TEMA 2: PROCESOS DE TRANSPORTE A TRAVÉS DE MEMBRANA.

CONSIDERACIONES TERMODINÁMICAS Y TIPOS DE TRANSPORTADORES.

Las membranas biológicas actúan como barreras semipermeables. Por tanto las membranas no son simples
barreras que definen el límite de una célula, sino que permiten la organización metabólica, conservación de la
energía y comunicación celular, todo gracias a la propiedad semipermeable, dejando pasar selectivamente
unas sustancias y a otras no.

 Poco permeables a la mayoría de las sustancias polares, el agua es una excepción.

 Los iones la atraviesan 10^9 veces más lenta que el agua.
 Proteínas transportadoras permiten la regulación en el paso de molécula a su través, facilita el paso del soluto a
favor de gradiente, a veces en contra de gradiente, en contra de carga eléctrica o de ambos. En este caso es
bombeado en un proceso que requiere de aporte energético. Puede proceder directamente de hidrólisis del ATP
o ser proporcionada por el gradiente de otra molécula.

DIFUSIÓN
- La tasa de difusión es directamente proporcional al potencial electroquímico:
El comportamiento de los solutos tiende de modo espontáneo hasta el sitio de mayor desorden y menor energía.
La variación de energía libre del movimiento es negativa y el proceso es favorable.

El flujo de materia es proporcional al gradiente de concentración. El transporte de un soluto a través de una

membrana está gobernado por la 2º ley de termodinámica. El potencial de membrana, es decir el sentido al que
tienen a moverse ya no solo depende de la diferencia de concentración, también del gradiente electroquímico.

Ley de Fick: El flujo de solutos es proporcional a la diferencia de concentración entre los compartimentos y depende
de las características de la molécula y también de las características de la membrana, viscosidad y grosor
(coeficiente de difusión).
Para iones o moléculas hidrofóbicas, el coeficiente de reparto (solubilidad de la molécula a transportar) toma un valor
muy pequeño, (difusión no mediada a través de la membrana es muy pequeña). J es menor con un coeficiente
de difusión y de reparto mayor. Experimentalmente puede estimarse conjuntamente el valor de los coeficientes de
difusión, de reparto y del coeficiente I (grosor de la membrana), en un único coeficiente, el de permeabilidad. Se
abrevia como P. El transporte facilitado de los iones y de glucosa aumenta considerablemente el coeficiente de
permeabilidad, y con ello la velocidad de flujo a través de la membrana.
 TRANSPORTE FACILITADO
- La permeabilidad selectiva está mediada por proteínas especializadas asociadas a membrana:
Cada proteína transportadora con uno o varios sitios de unión a un soluto lo
transporta a través de la capa lipídica. Algunas lo trasvasan a favor de gradiente,
mientras que otras pueden actuar como bombas a transportarlo en contra de
gradiente electroquímico, utilizando la energía proporcionada por el ATP

¿De qué depende la saturabilidad del transporte facilitado? Número finito de

transportadores. Cuando está saturado la velocidad de transporte es máxima, la
saturabilidad del transporte depende del número de transportadores activos y de
sus características cinéticas, entre ellas la Vmax, que nos proporciona la tasa
en la que puede cambiar entre sus estados conformacionales. Cada proteína
presenta además una constante de unión, una km, que viene dado por la
concentración de soluto a la que la velocidad del transporte es la mitad de su valor
máximo.

- El transporte facilitado aumenta en varios órdenes de magnitud la tasa de difusión a través de la

membrana:
Entre las desventajas biológicas de la difusión se encuentra que no es regulable y que en la mayoría de los
casos no permite el transporte en contra de gradiente electroquímico, además la velocidad de transporte de
numerosas moléculas mediante este mecanismo no es suficiente para satisfacer las necesidades metabólicas de la
célula

En función de las características del sistema empleado, los sistemas de transporte se han catalogado en:
 Implican la actividad de moléculas transportadoras.
 Implican la actividad de permeasas
 Implican la actividad de poro proteico.

