ELIAS AARON CALDERON GAMEZ 3D MICROBIOLOGÍA 05/09/2023

TINCIÓN DE GRAM
Universidad del Noreste
Escuela de Medicina: “Dr. José Sierra Flores”
Microbiología y Virología Médica
Dra. Ruth Velázquez Fernández

Alumno: Elías Aarón Calderón Gámez

183301
Licenciatura: Médico Cirujano
3º Semestre
Grupo D
Tampico, Tamaulipas
05/09/2023
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Introducción
Las bacterias son organismos unicelulares procariontes, esto quiere decir que están
formados por una sola célula carente de núcleo. Su ácido desoxirribonucleico (ADN)
se encuentra libre en el citoplasma y no tienen organelos, como las mitocondrias,
cloroplastos o aparato de Golgi.

A pesar de su sencilla organización celular, cuentan con una pared celular (capa de
polisacáridos) que envuelve la célula proporcionándole rigidez y protección. Son tan
pequeñas que es imposible verlas a simple vista, solamente cuando llegan a
agruparse formando colonias es cuando las podemos reconocer.

Para poder identificar más fácilmente a las bacterias, se utiliza una tinción diferencial,
llamada tinción de Gram, en la que utiliza dos colorantes y clasifica a las bacterias
en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y bacterias Gram positivas. Es
una de las tinciones más utilizadas universalmente debido a lo económico, sencillo
y eficaz que resulta.

La Tinción de Gram consiste en una técnica de laboratorio diseñada por Christian

Gramen el año 1884. El objetivo de Gram era conseguir una prueba con la que fuera
posible diferenciar diferentes grupos de bacterias para así poder estudiarlas y
clasificarlas.

La tinción de Gram es una prueba que detecta bacterias en el lugar donde se

sospecha una infección, como la garganta, los pulmones, los genitales o las lesiones
en la piel. Las tinciones de Gram también se pueden usar para detectar bacterias
en ciertos fluidos corporales, como la sangre o la orina.
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Fundamento
La tinción de Gram es de color púrpura. Cuando la tinción se combina con la bacteria
en una muestra, las bacterias pueden seguir de color púrpura o volverse rosadas o
rojas. Según la distribución del peptidoglicano de la pared celular que las envuelve,
se tiñen de una forma u otra. Si se mantienen púrpura, son grampositivas. Si se
vuelven rosadas o rojas, son gramnegativas.

• Gram +: Las bacterias Gram positivas poseen una pared celular gruesa
constituida por peptidoglicano, pero no cuentan con membrana celular
externa. Las bacterias G+ retienen el cristal-violeta después de la
decoloración y aparecen de color azul intenso.
• Gram -: La pared celular de las bacterias Gram negativas está constituida
por una capa fina de peptidoglicano y una membrana celular externa, cuyo
componente estructural único son los lipopolisacáridos. Las bacterias Gram-
no son capaces de retener el cristal-violeta después de la decoloración y son
teñidas de rojo con safranina. Pueden tomar un color Rojo - Rosa – Fucsia.

Las dos categorías causan tipos diferentes de infecciones:

• Las infecciones grampositivas incluyen el Staphylococcus aureus resistente

a la meticilina (SARM), las infecciones por estreptococos y el shock tóxico
• Las infecciones gramnegativas incluyen salmonela, neumonía, infecciones
del tracto urinario y gonorrea

Objetivos
• Hacer uso adecuado del microscopio
• Recordar la estructura de las bacterias grampositivas y gramnegativas
• Identificar los diferentes tipos de bacterias.
• Visualizar su morfología y disposición.
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Materiales

Procedimiento
1. Encender el mechero para conservar una atmosfera de esterilidad.
2. Tomar una muestra de cada una de las colonias de la bacteria cultivada y
colocarla en el portaobjetos.
3. Colocar una gota de agua en cada una de las colonias.
4. Pasar rápidamente el portaobjetos sobre el mechero para fijar las muestras.
5. Una vez fijadas las muestras, poner una gota de cristal violeta, esperar de
30-60 segundos y enjuagar en un vaso de precipitado con agua.
6. Una vez enjuagado, agregar una gota de yodo y repetir el mismo
procedimiento que el anterior.
7. Ya enjuagado, agregar una gota de fenolftaleína, e igualmente repetir el
procedimiento anterior.
8. Por último, después de enjuagar la fenolftaleína, agregar una gota de la
solución, esperar menos de un minuto y enjuagarlo.
9. Esperar a que se seque a temperatura ambiente.
10. Colocar el cubreobjetos de manera que cubra todas las colonias.
11. Proceder a encender el microscopio
12. Colocar una de las muestras y observar en el objetivo más conveniente en
busca de bacterias Gram positivas y negativas.
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Resultados
A lo largo de la práctica se llegó a comprender el procedimiento para llevar a cabo
la Tinción de Gram. La tinción de Gram permite conocer la morfología celular, el
tamaño y la forma (Gram positivos o Gram negativos) de acuerdo con el color que
tornan las bacterias después de la tinción, sin embargo, no permite conocer la
especie o género de la bacteria al cual pertenece. En este caso, la bacteria
observada era Salmonella, que creció en una muestra de salsa verde proveniente
de comida de la calle. Se pudieron observar pequeñas y escasas colonias pintadas,
algunas Gram positivas y otras pocas negativas, lo cual pudo deberse a un fallo en
la tinción.

Figura 2
Figura 1

Figura 1: En la observación del primer portaobjetos identificó conjuntos de racimos

que llegó a la hipótesis de que eran Cocos y según los colores marcados eran gram
negativo (se tiñó de rosa) y cocos gram positivo (se tiñó de un tono azul oscuro y
violeta). Fue observado en 40x
Figura 2: En la observación del segundo portaobjetos se encontró algo, ya que se
identificaron conjuntos de racimos que llegó a pensar que eran bacilo cocos, y según
los colores marcados eran gram negativo, ya que se tiñó de rosa. Fue observado
en 40x
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Conclusiones
El motivo de esta práctica fue aprender a diferenciar entre una Gram positiva y una
Gram negativa ya que con ayuda de la tinción se puede observar ciertos factores
que son muy distintivos como por ejemplo: su color, ya que unas se tiñen de un tono
morado o violeta (positivas) y otras de un tono rosa (negativas), en este caso se
observaron cocos y bacilococos (por su forma de varilla), con esto se sabe que
dependiendo del tipo de bacteria que se vaya a observar, es el tipo de Gram y forma
que esta tendrá.

Referencias Bibliográficas

• Biodiversidad mexicana, comisión nacional para el conocimiento y uso de la

biodiversidad “bacterias”

• Facultad de medicina de buenos aires, bacteriología, “gram positivas”, p 3.

• López Jácome Luis Esaú, Hernández Durán Melissa, Colín Castro Claudia Adriana,
Ortega Peña Silvestre, Cerón González Guillermo, Franco Cendejas Rafael. (marzo,
2014) “Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología”.

• Revista Portales Médicos (15 de marzo, 2013) Artículo de revisión. “La coloración
de gram y su importancia en el diagnóstico microbiológico”.

• Flores, E. E. M. “Tinción de Gram”.