0% encontró este documento útil (0 votos)

72 vistas48 páginas

Evaluación biológica ISO 10993-3:2014

Esta norma europea establece los requisitos para evaluar la genotoxicidad, carcinogenicidad y toxicidad para la reproducción de productos sanitarios. Describe los ensayos in vitro e in vivo requeridos para identificar los potenciales efectos genotóxicos, carcinogénicos y de toxicidad reproductiva de los materiales de los dispositivos médicos antes de su uso en humanos. La norma sustituye a la versión anterior de 2009 y tiene como objetivo apoyar los requisitos esenciales de las directivas europeas sobre evaluación de la seguridad

Cargado por

Germán Cárdenas Alvarez

Derechos de autor

Nos tomamos en serio los derechos de los contenidos. Si sospechas que se trata de tu contenido, reclámalo aquí.

Formatos disponibles

Descarga como PDF, TXT o lee en línea desde Scribd

0% encontró este documento útil (0 votos)

72 vistas48 páginas

Evaluación biológica ISO 10993-3:2014

Cargado por

Germán Cárdenas Alvarez

Derechos de autor

Nos tomamos en serio los derechos de los contenidos. Si sospechas que se trata de tu contenido, reclámalo aquí.

Formatos disponibles

Descarga como PDF, TXT o lee en línea desde Scribd

norma UNE-EN ISO 10993-3

española
Mayo 2015

TÍTULO Evaluación biológica de productos sanitarios

Parte 3: Ensayos de genotoxicidad, carcinogenicidad y

toxicidad para la reproducción

(ISO 10993-3:2014)

Biological evaluation of medical devices. Part 3: Tests for genotoxicity, carcinogenicity and reproductive
toxicity. (ISO 10993-3:2014).

Évaluation biologique des dispositifs médicaux. Partie 3: Essais concernant la génotoxicité, la

cancérogénicité et la toxicité sur la reproduction. (ISO 10993-3:2014).

CORRESPONDENCIA Esta norma es la versión oficial, en español, de la Norma Europea EN ISO 10993-3:2014,
que a su vez adopta la Norma Internacional ISO 10993-3:2014.

OBSERVACIONES Esta norma anula y sustituye a la Norma UNE-EN ISO 10993-3:2009.

ANTECEDENTES Esta norma ha sido elaborada por el comité técnico AEN/CTN 111 Aparatos y
dispositivos médicos y quirúrgicos cuya Secretaría desempeña FENIN.

Editada e impresa por AENOR LAS OBSERVACIONES A ESTE DOCUMENTO HAN DE DIRIGIRSE A:
Depósito legal: M 15295:2015
46 Páginas

 AENOR 2015 Génova, 6 [email protected] Tel.: 902 102 201

Reproducción prohibida 28004 MADRID-España www.aenor.es Fax: 913 104 032

Este documento ha sido adquirido por: UNIVERSIDAD INTERNACIONAL DE LA RIOJA a través de la suscripción AENORmás. Para uso en red interna se requiere de
autorización previa de AENOR.
18/02/2024
S

ICS 11.100.20 Sustituye a EN ISO 10993-3:2009

Versión en español

Evaluación biológica de productos sanitarios

Parte 3: Ensayos de genotoxicidad, carcinogenicidad y toxicidad para la reproducción
(ISO 10993-3:2014)

Biological evaluation of medical devices. Évaluation biologique des dispositifs Biologische Beurteilung von
Part 3: Tests for genotoxicity, médicaux. Partie 3: Essais concernant la Medizinprodukten. Teil 3: Prüfungen auf
carcinogenicity and reproductive toxicity. génotoxicité, la cancérogénicité et la Gentoxizität, Karzinogenität und
(ISO 10993-3:2014). toxicité sur la reproduction. Reproduktionstoxizität.
(ISO 10993-3:2014). (ISO 10993-3:2014).

Esta norma europea ha sido aprobada por CEN el 2014-09-06.

Los miembros de CEN están sometidos al Reglamento Interior de CEN/CENELEC que define las condiciones dentro de
las cuales debe adoptarse, sin modificación, la norma europea como norma nacional. Las correspondientes listas
actualizadas y las referencias bibliográficas relativas a estas normas nacionales pueden obtenerse en el Centro de
Gestión de CEN, o a través de sus miembros.

Esta norma europea existe en tres versiones oficiales (alemán, francés e inglés). Una versión en otra lengua realizada
bajo la responsabilidad de un miembro de CEN en su idioma nacional, y notificada al Centro de Gestión, tiene el mismo
rango que aquéllas.

Los miembros de CEN son los organismos nacionales de normalización de los países siguientes: Alemania, Antigua
República Yugoslava de Macedonia, Austria, Bélgica, Bulgaria, Chipre, Croacia, Dinamarca, Eslovaquia, Eslovenia,
España, Estonia, Finlandia, Francia, Grecia, Hungría, Irlanda, Islandia, Italia, Letonia, Lituania, Luxemburgo, Malta,
Noruega, Países Bajos, Polonia, Portugal, Reino Unido, República Checa, Rumanía, Suecia, Suiza y Turquía.

CEN
COMITÉ EUROPEO DE NORMALIZACIÓN
European Committee for Standardization
Comité Européen de Normalisation
Europäisches Komitee für Normung
CENTRO DE GESTIÓN: Avenue Marnix, 17-1000 Bruxelles

 2014 CEN. Derechos de reproducción reservados a los Miembros de CEN.

Prólogo

El texto de la Norma EN ISO 10993-3:2014 ha sido elaborado por el Comité Técnico ISO/TC 194
Evaluación biológica de los productos sanitarios en colaboración con el Comité Técnico CEN/TC 206
Evaluación biológica de productos sanitarios, cuya Secretaría desempeña NEN.

Esta norma europea debe recibir el rango de norma nacional mediante la publicación de un texto idéntico
a ella o mediante ratificación antes de finales de abril de 2015, y todas las normas nacionales
técnicamente divergentes deben anularse antes de finales de abril de 2015.

Se llama la atención sobre la posibilidad de que algunos de los elementos de este documento estén sujetos
a derechos de patente. CEN y/o CENELEC no es(son) responsable(s) de la identificación de dichos
derechos de patente.

Esta norma anula y sustituye a la Norma EN ISO 10993-3:2009.

Esta norma europea ha sido elaborada bajo un Mandato dirigido a CEN por la Comisión Europea y por la
Asociación Europea de Libre Comercio, y sirve de apoyo a los requisitos esenciales de las Directivas
europeas.

La relación con las Directivas UE se recoge en los anexos informativos ZA y ZB, que forman parte
integrante de esta norma.

De acuerdo con el Reglamento Interior de CEN/CENELEC, están obligados a adoptar esta norma europea
los organismos de normalización de los siguientes países: Alemania, Antigua República Yugoslava de
Macedonia, Austria, Bélgica, Bulgaria, Chipre, Croacia, Dinamarca, Eslovaquia, Eslovenia, España,
Estonia, Finlandia, Francia, Grecia, Hungría, Irlanda, Islandia, Italia, Letonia, Lituania, Luxemburgo,
Malta, Noruega, Países Bajos, Polonia, Portugal, Reino Unido, República Checa, Rumanía, Suecia, Suiza
y Turquía.

Declaración

El texto de la Norma ISO 10993-3:2014 ha sido aprobado por CEN como Norma EN ISO 10993-3:2014
sin ninguna modificación.

Índice

Prólogo...................................................................................................................................................... 6

0 Introducción ............................................................................................................................ 9

1 Objeto y campo de aplicación ................................................................................................ 9

2 Normas para consulta ............................................................................................................ 9

3 Términos y definiciones ........................................................................................................ 10

4 Requisitos para las estrategias de ensayo ........................................................................... 11

4.1 Generalidades ....................................................................................................................... 11
4.2 Requisitos adicionales para el ensayo de carcinogenidad ................................................. 12
4.3 Requisitos adicionales para el ensayo de toxicidad para la reproducción ....................... 12

5 Ensayos de genotoxicidad .................................................................................................... 12

5.1 Generalidades ....................................................................................................................... 12
5.2 Estrategia de ensayo ............................................................................................................. 12
5.3 Preparación de la muestra ................................................................................................... 15

6 Ensayos de carcinogenidad .................................................................................................. 16

6.1 Generalidades ....................................................................................................................... 16
6.2 Estrategia de la evaluación .................................................................................................. 16
6.3 Preparación de la muestra ................................................................................................... 17
6.4 Métodos de ensayo ................................................................................................................ 17

7 Ensayos de toxicidad para la reproducción y el desarrollo ............................................... 18

7.1 Generalidades ....................................................................................................................... 18
7.2 Estrategia del ensayo ............................................................................................................ 19
7.3 Preparación de la muestra ................................................................................................... 19
7.4 Métodos de ensayo ................................................................................................................ 20

8 Informe del ensayo ............................................................................................................... 20

Anexo A (Informativo) Recomendaciones sobre la selección de un procedimiento de

preparación de la muestra apropiado para los ensayos de
genotoxicidad ............................................................................................ 21

Anexo B (Informativo) Diagrama de flujo para la evaluación de seguimiento ........................... 30

Anexo C (Informativo) Justificación de los sistemas de ensayo ................................................... 31

Anexo D (Informativo) Sistemas de ensayo de transformación celular ....................................... 33

Anexo E (Normativo) Consideraciones sobre los estudios de carcinogenidad efectuados

como estudios de implantación ................................................................ 34

Anexo F (Informativo) Ensayos in vitro de toxicidad para el embrión ....................................... 35

Bibliografía............................................................................................................................................. 37

Prólogo

ISO (Organización Internacional de Normalización) es una federación mundial de organismos nacionales

de normalización (organismos miembros de ISO). El trabajo de preparación de las normas internacionales
normalmente se realiza a través de los comités técnicos de ISO. Cada organismo miembro interesado en
una materia para la cual se haya establecido un comité técnico, tiene el derecho de estar representado en
dicho comité. Las organizaciones internacionales, públicas y privadas, en coordinación con ISO, también
participan en el trabajo. ISO colabora estrechamente con la Comisión Electrotécnica Internacional (IEC)
en todas las materias de normalización electrotécnica.

En la parte 1 de las Directivas ISO/IEC se describen los procedimientos utilizados para desarrollar esta
norma y para su mantenimiento posterior. En particular debería tomarse nota de los diferentes criterios de
aprobación necesarios para los distintos tipos de documentos ISO. Esta norma se redactó de acuerdo a las
reglas editoriales de la parte 2 de las Directivas ISO/IEC. www.iso.org/directives.

Se llama la atención sobre la posibilidad de que algunos de los elementos de este documento puedan estar
sujetos a derechos de patente. ISO no asume la responsabilidad por la identificación de cualquiera o todos
los derechos de patente. Los detalles sobre cualquier derecho de patente identificado durante el desarrollo
de esta norma se indican en la introducción y/o en la lista ISO de declaraciones de patente recibidas.
www.iso.org/patents.

Cualquier nombre comercial utilizado en esta norma es información a la atención de los usuarios y no
constituyen una recomendación.

El comité responsable de esta norma es el ISO/TC 194.

Esta tercera edición anula y sustituye a la segunda edición (Norma ISO 10993-3:2003) que ha sido
revisada técnicamente.

Los principales cambios técnicos son los siguientes:

a) la estrategia de ensayo se modifica por la inclusión de un ensayo in vivo y una evaluación del
seguimiento;

b) se incluye un nuevo anexo A “Recomendaciones sobre la selección de un procedimiento de

preparación de la muestra apropiado para los ensayos de genotoxicidad”;

c) se incluye un ensayo in vitro e in vivo adicional para evaluar el potencial genotóxico de los productos
sanitarios;

d) se incluye un anexo B nuevo “Diagrama de flujo para la evaluación del seguimiento”;

e) se modifica el anexo E cuyo título es ahora “Consideraciones sobre los estudios de carcinogenidad
efectuados como estudios de implantación” y se hace normativo;

f) se incluye un anexo F nuevo “Ensayos in vitro de toxicidad para el embrión”.

La Norma ISO 10993 consiste en las siguientes partes, bajo el título general Evaluación biológica de
productos sanitarios:

– Parte 1: Evaluación y ensayos mediante un proceso de gestión del riesgo.

– Parte 2: Requisitos relativos a la protección de los animales.

– Parte 3: Ensayos de genotoxicidad, carcinogenicidad y toxicidad para la reproducción.

– Parte 4: Selección de los ensayos para las interacciones con la sangre.

– Parte 5: Ensayos de citotoxicidad in vitro.

– Parte 6: Ensayos relativos a los efectos locales después de la implantación.

– Parte 7: Residuos de la esterilización por óxido de etileno.

– Parte 9: Marco para la identificación y cuantificación de productos potenciales de degradación.

– Parte 10: Ensayos de irritación y sensibilización cutánea.

– Parte 11: Ensayos de toxicidad sistémica.

– Parte 12: Preparación de muestras y materiales de referencia.

– Parte 13: Identificación y cuantificación de los productos de degradación de productos sanitarios

poliméricos.

– Parte 14: Identificación y cuantificación de los productos de degradación de materiales cerámicos.

– Parte 15: Identificación y cuantificación de los productos de degradación de metales y aleaciones.

– Parte 16: Diseño del estudio toxicocinético de productos de degradación y sustancias lixiviables.

– Parte 17: Establecimiento de los límites permisibles para sustancias lixiviables.

– Parte 18: Caracterización química de materiales.

– Parte 19: Caracterización físico-química, morfológica y topográfica de los materiales (Especificación

Técnica).

– Parte 20: Principios y métodos para los ensayos inmunotoxicológicos de productos sanitarios
(Especificación Técnica.

La siguiente parte está en elaboración:

– Parte 33: Suplemento a la Norma ISO 10993-3: Orientación a los ensayos de evaluación de la
genotoxicidad (Informe Técnico).

Se aplican las definiciones siguientes sobre cómo implementar una norma internacional ISO y otros
documentos ISO normativos (TS, PAS, IWA):

– “debe/n” indica un requisito;

– “debería/n” indica una recomendación;

– “se permite/n” se utiliza para indicar que algo está permitido;

– “puede/n” se utiliza para indicar que algo es posible, por ejemplo, que una organización o individuo es
capaz de hacer algo.

El apartado 3.3.1 de la parte 2 (sexta edición, 2011) de las directivas ISO/IEC define un requisito como
una “indicación en el contenido de un documento que expresa criterios a cumplir si se reivindica el
cumplimiento del documento y de la que no se permite ninguna desviación”.

El apartado 3.3.2 de la parte 2 (sexta edición, 2011) de las directivas ISO/IEC define una recomendación
como una “indicación en el contenido de un documento que expresa que entre varias posibilidades se
recomienda una como particularmente adecuada, sin mencionar o excluir otras, o que un determinado
curso de acción se prefiere pero no se requiere necesariamente, o que (en su forma negativa) una
posibilidad o curso de acción determinado se desaconseja pero no se prohíbe”.

0 Introducción
La base para la evaluación biológica de productos sanitarios es a menudo empírica y está impulsada por las inquietudes
pertinentes sobre la seguridad humana. El riesgo de efectos graves e irreversibles, tales como el cáncer o las
anormalidades en la segunda generación es causa particular de preocupación pública. Es inherente a la provisión de
productos sanitarios seguros que tales riesgos sean minimizados lo máximo posible. La evaluación de los peligros
mutagénicos, carcinogénicos y para la reproducción es un componente esencial del control de estos riesgos. No todos
los métodos de ensayo para la evaluación de la genotoxicidad, carcinogenidad o toxicidad para la reproducción están
igualmente bien desarrollados, ni su validez está bien establecida para el ensayo de productos sanitarios.

Existen dificultades significativas referentes al tamaño y preparación de la muestra de ensayo, la comprensión científica
de los procesos de enfermedad y la validación de los ensayos que pueden citarse como limitaciones de los métodos
disponibles. Por ejemplo, el significado biológico de la carcinogénesis de estado sólido está lejos de entenderse bien. Se
espera que los avances continuos científicos y médicos mejorarán nuestro entendimiento y la forma de abordar estos
importantes efectos toxicológicos. Cuando se preparó esta parte de la Norma ISO 10993, los métodos de ensayo
propuestos eran los más aceptables. Se permiten como aceptables otras alternativas científicamente sólidas a los
ensayos propuestos siempre que contemplen aspectos pertinentes de la evaluación de la seguridad.

Para la selección de los ensayos necesarios para evaluar un producto sanitario concreto, la única vía es una evaluación
cuidadosa de la utilización esperada en seres humanos y las interacciones potenciales del producto sanitario con
diversos sistemas biológicos. Estas consideraciones serán particularmente importantes en áreas tales como la
toxicología para la reproducción y el desarrollo.

Esta parte de la Norma ISO 10993 presenta los métodos de ensayo para la detección de peligros biológicos específicos,
y las estrategias para la selección de los ensayos, cuando proceda, que facilitarán la identificación de los peligros. Los
ensayos no siempre son necesarios ni siempre facilitan la gestión de los peligros toxicológicos asociados con la
exposición a los materiales del producto sanitario, pero cuando procede, es importante conseguir que posean la máxima
sensibilidad.

Dada la multitud de los resultados posibles y la importancia de factores tales como el alcance de la exposición, las
diferencias entre especies y las consideraciones mecánicas o físicas, la determinación del riesgo ha de efectuarse para
cada caso concreto.

1 Objeto y campo de aplicación

Esta parte de la Norma ISO 10993 especifica las estrategias para la estimación del riesgo, la selección de los ensayos de
identificación de los peligros y la gestión del riesgo, cuando como resultado de la exposición a los productos sanitarios
existe la posibilidad de que se produzcan los siguientes efectos biológicos potencialmente irreversibles:

– genotoxicidad;

– carcinogenidad; y

– toxicidad para la reproducción y el desarrollo.

Esta parte de la Norma ISO 10993 es aplicable para la evaluación de un producto sanitario cuando se ha establecido su
potencial genotóxico, carcinógeno o tóxico para la reproducción y el desarrollo.

NOTA En la Norma ISO 10993-1 se dan recomendaciones para la selección de los ensayos.

2 Normas para consulta

Los documentos indicados a continuación, en su totalidad o en parte, son normas para consulta indispensables para la
aplicación de este documento. Para las referencias con fecha, sólo se aplica la edición citada. Para las referencias sin
fecha se aplica la última edición (incluyendo cualquier modificación de ésta).

ISO 10993-1, Evaluación biológica de productos sanitarios. Parte 1: Evaluación y ensayos mediante un proceso de
gestión del riesgo.

