Remoción de Nitrógeno en RAS Acuícola
Remoción de Nitrógeno en RAS Acuícola
TESIS
Director de tesis:
Co-director de tesis:
A Conacyt, por la beca que me fue otorgada para continuar mis estudios
Al Proyecto FORDECYT: Sistema regional de producción intensiva de tilapia para mercados de alto
valor comercial e impulsar el desarrollo económico y social en el occidente de México
Al Laboratorio de Acuicultura y Nutrición del IIAF, al Dr. Jorge Fonseca M. y la M.C. Sibila Santos,
por las facilidades y cooperación en el cumplimiento de nuevos objetivos
A mis compañeros y amigos del Laboratorio, Alex, Isaías, Jesús, Rubi, Laura, Atzimba y a mis
amigos especialmente Alia, Rubí, Brenda e Hilde que han estado conmigo incondicionalmente
A mis sinodales
HIPÓTESIS.......................................................................................................................................3
JUSTIFICACIÓN...............................................................................................................................4
2 MARCO TEÓRICO........................................................................................................................5
Acuicultura.....................................................................................................................................5
BIOFILTRACIÓN.............................................................................................................................22
2.1.12 Nitrificación..............................................................................................................26
Antecedentes...............................................................................................................................29
3 MATERIALES Y MÉTODOS.........................................................................................................31
Evaluación preliminar del sistema de tratamiento actual............................................................32
3.1.5 Preinoculación..........................................................................................................39
3.1.7 Operación.................................................................................................................40
Diseño experimental....................................................................................................................40
En todas las condiciones experimentales se trabajó con un volumen útil de estanque de 5.4
4 RESULTADOS Y DISCUSIÓN.......................................................................................................45
5 CONCLUSIONES........................................................................................................................62
6 REFERENCIAS............................................................................................................................63
Anexos................................................................................................................................................a
Anexo A1 .- Diseño de MBBR...................................................................................................a
Anexo A2.- Modificaciones del filtro..............................................................................................b
Anexo A3.- Preinoculación.............................................................................................................d
Figura 2.1 Tasas de producción mundial de pesca de captura y acuicultura (FAO, 2012)..................6
Figura 2.2 Fotografía de Oreochromis niloticus (Fuente: fishbase.org en Froese y Pauly, 2014).......7
Figura 2.4 Formas de carbono inorgánico a diferentes valores de pH (Henry y Heike, 1999)..........13
Figura 2.7 Sistema de agitación de un MBBR en a) Reactor aerobio; b) Reactor anaerobio (Rusten
et al., 2006)......................................................................................................................................20
Figura 3.2 Sistema de recirculación acoplado al sistema externo de la granja acuícola de la UMSNH
........................................................................................................................................................... 32
Figura 4.3 Tasa de alimentación proporcionada a los peces durante el periodo de estudio............49
Figura 4.7 Relación de la carga amoniacal con las tasas de remoción de NAT y acumulación de
sólidos en biopelícula.......................................................................................................................54
Figura 4.11. Relación de tasas de remoción de DQO con sólidos volátiles en biopelícula................60
Tabla 2.1. Comparación del valor nutricional de la carne de pescado y de otros animales
comestibles (Fuente: Modificado de Bocek, 2000).............................................................................6
Tabla 2.2 Parámetros de calidad del agua para lograr una buena sobrevivencia, crecimiento y
reproducción de tilapia (Beveridge y McAndrew, 2000).....................................................................8
Tabla 2.3. Uso de agua por kg de producción acuícola (Timmons y Ebeling, 2010).........................16
Tabla 2.4 Comparación de sistemas de biofiltración de lecho sumergido y lecho móvil (MBBR)......19
Tabla 3.1 Características del material de soporte utilizado en el biofiltro de lecho sumergido
(Viveros, 2013).................................................................................................................................33
Tabla 3.3 Características del operación del biofiltro por etapa (Viveros, 2013)...............................34
Tabla 3.8 Métodos de análisis de calidad del agua utilizados en este estudio.................................42
Tabla 4.1 Resultados de la evaluación de parámetros de calidad del agua para efluente acuícola en
el filtro sumergido............................................................................................................................45
Tabla 4.3 Concentraciones de compuestos de nitrógeno en la entrada y salida del reactor en las
corridas experimentales...................................................................................................................53
EPS = Exopolisacáridos
PS = Polisacáridos
PN = Proteínas
Los sistemas acuícolas con recirculación, requieren de procesos de tratamiento de agua eficientes
en la remoción de contaminantes, para poder reusarla en el cultivo acuícola. En estos sistemas el
contaminante de mayor interés es el nitrógeno amoniacal no ionizado, que debe mantenerse a
bajas concentraciones (<0.025mg/L) por su toxicidad para los peces. En este proyecto se trabajo
con un reactor de lecho móvil (MBBR) acoplado a un sistema acuícola con recirculación. En este
tipo de reactores, el tratamiento se realiza por biomasa fija en un material de soporte para
crecimiento; se utilizó material Kaldnes k1®, el cual tiene una densidad de área superficial de 500
m2/m3. Se trabajó operando el reactor con cinco cargas amoniacales de 51.2, 56.2, 64.0, 75.7 y
80.9 mg N-NH4/m2d. Se determinaron las tasas de remoción de nitrógeno amoniacal total (NAT),
obteniendo un porcentaje de remoción de hasta el 84% de NAT. Paralelamente se determinó el
porcentaje de asimilación de nitrógeno en la biomasa (biopelícula), así como el contenido de
sólidos volátiles (SV), proteínas (PN) y polisacáridos (PS) en la misma. Los resultados muestran que
los SV y las tasas de remoción son directamente proporcionales a la carga amoniacal, en el
intervalo de cargas aplicadas en este trabajo.
