bioquímico de las enzimas.
Objetivo general: Relacionar los conceptos de la cinética enzimática para determinar la inhibición por factores
físicos y químicos, a partir de procedimientos de laboratorio que describen el comportamiento bioquímico de las
enzimas.
Procedimiento de cada práctica elaborado en un diagrama de flujo
Análisis y resultados obtenidos
Parte I. Efecto del pH sobre la actividad amilasa salival.
Se preparan las soluciones de amilasa y almidón, se mide el pH
Tubo # 1 Tubo # 2 Tubo # 3
Tal como se puede ver el primer tubo es una solución ácida, el segundo es una solución básica y el tercero tiende
a ser una solución neutra. Posteriormente se pone en baño maría y se realizan las pruebas de Yodo y de benedict.
Prueba de yodo Prueba de Benedict
Se puede analizar que al realizar las pruebas en un pH acido y neutro es más viable que se realice la desagregación
de azúcares por efecto de las enzimas que en un pH básico, de la misma manera se evidencia que en un pH básico
la desagregación es más lenta y se presentan mayor cantidad de azucares reductores.
Parte II. Influencia de la temperatura en la velocidad enzimática
Se realizan las preparaciones en los 8 tubos, posteriormente se dejan en las cuatro temperaturas indicadas (0°C,
20°C, 37°C y 100°C), al haberse atemperado se unen las pareas y se realizan las pruebas de yodo en los tiempos
indicados, dando los siguientes resultados:
Minuto 1 Minuto 2 Minuto 3
Minuto 4 Minuto 6 Minuto 8
Al obtener los resultados de las pruebas realizadas (de Izq a Der 0°C, 20°C, 37°C y 100°C), se evidencia que a
mayor temperatura más rápido es el proceso de hidrolisis, eso se evidencia al notar que la muestra a 100 grados
se oscurece más rápido que la muestra a temperatura ambiente y que la muestra a ceo grados prácticamente no
tiene variación de color.
Conclusiones
Al realizar este experimento se puede ver como la actividad enzimática se puede ver afectada por factores como
la temperatura y el pH del medio donde ocurre la reacción, siendo más favorable a temperaturas altas y un pH
ácido, por lo que esto nos permite conocer los requisitos necesarios para tener una hidrolisis optima.
Conclusiones generales.
• Observar
REFERENCIAS
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Distancia. Recuperado de http://hdl.handle.net/10596/7232.
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TÉCNICAS BÁSICAS DE LABORATORIO | Apuntes de Ingeniería Genética | Docsity. (s. f.).
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colaboradores de Wikipedia. (2023c, septiembre 3). Precipitación salina. Wikipedia, la enciclopedia libre.
https://es.wikipedia.org/wiki/Precipitaci%C3%B3n_salina