ISO 10993-2, Evaluación biológica de productos sanitarios. Parte 2: Requisitos relativos a la protección de los
animales.

ISO 10993-6, Evaluación biológica de productos sanitarios. Parte 6: Ensayos relativos a los efectos locales después de
la implantación.

ISO 10993-12, Evaluación biológica de productos sanitarios. Parte 12: Preparación de muestras y materiales de
referencia.

ISO 10993-18, Evaluación biológica de productos sanitarios. Parte 18: Caracterización química de materiales.

OECD 414, Estudio de toxicidad en el desarrolo prenatal.

OECD 415, Estudio de toxicidad en la reproducción de la primera generación.

OECD 416, Toxicidad en la reproducción de la segunda generación.

OECD 421, Ensayo de revisión de la toxicidad de la reproducción/desarrollo.

OECD 451, Estudios de carcinogenicidad.

OECD 453, Estudios combinados toxicidad crónica/carcinogenicidad.

OECD 471, Ensayo de mutación inversa bateriana.

OECD 473, Ensayo de aberraciones cromosómicas in vitro en mamíferos.

OECD 476, Ensayo in vitro de mutación de genética celular en mamíferos.

OECD 487, Ensayo in vitro de micronúcleos de células de mamíferos.

3 Términos y definiciones
Para los fines de este documento, se aplican los términos y definiciones incluidos en las Normas ISO 10993-1 e
ISO 10993-12 además de los siguientes:

3.1 ensayo de carcinogenidad:

Ensayo para determinar el potencial carcinógeno de los productos sanitarios, materiales y/o extractos utilizando
exposiciones múltiples durante una porción importante de la vida del animal de ensayo.

3.2 producto sanitario que deposita energía:

Producto previsto para ejercer su efecto terapéutico o diagnóstico mediante la administración de radiación
electromagnética, radiación ionizante o ultrasonidos.

NOTA 1 Esto no incluye los productos sanitarios que administran corriente eléctrica simple, tales como los productos sanitarios electrocauteri-
zadores, marcapasos o estimuladores eléctricos funcionales.

3.3 ensayo de genotoxicidad:

Ensayo que utiliza células de mamífero o no mamífero, bacterias, levaduras, hongos o animales enteros para determinar
si las mutaciones genéticas, las alteraciones en la estructura cromosómica, u otros cambios del ADN o de los genes
están causados por las muestras de ensayo.

3.4 dosis tolerada máxima, MTD:

Dosis máxima que un animal de ensayo puede tolerar sin experimentar ningún efecto adverso.

3.5 ensayo de toxicidad para la reproducción y el desarrollo:

Ensayo para evaluar los efectos potenciales de las muestras de ensayo sobre la función reproductiva, la morfología
embriónica (teratogenidad), y el desarrollo prenatal y postnatal precoz.

3.6 preparación de la muestra de ensayo:

Materiales del producto residuales, extraíbles, lixiviables o biodegradables que se suspenden de nuevo en un vehículo
compatible con el sistema de ensayo.

4 Requisitos para las estrategias de ensayo

4.1 Generalidades
La Norma ISO 10993-1 indica las circunstancias en las que el potencial genotóxico, carcinógeno y tóxico para la
reproducción es un peligro pertinente para su consideración en una evaluación de la seguridad biológica global. Los
ensayos para investigar estos peligros se deben justificar dependiendo de la determinación del riesgo. Para determinar si
los ensayos de genotoxicidad, carcinogenidad y toxicidad para la reproducción del producto están justificados, una
determinación del riesgo debe contemplar los factores siguientes

– un análisis de los constituyentes químicos del (de los) material(es) del producto, incluyendo los residuos del proceso
de fabricación y los productos de degradación o los metabolitos, para identificar las causas de inquietud
dependiendo de las relaciones entre la estructura y la actividad o la demostración previa de la toxicidad pertinente en
la clase química;

– la base mecanística de la respuesta tóxica que se considera, si existe disponible;

– la información existente pertinente para la evaluación de la genotoxicidad, la carcinogenidad y la toxicidad para la

reproducción del producto sanitario;

– el alcance de la utilización previa de materiales comparables en aplicaciones pertinentes;

– la consideración de los residuos del producto terminado final con respecto a cuán bien están caracterizados y su
actividad biológica potencial (por ejemplo, relaciones estructura-actividad, o demostración previa de resultados
pertinentes);

– la ruta de exposición;

– la población de pacientes;

– el alcance y la duración de la exposición localizada (en el lugar de implantación o utilización) y sistémica;

– el impacto esperado de los resultados del ensayo (o la falta de ensayos) sobre los dictámenes de la gestión del riesgo; y

– los cambios en el tipo o la cantidad de residuos a los que estará expuesto el paciente, ya sea a través de un aumento
en la exposición al producto, o un aumento en el tamaño de los productos comparado con el de un producto
equivalente.

Puede ser beneficioso usar herramientas comúnmente utilizadas para la evaluación del riesgo (por ejemplo, umbral de
preocupación toxicológica, TTC) para evaluar estos factores.

Cuando un análisis de la composición de los materiales del producto revela la presencia de constituyentes químicos que
son preocupantes pero para los que no existen disponibles datos adecuados de su toxicidad, se debe considerar ensayar
la sustancia química individual. Las sustancias químicas individuales se deben ensayar en preferencia a materiales o
extractos compuestos, cuando esto mejore la estimación del riesgo. Cuando está indicado ensayo de un material del
producto, el ensayo se debe efectuar utilizando el producto final (incluyendo la esterilización si procede). Se debe
justificar y documentar la decisión de ensayar, y la naturaleza de la muestra de ensayo.

El ensayo puede estar justificado para estados adicionales del producto tales como, residuos de fricción generados a
partir del producto o materiales que curan in situ (por ejemplo, cementos, adhesivos y mezclas prepoliméricas) a menos
que la determinación del riesgo toxicológico confirme la ausencia de preocupación de los estados adicionales del
producto/material. Para las recomendaciones sobre el curado in situ de productos, véase la Norma ISO 10993-12.

4.2 Requisitos adicionales para el ensayo de carcinogenidad

Para el ensayo de carcinogenidad, además del apartado 4.1, se deben contemplar los factores siguientes:

– las características físicas (por ejemplo, el tamaño y la forma de las partículas, el tamaño de poro, la continuidad
superficial, la condición de la superficie, el espesor del producto);

– los resultados de los estudios de genotoxicidad, implantación y otros estudios.

4.3 Requisitos adicionales para el ensayo de toxicidad para la reproducción

Para el ensayo de toxicidad para la reproducción, además del apartado 4.1, se deben contemplar la duración del contacto
acumulativo directo o indirecto total con el tejido del sistema reproductor, con el embrión/feto o con las células
germinales.

Cualquier información proveniente de la literatura publicada acerca del efecto de los materiales del producto sobre los
órganos reproductores masculinos/femeninos o la información proveniente del estudio de toxicidad subaguda/crónica
sobre la histopatología del sistema reproductor debería servir de base también antes de efectuar un ensayo de toxicidad
para la reproducción a gran escala.

5 Ensayos de genotoxicidad

5.1 Generalidades
Antes de tomar una decisión de efectuar un ensayo de genotoxicidad, se debe tener en cuenta la Norma ISO 10993-1. Se
debe justificar y documentar la realización de un programa del ensayo, teniendo en cuenta todos los factores pertinentes
dados en los apartados 4.1 a 4.3.

Los ensayos de genotoxicidad están diseñados para detectar las dos clases principales de daño genético:

– las mutaciones genéticas (mutaciones puntuales);

– el daño cromosómico [anomalías estructurales tales como translocaciones, deleciones e inserciones pequeñas o
grandes, y aberraciones en el número cromosómico (aneuploidia)].

5.2 Estrategia de ensayo

5.2.1 Generalidades
No existe un único ensayo capaz de detectar todos los agentes genotóxicos pertinentes. Por tanto, el enfoque usual es
efectuar una batería de ensayos in vitro y en determinadas circunstancias también in vivo.

Se ha demostrado que los ensayos de mutación inversa en bacterias detectan los cambios genéticos pertinentes
producidos por la mayoría de los carcinógenos genotóxicos detectados por ensayos en roedores. Determinadas clases de
genotoxinas, por ejemplo, los haluros de alquilo, no se detectan.

El potencial de los materiales de ensayo para producir daños en el ADN de sistemas bacterianos podría no ser pertinente
para confirmar los efectos probables de los materiales sobre células eucarióticas, y por tanto, se deben efectuar ensayos
en sistemas de células de mamífero para así confirmarlo. Se utilizan varios sistemas de células de mamífero: sistemas
que detectan daños cromosómicos gruesos (ensayos in vitro para las anomalías estructurales y las aberraciones en el
número cromosómico), sistemas que detectan principalmente mutaciones genéticas (ensayo de mutación en el locus
HPRT), y un sistema que detecta mutaciones genéticas y efectos clastogénicos [ensayo de linfoma de ratón utilizando el
locus de la timidina quinasa (tk) con determinación del número y tamaño de las colonias]. Los ensayos in vitro del daño
cromosómico y el ensayo de linfoma de ratón utilizando el locus tk arrojan resultados que son equivalentes. Los
resultados de ambos ensayos poseen un nivel relativamente alto de congruencia para compuestos que son considerados
genotóxicos pero que arrojan resultados negativos en el ensayo de mutación inversa en bacterias. Por tanto, el ensayo de
aberraciones cromosómicas y el ensayo de linfoma de ratón utilizando el locus tk se consideran actualmente igualmente
aceptables cuando se utiliza uno cualquiera de ellos con el ensayo de mutación inversa en bacterias en una batería
normalizada para los ensayos de genotoxicidad.

5.2.2 Batería de ensayos

Cuando se efectúan ensayos de genotoxicidad, la batería de ensayos debería incluir

a) un ensayo de mutaciones genéticas en bacterias (OECD 471), modificado para productos sanitarios para permitir,
por ejemplo, el ensayo de extractos de los productos, véase el capítulo 6 del Informe Técnico ISO/TR 10993-33:–, y
uno cualquiera de los siguientes

b) un ensayo in vitro con evaluación citogenética del daño cromosómico con células de mamífero (OECD 473),
modificado para productos sanitarios, véase el capítulo 7 del Informe Técnico ISO/TR 10993-33:–, o

c) un ensayo in vitro de linfoma de ratón utilizando el locus tk (OECD 476), modificado para productos sanitarios,
incluyendo detección de colonias pequeñas (crecimiento lento) y grandes, véase el capítulo 9 del Informe Técnico
ISO/TR 10993-33:–, o

d) un ensayo citogenético de micronúcleos in vitro para daño cromosómico y aneugenicidad (OECD 487), modificado
para productos sanitarios, véase el capítulo 8 del Informe Técnico ISO/TR 10993-33:–.

Cuando es necesario considerar factores pertinentes adicionales (tales como mecanismo y farmacocinética de
genotoxicidad) que pueden influir sobre la actividad genotóxica de un compuesto, se permite efectuar un ensayo in vivo
si está justificado. Un ensayo in vivo del daño cromosómico en células hematopoyéticas de roedor podría ser o un
análisis de aberraciones cromosómicas en células de médula ósea o un análisis de micronúcleos en eritrocitos de médula
ósea o de sangre periférica [véase el capítulo 10 del Informe Técnico ISO/TR 10993-33:– (OECD 474) o el capítulo 11
del Informe Técnico ISO/TR 10993-33:– (OECD 475)].

Cuando proceda, el ensayo in vivo de daño cromosómico en células hematopoyéticas de roedor se debería efectuar
utilizando dos extractos (véase la Norma ISO 10993-12 o el anexo A). La vía de aplicación preferida para los vehículos
de carácter polar es intravenosa. La vía de aplicación preferida para los vehículos de carácter apolar es intraperitoneal.

Un ensayo in vivo no es necesario si el usuario puede demostrar que las cantidades de extraíbles a partir del artículo de
ensayo son inferiores a la cantidad de material que induciría una respuesta positiva con una genotoxina de micronúcleos
potente y bien caracterizada in vivo.

Un ejemplo es el cisplatino (número CAS 15663-27-1), que ha demostrado una respuesta positiva a 0,3 mg/kg, véase la
referencia [35].

5.2.3 Evaluación de seguimiento

Si los ensayos de genotoxicidad se efectúan de acuerdo con el apartado 5.2.2 y si los resultados de los dos ensayos in
vitro son negativos, no es necesario efectuar ningún otro ensayo adicional de genotoxicidad en animales.

Si cualquiera de los ensayos es positivo, se aplica el procedimiento en etapas siguiente (véase también el anexo B).

Etapa 1: Identificación de los factores de confusión en los resultados del conjunto inicial de ensayos de genotoxicidad,
si están disponibles.

a) Identificación de los factores de confusión (por ejemplo, condiciones no fisiológicas, interacción del artículo de
ensayo con el medio de cultivo, autooxidación y citotoxicidad).

b) Identificación de los efectos metabólicos (por ejemplo, naturaleza del sistema metabólico exógeno, naturaleza del
perfil metabólico, metabolitos únicos).

c) Identificación de las impurezas mediante caracterización química (es decir, investigación o ensayos analíticos de los
ingredientes de los materiales).

Etapa 2: Evaluación del peso de la evidencia (WOE) con mecanismo y modo de acción (MOA) a considerar.

a) Modo de acción con reactivo de ADN utilizando un método directo frente a un método indirecto.

b) Aspectos de aneuploidia o poliploidia. ¿Existe un mecanismo de aneuploidia implicado?

Etapa 3: Punto de decisión.

Se determina si el extracto del producto sanitario o el agente químico estudiado es una genotoxina y si:

a) la interpretación de los resultados y el análisis WOE/MOA dentro de un marco evaluativo del riesgo toxicológico
presenta una inquietud baja/despreciable para los pacientes en las condiciones esperadas de utilización; o

b) la interpretación de los resultados y el análisis WOE/MOA dentro de un marco evaluativo del riesgo toxicológico
sugiere que podrían existir riesgos potenciales para los pacientes en las condiciones esperadas de utilización.

Si la determinación es a) no es necesario ningún otro ensayo o evaluación adicional.

Si la decisión es b), se prosigue a la etapa 4.

Etapa 4: Se efectúa la gestión del riesgo.

O se gestionan los riesgos suponiendo un peligro genotóxico o se selecciona el ensayo de seguimiento in vitro y/o in
vivo apropiado.

Etapa 5: Se selecciona y efectúa el ensayo in vitro y/o in vivo adicional.

Cualquier ensayo in vivo se debe seleccionar dependiendo de la conclusión más apropiada identificada por los ensayos
in vitro.

Los ensayos in vivo utilizados comúnmente son

– ensayo de micronúcleos en roedores (OECD 474);

– análisis cromosómico en metafase en médula ósea de roedor (OECD 475);
– ensayos de mutagenidad en roedores transgénicos (OECD 488).

Se debe justificar y documentar la decisión de optar por el sistema de ensayo más apropiado.

NOTA Recientemente, se ha iniciado el desarrollo de un borrador de directriz OECD para un ensayo de genotoxicidad inducida por agentes químicos en
células individuales de roedor mediante electroforesis en gel alcalino (Comet). Este ensayo podría demostrar su validez para los ensayos de
productos sanitarios, pero en el momento de la publicación de esta norma internacional no se había publicado todavía la directriz OECD1).

Se debe intentar demostrar que la sustancia de ensayo ha alcanzado el órgano diana. Para el ensayo de micronúcleos en
roedores o el análisis cromosómico en metafase en médula ósea de roedor, la biodisponibilidad se puede demostrar de
una de las formas siguientes:

– cuantificación analítica de compuestos específicos del extracto en la sangre o en el suero,

– citotoxicidad inducida por el extracto de ensayo en células de médula ósea,

– ruta de exposición intravenosa (para vehículos polares).

Si la exposición del órgano diana no se puede demostrar, se debe efectuar un segundo ensayo in vivo en otro órgano
diana para verificar la ausencia de genotoxicidad in vivo.

Etapa 6: Se reinterpretan todos los datos acumulados y se determina si el artículo de ensayo es genotóxico.

En algunos casos, los ensayos in vitro con resultado positivo pueden no ser pertinentes. Para determinar la pertinencia
global de los resultados in vitro, se debería considerar lo siguiente. Esta lista no es exhaustiva pero se da para facilitar el
proceso de decidir la existencia o ausencia de genotoxicidad.

a) Solamente uno de los dos ensayos in vitro originales efectuados demostró un resultado positivo.

b) Una investigación in vitro subsiguiente utilizando criterios mecanísticos de valoración de la genotixicidad no

confirma el resultado positivo.

c) La información mecanística indica que los resultados in vitro positivos no son pertinentes para situaciones in vivo
(por ejemplo, citotoxicidad alta, osmolalidad, etc.).

d) Los ensayos in vivo incluyendo la evidencia de que la muestra de ensayo alcanzó el órgano diana no demostraron un
efecto genotóxico.

Con la conclusión final, se debe documentar la WOE global y la interpretación del conjunto completo de datos. En
algunos casos, podría ser necesario efectuar ensayos del lugar específico o del mecanismo genotóxico específico. En la
mayoría de los casos, estos ensayos no disponen de protocolos reconocidos internacionalmente.

5.3 Preparación de la muestra

A menos que la muestra se pueda disolver en un disolvente compatible con el sistema de ensayo, se deben escoger
disolventes de extracción apropiados basándose en su capacidad para maximizar la extracción del material o del
producto sanitario hasta que la concentración alcanzada de los residuos genotóxicos sea suficiente para producir una
respuesta positiva en el sistema de ensayo, pero sin degradación del producto ni de la muestra de ensayo. El (los)
vehículo(s) del sistema de ensayo se debe(n) escoger dependiendo de su compatibilidad con el sistema de ensayo de la
genotoxicidad. Los ensayos se deben efectuar utilizando soluciones, suspensiones (por ejemplo, el método A en el
anexo A), extractos (por ejemplo, el método C en el anexo A) o extractos exagerados (por ejemplo, el método B en el
anexo A) del producto terminado (incluyendo la esterilización, si procede), material del producto, un componente del
producto o agentes químicos individuales del producto.

1) Borrador de directriz OECD para el ensayo de agentes químicos: Ensayo de genotoxicidad en células individuales de mamífero mediante
electroforesis en gel alcalino (Comet), disponible en http://www.oecd.org/

Los materiales del producto deberían incluir toda la formulación y procesado finales, a menos que se justifique lo
contrario. No es generalmente apropiado efectuar ensayos en materias primas, pues la formulación y el procesado
podrían cambiar el potencial tóxico del producto final.