PORINAS
Son agujeros de la membrana y actúan como filtro de exclusión por tamaño. En todos los casos se da la presencia
de una doble membrana, la membrana externa es permeable a la mayoría de los iones y metabolitos, la regulación
de intercambio se da a nivel de la membrana interna. Dentro de este grupo de canales se encuentran las
acuaporinas.
IONÓFOROS
Los ionóforos son moléculas orgánicas de distinta naturaleza que aumentan la permeabilidad de la membrana a los
iones. Se han descrito dos tipos:
 De naturaleza transportadora: se unen a un ion, y lo liberan al otro lado. Para su transporte neto, el ionóforo
retorna al lado original de la membrana. Las permeasas reconocen de manera específica determinadas
moléculas que transportan alternando dos estados conformacionales. El trasvase de metabolitos es saturable.

Algunas permeasas actúan de forma pasiva transportando su sustrato en ambas direcciones con un flujo neto hacia
el lado de la membrana generalmente con menor concentración.

Ej: El transportador de glucosa de los eritrocitos, GLUT1, tiene dos sitios de unión para el monosacárido. Se fija a la
proteína en una de las caras, induciendo un cambio que cierra el primer sitio de fijación al monosacárido y abriendo
el segundo sitio de unión a la glucosa que se encuentra en la otra cara de la membrana. La disociación de la
glucosa induce un nuevo cambio conformacional que lo devuelve a su estado inicial. El transportador glut1
discrimina entre estereoisómeros. Este transportador en particular discrimina entre la d y l glucosa, transporta la d
glucosa en una tasa mucho mayor que su estereoisómero.
 Forman canales: son simplemente canales. La selectividad del ión que atraviesa el poro viene determinado por
la carga y el tamaño. Los canales iónicos median cambios en el potencial de membrana. Desde el punto de vista
de eficiencia los canales tienen mayor ventaja que las proteínas transportadoras, 10000 más rápido que cualquier
proteína. La desventaja es que los canales no pueden acoplarse a una fuente de energía para realizar un
transporte activo, siempre lo tienen que hacer a favor de gradiente electroquímico. Normalmente tienen
selectividad por un único ión. Alternan dos conformaciones, una abierta y otra cerrada. Normalmente están
cerrados y sólo se abren de manera transitoria en respuesta a un estímulo de voltaje, mecánico o ligando.

La selectividad viene dada por un conjunto de aminoácidos que forman parte del vestíbulo del canal. Definen el filtro
de selectividad. Han evolucionado a partir de un ancestro común que recibe el nombre de 2tm, formado por dos
hélices transmembrana, La mayoría de los canales de mamífero muestran una estructura mucho más compleja que
interaccionan con moduladores, activados o inhibidos por señales acoplados a proteína g.
La valinomicina es un ionóforo transportador de potasio de 10000 iones por segundo. Gramicidina es un ionóforo
formador de canal, transporta más de 10000000 por segundo. Se trata de un transporte pasivo, a favor de gradiente
electroquímico.
 TRANSPORTE ACTIVO
Media el trasvase de moléculas o iones en contra de gradientes electroquímicos. La fuente de energía es externa, es
independiente del potencial electroquímico. Presenta una cinética de saturación. La energía puede ser de luz solar,
por reacciones redox o por enlaces fosfoanhidro, proporcionados mayoritariamente por el ATP, aunque también
puede ser facilitada por nucleótidos trifosfato o pirofosfatos inorgánicos. Entre estas últimas, las más abundantes,
conocidas como ATPasas que se clasifican en 3 tipos:
o Tipo F, V y A, presentan un mecanismo de transporte
rotacional, sintetizan ATP. En caso de que sinteticen ATP en
vez de hidrolizarlo para transportar, obtienen la energía a
partir de la energía que se libera durante el transporte. Las
tipo F se encuentran en las mitocondrias, cloroplastos y
membranas plasmáticas de fotofosforilaciones. Tipo V en
vacuolas y lisosomas. Son bombas protónicas responsable
del bajo pH que las caracterizan. Las del tipo A se han
descrito en archeas, funcionan de forma similar a las de tipo
F.
o Tipo P, modificación covalente reversible por fosforilación.
o Tipo ABC, nombre en inglés ATP binding cassette. Cuentan
con dos dominios transmembrana y dos citosólicos.
ATPasas tipo P: acoplan cambios conformacionales inducidos por fosforilación al bombeo de iones:
La bomba de sodio-potasio de la membrana plasmática está acoplada a la hidrólisis del ATP intracelular. Se da el
transporte de 3 moles de sodio y 2 de potasio. El antiporte requiere un aporte energético de 44,4 kj, únicamente
posible gracias al acoplamiento de un mol de ATP, que rinde -48,1 kj. El proceso sucede en múltiples etapas, se
postula que la unión del ATP en la cara citosólica de la bomba determina cambios estructurales que posibilitan la
unión del sodio citosólico. Fosforilación con ATP produce cambio conformacional adicional que permite el trasvase de
sodio a través de la membrana, lo libera al exterior. Unión de potasio en el exterior, desfosforilación del transportador,
se devuelve a la configuración inicial, potasio liberado en el citosol. Presenta tres sitios de unión a sodio y dos de

unión a potasio.
El transporte activo puede estar impulsado por gradientes iónicos: La energía libre almacenada en forma de
gradiente electroquímico en las membranas puede utilizarse para impulsar procesos endergónicos, como en las
células de la mucosa intestinal. Captan la glucosa mediante simporte
dependiente de iones sodio mediado por la actividad de transportadores
SGLT. Es un ejemplo de transporte activo secundario. Una vez que la
glucosa se encuentra en el interior de la célula, esta se transporta hacia
los capilares sanguíneos mediante uniporte facilitado pasivo llevado a
cabo por el transportador glut2.

ATPasas tipo ABC: acoplan cambios conformacionales inducidos

por unión a nucleótido al transvase de una gran variedad de
moléculas:
Los transportadores ABC comprenden una familia de proteínas de
membrana descritas en arqueas, bacterias, hongos, vegetales y
animales. Transportan desde iones y moléculas de pequeño tamaño,
pasando por tamaño medio y grande.
Todos comparten estructura básica, dos dominios unión a nucleótido intracelulares y dos dominios
transmembrana. Los intracelulares son los dominios ABC que unen ATP (por ello ATP binding cassette). Los
dominios ABC suministran la energía a través de la hidrólisis del ATP. La unión de ATP en el dominio intracelular
induce la dimerización de los dominios de unión de ATP de los dos monómeros que constituyen el transportador
activo. Hidrólisis, cambio conformacional que constituyen disociación. Los elementos transmembrana impulsan ciclos
de cambios conformacionales que van exponiendo los sitios de unión a sustrato en uno y otro lado de la membrana.

TRANSPORTADORES DE GLUCOSA
Ya hemos comentado GLUT y los cotransportadores dependientes de glucosa. Mientras que las permeasas GLUT
llevan a cabo transporte pasivo a través de gradiente químico, los transportadores SGLT llevan a cabo un transporte
activo secundario saturable en simporte con sodio. Un tercer grupo son los transportadores SWEET. Son similares a
GLUT, pero es poco específico. Se localizan en la membrana plasmática con la excepción del SWEET 1 humano que
se encuentra en la membrana del Golgi. Podrían estar implicados en el transporte de glucosa desde las células
intestinales hasta los hepatocitos

GLUT

La estructura de los transportadores GLUT está conservada. Son proteínas que cuentan con 12 hélices
transmembranales con ambos extremos mirando al citosol y glicosiladas tanto en el primer como en el quinto bucle.
La mejor caracterizada es glut1. Atendiendo a la estructura primaria, GLUT se ha clasificado en 3 categorías:

1. Transportadores clásicos que se encuentran bien caracterizados: de GLUT 1 a GLUT 4 incluyendo una
duplicación de GLUT 3 que es el 14.
2. Transportadores de isoformas impares, la 5 la 7 la 9 o la 11. Gran capacidad de transportar glucosa.
3. Resto de isoformas, incluyendo un transportador de mioinositol. Las isoformas de esta clase comparten
características estructurales exclusivas de este grupo, una glicosilación en el 5 bucle y una señal que los
mantiene en una localización intracelular.