Se debe justificar y documentar la argumentación cuando se opta por ensayar los agentes químicos individuales. La
argumentación debe incluir las consideraciones de las interacciones y los efectos sinergísticos.

Cuando proceda, el extracto del material de ensayo se debería efectuar con los dos disolventes (véase la Norma
ISO 10993-12 o el anexo A).

Se debe justificar y documentar cualquier decisión de omitir el ensayo con una de las clases de disolvente.

6 Ensayos de carcinogenidad

6.1 Generalidades
Antes de tomar una decisión sobre la realización de un ensayo de carcinogenidad, se debe tener en cuenta la Norma
ISO 10993-1. La decisión de efectuar un ensayo se debe justificar basándose en una evaluación del riesgo de carcino-
génesis resultante del uso del producto sanitario. El ensayo de carcinogenidad no debe efectuarse cuando los riesgos se
pueden ya determinar o gestionar de forma adecuada sin generar datos adicionales de un ensayo de carcinogenidad.

Se permite diseñar estos ensayos para examinar simultáneamente en un único estudio la toxicidad crónica y la
carcinogenidad. Cuando la toxicidad crónica y la carcinogenidad se evalúan conjuntamente en un único estudio, se debe
proceder con el debido cuidado durante la etapa de diseño del estudio para garantizar que los grupos de dosis son
apropiados. Esto ayuda a impedir o minimizar que la mortalidad prematura de la toxicidad sistémica crónica/acumu-
lativa comprometa la evaluación estadística de los datos derivados de los animales que sobrevivirían hasta el final del
periodo de estudio (es decir, duración normal del periodo de vida).

NOTA Existen disponibles sistemas de transformación celular in vitro para una criba inicial de la carcinogenidad [por ejemplo, el ensayo de
transformación celular en el embrión de hámster sirio (SHE) y el ensayo de transformación celular Balb 3T3]. En el momento de la
publicación de esta norma internacional no se había publicado todavía la directriz OECD correspondiente. En el anexo D se da información
adicional sobre los sistemas de ensayo de transformación celular.

6.2 Estrategia de la evaluación

Los ensayos de carcinogenidad de materiales genotóxicos se deben justificar científicamente. En la mayoría de los casos
para materiales genotóxicos, se puede suponer un peligro de carcinogenidad y el riesgo se puede gestionar en
consecuencia.

En ausencia de evidencia que permita descartar el riesgo de carcinogenidad para materiales no genotóxicos, las
situaciones en las que se debe considerar la necesidad de efectuar el ensayo de carcinogenidad pueden incluir las
siguientes:

– materiales para los que el tiempo de degradación es superior a 30 días;

– materiales introducidos en el cuerpo y/o sus cavidades con un contacto acumulativo de duración superior a 30 días.

Las circunstancias en las que no se puede justificar la realización de ensayos incluyen:

– materiales para los que existen datos significativos y adecuados sobre la exposición o utilización en seres humanos;

– materiales que se espera den lugar a carcinogénesis de estado sólido (véase el anexo E);

– restricciones metodológicas u otras circunstancias que limitarían el valor predictivo de un ensayo.

Para determinar si un producto posee un historial de utilización en humanos, la determinación debería incluir una
evaluación que contemple si el producto es sometido a un proceso de fabricación similar, si se utiliza para tratar a una
población de pacientes similar, en un centro de tratamiento similar y con una exposición acumulada más pequeña o
similar. El historial de utilización en humanos debería documentar si existe información disponible de la monitorización
de episodios adversos, en particular del riesgo de cáncer, en la población de utilización en humanos.

Cuando se considera si se debería efectuar un estudio de carcinogenidad, se debe describir el papel del estudio en la
evaluación del riesgo en seres humanos, y se deben justificar la necesidad del estudio y el diseño del estudio. Esta
justificación debe tener en cuenta el papel incierto que los estudios de carcinogenidad por implantación juegan en la
evaluación de la seguridad biológica junto con el número significativo de animales.

Si de acuerdo con la Norma ISO 10993-1, la toxicidad crónica y la carcinogenidad se consideran pertinentes y se
determina que los ensayos son necesarios, éstos se deben efectuar de acuerdo con la directriz OECD 453, si es posible.

Si de acuerdo con la Norma ISO 10993-1, se considera pertinente solamente un estudio de carcinogenidad, y se
determina que los ensayos son necesarios, éstos se deben efectuar de acuerdo con la directriz OECD 451.

Una especie animal es típicamente suficiente para los ensayos de productos sanitarios. La elección de la especie debe
estar de acuerdo con la Norma ISO 10993-2 y se debe justificar la elección y documentar la argumentación.

6.3 Preparación de la muestra

Cuando los ensayos de carcinogenidad son necesarios como parte de una evaluación de la seguridad biológica, estos
estudios se deben efectuar ya sea con los materiales, agentes químicos definidos o extractos caracterizados de los
productos sanitarios.

El producto sanitario se debe ensayar en una forma que sea representativa del estado del producto final. Se permiten
ensayos adicionales para estados adicionales del producto tales como, residuos generados por desgaste del producto o
de los materiales que curan in situ (por ejemplo, cementos, adhesivos y mezclas pre-poliméricas). Para consultar las
recomendaciones sobre el curado in situ de productos, véase la Norma ISO 10993-12.

Se debe justificar y documentar la selección de la muestra de ensayo (material del producto, extractos o producto
químico definido del material del producto).

La dosis más alta utilizada en los animales es o la dosis máxima tolerada o la dosis limitada por las restricciones físicas
del modelo animal. Esta dosis se debe expresar como un múltiplo de la exposición humana estimada máxima (en peso
y/o área superficial por kilogramo).

6.4 Métodos de ensayo

Si el ensayo de un extracto se considera pertinente, los ensayos de carcinogenidad se deben efectuar de acuerdo con las
directrices OECD 451 u OECD 453.

Los tejidos evaluados deben ser los tejidos pertinentes incluidos en la lista indicada en las directrices OECD 451 u
OECD 453, así como el lugar de implantación y los tejidos adyacentes.

Para los estudios que utilizan extractos del material del producto o productos químicos definidos, una explicación debe
contemplar porqué no se contempla la contribución de las propiedades de la superficie del material al potencial
carcinógeno. Se deben tener en cuenta las consideraciones para la realización de los estudios de implantación (véase el
anexo E) y se debe describir y documentar el papel que juegan las propiedades de la superficie en la evaluación del
riesgo humano.

Para los estudios de implantación que evalúan la carcinogenidad, la cantidad de material implantado debe ser
representativa de una dosis humana exagerada que proporcione un margen de seguridad suficiente. La dosis más alta
estará limitada por las restricciones físicas del modelo animal. Esta dosis se debe expresar como un múltiplo de la
exposición humana estimada máxima (en peso y/o área superficial por kilogramo).

Se aplica un factor de seguridad de 100 a la exposición humana estimada máxima (en peso y/o área superficial por
kilogramo), sin embargo, la dosis debería ser fisiológicamente compatible con el modelo. El grupo de control negativo
recibirá generalmente una forma geométrica y física comparable de un material o material de control de referencia
clínicamente aceptable cuya ausencia de potencial carcinógeno haya sido documentada (por ejemplo, polietileno).

Cuando proceda, se debe hacer un implante adecuadamente formado del (de los) material(es) de ensayo de acuerdo con
la Norma ISO 10993-6, teniendo en cuenta la consideración apropiada de la posibilidad de inducir carcinogenidad de
estado sólido (véase la referencia [33]).

EJEMPLO Artículo de ensayo: Polímero

Características de la exposición: Un paciente típico será expuesto a un máximo de 11 g de polímero en un

producto.

Dosis humana: 0,19 g/kg (basada en el peso corporal medio de una hembra de 58 kg). Si el
producto se utilizará en niños, se recomienda un peso corporal de 10 kg.

Considerando un factor de seguridad de 100, la dosis ratón es igual a 19 g/kg. Por tanto, un ratón típico de 25 g recibirá
0,475 g.

El polímero se puede ensayar en forma de disco. Se recomienda un disco cuyas dimensiones no sobrepasen
aproximadamente 15 mm de diámetro y 2 mm a 3 mm de espesor. Sin embargo, para materiales de densidad alta, se
permite reducir estas dimensiones para evitar un daño del tejido derivado del peso de la muestra. Se permite implantar
muestras múltiples para obtener la dosis deseada. Por tanto, en el ejemplo anterior, en cada ratón se implantarían dos
implantes en forma de disco conteniendo 0,2 g de polímero por implante.

Los tejidos evaluados deben ser los tejidos incluidos en la lista indicada en las directrices OECD 451 y OECD 453, así
como el lugar de implantación y los tejidos adyacentes.

En estos últimos años, ha ganado alguna aceptación la utilización de animales transgénicos para ensayos de carcinoge-
nidad, pero la técnica no ha sido validada para los productos sanitarios. El ensayo de carcinogenidad en modelos trans-
génicos es de duración más corta (normalmente seis meses) y requiere un número menor de animales que para los ensa-
yos de carcinogenidad de vida completa de dos años en roedores. Además de ser de duración más corta, estos estudios
ofrecen un beneficio adicional de no resultar complicados por el fenómeno de tumorigénesis de estado sólido. Dado que
los estudios en modelo transgénico duran solamente seis meses, y se requieren entre 8 meses y 9 meses para que se de-
sarrollen tumores de estado sólido, este fenómeno no es un factor de confusión. El modelo de ratón transgénico rasH2
ha sido el modelo transgénico principal utilizado para evaluar el riesgo de carcinogenidad de productos sanitarios.

Debido a los pocos datos disponibles, y a la falta de estudios formales de validación con el modelo de ratón transgénico
rasH2, el diseño del estudio con este modelo incluye frecuentemente un control positivo junto con el control negativo.

7 Ensayos de toxicidad para la reproducción y el desarrollo

7.1 Generalidades
Antes de tomar una decisión de efectuar ensayos de toxicidad para la reproducción y el desarrollo, se debe tener en
cuenta la Norma ISO 10993-1. La decisión de efectuar un ensayo se debe justificar basándose en una evaluación del
estado del aparato reproductor de la población a someter al ensayo, del potencial de exposición de los tejidos del
aparato reproductor, del embrión/feto o niño lactante al material de ensayo o a las sustancias lixiviables.

No es necesario efectuar ensayos de toxicidad para la reproducción de productos sanitarios biodegradables o de

productos sanitarios que contienen sustancias lixiviables cuando existan datos adecuados y confirmatorios provenientes
de estudios de absorción, metabolismo, distribución y excreción o de estudios de toxicidad para la reproducción y el
desarrollo que demuestren una ausencia de toxicidad para los tejidos pertinentes.

No es necesario efectuar ensayos de toxicidad para la reproducción y el desarrollo cuando una evaluación del riesgo
toxicológico aceptable del producto sanitario confirma que se ha atenuado de forma adecuada el riesgo de toxicidad
para la reproducción y el desarrollo.

7.2 Estrategia del ensayo

Los ensayos de toxicidad para la reproducción y el desarrollo se deben considerar para los productos siguientes:

– productos de contacto prolongado o permanente con materiales, o subproductos de degradación o sustancias

lixiviables que pueden posiblemente entrar en contacto con tejidos del aparato reproductor o con el embrión/feto o
las células germinales;

– productos sanitarios que depositan energía;

Para determinar si está justificado efectuar ensayos de toxicidad para la reproducción para el producto, una
determinación del riesgo debe contemplar los factores siguientes:

– el alcance de la exposición sistémica a los compuestos lixiviables (si el producto no entra en contacto directo con el
tejido del aparato reproductor);

– las características físicas del producto;

– los metabolitos del material del producto;

– los resultados de genotoxicidad.

Los ensayos están indicados cuando existe información inadecuada sobre uno o más de los factores anteriores y este
riesgo no puede ser atenuado mediante otras medidas de control del riesgo (por ejemplo, información sobre la ausencia
de datos de toxicidad para la reproducción).

Los ensayos se deben efectuar utilizando el producto o material de ensayo terminado.

Se debe justificar la utilización de material de ensayo específico que no sea el producto terminado y se deben
documentar los argumentos de la justificación.

Si los ensayos son necesarios, se debe comenzar utilizando la directriz OECD 421 para proporcionar la información
inicial de los efectos posibles sobre la reproducción y el desarrollo. Los resultados positivos con estos ensayos son útiles
para la determinación inicial de los peligros y para contribuir a las decisiones a tomar sobre la necesidad y el calendario
de cualquier ensayo adicional.

Si se considera necesario cualquier ensayo adicional, se debe efectuar de acuerdo con las directrices OECD 414,
OECD 415 u OECD 416, según proceda.

Es posible comenzar con sistemas de ensayo apropiados que demuestren claramente la ausencia o presencia de
toxicidad para la reproducción de acuerdo con las directrices OECD 414, OECD 415 u OECD 416.

7.3 Preparación de la muestra

La preparación de la muestra se debe hacer de conformidad con la Norma ISO 10993-12. Siempre que sea posible, el
producto sanitario se debe ensayar en una forma representativa de su estado final. Se permiten ensayos adicionales para
estados adicionales del producto tales como, producto o materiales que curan in situ (por ejemplo, cementos, adhesivos
y mezclas pre-poliméricas).

En el caso de productos sanitarios que depositan energía, es apropiada la exposición del cuerpo entero de los animales.
Se debe aplicar un múltiplo de la exposición humana esperada de los órganos reproductores.

La dosis más alta utilizada en los animales es la dosis tolerada máxima o la dosis limitada por las restricciones físicas
del modelo animal. Esta dosis se debe expresar como un múltiplo de la exposición humana estimada máxima (en peso
y/o área superficial por kilogramo).

Los ensayos in vivo se deben efectuar de acuerdo con la Norma ISO 10993-2.

7.4 Métodos de ensayo

La evaluación de los efectos sobre la primera generación (F1) o incluso la segunda generación (F2) se debe hacer de
acuerdo con las directrices OECD 414, OECD 415 u OECD 416 y OECD 421. Dado que las recomendaciones de la
OECD no fueron previstas para productos sanitarios, se deben considerar las modificaciones siguientes:

– dosis (en el caso de productos sanitarios que depositan energía);

– ruta de aplicación (implante, parenteral, otra);

– medios de extracción;

– tiempo de exposición (niveles elevados en sangre durante la organogénesis, cuando sea posible).

NOTA Dependiendo de la utilización humana prevista y de las características del material, pueden estar indicados estudios peri-/post natales.

Si la información derivada de otros ensayos indica efectos potenciales sobre el sistema reproductor masculino, se deben
entonces efectuar los ensayos apropiados para evaluar la toxicidad sobre el sistema reproductor masculino.

Se han desarrollado recientemente sistemas de ensayo in vitro de toxicidad para la reproducción. Pueden ser útiles como
un método de ensayo de preselección de la toxicidad para la reproducción y el desarrollo.

8 Informe del ensayo

Si es pertinente, el informe del ensayo debe incluir al menos la información siguiente:

a) descripción del material y/o producto sanitario (por ejemplo, composición química, procesado, acondicionamiento y
tratamiento superficial) incluyendo su utilización prevista;

b) descripción y justificación/argumentación de los métodos de ensayo, condiciones de ensayo, materiales de ensayo,

dosis de ensayo y los procedimientos del ensayo;

c) descripción de los métodos analíticos, incluyendo los límites de cuantificación;

d) indicación de la conformidad con las buenas prácticas de la calidad o de laboratorio válidas/actuales apropiadas, por
ejemplo, las buenas prácticas de laboratorio (GLP) o la Norma ISO/IEC 17025, según proceda;

e) resultados del ensayo, incluyendo un resumen;

f) métodos estadísticos;

g) interpretación y discusión de los resultados;

h) información adicional según se especifica en las directrices OECD pertinentes o en el anexo C y anexo D, y en el
Informe Técnico ISO/TR 10993-33;

i) nombre y certificaciones del laboratorio de ensayo;

j) fecha del ensayo;

k) nombre y firma de la persona responsable.

Anexo A (Informativo)

Recomendaciones sobre la selección de un procedimiento de preparación de la

muestra apropiado para los ensayos de genotoxicidad

A.1 Generalidades
Este anexo incluye recomendaciones para seleccionar un procedimiento de preparación de la muestra apropiado para los
ensayos de genotoxicidad de productos sanitarios. Al seleccionar el método, el usuario debería considerar las
propiedades fisicoquímicas del material del producto sanitario y el proceso de fabricación del producto sanitario. Por
ejemplo, muchos polímeros utilizados en productos sanitarios contienen, además de un polímero relativamente inerte de
masa molecular alta, otros componentes tales como residuos de monómeros, oligómeros, catalizadores, agentes de
procesado, etc. Estos componentes están presentes en diversas concentraciones dependiendo de las fuentes de las
materias primas, de los procesos de fabricación, y de la función prevista de los aditivos. Además, se pueden generar
especies químicas adicionales durante los procesos de fabricación tales como el termosellado, la soldadura, o la
esterilización del producto. Todos estos componentes pueden migrar desde el producto hasta el interior del cuerpo
humano y deberían estar sujetos a una determinación del riesgo.

La información pertinente al análisis del riesgo biológico puede encontrase disponible en la literatura y/o por solicitud
al (a los) fabricante(s) o distribuidor(es).

Si existe disponible información suficiente sobre las características cualitativas y cuantitativas del producto terminado o
muestra de ensayo, incluyendo los materiales y los agentes de procesado utilizados en la fabricación del producto, no
hay necesidad de efectuar ningún ensayo.

Al evaluar si existe disponible información suficiente, el usuario debería incluir en su análisis lo siguiente.

– ¿Experimenta el producto terminado un proceso de fabricación equivalente (incluyendo la esterilización, si

procede)?

– ¿Contiene el producto los mismos aditivos y contaminantes (tales como agentes de procesado, monómeros que no
han reaccionado, catalizadores)?

Para efectuar una evaluación basada en el riesgo de acuerdo con la Norma ISO 14971, el procedimiento de análisis del
riesgo debería incluir las tres etapas siguientes:

– Caracterización del material/producto.

– Identificación de los peligros.

– Estimación del riesgo.

Sin embargo, si falta alguna información necesaria, se deberían efectuar los ensayos. Los métodos de ensayo biológico
incluyendo el procedimiento de preparación de la muestra se deberían diseñar de forma apropiada para identificar los
peligros biológicos y estimar sus riesgos.

La selección de la preparación apropiada de la muestra es un aspecto crítico para obtener resultados pertinentes de los
ensayos de genotoxicidad. Una preparación inapropiada de la muestra puede dar lugar a un riesgo de genotoxicidad
debido a una estimación por defecto. Por ejemplo, se consideró inicialmente la extracción de polímeros con agua para
simular la migración in situ de agentes lixiviables desde polímeros a la sangre. Sin embargo, Tsuji et al. [76] demostraron
que el ftalato de bis (2-etilhexilo) (DEHP) no se extraía del tubo de poli (cloruro de vinilo) (PVC) de un circuito
sanguíneo cuando se utilizaba agua como disolvente de extracción. Demostraron que el plasma humano extraía
cantidades significativas de DEHP y que el porcentaje de DEHP extraíble con plasma humano era similar al que podía
extraer etanol del 40%. Basándose en este estudio, Oba et al. [77] consiguieron reproducir lesiones oculares, que se
producen en pacientes de diálisis tratados con una marca específica de dializador de acetato infundiendo a conejos con
extractos obtenidos con etanol del 40%.

A.2 Materiales del producto

A.2.1 Productos químicos de masa molecular baja (LMWC)

Los LMWC, sustancias no poliméricas contenidas en productos sanitarios, pueden penetrar las membranas celulares,
reaccionar con el ADN, con los genes o con los cromosomas de forma que pueden dar lugar a reacciones genotóxicas
(por ejemplo, el adhesivo de cianoacrilato), véase el apartado A.2.2.1.

A.2.2 Polímeros (incluyendo los polímeros que ocurren de forma natural)

Un polímero es una sustancia química compuesta por moléculas caracterizadas por la secuencia de uno o más tipos de
unidades monoméricas y que comprende una mayoría ponderal simple de moléculas que contienen al menos 3 unidades
monoméricas. Estas unidades están unidas covalentemente al menos a otra unidad monomérica u otro grupo funcional,
que contiene menos de una mayoría ponderal simple de moléculas de la misma masa molecular. Es preciso que tales
moléculas estén distribuidas dentro de un rango de masas moleculares cuyas diferencias de masa molecular son debidas
principalmente a las diferencias en el número de unidades monoméricas.

Algunos grupos de polímeros comunes son: polímeros sintéticos no degradables [por ejemplo, polietileno, poli
(metacrilato de metilo) (PMMA), silicona]; polímeros que ocurren de forma natural (por ejemplo, celulosa, alginato,
gelatina, colágeno); y polímeros biodegradables [por ejemplo, poli (ácido L-láctico) (PLLA), ácido poliglicólico].

A.2.2.1 LMWC contenidos en polímeros

Los materiales poliméricos contienen a menudo una pequeña cantidad de LMWC tales como aditivos, catalizadores,
agentes de procesado, y productos de radiación. Estos LMWC pueden ser potencialmente genotóxicos. En los casos en
que se produce un contacto invasivo, los LMWC pueden migrar al exterior del polímero y alojarse en el paciente. Por
tanto, se debería evaluar el riesgo genotóxico de los LMWC contenidos en polímeros.

La migración de los LMWC desde el producto polimérico hasta el fluido corporal se considera un fenómeno similar a la
migración de LMWC desde el recipiente alimentario hasta el producto alimentario que contiene. En el recipiente
alimentario, la velocidad de migración se expresa como

– una función del contenido total del LMWC en el polímero;

– el coeficiente de difusión del LMWC en el polímero; y

– la constante de equilibrio de partición del LMWC entre el polímero y el producto alimentario (véase la referencia [82]).

Las suposiciones y ecuaciones establecidas para los recipientes alimentarios se pueden por tanto utilizar en las
evaluaciones del riesgo de los LMWC contenidos en productos sanitarios.

A.2.2.2 Oligómeros
Un oligómero es una molécula polimérica que contiene solamente un número pequeño de unidades monoméricas
(dímero, trímero, tetrámero). Los oligómeros pueden estar presentes en los polímeros y pueden migrar hasta el exterior
del mismo. Los oligómeros con grupos funcionales químicamente reactivos en su estructura constituyen un posible
peligro para la salud debido a su potencial genotóxico. En 1993, la 3ª convención de expertos de la OECD sobre
polímeros [78] concluyó que se deberían considerar los parámetros siguientes para estudiar sus efectos sobre la salud del
paciente al tomar decisiones sobre polímeros,

– promedio de la masa molecular y número de unidades monoméricas;

– contenido de masa molecular baja;

– presencia de grupos funcionales reactivos; y

– presencia de metales biodisponibles, que forman parte de la estructura del polímero.

Los grupos funcionales reactivos se definen, por ejemplo, como sigue: haluros ácidos, anhídridos de ácido, aldehídos,
hemiacetales, metilolamidas, derivados amínicos o ureicos, alcoxisilanos ( C2), éteres alílicos, olefinas conjugadas,
cianatos, epóxidos, iminas, posiciones orto o para no sustituidas del hidroxilo fenólico, acrilatos y metacrilatos en
cadena lateral, aziridinas, carbodiimidas, halosilanos, hidrosilanos, hidrazinas, isocianatos, isotiocianatos, alfa- o beta-
lactonas, metoxi o etoxi silanos, vinilsulfonas o compuestos análogos (véase la referencia [79]).

A.2.2.3 Polímeros biodegradables

Un polímero biodegradable es un polímero que está diseñado, o que se espera razonablemente que se degrade,
descomponga o despolimerice de forma sustancial, incluyendo aquellos polímeros que pudieran descomponerse de
forma sustancial después de su fabricación y utilización, aunque no esté previsto realmente que lo hagan. Para los
polímeros biodegradables, la cantidad total de LMWC en el polímero se libera en el cuerpo. La mayoría de los
polímeros biodegradables son similares al poliéster, y no poseen generalmente grupos funcionales reactivos según se
definen en el informe de la OECD. El LMWC contenido o añadido al polímero biodegradable se debería evaluar para
conocer su riesgo genotóxico.

A.2.3 Materiales inorgánicos: Residuos producidos por el desgaste de metales, aleaciones y cerámicas
La cantidad y genotoxicidad de los iones metálicos liberados de materiales inorgánicos (por ejemplo, acero inoxidable,
aleación de titanio, hidroxiapatita, fosfato tricálcico, alúmina y zirconia) constituyen un problema para la salud. Por
ejemplo, se han observado efectos genotóxicos in vivo en linfocitos de tejido periprostético de un paciente implantado
con implantes de cadera con contacto metal-metal. Muchos iones metálicos juegan un papel regulatorio importante y
este papel depende de sus características químicas y de la valencia del ión. Los iones metálicos se unen a proteínas en
los fluidos fisiológicos (tales como sangre, linfa y orina) y su biodistribución puede depender de las diferentes
fracciones de partición. Los iones metálicos llegan al interior de la célula donde se pueden unir a material nuclear y
alterar la transmisión de señales químicas celulares en un entorno tanto local como sistémico. Por tanto, se debería
evaluar y determinar de la forma más exhaustiva el perfil genotóxico de los iones metálicos basándose en los datos
publicados.

A.3 Métodos de preparación de la muestra

A.3.1 Generalidades
El diseño ideal de preparación de la muestra para estimar el riesgo genotóxico de un producto es aplicar al sistema de
ensayo la cantidad total de los extraíbles a partir del producto completo. Sin embargo, este método no es práctico para
productos de un tamaño relativamente grande. Para los productos de tamaño relativamente grande, se extrae una
porción de la muestra de ensayo utilizando un procedimiento apropiado de preparación de la muestra, y el extracto se
aplica al sistema de ensayo.

La selección de un procedimiento de preparación de la muestra para cualquier material o producto previsto para
utilización en humanos requiere un método estructurado que tenga en cuenta la composición química y las propiedades
fisicoquímicas del material o producto. La preparación de la muestra se debería efectuar siguiendo el árbol de
decisiones de la figura A.1. Esta figura resume el proceso de decisión utilizado para seleccionar el método de extracción
(método A, B, o C) para un material de un producto, a menos que el producto sanitario o el material del producto
sanitario tengan que evaluarse de acuerdo con un procedimiento especial de preparación de la muestra descrito en el
capítulo A.4.

Debería tenerse la certeza de que los disolventes o disolventes de extracción utilizados no causan ninguna reacción
química con la muestra de ensayo.

El método A requiere la aplicación directa de la muestra de ensayo al sistema de ensayo y se utiliza cuando la muestra
de ensayo se puede disolver o suspender en un disolvente apropiado compatible con el sistema de ensayo.

Figura A.1 – Método estructurado para seleccionar un procedimiento de preparación de la muestra

Cuando la muestra de ensayo no es ni soluble ni suspendible en ningún disolvente polar o apolar, los métodos de
extracción B y C se escogen dependiendo de las características físicas de los materiales que componen el producto. La
selección del método B o C depende del porcentaje de extraíbles obtenidos de la muestra de ensayo.

Se debería notificar el porcentaje de extraíbles (notificados como un porcentaje de la cantidad del residuo respecto a la
masa total del producto, véase también A.3.3.4) con cada disolvente. Los disolventes de extracción comunes son
metanol y acetona.

El metanol es mejor para extraer sustancias solubles en agua mientras que la acetona es mejor para extraer las sustancias
solubles en grasas. Los extractos en metanol y acetona se evaporan a sequedad por separado para determinar el
porcentaje de extraíbles retirados del sistema de ensayo por cada disolvente. Se debería notificar el porcentaje de
extraíbles con cada disolvente.

Se pueden utilizar disolventes adicionales en los ensayos preliminares de los materiales si ello se justifica de forma
apropiada. Si se utilizan disolventes volátiles, éstos pueden degradar el material de ensayo o pueden no extraer el
residuo del material de ensayo de forma eficaz.

La tabla A.1 puede ser útil para escoger un disolvente apropiado para la extracción de los productos sanitarios. Esta
tabla enumera los disolventes de extracción comunes y su coeficiente de partición etanol-agua, log Kow. Cuanto más
negativo es el log Kow del disolvente mayor es su solubilidad en agua respecto a su solubilidad en etanol. Cuanto más
positivo es el log Kow del disolvente mayor es su solubilidad en etanol respecto a su solubilidad en agua. Se debería
justificar la selección del disolvente.

Tabla A.1 – Disolventes de extracción comunes

Disolvente log Kow

Dimetilformamida – 1,01
Metanol – 0,74
Etanol – 0,30
Acetona/2-propanona – 0,24
a
Diclorometano + 1,25
Cloroformoa + 1,97
a
Hexano + 3,90
a
Estos productos químicos pueden estar sujetos a controles en cumplimiento de los requisitos de seguridad pertinentes.

A.3.2 Método A
La muestra de ensayo se disuelve o se suspende (parcialmente disuelta) en el disolvente. El volumen final de la
preparación de la muestra de ensayo en el sistema de ensayo con células de mamífero in vitro no debería ser superior a
10%, si el artículo de ensayo se disuelve en un disolvente acuoso tal como agua o solución salina. La concentración
máxima ensayada en un sistema de ensayo con células de mamífero in vitro es 5 mg/ml. En el ensayo de mutación
inversa en bacterias, se deberían aplicar 100 l de la preparación de la muestra de ensayo a una placa de agar. La
concentración máxima para el ensayo de mutación inversa en bacterias es 5 mg/placa.

La selección de la dosis se debería basar en el perfil de toxicidad dentro del contexto del ensayo genotoxicológico. En
algunos casos pueden ser útiles ensayos preliminares de rango de dosis para lograr la selección apropiada de la dosis.
También puede ser apropiado seleccionar una dosis de una concentración única máxima si no se espera que exista
toxicidad. Véanse las instrucciones para la evaluación de la dosis dentro de cada ensayo en el Informe Técnico
ISO/TR 10993-33.

Para el ensayo in vivo, el volumen máximo de preparación de la muestra de ensayo que se puede administrar por
inyección de una vez es normalmente 20 ml/kg de masa corporal para ratones y 10 ml/kg de masa corporal para ratas.
Para las preparaciones no tóxicas de la muestra de ensayo, la dosis máxima es 2 000 mg/kg de masa corporal. Para las
preparaciones tóxicas de la muestra de ensayo, se debería efectuar un estudio para averiguar el rango de dosis antes de
efectuar el estudio principal in vivo para determinar la toxicidad de la preparación de la muestra de ensayo y asignar los
niveles de dosis para el estudio principal.

Si procede, se permite utilizar los datos de los estudios de toxicidad aguda para minimizar el número de animales
utilizados.

Se recomienda a los usuarios consultar la información del Informe Técnico ISO/TR 10993-33.
[107]
Los principios establecidos en la referencia se pueden utilizar como recomendaciones para determinar las
soluciones de dosis máximas.

A.3.3 Método B

A.3.3.1 Generalidades
Se debería efectuar un ensayo previo de acuerdo con la preparación de la muestra de ensayo (véase A.3.3.2) y el
procedimiento de extracción (véase A.3.3.3) para seleccionar ya sea el método B o el método C.

El método B se selecciona si el porcentaje de extraíbles obtenido en un ensayo previo cumple los criterios siguientes:

a) Para productos con una masa  0,5 g, tales como lentes de contacto o intraoculares, se debería utilizar el método B si
el porcentaje de extraíbles en la muestra de ensayo es  1%.

b) Para productos con una masa  0,5 g, se debería utilizar el método B si el porcentaje de extraíbles en la muestra de
ensayo es  0,5%.

Si el porcentaje de extraíbles no cumple los criterios anteriores, el extracto se debería preparar utilizando el método C.

A.3.3.2 Preparación de la muestra de ensayo

La muestra de ensayo se sumerge en un vehículo de extracción orgánico volátil que extraiga los residuos de la muestra
de ensayo pero que no disuelva la muestra de ensayo. Si el aspecto o la masa de la muestra de ensayo confirma la
degradación parcial, se utiliza el método C. Se ensayan dos o más disolventes para determinar qué disolvente extrae el
mayor porcentaje de extraíbles de la muestra de ensayo (véanse A.3.3.3 y A.3.3.4). Los disolventes comunes para la
extracción son metanol y acetona. El residuo de la muestra de ensayo extraído y evaporado se disuelve o se suspende en
un disolvente compatible con el sistema de ensayo de la genotoxicidad. El volumen final del disolvente orgánico o
acuoso en el cultivo no debería ser superior al 1% (orgánico) y 10% (acuoso), en el ensayo de aberración cromosómica
o en el ensayo de linfoma de conejo. En el ensayo de mutación inversa en bacterias, se deberían aplicar 100 l de la
solución/suspensión de los residuos a una placa de agar. La concentración máxima ensayada en el ensayo de aberración
cromosómica in vitro o en el ensayo de linfoma de conejo in vitro es 5 mg/ml. La concentración máxima ensayada para
el ensayo de mutación inversa en bacterias es 5 mg/placa.

El procedimiento de extracción de la muestra se da en el apartado A.3.3.3. Véase la referencia [86].

Para el ensayo in vivo, el residuo de la muestra de ensayo extraído y evaporado se disuelve o se suspende en vehículos
compatibles con el sistema de ensayo. La selección de la dosis más alta y la vía de administración son las mismas que
las correspondientes al método A.
[107]
Los principios establecidos en la referencia se pueden utilizar como recomendaciones para determinar las
soluciones de dosis máximas.

A.3.3.3 Procedimiento

– Se corta en trocitos pequeños una cantidad apropiada de la muestra de ensayo y los trocitos se colocan en un
recipiente de vidrio junto con el vehículo de extracción. Se debería utilizar una proporción de 1 g para 10 ml o un
volumen suficiente para sumergir la muestra de ensayo. Si la muestra de ensayo no se puede cortar, se utiliza un
volumen suficiente para cubrir la muestra de ensayo, preferiblemente utilizando una proporción de 1 g para 10 ml.

NOTA La información sobre los materiales absorbentes de extracción se incluye en la Norma ISO 10993-12.

– Se extrae la muestra de ensayo durante (24 ± 2) h a temperatura ambiente utilizando una agitación constante.

– Después de la extracción, se filtran los extractos a través de un filtro que posea una baja afinidad de unión a analitos
y sea químicamente resistente para retirar la muestra de ensayo.

– Se vierte el extracto en un matraz en forma de pera que posea una masa constante conocida m1 y el disolvente de
extracción del extracto se evapora a sequedad o a masa constante utilizando un aparato concentrador a presión
reducida a  30 ºC. Se determina la masa del matraz después de la evaporación m2.

– Se calcula el porcentaje de extraíbles.

– Se puede utilizar una porción del residuo para verificar la solubilidad/uniformidad en disolventes compatibles con el
sistema de ensayo.

– No se permite calentar ni el extracto ni las soluciones de dosificación para evitar los cambios químicos de los
residuos o la pérdida de compuestos volátiles.

NOTA El método que utiliza un Soxhlet para la extracción exhaustiva se puede considerar como un método alternativo.

– La evaporación del extracto después de la extracción no es aplicable cuando el residuo que se sospecha presente en
el producto es altamente volátil (por ejemplo, óxido de etileno, monómeros de acrilato de masa molecular baja).

– Para la preparación de la muestra de acuerdo con el método B, ambos extractos de la muestra de ensayo se deberían
utilizar individualmente si se cumplen los criterios para el método B. Si solamente uno de los extractos de la muestra
de ensayo cumple los criterios, se utiliza solamente este extracto para los ensayos de genotoxicidad. El otro extracto
no se utiliza.

– Se disuelve o suspende el residuo de los extraíbles en un disolvente buscando maximizar la concentración de ensayo
para el sistema de ensayo apropiado. Este disolvente se puede identificar, por ejemplo, utilizando el residuo
obtenido en el ensayo previo del método B. Se utiliza esta solución antes de transcurridas 24 h.

A.3.3.4 Expresión de los resultados

Se calcula la masa de los residuos extraídos, WR, en el matraz en forma de pera, determinando el aumento de masa en el
matraz mediante la fórmula (A.1)

WR = m2 – m1 (A.1)

donde

m1 es la masa del matraz vacío;

m2 es la masa del matraz después de la evaporación del extracto.

Se calcula el porcentaje de extraíbles dividiendo la masa de materiales extraíbles por la masa de la muestra de ensayo y
multiplicando por 100 utilizando la ecuación (A.2)

WR
%e   100 (A.2)
m3

donde

%e es el porcentaje de extraíbles;

m3 es la masa de la muestra de ensayo antes de la extracción.