La función celular viene en parte determinada por las propiedades cinéticas de los transportadores de
glucosa:
La afinidad del transportador con la glucosa regula su entrada en los tejidos . Sólo GLUT2 responde a la
concentración de glucosa en sangre, la km es entre 3 y 4 veces superior al de glucemia basal (+/- 5mM). Esto permite
actuar como sensor de glucosa en el hígado participando en los mecanismos de regulación de glucemia,
directamente implicado en la cascada de señalización que conduce a la secreción de insulina. GLUT 1 y GLUT 3 se
encuentran saturados al valor de glucemia basal, inferior a 5 mM, cercanos por tanto a la vmax., están implicados en
la incorporación basal de glucosa en la
mayoría de los tejidos. GLUT 1 tiene una
distribución ubicua, es el único que media el
transporte de glucosa a través de la barrera
hematoencefálica y en la membrana de los
eritrocitos. GLUT 3 es esencial para la toma de
glucosa por las neuronas. GLUT 4 es sensible
a insulina, la incorporación de glucosa en
adipocitos y células musculares están
reguladas a esta hormona, el número de
transportadores expuestos en la superficie es
el paso limitante de velocidad en la captación de glucosa en estas células, responden directamente a la
concentración de glucosa en sangre.
El modelo cinético nos indica que la velocidad de entrada de la glucosa depende de la concentración en sangre.
Cuando el transportador está saturado, la velocidad de transporte es máxima. La vmax, es específica para cada uno
de ellos. Cada miembro de la familia GLUT presenta una característica que nos proporciona información sobre su
afinidad con la glucosa.
El de glucosa de los hepatocitos, GLUT 2, tiene una km entre 15 y 20 mM, esta característica contribuye a que el
hígado amortigüe la concentración de glucosa en sangre incorporando a concentraciones a la que el resto de
transportadores GLUT se encuentran en condiciones de saturación. GLUT 2 transporta por tanto glucosa hacia el
interior de las células del hígado a una tasa elevada a concentraciones de glucemia incluso superiores al valor de
glucemia basal. Este transportador GLUT transporta glucosa desde los hepatocitos altorrente circulatorio cuando se
degrada el glucógeno, reponiendo entonces la glucosa sanguínea. GLUT 1 presenta estereoespecificidad por la D-
glucosa, la transporta varios órdenes de magnitud a la L-glucosa. Para Dmanosa o Dgalactosa, los valores de km son
un orden de magnitud superior, entre 20 y 30 mM, la afinidad de glut 1 por estos azúcares es muy inferior a la que

muestra por la Dglucosa.

La actividad de los transportadores GLUT está coordinada con el resto de la maquinaria celular presente en cada uno
de los tipos metabólicos. En las células beta pancreáticas que secretan insulina en respuesta a un aumento de
glucosa en sangre, GLUT 2 media la captación de glucosa. La actividad de la hexoquinasa es el paso limitante de la
glucólisis, aumenta en la relación de ATP y ADP, supone en la célula información de que el estado energético de la
célula es elevado. ATP regula la actividad del transportador de iones potasio, determina su cierre. Este cambio en el
potencial es la señal para la apertura de iones calcio de voltaje. El cambio en los niveles de calcio induce la exocitosis
de la insulina. En los hepatocitos, GLUT 2 media la absorción de glucosa en ingesta, controla si pasa a glucólisis o se
incorpora en el gránulo de glucógeno. Deficiencia en el almacenamiento de glucógeno sugiere que GLUT 2 podría
también transportar fructosa. Vimos que el transportador SGLT1 es responsable de la captación secundaria de
glucosa acoplada al sodio desde el tracto intestinal hasta las células intestinales. Es de alta afinidad capaz de
transportar glucosa en contra de su concentración, 2 iones sodio por cada glucosa. Fructosa a través de GLUT 5
localizada en la membrana apical también de las células intestinales. Ambas salen al torrente circulatorio por GLUT 2.
GLUT 2 se redistribuye a la zona apical de la membrana del epitelio donde facilita la introducción de glucosa.
Entre los transportadores SGLT las isoformas 1 y 2 son esenciales para la absorción de glucosa en el riñón.
Reabsorción de glucosa filtrada al riñón, envuelve la glucosa al torrente y no permite que se pierda en la orina.
SGLT2 acopla el transporte de una molécula de glucosa a 2 de sodio. La glucosa restante puede serreabsorbida por
la isoforma 1 en el epitelio apical o también puede ser reabsorbida por GLUT1 en la membrana basolateral.
 - La regulación metabólica conlleva el control del flujo de metabolitos e iones entre células y
compartimentos celulares:
La actividad de la enzima hexoquinasa 4, glucoquinasa presente en hepatocitos, se encuentra estrechamente
relacionada con la actividad del transportador glut2. La glucoquinasa se encuentra bajo un estricto control gracias a
una proteína reguladora de células hepáticas que la mantiene en el interior del núcleo y la libera cuando la
concentración de glucosa es elevada. Existe equilibrio desplazado hacia el citosol en presencia de glucosa y hacia el
núcleo en presencia de fructosa 6-bifosfato. Inmediatamente después de una ingesta rica en carbohidratos aumenta
la glucemia, la glucosa entra y activa la hexoquinasa IV. En el ayuno la fructosa 6 fosfato induce la inhibición de la
enzima a través de la proteína reguladora, en escasez de glucosa el hígado no compite con otros órganos. en este
tipo metabólico.