Se registra y se incluye en el informe el porcentaje de extraíbles para cada disolvente.

El informe del estudio debería incluir la justificación de la selección del disolvente de extracción y el porcentaje del
residuo para cada disolvente ensayado.

A.3.4 Método C

A.3.4.1 Generalidades
El método C es un método de extracción de utilización simulada similar al descrito en la Norma ISO 10993-12.

La muestra de ensayo se extrae en un disolvente/vehículo compatible con el sistema de ensayo. La preparación de la

muestra de ensayo se efectúa en el sistema de ensayo. Se utiliza este extracto antes de transcurridas 24 h.

A.3.4.2 Procedimiento

A.3.4.2.1 Para el ensayo de mutación inversa en bacterias, la muestra de ensayo se corta en trocitos pequeños, si es
posible, y se extrae según se especifica en la Norma ISO 10993-12.

A.3.4.2.2 Para los ensayos con células de mamífero in vitro, la muestra de ensayo se corta en trocitos pequeños, si es
posible, y se extrae según se especifica en la Norma ISO 10993-12.

A.3.4.2.3 Si el medio de cultivo sin suero se utiliza como un disolvente polar para la extracción, el extracto de ensayo
se ensaya sin diluir ni mezclar con otras sustancias después de la suplementación con suero antes de dosificar las
células. El extracto de ensayo en el medio de cultivo celular con suero (como un disolvente apolar) se ensaya como un
extracto sin diluir ni mezclar con otras sustancias. Si se utiliza solución salina como un disolvente polar para la
extracción, el extracto de ensayo se debería diluir al 10% con medio de cultivo celular suplementado con suero antes de
dosificar las células. El extracto de ensayo en dimetilsulfóxido o en etanol se debería ensayar al 1% después de la
dilución con medio de cultivo celular suplementado con suero. Para los extractos del ensayo de citotoxicidad, se debería
considerar el límite de citotoxicidad aceptable para los ensayos con objeto de seleccionar la dosis del extracto de ensayo
adecuada.

NOTA 1 Puede ser aceptable también (37 ± 1) ºC durante (48 ± 2) h si se utiliza medio de cultivo celular con o sin suero para la extracción.

A.3.4.2.4 Para el ensayo in vivo, la muestra de ensayo se corta en trocitos pequeños, si es posible, y se extrae según se
especifica en esta parte de la Norma ISO 10993.

A.3.4.2.5 El extracto de ensayo se administra intravenosamente (solución salina) o intraperitonealmente (hidrofóbico)

a animales dependiendo del disolvente utilizado. El volumen administrado no debería ser superior a 20 ml/kg de masa
corporal para ratones ni superior a 10 ml/kg de masa corporal para ratas.

A.4 Recomendaciones adicionales sobre procedimientos especiales de preparación de la

muestra

A.4.1 Polímeros biodegradables

Para los productos hechos con polímeros biodegradables, se puede utilizar un método B modificado para preparar el
material de ensayo para evitar que el LMWC total sea liberado en el paciente. Utilizando disolventes que sean
adecuados para la disolución y reprecipitación, se filtra la solución resultante para retener los precipitados. Se notifica
cualquier precipitado en el papel de filtro después de la filtración. Se evaporan los disolventes del filtrado (por ejemplo,
se podría utilizar un evaporador rotatorio). Se registra la cantidad de residuo generado.

Se disuelve o suspende el residuo en un disolvente/vehículo compatible con el sistema de ensayo y se aplica al sistema
de ensayo.

A.4.2 Materiales inorgánicos: Residuos producidos por el desgaste de metales, aleaciones y cerámicas
Para evaluar la genotoxicidad de productos hechos de materiales inorgánicos tales como prótesis de articulación de la
cadera, la preocupación principal es el potencial genotóxico de los iones metálicos liberados de los residuos producidos
por el desgaste y/o la corrosión durante la exposición clínica, y sus cantidades respectivas. Dado que los ensayos en esta
norma están diseñados para medir el potencial genotóxico de los extractos del producto terminado (en solución) y no el
material particulado, será necesario desarrollar métodos alternativos para evaluar el potencial genotóxico de los residuos
producidos por el desgaste o por las partículas.

A.4.3 Productos químicos de masa molecular baja (LMWC)

Cuando la muestra de ensayo está compuesta de uno o múltiples LMWC, el riesgo genotóxico se puede evaluar
aplicando su solución/suspensión en un vehículo compatible con el sistema de ensayo. Es aplicable el método A.

Anexo B (Informativo)

Diagrama de flujo para la evaluación de seguimiento

Figura B.1 – Diagrama de flujo para la evaluación de seguimiento

Anexo C (Informativo)

Justificación de los sistemas de ensayo

C.1 Ensayos de genotoxicidad

La función principal de los ensayos de genotoxicidad es investigar los riesgos de que las células germinales y las células
somáticas sufran cambios genéticos, utilizando para ello células u organismos de ensayo. Los datos científicos avalan
generalmente la hipótesis de que el daño que experimenta el ADN en células somáticas es un episodio crítico en la
iniciación del cáncer. Por ello, algunos ensayos que detectan el daño del ADN son útiles para la investigación de la
presunta actividad carcinógena.

Mientras que en los ensayos toxicológicos clásicos pueden observarse varios parámetros o mecanismos genotóxicos perti-
nentes dentro de un diseño experimental, lo mismo no es cierto para la toxicología genética. La diversidad de los meca-
nismos de genotoxicidad hace normalmente imposible la detección de más de uno de ellos en un único sistema de ensayo.

En las recomendaciones para los ensayos se citan aproximadamente 15 ensayos diferentes. La selección de los más
apropiados de éstos para cumplir un requisito particular depende de un número de factores. Éstos incluyen el tipo de
cambio genético que el ensayo es preciso que detecte, o la capacidad metabólica del sistema de ensayo.

Debe destacarse que no existe ningún acuerdo internacional sobre la mejor combinación de tales ensayos para un fin
particular, aunque ha habido intentos de armonizar la selección de los ensayos más apropiados. Puede también ser
pertinente indicar que existen otros ensayos de mutagenidad en uso o en desarrollo, que si bien no están avalados por
una directriz OECD, pueden también ser útiles. Debería señalarse la existencia del acuerdo ICH/S2B para fármacos.

Los productos químicos que interaccionan con el ADN producen lesiones, que después de la influencia de diversos
procesos de reparación, pueden conducir a cambios genéticos de los genes, por ejemplo, mutaciones de un gen o de la
posición del mismo, pequeñas deleciones, recombinación mitótica o diversos cambios cromosómicos
microscópicamente visibles, y existen ensayos disponibles para investigar cada uno de estos episodios.

Los ensayos actuales a corto plazo, no pueden por supuesto simular todas las etapas del proceso cancerígeno y se supo-
ne frecuentemente que detectan solamente el episodio que conduce a la fase de iniciación, es decir, la capacidad de in-
ducir una lesión mutagénica o clastogénica. Por tanto, el valor principal de estos procedimientos es su capacidad de
identificar substancias que en ciertas condiciones de exposición, pueden ya sea causar cáncer por un mecanismo predo-
minantemente genotóxico o inducir la fase inicial del proceso cancerígeno. Es evidente, por la complejidad del proceso
cancerígeno comparado con la simplicidad relativa de los ensayos a corto plazo, que si bien proporcionan información
cualitativa útil, se precisa una precaución considerable en su interpretación en términos de la actividad carcinógena.

Dado que ningún ensayo por sí mismo ha demostrado ser capaz de detectar mutágenos y carcinógenos de mamífero con
un nivel aceptable de precisión y reproducibilidad, es práctica científica usual aplicar estos ensayos en “baterías”. La
información inicial sobre la mutagenidad de una sustancia puede obtenerse utilizando ensayos que midan las
mutaciones de genes y el daño cromosómico. Dado que se precisan procedimientos separados para investigar estos
mecanismos genotóxicos, se necesita una batería de ensayos.

Si existe disponible información pertinente adicional, tal como los procesos de absorción, distribución, metabolismo y
excreción (ADME) que indican que existen lixiviables en lugares orgánicos específicos, se debería considerar un
ensayo de genotoxicidad in vivo. La decisión de cuál de los ensayos in vivo ha de efectuarse dependerá de los lugares
orgánicos en donde se están acumulando los lixiviables. En muchos casos, será apropiado un ensayo in vivo para
determinar daño cromosómico en células hematopoyéticas de roedor. En la mayoría de los casos, estos ensayos no
disponen de protocolos reconocidos internacionalmente. Para la mayoría de los productos sanitarios y/o materiales para
los que se considera necesario un ensayo de genotoxicidad, es suficiente una batería de ensayos in vitro normalizados
para proporcionar la evidencia del potencial genotóxico de la muestra de ensayo.

C.2 Estudios de carcinogenidad

El objetivo de un estudio de carcinogenidad a largo plazo es observar los animales de ensayo, durante una porción larga
de su periodo de vida, para detectar el desarrollo de lesiones neoplásicas, durante o después de la exposición a diversas
dosis de una muestra de ensayo a través de una vía de administración apropiada. Tal ensayo precisa una planificación y
documentación cuidadosas del diseño experimental (véase el anexo E), una alta calidad de investigación patológica y un
análisis estadístico no sesgado.

C.3 Ensayos de toxicidad para la reproducción y el desarrollo

Los ensayos de toxicidad para la reproducción cubren las áreas de reproducción, fertilidad y desarrollo del embrión-
feto. La fertilidad puede resultar afectada tanto en machos como en hembras y los efectos pueden ir desde un ligero
descenso de la capacidad reproductora hasta la esterilidad completa. Los efectos tóxicos sobre el embrión o el feto en
desarrollo pueden afectar la salud de la descendencia.

La teratogenidad atañe a los efectos adversos de una sustancia sobre el embrión y el feto en desarrollo. La toxicidad
para la reproducción tiene un impacto importante sobre la salud de la humanidad. Las técnicas de ensayo están
desarrollándose y el concepto de ensayos combinados que cubran todos los aspectos de la toxicología para la
reproducción parece prometedor.

Anexo D (Informativo)

Sistemas de ensayo de transformación celular

Los ensayos con modelos de roedor in vivo se utilizan para la investigación experimental del riesgo carcinógeno de los
productos químicos en humanos. Sin embargo, el ensayo de carcinogenidad en roedor es caro y requiere bastante
tiempo. Se han desarrollado varias alternativas in vitro a los métodos basados en animales. Entre estos métodos, se han
propuesto los ensayos de transformación celular que simulan algunas etapas de la carcinogénesis multietapa in vivo,
para predecir el potencial carcinógeno de los productos químicos.

Comparados con los ensayos in vivo, los ensayos de transformación celular in vitro son rápidos, coste eficaces y
proporcionan un medio para la criba inicial del potencial carcinógeno. La transformación celular se ha definido como la
inducción de determinadas alteraciones fenotípicas en células cultivadas que son características de las células
cancerosas. Estas alteraciones fenotípicas pueden ser inducidas por la exposición de células de mamífero a agentes
carcinógenos. Las células transformadas que han adquirido las características de células malignas tienen la capacidad de
inducir tumores en animales susceptibles. Las células transformadas in vitro exhiben cambios morfológicos
relacionados con la neoplasia. Este fenómeno de transformación celular morfológica implica cambios en el
comportamiento y en el control del crecimiento de las células cultivadas, tales como la alteración de la morfología
celular, un patrón desorganizado del crecimiento de la colonia, y la adquisición de crecimiento independiente de
anclaje.

El ensayo de transformación celular en el embrión de hámster sirio (SHE, Syrian hámster embryo) ha sido descrito
como el ensayo a corto plazo con más alto valor predictivo para los carcinógenos de roedores. Schectman [34] describe
cómo ha cambiado con el tiempo la metodología de los ensayos de transformación celular en roedor habiéndose llegado
a un ensayo con células SHE que es más reproducible que los métodos anteriores. Los ensayos de transformación
celular son también capaces de detectar algunos carcinógenos no genotóxicos, lo que representa una ventaja en
comparación con los ensayos de genotoxicidad. Sin embargo, los ensayos de transformación celular son técnicamente
difíciles y su mecanística no está todavía bien comprendida.

Además, un ensayo de transformación celular de dos etapas en células Balb/c 3T3 o en células SHE parece
potencialmente útil no solamente para detectar compuestos que inducen transformación celular sino también para
detectar promotores tumorales. Se ha demostrado que la transformación celular morfológica se inicia a partir de una
mutación puntual, daño cromosómico, aneuploidia u otros efectos asociados con la proliferación celular. Sin embargo,
dado el amplio margen de mecanismos de la posible actuación de los carcinógenos no genotóxicos, y especialmente
porque algunos de los efectos se manifiestan selectivamente en un tejido, es poco probable que una combinación de este
ensayo y de otro para detectar agentes aneugénicos sea suficiente para detectar todos los tipos de carcinógenos no
genotóxicos. Por lo tanto, para aumentar el espectro de los carcinógenos no genotóxicos que se pueden detectar in vitro,
será necesario desarrollar una batería de ensayos capaces de detectar los mecanismos principales de actuación de estos
agentes.

En las referencias [13] y [14] se dan las recomendaciones y una revisión de los ensayos de transformación celular in vitro.

Anexo E (Normativo)

Consideraciones sobre los estudios de carcinogenidad efectuados como estudios

de implantación

E.1 Carcinogénesis por cuerpo extraño

Los tumores inducidos por implantes son bien conocidos en experimentos que utilizan ratas, y este fenómeno se
denomina “carcinogénesis por cuerpo extraño” o “carcinogénesis de estado sólido”. El fenómeno se resume en la
explicación a continuación.

Los tumores se desarrollan normalmente alrededor o cerca de un implante, con una frecuencia que depende de varios
factores:

– el tamaño del implante (implantes de mayor tamaño producen generalmente mas sarcoma que los de menor tamaño);

– la forma del implante;

– la suavidad superficial del implante (los implantes con superficies rugosas son menos carcinógenos que aquéllos con
superficies lisas);

– la continuidad del área superficial (cuanto más grandes son los orificios o poros del implante, tanto más baja es la
incidencia del tumor);

– para ciertos materiales, su espesor (implantes más gruesos producen más sarcomas);

– el tiempo que el implante permanece en contacto con el tejido.

El mismo material que produce tumores en forma de película o lámina, producirá la mayoría de las veces menos
tumores o ninguno cuando se implanta en forma de polvo, de hilo o como un material poroso. Véanse las referencias 37
y 38.

Los tumores debidos a este fenómeno comienzan primeramente a ser detectados transcurridos entre 8 meses y 9 meses
después de la implantación. La incidencia continúa aumentando después de este periodo de latencia.

Por el contrario, muchos informes indican una diferencia en la incidencia de formación de tumor entre materiales
diferentes cuya forma y tamaño son similares utilizando el mismo protocolo experimental en animales.

La visión de los aspectos mecanísticos se resume en una monografía IARC. Véanse las referencias 363738.

E.2 Consideraciones sobre el bienestar de los animales de ensayo

La realización de los estudios de carcinogenidad por implantación requiere la utilización de procedimientos
quirúrgicamente invasivos en un gran número de animales para el grupo de ensayo y el grupo de control (simulacro de
implantación).

Anexo F (Informativo)

Ensayos in vitro de toxicidad para el embrión

En el campo de la toxicidad para el desarrollo, existen disponibles una variedad de alternativas a los ensayos
exclusivamente con animales. Durante los últimos 30 años se ha desarrollado un amplio espectro de ensayos in vitro
que van desde el cultivo de células, tejidos y órganos hasta los cultivos de embriones completos. Siguiendo las
recomendaciones de una reunión de trabajo del ECVAM (European Center for the Validation of Alternative Methods)
sobre toxicidad para la reproducción, véase la referencia [87], el ECVAM inició y financió un estudio de validación de
tres ensayos in vitro de toxicidad para el embrión. En dos de estos ensayos, se utilizaron hembras preñadas como
animales de laboratorio para obtener tejido embriónico, tanto células embrionarias primarias en el ensayo micromass
(MM) en ratón, véase la referencia [88], como embriones en el ensayo de cultivo de embrión entero (WEC) de rata,
véanse las referencias [89] [90] [91] [92]. A diferencia de éstos, en el ensayo de células germinales embrionarias, véanse las
referencias [92] [93] [94] [95], se utilizó una sola línea celular germinal embrionaria (EST) de ratón. Los objetivos principales
del estudio de validación fueron evaluar las concordancias de los tres ensayos in vitro para discriminar entre tres niveles
de toxicidad de los compuestos: no tóxico para el embrión, ligeramente tóxico para el embrión y fuertemente tóxico
para el embrión. Los tres ensayos in vitro de toxicidad para el embrión demostraron ser aplicables para ensayar un
grupo diverso de productos químicos con diferentes potenciales tóxicos para el embrión, véase la referencia [96]. Los
resultados obtenidos en el ensayo ciego de la fase definitiva del estudio de evaluación del ECVAM fueron reproducibles
por comparación interlaboratorios e intralaboratorio, y las concordancias entre los potenciales tóxicos para el embrión
comparando los datos in vitro con los datos in vivo fueron buenas para el ensayo EST y el ensayo WEC (con un modelo
de predicción, PM1) y suficientes para el ensayo MM y el ensayo WEC (con otro modelo de predicción, PM2), de
acuerdo con los criterios de concordancia (véase la tabla F.1) definidos por el equipo gestor del ensayo antes de realizar
el estudio de validación formal, véase la referencia [96]. En la tabla F.2 se da un resumen de la comparación de las
clasificaciones in vitro y de las clasificaciones in vivo, basadas en el estudio de 14 productos químicos utilizados en el
estudio de validación. Se ha publicado un informe sobre los resultados del estudio de validación del ECVAM y,
además, un informe sobre la selección de los productos químicos de ensayo y tres estudios detallados sobre los
parámetros bioestadísticos de cada uno de los ensayos in vitro de toxicidad para el embrión incluidos en el estudio de
validación, véanse las referencias [96] [97] [98] [99] [100].

Tras evaluar los resultados, el comité asesor científico del ECVAM (ESAC) concluyó que los tres ensayos in vitro de
toxicidad para el embrión habían sido suficientemente validados y se podían aplicar a la determinación del potencial
tóxico para el embrión de fármacos y otros productos químicos, véase la referencia [101]. Además, el ESAC recomendó
concertar una reunión de trabajo con objeto de producir un documento conteniendo recomendaciones sobre la
aplicabilidad de los tres métodos de ensayo científicamente válidos para la realización de ensayos de toxicidad para la
reproducción. Por lo tanto, ECVAM y ZEBET (Centre for the Documentation and Evaluation of Alternatives to Animal
Experiments) celebraron una segunda reunión de trabajo sobre la toxicidad para el embrión para evaluar más
extensamente las aplicaciones prácticas de los tres ensayos in vitro de toxicidad para el embrión. Se han publicado los
resultados de esta reunión de trabajo, véase la referencia [102].

Tabla F.1 – Criterios definidos por el grupo gestor del estudio para evaluar los datos de validación del ensayo

Criterios Porcentaje de concordancia

Aleatoria 33%
Suficiente  65%
Buena  75%
Excelente  85%

Tabla F.2 – Resumen de los resultados de las clasificaciones (todos los datos [88])

WEC
Clasificación EST MM
PM1 PM2
Predictividad (no tóxico para el embrión) 72% 57% 56% 70%
Predictividad (ligeramente tóxico para el embrión) 70% 71% 75% 76%
Predictividad (fuertemente tóxico para el embrión) 100% 100% 79% 100%
Precisión (no tóxico para el embrión) 70% 80% 70% 80%
Precisión (ligeramente tóxico para el embrión) 83% 60% 45% 65%
Precisión (fuertemente tóxico para el embrión) 81% 69% 94% 100%
Exactitud 78% 70% 68% 80%

Bibliografía

Bibliografía general

[1] OECD 474, Mammalian Erythrocyte Micronucleus Test.

[2] OECD 475, Mammalian Bone Marrow Chromosome Aberration Test.

[3] OECD 478, Genetic Toxicology. Rodent Dominant Lethal Test.

[4] OECD 479, Genetic Toxicology. In vitro Sister Chromatid Exchange Assay in Mammalian Cells.

[5] OECD 480, Genetic Toxicology. Saccharomyces cerevisiae. Gene Mutation Assay.

[6] OECD 481, Genetic Toxicology. Saccharomyces cerevisiae. Miotic Recombination Assay.

[7] OECD 482, Genetic Toxicology. DNA Damage and Repair, Unscheduled DNA Synthesis in Mammalian Cells In
vitro.

[8] OECD 483, Mammalian Spermatogonial Chromosome Aberration Test.

[9] OECD 484, Genetic Toxicology. Mouse Spot Test.

[10] OECD 485, Genetic Toxicology. Mouse Heritable Translocation Assay

[11] OECD 486, Unscheduled DNA Synthesis (UDS) Test with Mammalian Liver Cells In vivo.

[12] OECD 488, Transgenic Rodent Somatic and Germ Cell Gene Mutation Assays.

[13] Official Journal of the European Communities, L 133/73, May 1988, concerning in vitro cell transformation
tests.

Bibliografía para animales transgénicos

[14] GORELICK N.J. Overview of mutation assays in transgenic mice for routine testing. Environ. Mol. Mutagen.
1995, 25 pp. 218–230.

[15] PROVOST G.S., ROGERS B.J., DYCAICO M.J., CARR G. Evaluation of the transgenic Lambda/LacI mouse model
as a short-term predictor of heritable risk. Mutat. Res. 1997, 388 pp. 129–136.

[16] KRISHNA G., URDA G., THEISS J. Principles and practice of integrating genotoxicity evaluation into routine
toxicology studies: a pharmaceutical industry perspective. Environ. Mol. Mutagen. 1998, 32 pp. 115–120.

[17] MACGREGOR J.T. Transgenic animal models for mutagenesis studies: role in mutagenesis research and
regulatory testing. Environ. Mol. Mutagen. 1998, 32 pp. 106–109.

[18] KOHLER S.W., PROVOST G.S., KRETZ P.L., DYCAICO M.I., SORGE J.A., SHORT J.M. Development of a short-
term in vitro mutagenesis assay: The effect of methylation on the recovery of a lambda phage shuttle vector from
transgenic mice. Nucleic Acids Res. 1990, 18 pp. 3007–3013.

[19] Short, JM., Kohler, SW. and provost, GS. The use of lambda phage shuttle vectors in transgenic mice for
development of a short term mutagenicity assay. In: Mutation and the environment. Wiley-Liss, New York,
1990, pp. 355–67.

Bibliografía para ensayos de transformación celular

[20] LEBOEUF R.A., KERCKAERT K.A., AADEMA M.J., ISFORT R.J. Use of the Syrian hamster embryo and
BALB/c 3T3 cell transformation for assessing the carcinogenic potential of chemicals. IARC Sci. Publ. 1999,
146 pp. 409–425. Available at:
http://apps.who.int/bookorders/anglais/detart1.jsp?sesslan=1&codlan=1&codcol=73&codcch=146

[21] LEBOEUF R.A., KERCKAERT K.A., AADEMA M.J., GIBSON D.P., BRAUNINGER R., ISFORT R.J. The pH 6.7
hamster embryo cell transformation assay for asessing the carcinogenic potential of chemicals. Mutat. Res. 1996,
356 pp. 65–84.

[22] AARDEMA M.J., ISFORT R.J., THOMPSON E.D., LEBOEUF R.A. The low pH Syrian hamster embryo (SHE) cell
transformation assay: a revitalized role in carcinogenic prediction. Mutat. Res. 1996, 356 pp. 5–9.

[23] ISFORT R.J., LEBOEUF R.A. The Syrian hamster embryo (SHE) cell transformation system: a biologically
relevant in vitro model – with carcinogen predicting capabilities – of in vivo multistage neoplastic
transformation. Crit. Rev. Oncog. 1995, 6 pp. 251–260.

[24] Advances in Modern Environment Toxicology, Vol.1. Mammalian Cell Transformation by Chemical
Carcinogens. N. Mishra, V. Dunkel, and M. Mehlman (eds). Senate Press: Princeton Junction (New Jersey,
08550), 1981.

[25] TRANSFORMATION ASSAYS OF ESTABLISHED CELL LINES. Mechanisms and Application. T. Kakunaga and H.
Yamasaki (eds). Proceedings of a Workshop Organized by IARC in Collaboration with the US National Cancer
Institute and the US Environmental Protection Agency, Lyon 15-17 Feb. 1984. IARC Scientific Publication
No. 67.

[26] BARRETT J.C., OHSHIMURA M., TANAKA N., TSUTSUI T. Genetic and Epigenetic Mechanisms of Presumed
Nongenotoxic Carcinogens. In: Banbury Report 25. Nongenotoxic Mechanisms in Carcinogenesis, 1987,
pp. 311–24.

[27] OSHIMURA M., HESTERBERG T.W., TSUTSUI T., BARRETT J.C. Correlation of Asbestos-induced Cytogenetic
Effects with Cell Transformation of Syrian Hamster Embryo Cells in Culture. Cancer Res. 1984 Nov., 44
pp. 5017–5022.

[28] BARRETT J.C., OSHIMURA M., TANAKA N., TSUTSUI T. Role of Aneuploidy in Early and Late Stages of
Neoplastic Progression of Syrian Hamster Embryo Cells in Culture. In: Aneuploidy, (DELLARGO W.L., VOYTEK
P.E., HOLLAENDER A., eds.). Plenum Publishing, 1985.

[29] FITZGERALD D.J., YAMASAKI H. Tumor promotion: Models and assay systems. Teratogenesis Carcinog.
Mutage. 1990, 10 (2) pp. 89–102.

[30] KUROKI T., MATSUSHIMA T. Performance of short-term tests for detection of human carcinogens. Mutagenesis.
1987, 2 (1) pp. 333–337.

[31] RAY V.A. et al. An approach to identifying specialized batteries of bioassays for specific classes of chemicals:
Class analysis using mutagenicity and carcinogenicity relationships and phylogenetic concordance and
discordance patterns. 1. Composition and analysis of the overall data base. A report of phase II of the U.S.
Environmental Protection Agency Gene-Tox Program. Mutat. Res. 1987, 3 pp. 197–241.

[32] DUNKEL, VD., SCHECHTMAN, LM., TU, AS., SIVAK, A., LUBET, RA. and CAMERON, TP. Interlaboratory
evaluation of the C3H/10T1/2 cell transformation assay. Environ. Mol. Mutagen, 1988, 12 (1), No. 1, pp. 12–31.

[33] JONES C.A., HUBERMAN E. CALLAHAM, MF., TU, A., HALLOWEEN, W., PALLOTA, S., SIVAK, A., LUBET, RA.,
AVERY, MD., KOURI, RE., SPALDING, J. and TENNANT, RW. An interlaboratory evaluation of the Syrian hamster
emryo cell transformation assay using eighteen coded chemicals. Toxicol. In Vitro. 1988, 2 (2) pp. 103–116.

[34]. SCHECTMAN, Rodent cell transformation assays. A brief historical perspective. Mutat. Res. 2012, 744 (1)
pp. 3-7.

Bibliografía para ensayos de genotoxicidad y carcinogenidad

[35] MORITA T., ASANO N., AWOGI T., SASAKI Y.F., SATO S., SHIMADA H. et al. Evaluation of the rodent
micronucleus assay in the screening of IARC carcinogens (groups 1, 2A and 2B) the summary report of the 6th
collaborative study by CSGMT/JEMS MMS. Collaborative Study of the Micronucleus Group Test. Mammalian
Mutagenicity Study Group. Mutat. Res. 1997, 389 (1) pp. 3–122.

[36] IARC Monographs on the Evaluation of the Carcinogenic Risk of Chemicals to Humans. Some Monomers,
Plastics, and Synthetic Elastomers and Acrolein, Vol. 19, 1979, pp. 41.

[37] IARC Monographs on the Evaluation of the Carcinogenic Risk of Chemicals to Humans. Surgical Implants and
Other Foreign Bodies, Vol. 74, 1999, pp. 225–8.

[38] IARC Monographs on the Evaluation of the Carcinogenic Risk of Chemicals to Humans. Surgical Implants and
Other Foreign Bodies, Vol. 74, 1999, pp. 282–97.

[39] NAKAMURA A. et al. Difference in tumor incidence and other tissue responses to polyetherurethanes and
polydimethylsiloxane in long-term subcutaneous implantation into rats. J. Biomed. Mater. Res. 1992, 1992
pp. 631–650.

[40] TSUCHIYA T., NAKAMURA A. A new hypothesis of tumorigenesis induced by biomaterials: Inhibitory potentials
of intercellular communication play an important role on the tumor-promotion stage. J. Long Term Eff. Med.
Implants. 1995, 5 pp. 232–242.

[41] Department of Health. Guidelines for the testing of chemicals for mutagenicity. Londong: HMSO, 1989. (Report
on Health and Social Security Subjects No. 35).

[42] DEPARTMENT OF HEALTH. Guidelines for the evaluation of chemicals for carcinogenicity. London: HMSO,
1992. (Report on Health and Social Security Subjects No. 42).

[43] OPPENHEIMER B.S., OPPENHEIMER E.T., STOUT A.P. Sarcomas induced in rats by implanting cellophane. Proc.
Soc. Exp. Biol. Med. 1948, 67 (33).

[44] BRAND K.G., JOHNSON K.H., BUON L.C. Foreign Body, Tumorgenesis CRC Crit. Rev. Toxicology, October
1976, pp. 353.

[45] BRAND L., BRAND K.G. Testing of Implant Materials for Foreign Body Carcinogenesis. In Biomaterials, 1980,
p. 819.

[46] WINTER G.D., GIBBONS D.F., PLENK H. JR., eds. Advances in Biomaterials, Volume 3, New York, J. Wiley,
1982.

[47] Biological Bases for Interspecies Extrapolation of Carcinogenicity Data. Hill TA., Wands, RC., Leukroth RW.
Jr. (eds). (Prepared for the Center for Food Safety and Applied Nutrition, Food and Drug Administration,
Department of Health and Human Services, Washington, D.C.) July 1986, Bethesda (MD): Life Science
Research Office, Federation of American Societies for Experimental Biology.

[48] National Toxicology Program Report of the BTP Ad Hoc Panel on Chemical Carcinogenesis Testing and
Evaluation, August 1984, Board of Scientific Counselors.

[49] ASTM F 1439-39 Standard guide for performance of lifetime bioassay for the tumorgenic potential of implant
materials.

[50] CARERE A. et al. Methods and testing strategies for evaluating the genotoxic properties of chemicals, European
Commision Report EUR 15945 EN, ISSN 1018-5593, Luxemburg (1995).

[51] FORAN J.A. (ED), Principles for the selection of doses in chronic rodent bioassays, ILSI Risk Science Institute,
Washington DC, USA, ISBN 0.944398-71-5, 1997.

Bibliografía para ensayos de toxicidad sobre la reproducción y el desarrollo

[52] Guideline for toxicity studies of drugs manual, Chapter 4: Reproductive and developmental toxicity studies. First
edition. Editorial Supervision by New Drugs Division, Pharmaceutical Affairs Bureau, Ministry of Health and
Welfare, 1990, Yakuji Nippo Ltd.

[53] GABRIELSON J.L., LARSSON K.S. Proposal for improving risk assessment in reproductive toxicology. Pharmacol.
Toxicol. 1990, 66 pp. 10–17.

[54] NEUBERT D. et al. Results of in vivo and in vitro Studies for Assessing Prenatal Toxicity. Environ. Health
Perspect. 1986, 70 pp. 89–103.

[55] SADLER T.W., HORTON W.E., WARNER C.W. Whole Embryo Culture: A Screening Technique for Teratogens?
Teratog. Carcinog. Mutagen. 1982, 2 pp. 243–253.

[56] In vitro Methods in Developmental Toxicology: Use in Defining Mechanisms and Risk Parameters. GL. Kimmel
and DM. Kochhar (eds.). Boca Raton (Florida): CRC Press, 1990.

[57] In vitro Embryotoxicity and Teratogenicity Tests. F. Homburger and AH. Goldberg (eds.). Concepts in
Toxicology, Vol. 3. Karger, Basel, 1985.

[58] BRENT R.L. Predicting Teratogenic and Reproductive Risks in Humans from Exposure to Various
Environmental Agents Using In vitro Techniques and In vivo Animal Studies. Cong. Anom. 1988, 28 (Suppl.)
pp. 41–55.

[59] TSUCHIYA T., NAKAMURA A., IIO T., TAKAHASI A. Species Differences between Rats and Mice in the
Teratogenic Action of Ethylenethiourea: In vivo/In vitro Tests and Teratogenic Activity of Sera Using an
Embryonic Cell Differentiation System. Toxicol. Appl. Pharmacol. 1991, 109 pp. 1–6.

[60] TSUCHIYA T. et al. Embryolethality of new herbicides is not detected by the micromass teratogen tests. Arch.
Toxicol. 1991, 65 pp. 145–149.

[61] KISTLER A., TSUCHIYA T., TSUCHIYA M., KLAUS M. Teratogenicity of arotinoids (retinoids) in vivo and in vitro.
Arch. Toxicol. 1990, 64 pp. 616–622.

[62] TSUCHYIA T. et al. Comparative Studies of Embryotoxic Action of Ethylenethiourea in Rat Whole Embryo and
Embryonic Cell Culture. Teratology. 1991, 43 pp. 319–324.

[63] REPORT OF THE. in vitro teratology task force, Organized by the Division of Toxicology, Office of Toxicological
Sciences, Center for Food Safety and Applied Nutrition, Food and Drug Administration. Environ. Health
Perspect. 1987, 72 pp. 200–235.

[64] BASS R. et al. Draft guideline on detection of toxicity to reproduction for medical products. Adverse Drug React.
Toxicol. Rev. 1991, 9 (3) pp. 127–141.

[65] BROWN et al. Screening chemicals for reproductive toxcity: the current approaches - the report and
recommendations of an ECVAM/EST workshop (ECVAM Workshop 12), ATLA, 1995, 23, pp. 868–882.

[66] SPIELMANN R. Reproduction and development. Environ. Health Perspect. 1998, 106 (Suppl. 2) pp. 571–576.

Bibliografía para animales transgénicos como alternativa a ensayos de carcinogenidad durante la vida completa
del animal de ensayo

[68] STORER R.D. Current status and use of short/medium term models for carcinogenicity testing of
pharmaceuticals - scientific perspective. Toxicol. Lett. 2000, 112-113 pp. 557–566.

[69] DASS S.B. et al. Evaluation of the transgenic p53± mouse for detecting genotoxic liver carcinogens in a short-
term bioassay. Cancer Lett. 1999, 143 pp. 81–85.

[70] TENNANT R.W. et al. Genetically altered mouse models for identifying carcinogens. IARC Sci. Publ. 1999, 146
pp. 123–150.

[71] MAHLER J.F. et al. Spontaneous and chemically induced proliferative lesions in TG. AC transgenic and p53-
heterozygous mice. Toxicol. Pathol. 1998, 26 pp. 501–511.

[72] TAMAOKI N. The rasH2 transgenic mouse: Nature of the model and mechanistic studies on tumorigenesis.
Toxicol. Pathol. 2001, 29 (Supplement) pp. 81–89.

[73] USUI T., MUTAI M., HISADA S., TAKAOKA M., SOPER K.E., MCCULLOUGH B. et al. CB6F1-rasH2 mouse:
Overview of available data. Toxicol. Pathol. 2001, 29 (Supplement) pp. 90–108.

[74] MACDONALD J., FRENCH J.E., GERSON R.J., GOODMAN J., INOUE T., JACOBS A. et al. The utility of genetically
modified mouse assays for identifying human carcinogens: A basic understanding and path forward. Toxicol. Sci.
2004, 77 pp. 188–194.

[75] URANO K., SUZUKI S., MACHIDA K., SAWA N., EGUCHI N., KIKUCHI K. et al. Use of IC Tags in short-term
carcinogenicity study on CB6F1 TGrasH2 mice. J. Toxicol. Sci. 2006, 31 pp. 407–418.

Bibliografía para un apropiado procedimiento de preparación de la muestras en ensayos de genotoxicidad

[76] TSUJI K. MIZUMACHI, S., IIDA K., OBA T. Kobunshi Ronbunshu. 1977, 34 (4) pp. 287–290.

[77] OBA T., TSUJI K., NAKAMURA A., SHINTANI H., MIZUMACHI S., KIKUCHI H. et al. Migration of acetylated
hemicellulose from capillary hemodialyzer to blood, causing scleritis and/or iritis. Artif. Organs. 1984, 8 (4)
pp. 429–435.

[78] OECD ENVIRONMENT DIRECTORATE. Chemical group and management committee, Third Meeting of OECD
Experts on Polymers (Tokyo, 14-16 April 1993) Chairman’s Report.