- La insulina regula la homeostasis de la glucosa controlando su tráfico a través de membranas:

El músculo esquelético y el tejido adiposo cuentan con glut4, sensibles a la insulina secretada en respuesta a una
elevada concentración de glucosa en sangre. Almacenamiento energético en ambos tejidos, glucógeno en los
músculos o triacilglicéridos en los adipocitos. La hormona induce la exposición en la membrana de moléculas
adicionales de transportador localizadas en vesículas intracelulares. El resultado es un aumento de unas 15 veces en
la velocidad de entrada de glucosa. En condiciones de glucemia alta la insulina dispara una vía de transducción de la
señal que en miocitos induce un aumento en la toma de glucosa por incorporación a través de glut 2, síntesis de novo
de la hexoquinasa y además activa a la glucógeno sintasa por fosforilación. Los dos primeros efectos de la hormona
aumentan el flujo de glucosa a través de la ruta glucolítica, el tercero ocasiona un cambio en la actividad de la enzima
glucógeno sintasa encaminada a que la concentración de glucosa 6 fosfato en la célula no cambie de forma drástica.
Los 3 efectos de la insulina permite el almacenamiento de glucosa en forma de glucógeno al mismo tiempo que
posibilita el uso de glucosa 6 fosfato en otras rutas.

- La vía de señalización de insulina se integra con la ruta de tráfico de GLUT4:

. La ruta de señalización de insulina se integra con glut 4 en varios puntos, en el desensamblaje del complejo que
mantiene las vesículas del transportador en el interior celular, transporte a lo largo del citoesqueleto, en el anclaje
de las vesículas a la cara interna de la membrana y en la internalización del transportador que cerraría el ciclo.

- El tráfico de GLUT4 está regulador por la vía de transducción PI3K/PKB:

La cascada de eventos que desencadena la insulina modula la actividad de RAB, proteína g monomérica
responsable de orquestar el ensamblaje de los transportadores desde las regiones asociadas a Golgi hasta la
membrana plasmática. La proteína g involucra la vía de fosforilación de PI3K. El esquema muestra que el ejercicio
también induce la activación de RAB de un mecanismo independiente de pi3k y que requiere de la activación de
quinasa dependiente de AMP, que puede ser activada por dos quinasas, una de ellas con la capacidad de sensar de
disponibilidad energética y de iones calcio.

La modulación de la actividad de RAB lo que hace es disparar la primera fase del tráfico de transportadores a la
membrana, liberación de vesículas de almacenamiento de transportador asociadas a trans Golgi. La insulina se une a
su tirosin quinasa asociada a caveolas. La flotina es una proteína que se encuentra localizada en la caveola y que es
la responsable de iniciar el ensamblaje de una serie de proteínas, que cuando la insulina interacciona con el receptor
tirosin quinasa dan lugar a la fosforilación de una proteína que es reguladora de la actividad RAB. RAB participa en la
regulación de translocación de GLUT 4 a la membrana a través de dos mecanismos alterando el comportamiento de
la red cortical de actina y además estimulando la polimerización de la actina asociada a las vesículas en las que se
almacena el transportador.
 SGLT

La estructura de los transportadores SGLT está conservada: Junto con GLUT, los transportadores SGLT
contribuyen a la homeostasis de la glucosaTambién funcionan como canales de agua, urea, sensores de glucosa y
sensores de agua y glucosa acoplados. la familia cuenta con 12 miembros codificados por genes no relacionados que
comparten estructuras y medio de transporte. Estructura basada en 14 hélices transmembranas, con los extremos
mirando hacia el lado extracelular de la membrana y con un único sitio de n glicosilación.