[79] EPA Proposed Rule 40, CFR Part 723 (58 FR 7679), February 8, 1993.

[80] NAKAMURA A., KAWASAKI Y., TAKADA K., AIDA Y., KUROKAWA Y., KOJIMA S. et al. Difference in tumor
incidence and other tissue responses to polyetherurethanes and polydimethylsiloxane in long-term subcutaneous
implantation into rats. J. Biomed. Mater. Res. 1992, 26 pp. 631–650.

[81] NAKAMURA A., KOJIMA S., ISAMA K., UMEMURA T., KAWASAKI Y., TAKADA K. et al. The effects of oligomers
content and surface morphology on foreign-body tumorigenesis with polyetherurethanes: two years
subcutaneous implantation study in rats. J. Long Term Eff. Med. Implants. 1995, 5 pp. 263–273

[82] Reid, RC., Schwope, AD., Sidman, KR.: Modeling the migration of additives from polymer films to foods and
food simulating liquids, MIT Industrial Liaison Program Report 1-14-84 Directory of Current Research:
3.04.077.

[83] MULLER B.P., ENSSLEN S., DOTT W., HOLLENDER J. Improved sample preparation of biomaterials for in vitro
genotoxicity testing using reference materials. J. Biomed. Mater. Res. 2002, 61 pp. 83–90.

[84] MATSUOKA A., ISAMA K., TSUCHIYA T. In vitro induction of polyploidy and chromatid exchanges by culture
medium extracts of natural rubbers compounded with 2-mercaptobenzothiazole as a positive control candidate
for genotoxicity tests. J. Biomed. Mater. Res. 2005, 75 pp. 439–444.

[85] MATSUOKA A., HAISHIMA Y., HASEGAWA C., MATSUDA Y., TSUCHIYA T. Organic-solvent extraction of model
biomaterials for use in the in vitro chromosome aberration test. J. Biomed. Mater. Res. 2008, 86 pp. 13–22.

[86] MHLW NOTIFICATION BY DIRECTOR. OMDE, Yakushokuki-hatsu 0301 No. 20, March 1, 2012: Basic Principles
of Biological Safety Evaluation Required for Application for Approval to Market Medical Devices, Part 3
Genotoxicity Test. YAKUJI NIPPO Ltd, Tokyo, 2012.

Bibliografía para ensayos in vitro para embriotoxicidad

[87] BROWN N.A., SPIELMANN H., BECHTER R., FLINT O.P., FREEMAN S.J., JELINEK R.J. et al. Screening chemicals
for reproductive toxicity: the current alternatives. The report and recommendations of an ECVAM/ETS
workshop, ECVAM workshop 12. ATLA. 1995, 23 pp. 868–882.

[88] INVITTOX protocol no. 114. (1996). In vitro Micromass Teratogen Assay. The ERGATT/FRAME Data Bank
of In vitro Techniques in Toxicology.

[89] PIERSMA A.H., ATTENON P., BECHTER R., GOVERS M.J.A.P., KRAFFT N., SCHMID B.P. et al. Interlaboratory
evaluation of embryotoxicity in the postimplantation rat embryo culture. Reprod. Toxicol. 1995, 9 pp. 275–280.

[90] PIERSMA A.H., BECHTER R., KRAFFT N., SCHMID B.P., STADLER J., VERHOEF A. et al. An interlaboratory
evaluation of five pairs of teratogens in postimplantation rat embryo culture. ATLA. 1996, 24 pp. 201–209.

[91] INVITTOX protocol no. 68. (1993). Embryotoxicity testing using a whole embryo culture WEC procedure. The
ERGATT/FRAME Data Bank of In vitro Techniques in Toxicology.

[92] SCHOLZ G., GENSCHOW E., POHL I., BREMER S., PAPARELLA M., RAABE H. et al. Prevalidation of the
Embryonic Stem Cell Test (EST), a new in vitro Embryotoxicity Test. Toxicol. In Vitro. 1999, 13 pp. 675–681.

[93] SPIELMANN H., POHL I., DÖRING B., LIEBSCH M., MOLDENHAUER F. The embryonic stem cell test (EST), an in
vitro embryotoxicity test using two permanent mouse cell lines: 3T3 fibroblasts and embryonic stem cells. In
Vitro Toxicol. 1997, 10 pp. 119–127.

[94] SEILER A., BUESEN R., VISAN A., SPIELMANN H. Use of Murine Embryonic Stem Cells in Embryotoxicity
Assays: The Embryonic Stem Cell Test. Methods Mol. Biol. 2006, ••• pp. 371–395.

[95] INVITTOX protocol no. 113. (1996). Embryonic Stem Cell Test (EST). The ERGATT/FRAME Data Bank of In
vitro Techniques in Toxicology.

[96] GENSCHOW E., SPIELMANN H., SCHOLZ G., SEILER A., BROWN N.A., PIERSMA A. et al. The ECVAM
international validation study on in vitro embryotoxicity tests. Results of the definitive phase and evaluation of
prediction models. ATLA. 2002, 30 pp. 151–176.

[97] BROWN N.A. Selection of test chemicals for the ECVAM international validation study on in vitro
embryotoxicity tests. ATLA. 2002, 30 pp. 177–198.

[98] GENSCHOW E., SPIELMANN H., SCHOLZ G., POHL I., SEILER A., CLEMANN N. et al. Validation of the embryonic
stem cell test (EST) in the international ECVAM validation study of three in vitro embryotoxicity tests. ATLA.
2004, 32 pp. 209–244.

[99] SPIELMANN H., GENSCHOW E., BROWN N.A., PIERSMA A.H., VERHOEF A., SPANJERSBERG M.Q.I. et al.
Validation of the postimplantation rat limb bud micromass (MM) test in the international ECVAM validation
study of three in vitro embryotoxicity tests. ATLA. 2004, 32 pp. 245–274.

[100] PIERSMA A.H., GENSCHOW E., VERHOEF A., SPANJERSBERG M.Q.I., BROWN N.A., BRADY M. et al. Validation
of the rat postimplantation whole embryo culture test (WEC) in the international ECVAM validation study of
three in vitro embryotoxicity tests. ATLA. 2004, 32 pp. 275–307.

[101] BALLS M., & HELLSTEN E. Statement of the scientific validity of the embryonic stem cell test (EST) – an in vitro
test for embryotoxicity. - Statement of the scientific validity of the micromass test – an in vitro test for
embryotoxicity. - Statement of the scientific validity of the postimplantation rat whole embryo culture assay– an
in vitro test for embryotoxicity. ATLA. 2002, 30 pp. 265–273.

[102] SPIELMANN H., SEILER A., BREMER S., HARENG L., HARTUNG T., AHR H. et al. The practical application of
three validated in vitro embryotoxicity tests. The report and recommendations of an ECVAM/ZEBET workshop
(ECVAM workshop 57). Altern. Lab. Anim. 2006, 5 pp. 527–538.

Bibliografía para los ensayos para evluar la genotoxicidad

[103] ASHBY J., T INWELL H. The rodent bone marrow micronucleus assay: contrast between its sensitivity to human
carcinogens and its insensitivity to NTP rodent carcinogens –. Mutat. Res. 1996, 352 pp. 181–184.

[104] BENIGNI R. Mouse bone marrow micronucleus assay: relationships with in vitro mutagenicity and rodent
carcinogenicity –. J. Toxicol. Environ. Health. 1995, 45 pp. 337–347.

[105] CIMINO M. Comparative Overview of Current International Strategies and Guidelines for Genetic Toxicology
Testing for Regulatory Purposes. Environ. Mol. Mutagen. 2006, 47 pp. 362–390.

[106] Committee on Mutagencity (2000) Guidance on a Strategy for Testing of Chemicals for Mutagenicity,
December.

[107] ICH. Guidance on Genotoxicity Testing and Data Interpretation for Pharmaceuticals Intended for Human Use.
Step. 2011 November, 4 p. 9.

[108] Draft 2008 S2(R1) Genotoxicity Testing and Data Interpretation for Pharmaceuticals Intended for Human Use.

[109] ELESPURU R.K. et al. FORUM: Current and Future Application of Genetic Toxicity Assays: The Role and Value
of In vitro Mammalian Assays. Toxicol. Sci. 2009, 109 pp. 172–179.

[110] WEBSITE F.D.A. Limits of Recognition of ISO 10993 3 available at

http://www.accessdata.fda.gov/scripts/cdrh/cfdocs/cfStandards/search.cfm

[111] GLATT H., PADYKULA R., BERCHTOLD G.A., LUDEWIG G., PLATT K.L., KLEIN J. et al. Multiple Activation
Pathways of benzene leading to products with varying genotoxic characteristics. Environ. Health Perspect. 1989,
82 pp. 81–89.

[112] GOLLAPUDI B., SCHISLER M.R., MOORE M.M. Evaluation of publicly available mouse lymphoma assay data
using currently accepted standards to establish a curated data base. Toxicologist. 2010, 114 p. 148.

[113] KIM B.S., MARGOLIN B.H. Prediction of Rodent Carcinogenicity Utilizing a Battery of In vitro and In vivo
Genotoxicity Tests –. Environ. Mol. Mutagen. 1999, 34 pp. 297–304.

[114] KIRKLAND D., AARDEMA M., HENDERSON L., MULLER L. Evaluation of the ability of a battery of three in vitro
genotoxicity tests to discriminate rodent carcinogens and non-carcinogens I. Sensitivity, specificity and relative
predictivity –. Mutat. Res. 2005, 584 pp. 1–256.

[115] MORITA T., ASANO N., AWOGI T., SASAKI Y.F., SATO S., SHIMADA H. et al. Evaluation of the rodent
micronucleus assay in the screening of IARC carcinogens (groups 1, 2A and 2B) - The summary report of the
6th collaborative study by CSGMT/JEMS MMS. Mutat. Res. 1997, 389 pp. 3–122.

[116] ROSENKRANZ H., CUNNINGHAM A. The high production volume chemical challenge program: the relevance of
the in vivo micronucleus assay –. Regul. Toxicol. Pharmacol. 2000, ••• pp. 182–189.

[117] SHELBY M.D. Selecting chemicals and assays for assessing mammalian germ cell mutagenicity. Mutat. Res.
1996, 352 (3) pp. 159–167.

[118] SHELBY M.D., EREXSON G.L., HOOK G.J., TICE R.R. Evaluation of the three-exposure mouse bone marrow
micronucleus protocol, results with 49 chemicals. Environ. Mol. Mutagen. 1993, 21 pp. 160–179.

[119] SHELBY M.D., ZEIGER E. Activity of human carcinogens in the Salmonella and rodent bone marrow cytogenetics
tests. Mutat. Res. 1990, 234 (3-4) pp. 257–261.

[120] SNYDER R.D. An Update on the Genotoxicity and Carcinogenicity of Marketed Pharmaceuticals with Reference
to In Silico Predictivity. Environ. Mol. Mutagen. 2009, 50 pp. 435–450.

[121] TWEATS D.J., BLAKEY D., HEFLICH R.H., JACOBS A., JACOBSEN S.D., MORITA T. et al. Report of the IWGT
working group on strategy/interpretation for regulatory in vivo tests II. Identification of in vivo-only positive
compounds in the bone marrow micronucleus test. Mutat. Res. 2007, 627 pp. 92–105.

[122] TWEATS D.J., SCOTT A.D., WESTMORELAND C., CARMICHAEL P.L. Determination of genetic toxicity and
potential carcinogenicity in vitro – challenges post the seventh amendment to the European Cosmetics Directive.
Mutagenesis. 2007, 22 pp. 5–13.

[123] WITT K., KNAPTON A., WEHR C., HOOK G., MIRSALIS J., SHELBY M. et al. Micronucleated erythrocyte
frequency in peripheral blood of B6C3F Mice from short-term, prechronic, and chronic studies of the NTP
carcinogenesis bioassay program. Environ. Mol. Mutagen. 2000, 36 pp. 163–194.

[124] ISO/TR 10993-33:–2), Biological evaluation of medical devices. Part 3: Supplement to ISO 10993 3. Guidance
on tests to evaluate genotoxicity.

2) Pendiente de publicación

Anexo ZA (Informativo)

Capítulos de esta norma europea relacionados con los requisitos esenciales u

otras disposiciones de la Directiva 93/42/CEE de productos sanitarios

Esta norma europea ha sido elaborada bajo un Mandato dirigido a CEN por la Comisión Europea y por la Asociación
Europea de Libre Comercio, para proporcionar un medio de dar cumplimiento a los requisitos esenciales de la Directiva
93/42/CEE.

Una vez que esta norma se cite en el Diario Oficial de la Unión Europea bajo esta directiva, y se implemente como
norma nacional en al menos un Estado Miembro, el cumplimiento de los capítulos de esta norma indicados en la tabla
ZA.1, dentro de los límites del campo de aplicación de esta norma, es un medio para dar presunción de conformidad con
los requisitos esenciales específicos de esta directiva y los reglamentos de la AELC asociados.

Tabla ZA.1  Correspondencia entre esta norma europea y la Directiva 93/42/CEE de Productos Sanitarios

Requisitos esenciales de la Capítulo(s)/Apartado(s)

Notas/Comentarios
Directiva 93/42/CEE de esta norma europea
El requisito esencial 7.1 solo está cubierto parcialmente
por la Norma ISO 10993-3, desde la norma no se
proporcionan los requisitos de diseño y fabricación. Sin
7.1 (primer y segundo guión) 4, 5, 6 y 7 embargo, esta norma proporciona un medio para evaluar
la genotoxicidad, carcinogenotoxicidad o los riesgos
asociados a la toxicidad para la reproducción
relacionados con los materiales que se utilizan.
El requisito esencial 7.2 solo está cubierto parcialmente
por la Norma ISO 10993-3, desde la norma no se
proporcionan los requisitos de diseño y fabricación y no
obliga a minimizar el riesgo.
Sin embargo, esta norma proporciona un medio para
7.2 4, 5, 6 y 7
evaluar la genotoxicidad, carcinogenotoxicidad o la
toxicidad para la reproducción. Esta evaluación puede
ser un paso preliminar para la minimización del riesgo.
Otras formas de toxicidad e inflamabilidad no se tratan
en esta norma.
El requisito esencial 7.5 solo está cubierto parcialmente
por la Norma ISO 10993-3, desde la norma no se
proporcionan los requisitos de diseño, fabricación y
empaquetado y no obliga a la minimización del riesgo.
Sin embargo, esta norma proporciona un medio para
7.5 (primer páragafo) 4, 5, 6 y 7
evaluar la genotoxicidad, carcinogenotoxicidad o la
toxicidad para la reproducción. Esta evaluación puede
ser un paso preliminar para la minimización del riesgo.
Otras formas de toxicidad e inflamabilidad no se tratan
en esta norma.

Nota general: La presunción de la conformidad depende también del cumplimiento con los capítulos/apartados
relevantes de la Norma ISO 10993-1.

ADVERTENCIA: Los productos incluidos en el campo de aplicación de esta norma pueden estar afectados por
otros requisitos o directivas de la UE.

Anexo ZB (Informativo)

Capítulos de esta norma europea relacionados con los requisitos esenciales u

otras disposiciones de la Directiva 90/385/CEE de productos sanitarios
implantables activos

Una vez que esta norma se cite en el Diario Oficial de la Unión Europea bajo esta directiva, y se implemente como
norma nacional en al menos un Estado Miembro, el cumplimiento de los capítulos de esta norma indicados en la tabla
ZB.1, dentro de los límites del campo de aplicación de esta norma, es un medio para dar presunción de conformidad con
los requisitos esenciales específicos de esta directiva y los reglamentos de la AELC asociados.

Tabla ZB.1  Correspondencia entre esta norma europea y la Directiva 90/385/CEE de productos sanitarios
implantables activos

Requisitos esenciales de la Capítulo(s)/Apartado(s)

Notas/Comentarios
Directiva 90/385/CEE de esta norma europea
El requisito esencial 9 solo está cubierto parcialmente
por la Norma ISO 10993-3, desde la norma no se
proporcionan los requisitos de diseño y fabricación. Sin
embargo, esta norma proporciona un medio para evaluar
9 (primer y segundo guión) 4, 5, 6 y 7
la genotoxicidad, carcinogenotoxicidad o la toxicidad
para la reproducción usada en la fabricación de los
productos sanitarios. Otras formas de toxicidad no están
cubiertas.

Nota general: La presunción de la conformidad depende también del cumplimiento con los capítulos/apartados
relevantes de la Norma ISO 10993-1.

ADVERTENCIA: Los productos incluidos en el campo de aplicación de esta norma pueden estar afectados por
otros requisitos o directivas de la UE.

Este documento ha sido adquirido por: UNIVERSIDAD INTERNACIONAL DE LA RIOJA a través de la suscripción AENORmás. Para uso en red interna se requiere de
autorización previa de AENOR.
18/02/2024
Este documento ha sido adquirido por: UNIVERSIDAD INTERNACIONAL DE LA RIOJA a través de la suscripción AENORmás. Para uso en red interna se requiere de
autorización previa de AENOR.
18/02/2024
Génova, 6 [email protected] Tel.: 902 102 201
28004 MADRID-España www.aenor.es Fax: 913 104 032

Este documento ha sido adquirido por: UNIVERSIDAD INTERNACIONAL DE LA RIOJA a través de la suscripción AENORmás. Para uso en red interna se requiere de
autorización previa de AENOR.
18/02/2024

También podría gustarte

Norma ISO 10993-5: Ensayos de Citotoxicidad
Aún no hay calificaciones
Norma ISO 10993-5: Ensayos de Citotoxicidad
17 páginas
Evaluación biológica de productos sanitarios
Aún no hay calificaciones
Evaluación biológica de productos sanitarios
102 páginas
1.2.1 ISO 10993-3 - 2014 - EN - PDF Geancarlo
Aún no hay calificaciones
1.2.1 ISO 10993-3 - 2014 - EN - PDF Geancarlo
3 páginas
(Ex) Une-En Iso 10993-1 2021
Aún no hay calificaciones
(Ex) Une-En Iso 10993-1 2021
5 páginas
ISO 10993-3 - 2014 - EN - PDF ES
Aún no hay calificaciones
ISO 10993-3 - 2014 - EN - PDF ES
19 páginas
Normas ISO para Polímeros Médicos
Aún no hay calificaciones
Normas ISO para Polímeros Médicos
26 páginas
Evaluación biológica de cerámicas sanitarias
Aún no hay calificaciones
Evaluación biológica de cerámicas sanitarias
20 páginas
ISO 10993-1 INTERNATIONAL STANDARD - Biological Evaluation of Medical Device (0) - Libgen - LC ES
Aún no hay calificaciones
ISO 10993-1 INTERNATIONAL STANDARD - Biological Evaluation of Medical Device (0) - Libgen - LC ES
27 páginas
Norma Español La: Une-En ISO 10993-7
Aún no hay calificaciones
Norma Español La: Une-En ISO 10993-7
3 páginas
Esn 0043212
Aún no hay calificaciones
Esn 0043212
3 páginas
Detección de Trichinella (ISO 18743:2015)
Aún no hay calificaciones
Detección de Trichinella (ISO 18743:2015)
24 páginas
Iso 2
Aún no hay calificaciones
Iso 2
44 páginas
Norma UNE-EN ISO 10993-6:2017
Aún no hay calificaciones
Norma UNE-EN ISO 10993-6:2017
47 páginas
UNE-EN ISO 11133:2014/A1: Norma Española
Aún no hay calificaciones
UNE-EN ISO 11133:2014/A1: Norma Española
13 páginas
Norma Duo-Trio Es
Aún no hay calificaciones
Norma Duo-Trio Es
26 páginas
Iso 19036 - 2020
Aún no hay calificaciones
Iso 19036 - 2020
56 páginas
Inte Iso 10993-1 2017
100% (3)
Inte Iso 10993-1 2017
32 páginas
Reto Microbiano - En.es
Aún no hay calificaciones
Reto Microbiano - En.es
42 páginas
UNE-EN ISO 11133:2014/A2: Norma Española
100% (1)
UNE-EN ISO 11133:2014/A2: Norma Española
18 páginas
(Ex) Une-En Iso 10993-6 2009
Aún no hay calificaciones
(Ex) Une-En Iso 10993-6 2009
3 páginas
Propiedades de tracción en tubos de poliolefina
Aún no hay calificaciones
Propiedades de tracción en tubos de poliolefina
20 páginas
Norma UNE-EN ISO 10993-10:2023
Aún no hay calificaciones
Norma UNE-EN ISO 10993-10:2023
72 páginas
(Ex) Une-En Iso 10993-10 2013
Aún no hay calificaciones
(Ex) Une-En Iso 10993-10 2013
3 páginas
Detección de Campylobacter spp. ISO 10272-1
Aún no hay calificaciones
Detección de Campylobacter spp. ISO 10272-1
37 páginas
Norma UNE-EN ISO 10993-15:2024
Aún no hay calificaciones
Norma UNE-EN ISO 10993-15:2024
29 páginas
BIOCOMPATIBILIDAD
Aún no hay calificaciones
BIOCOMPATIBILIDAD
38 páginas
Normas de Productos Sanitarios UE
Aún no hay calificaciones
Normas de Productos Sanitarios UE
5 páginas
Preparación de Muestras en Productos Sanitarios
Aún no hay calificaciones
Preparación de Muestras en Productos Sanitarios
34 páginas
Norma UNE-EN ISO 11085:2015 sobre grasas
Aún no hay calificaciones
Norma UNE-EN ISO 11085:2015 sobre grasas
24 páginas
Une-En Iso 12099-2018
Aún no hay calificaciones
Une-En Iso 12099-2018
42 páginas
Ensayos de Efectos Locales en Biomateriales
Aún no hay calificaciones
Ensayos de Efectos Locales en Biomateriales
4 páginas
Normativa UNE-EN 203-2-1: Cocción Gas
Aún no hay calificaciones
Normativa UNE-EN 203-2-1: Cocción Gas
36 páginas
Iso 16140-3
100% (5)
Iso 16140-3
100 páginas
Une-En Iso 15883-4 2019
Aún no hay calificaciones
Une-En Iso 15883-4 2019
103 páginas
Determinación de acrilonitrilo en alimentos
Aún no hay calificaciones
Determinación de acrilonitrilo en alimentos
22 páginas
p867449 r5z5f2 Norma Aenor Microbiologia
Aún no hay calificaciones
p867449 r5z5f2 Norma Aenor Microbiologia
18 páginas
Iso 13299 Perfil Sensorial
Aún no hay calificaciones
Iso 13299 Perfil Sensorial
58 páginas
013804nenn101 Es
Aún no hay calificaciones
013804nenn101 Es
18 páginas
Resistencia y Alargamiento en No Tejidos
Aún no hay calificaciones
Resistencia y Alargamiento en No Tejidos
23 páginas
Une-En Iso 12193
Aún no hay calificaciones
Une-En Iso 12193
12 páginas
Une-En - Iso - 3961 2019 Yodo
Aún no hay calificaciones
Une-En - Iso - 3961 2019 Yodo
20 páginas
Une-En Iso 10272-2
Aún no hay calificaciones
Une-En Iso 10272-2
30 páginas
Une-En 1593 (A1 2004
Aún no hay calificaciones
Une-En 1593 (A1 2004
8 páginas
Ailc - Iso 10993 - 1 - 2003
100% (1)
Ailc - Iso 10993 - 1 - 2003
23 páginas
Normativa sobre Esterilización Sanitaria
0% (1)
Normativa sobre Esterilización Sanitaria
41 páginas
Bio PDF
Aún no hay calificaciones
Bio PDF
38 páginas
Norma UNE-EN ISO 10619-1:2018
Aún no hay calificaciones
Norma UNE-EN ISO 10619-1:2018
22 páginas
UNE EN ISO 3452-1 - 2013 - Nondestructive Testing. Penetrant Testing. Part1-General Principles
Aún no hay calificaciones
UNE EN ISO 3452-1 - 2013 - Nondestructive Testing. Penetrant Testing. Part1-General Principles
28 páginas
015505nenn100 Es
Aún no hay calificaciones
015505nenn100 Es
18 páginas
UNE-EN 16618-2015. Análisis de Los Productos Alimenticios. Determinación de Acrilamida en Alimentos.
Aún no hay calificaciones
UNE-EN 16618-2015. Análisis de Los Productos Alimenticios. Determinación de Acrilamida en Alimentos.
28 páginas
Aluminio y Aleaciones de Aluminio Composición Química y Forma de Los Productos de Forja Parte 3: Composición Química y Forma de Los Productos
Aún no hay calificaciones
Aluminio y Aleaciones de Aluminio Composición Química y Forma de Los Productos de Forja Parte 3: Composición Química y Forma de Los Productos
60 páginas
Une-En Iso 660 2021-Indice Acidez Aceites
Aún no hay calificaciones
Une-En Iso 660 2021-Indice Acidez Aceites
20 páginas
Une-En Iso 12215-1 2019
Aún no hay calificaciones
Une-En Iso 12215-1 2019
15 páginas
(Ex) Une-En Iso 11138-3 2017
Aún no hay calificaciones
(Ex) Une-En Iso 11138-3 2017
4 páginas
Determinacion de Densidad Aparente, Porosidad Abierta y Porosidad Total PDF
Aún no hay calificaciones
Determinacion de Densidad Aparente, Porosidad Abierta y Porosidad Total PDF
12 páginas
12 - UNE EN ISO 18125 2018 - Poder Calórico
Aún no hay calificaciones
12 - UNE EN ISO 18125 2018 - Poder Calórico
71 páginas
Biocompatibilidad ISO 10993 Correspondencias PDF
Aún no hay calificaciones
Biocompatibilidad ISO 10993 Correspondencias PDF
1 página
011290NEIS104 - ES Listeria
100% (2)
011290NEIS104 - ES Listeria
51 páginas
ISO 14644-1 Version 2015 Traducida
100% (4)
ISO 14644-1 Version 2015 Traducida
44 páginas
ISPE Commissioning and Qualification Es
100% (5)
ISPE Commissioning and Qualification Es
293 páginas
ISO 14644-3 - 2019.en - Es
100% (3)
ISO 14644-3 - 2019.en - Es
60 páginas
ISO 14644 4 2001.en - Es
89% (9)
ISO 14644 4 2001.en - Es
58 páginas
Plan Maestro de Validacion. Ejemplo PDF
79% (28)
Plan Maestro de Validacion. Ejemplo PDF
24 páginas
NORMAS ISPE HVAC-páginas-1,217-288.en - Es
100% (3)
NORMAS ISPE HVAC-páginas-1,217-288.en - Es
73 páginas
Mga-0571 Limites
100% (1)
Mga-0571 Limites
10 páginas
GAMP 5 Sistemas Computarizados
100% (2)
GAMP 5 Sistemas Computarizados
1 página
HVAC FEUM 13a
100% (17)
HVAC FEUM 13a
18 páginas
Norma ISO 14644 Partes 1 y 2 Revisadas
80% (5)
Norma ISO 14644 Partes 1 y 2 Revisadas
15 páginas
Protocolo de Calificacion de Areas
100% (6)
Protocolo de Calificacion de Areas
36 páginas
Protocolos de Calificación Farmacéutica
100% (3)
Protocolos de Calificación Farmacéutica
15 páginas
Une-En-Iso 14644-2-2016
75% (4)
Une-En-Iso 14644-2-2016
22 páginas
ISO 8573 Aire Comprimido
100% (9)
ISO 8573 Aire Comprimido
50 páginas
Une en Iso 13485 2016
100% (2)
Une en Iso 13485 2016
75 páginas
Iso 14698 Word - En.español
88% (8)
Iso 14698 Word - En.español
24 páginas
Manual Avanzado Hvac Diseño de Salas Blancas
100% (6)
Manual Avanzado Hvac Diseño de Salas Blancas
107 páginas
Reporte Tecnico #60 - Pda 2015 - 07 - 03
Aún no hay calificaciones
Reporte Tecnico #60 - Pda 2015 - 07 - 03
124 páginas
ISPE Vol 5-Validaciones Completo 1ed Es
Aún no hay calificaciones
ISPE Vol 5-Validaciones Completo 1ed Es
172 páginas
ISPE - Baseline - Guide - Volume - 4 - Water - and - S Es
Aún no hay calificaciones
ISPE - Baseline - Guide - Volume - 4 - Water - and - S Es
402 páginas
Commissioning Vs Qualificación ISPE PDF
50% (2)
Commissioning Vs Qualificación ISPE PDF
84 páginas
Guía de Validación de Sistema Hvac
90% (10)
Guía de Validación de Sistema Hvac
46 páginas
ISO 14644-1 2015.en - Es
100% (1)
ISO 14644-1 2015.en - Es
44 páginas
Protocolo de Validación de Sistemas Computacionales - v2
100% (4)
Protocolo de Validación de Sistemas Computacionales - v2
26 páginas
FEUM SUPLEMENTO para Establecimientos Dedicados A La Venta y Suministro de Medicamentos y Demás Insumos para La Salud (Secretaría de Salud)
92% (36)
FEUM SUPLEMENTO para Establecimientos Dedicados A La Venta y Suministro de Medicamentos y Demás Insumos para La Salud (Secretaría de Salud)
277 páginas
USP-NF 〈1072〉 Disinfectants and Antiseptics
75% (4)
USP-NF 〈1072〉 Disinfectants and Antiseptics
7 páginas
Validacion de Hojas de Calculo
100% (2)
Validacion de Hojas de Calculo
23 páginas
Métodos Estadísticos en Monitoreo de Producción
Aún no hay calificaciones
Métodos Estadísticos en Monitoreo de Producción
82 páginas
Estándar Internacional Iso 8573-1
100% (2)
Estándar Internacional Iso 8573-1
10 páginas
Validacion Limpieza
100% (2)
Validacion Limpieza
81 páginas
Huella de Carbono de Productos
100% (1)
Huella de Carbono de Productos
65 páginas
Gestión de La Calidad Satisfacción Del Cliente Directrices para La Resolución de Conflictos de Forma Externa A Las Organizaciones
100% (1)
Gestión de La Calidad Satisfacción Del Cliente Directrices para La Resolución de Conflictos de Forma Externa A Las Organizaciones
51 páginas
Procedimiento Selección Proveedores Seguridad
Aún no hay calificaciones
Procedimiento Selección Proveedores Seguridad
16 páginas
El Manual de Instrucción Cuadros y Cubículos r00
Aún no hay calificaciones
El Manual de Instrucción Cuadros y Cubículos r00
44 páginas
IFA Smart Checklist FV v6 0 Sep22 Protected Es
Aún no hay calificaciones
IFA Smart Checklist FV v6 0 Sep22 Protected Es
77 páginas
Normativa de Seguridad y Salud Laboral
Aún no hay calificaciones
Normativa de Seguridad y Salud Laboral
27 páginas
Norma Española: UNE-EN ISO 14644-5
Aún no hay calificaciones
Norma Española: UNE-EN ISO 14644-5
54 páginas
Seguridad y Salud en el Trabajo: Guía Completa
Aún no hay calificaciones
Seguridad y Salud en el Trabajo: Guía Completa
240 páginas
Une-En Iso 14644-8
100% (1)
Une-En Iso 14644-8
32 páginas
Seguimiento de Limpieza en Salas Limpias
100% (1)
Seguimiento de Limpieza en Salas Limpias
22 páginas
Une-En Iso 14644-17
Aún no hay calificaciones
Une-En Iso 14644-17
38 páginas
Une-En Iso 14644-16
Aún no hay calificaciones
Une-En Iso 14644-16
58 páginas
Une-En Iso 14644-9
100% (1)
Une-En Iso 14644-9
36 páginas
Requisitos del Programa de Controles Preventivos
Aún no hay calificaciones
Requisitos del Programa de Controles Preventivos
7 páginas
Buenas Prácticas en Dispositivos Médicos
Aún no hay calificaciones
Buenas Prácticas en Dispositivos Médicos
64 páginas
IFA GFS Checklist FV v6 0 Sep22 Protected Es
Aún no hay calificaciones
IFA GFS Checklist FV v6 0 Sep22 Protected Es
77 páginas
Decreto - Ejecutivo - Nro. - 1307 Fusion ARCSA
Aún no hay calificaciones
Decreto - Ejecutivo - Nro. - 1307 Fusion ARCSA
13 páginas
ISO 14159 Higiene Equipos
100% (1)
ISO 14159 Higiene Equipos
41 páginas
FSSC 22000 Scheme Version 5.1 - ES - Decrypted
Aún no hay calificaciones
FSSC 22000 Scheme Version 5.1 - ES - Decrypted
82 páginas
Am Bosques Protectores
Aún no hay calificaciones
Am Bosques Protectores
1 página
Arquitectura Bioclimática RESPIRE Christoph Peters
Aún no hay calificaciones
Arquitectura Bioclimática RESPIRE Christoph Peters
43 páginas
Infraestructura Sostenible en Floreana
Aún no hay calificaciones
Infraestructura Sostenible en Floreana
46 páginas
Esófago y Diafragma
100% (4)
Esófago y Diafragma
82 páginas
Espasmoliticos
Aún no hay calificaciones
Espasmoliticos
2 páginas
Protocolo de Referencia en Periodoncia
Aún no hay calificaciones
Protocolo de Referencia en Periodoncia
35 páginas
Hoja de Seguridad Batería de Plomo
Aún no hay calificaciones
Hoja de Seguridad Batería de Plomo
6 páginas
Uso y Protección con Lentes de Seguridad
Aún no hay calificaciones
Uso y Protección con Lentes de Seguridad
3 páginas
Ley 52 de 1993
Aún no hay calificaciones
Ley 52 de 1993
13 páginas
Copia de Regidores
Aún no hay calificaciones
Copia de Regidores
11 páginas
Buenas Prácticas en Fabricación Farmacéutica
Aún no hay calificaciones
Buenas Prácticas en Fabricación Farmacéutica
7 páginas
Funciones y Composición del LCR
Aún no hay calificaciones
Funciones y Composición del LCR
29 páginas
Procedimientos de Anatomía Patológica
Aún no hay calificaciones
Procedimientos de Anatomía Patológica
1 página
Temario DPZ
Aún no hay calificaciones
Temario DPZ
3 páginas
Hemorragia Uterina Disfuncional en Adolescente
Aún no hay calificaciones
Hemorragia Uterina Disfuncional en Adolescente
23 páginas
Tiempo Libre y Calidad de Vida
Aún no hay calificaciones
Tiempo Libre y Calidad de Vida
3 páginas
CORTICOESTEROIDES
Aún no hay calificaciones
CORTICOESTEROIDES
43 páginas
Diagnóstico de Vulvovaginitis No Infecciosa
100% (1)
Diagnóstico de Vulvovaginitis No Infecciosa
5 páginas
Protocolo de Peeling Suave
Aún no hay calificaciones
Protocolo de Peeling Suave
2 páginas
¿Deben Los Adolescentes Tener Relaciones Sexuales?
0% (1)
¿Deben Los Adolescentes Tener Relaciones Sexuales?
2 páginas
Fisioterapia en Artritis Reumatoide
100% (1)
Fisioterapia en Artritis Reumatoide
48 páginas
Purificador de Aire UTO 600 Plus Eficiente
Aún no hay calificaciones
Purificador de Aire UTO 600 Plus Eficiente
1 página
Creación de Centro Médico "La Familia"
Aún no hay calificaciones
Creación de Centro Médico "La Familia"
3 páginas
Vientre en Alquiler
100% (1)
Vientre en Alquiler
38 páginas
Mejora del Agua y Saneamiento en Tunzo
Aún no hay calificaciones
Mejora del Agua y Saneamiento en Tunzo
35 páginas
Curso de Desarrollo Comunitario en Salud
0% (1)
Curso de Desarrollo Comunitario en Salud
5 páginas
Biotecnología en Alimentos
Aún no hay calificaciones
Biotecnología en Alimentos
32 páginas
Examen - (ACDB2-35%) (SUP1) Actividad Suplementaria - Analice Los Criterios Diagnósticos de La Disforia de Género ALI
Aún no hay calificaciones
Examen - (ACDB2-35%) (SUP1) Actividad Suplementaria - Analice Los Criterios Diagnósticos de La Disforia de Género ALI
6 páginas
Vaporizador y Alta Frecuencia Facial
Aún no hay calificaciones
Vaporizador y Alta Frecuencia Facial
17 páginas
Test de Silverman: Evaluación Neonatal
Aún no hay calificaciones
Test de Silverman: Evaluación Neonatal
4 páginas
Virulencia y respuesta del huésped
Aún no hay calificaciones
Virulencia y respuesta del huésped
7 páginas
Relajación
Aún no hay calificaciones
Relajación
4 páginas
Consultoría en Seguridad y Salud MIPYMES
Aún no hay calificaciones
Consultoría en Seguridad y Salud MIPYMES
69 páginas