- El modelo del mecanismo de cotransporte de SGLT1 se basa en el de la superfamilia LeuT:

La especificidad de interacción con el soluto viene determinada por
diferentes residuos de aas expuestos que son responsables de la
coordinación. El modelo postula que la unión de sodio al transportador
induce la apertura de la compuerta exterior del canal permitiendo que la
glucosa ingrese en el vestíbulo interaccionando en esta región de la
proteína quedando atrapada en el sitio de unión. Se da un cambio
conformacional de estado ocluido hacia fuera ha estado ocluido hacia
dentro, lo que provoca es la apertura del canal y la salida hacia el sitio o
entrada tanto de los iones sodio como de la molécula de glucosa. El ciclo
de transporte se completa con un nuevo cambio conformacional desde el
estado libre de ligando orientado al interior hasta el exterior.

TRANSPORTADORES DE AMINOÁCIDOS

- Los transportadores de aminoácidos se catalogan en cinco superfamilias:

Usan el transporte de protones como activador del transporte secundario activo. En cuanto a los transportadores
localizados en compartimentos celulares, la mitocondria cuenta con numerosos sistemas de transporte, reflejo del
importante papel que el orgánulo desempeña en el metabolismo tanto general como de los aas. Familias: APC, MSF,
MCF, ATF1 y SDS
- Los aminoácidos libres desempeñan un papel fundamental en la regulación de la glucemia:
De entre los aas esenciales, los de cadena larga actúan como potentes inductores de liberación de insulina, ya sea
directamente o a través de su acción sobre la liberación de incretinas, hormonas producidas en el intestino tras la
ingesta de alimentos. Las dos incretinas principales actúan sobre el páncreas estimulando la producción de insulina.
GLP1 inhibe la secreción de glucagón, efecto más pronunciado a nivel sistémico.
- Numerosos aminoácidos son incorporados a nuestras células por sistemas de transporte activo:
Transporte de aas en contra de concentración, se acopla el transporte de sodio, cloro, potasio… la actividad de la
bomba sodio potasio contribuye al transporte activo secundario. Por otro lado nos encontramos otro tipo de transporte
activo en este proceso al que denominamos terciario, en el que en antiporte se intercambian sodio por protones.
- La glutamina es esencial para el mantenimiento de la homeostasis:
Es el aminoácido más abundante, implicado en procesos energéticos reguladores. Los hay de simporte utilizando
gradientes de iones, esto permite la acumulación de glutamina en contra de gradiente de concentración
transmembrana, posibilitando la absorción del aminoácido a través de la pared intestinal y su reabsorción desde la
porina en el riñón. Tanto los de simporte como antiporte permiten el equilibrio de su concentración con la
concentración de otros aminoácidos.
La glutamina participa en diversas vías metabólicas: La glutaminasa mitocondrial es la enzima que cataliza la
conversión de glutamina en glutamato, que puede producir alfacetoglutamato, por dos vías distintas, que ingresa en
el ciclo de krebs. Puede producir una gran cantidad de energía. La oxidación de un átomo de carbono de la glutamina
en el ciclo de krebs y la exportación de 4C en el citosol hace que esta vía sea menos eficiente desde el punto de vista
energético. En el citosol estos 4C procedentes de los 5C del esqueleto carbonado de la glutamina pueden convertirse
en piruvato rindiendo NADPH que se usa en la síntesis de lípidos. En condiciones de anaerobiosis este piruvato se
convierte en lactato y sucede la oxidación del NADH hasta NAD+, importante porque la oxidación permite el
mantenimiento de la glucolisis, posibilita la síntesis citosólica de ATP mediante la fosforilación a nivel de sustrato en
la glucolisis. La glutamina también puede ser precursor de la síntesis de ácidos grasos a partir del alfacetoglutarato.
En este caso se exporta al citosol desde la matriz mitocondrial. Por último, la síntesis de glutation dependiente de
glutamina. Depende de glutamina a través de dos vías diferentes, el glutamato derivado de la glutamina se incorpora
al glutation o bien se puede intercambiar por cistina, que si recordamos es un dímero de cisteínas unidas por un
puente disulfuro. Una vez internalizada se permite su incorporación al glutatión. En el riñón y en el hígado la
glutamina puede ser utilizado como precursor gluconeogénico, ruta compleja.