Se concluye que las condiciones de operación más recomendables para la operación de un reactor
de lecho móvil sería: con altas CA, pero bajas CO, con objeto de orientar la asimilación de
nitrógeno amoniaclan hacia la síntesis de productos de reserva de energía en la biomasa y tener
baja producción de lodos residuales.
Recirculating aquaculture systems, require efficient water treatment processes in order to remove
pollutants, allow the water reuse in aquaculture. In these wastewater treatment systems, the
unionized ammonia nitrogen, is considered as most importante contaminant, which must be
maintained at concentrations below 0.025mg/L, due to its toxicity to fish. In this project, the
experiment was carried out in a moving bed biofilm reactor (MBBR), coupled to a recirculating
aquaculture system. In such reactors, the treatment is performed by fixed biomass grown on the
plastic material support. In this experiment il was used K1® Kaldnes material, which has a surface
area density of 500 m2/m3. The ammonia loading experimental conditions were: 51.2, 56.2, 64.0,
75.7 and 80.9 mgN-NH4/m2·d. Removal rates of total ammonia nitrogen were determined, obtaining
a removal percentage up to 84% of NAT.
The percentage of nitrogen assimilation in biomass (biofilm) and the content of proteins (PN) and
polysaccharide (PS) in biomass (VS), were determined. The results show that the SV and removal
rates are directly proportional to ammonia load, under the operatinng conditions of this
experiment. The amount of SV, PN and PS in the biofilm are linearly related to the removal NAT
removal rates. On the other hand, the synthesis of storage compounds showed an inverse
relationship to the specific NAT assimilation rates.
It is concluded , that the most suitable operating conditions of a moving bed biofilm reactor would
be: high ammonia loading, but low organic loading, in order to drive the ammonia nitrogen
assimilation to the synthesis of biomass storage compounds as well as to get low waste sludge
production.
Keywords: Recirculating aquaculture systems, ammonia removal rate, ammonia assimilation rates,
biofilm composition.
1 INTRODUCCIÓN
OBJETIVOS
HIPÓTESIS
JUSTIFICACIÓN
El amoniaco, como residuo principal de los efluentes acuícolas, resulta tóxico en pequeñas
concentraciones para los peces, por lo cual debe asegurarse la remoción en una alta proporción,
siendo así un factor de control en el diseño de éste tipo de sistemas, principalmente por la etapa
biológica, es por ello que en este trabajo se estudian los procesos de asimilación y nitrificación, de
tal modo que permitan diseñar mejor los sistemas de tratamiento para efluentes acuícolas con
recirculación.
2 MARCO TEÓRICO
Acuicultura
Entre los factores más importantes a considerar en el desarrollo de los proyectos productivos de
acuicultura, es necesario definir la especie o especies a cultivar, el tamaño del mercado, la talla
comercial, la producción pesquera de la especie o especies que puedan competir en los mercados
con las cultivadas, los productos similares, la temperatura óptima del crecimiento y reproducción,
las facilidades de infraestructura, la calidad del agua, el alimento y su disponibilidad, así como los
limitantes en el manejo y transporte de organismos e insumos (Arredondo y Lozano, 2003). Los
acuicultores se encuentran modificando los diversos componentes del medio, para controlar a los
organismos acuáticos. Ésta práctica se ha llevado a cabo por varios siglos y presenta diversas
ventajas, como por ejemplo:
Alto valor nutricional de los productos acuícolas. Los peces son fuente de proteínas
esenciales, de gran calidad y digestibilidad. El contenido en grasas insaturadas es mayor y
su consumo ayuda a reducir los niveles de colesterol en la sangre (Tabla 2.1). Aunque la
acuicultura representa un gran consumo de agua, puede ser justificado debido a los
grandes beneficios ésta actividad refleja.
El valor comercial de productos acuícolas. La producción acuícola promete intensificar la
producción con mejor distribución de la tierra, agua, mano de obra, equipo y otros
capitales limitantes.
Tabla 2.1. Comparación del valor nutricional de la carne de pescado y de otros animales
comestibles (Fuente: Modificado de Bocek, 2000)
El sector acuícola se encuentra en constante crecimiento. Según datos de la FAO (2012), la pesca
de captura y la acuicultura han alcanzado una producción de 154 millones de toneladas, de los que
131 millones de toneladas se destinaron a alimentos (Figura 2.1). La producción mundial de peces
por acuicultura ha alcanzado, desde 1980, una tasa de media de crecimiento del 8.8%. En la
actualidad se cultivan alrededor de 600 especies acuáticas por medio de acuicultura en el mundo,
en diferentes condiciones de utilización de insumos y tecnologías (FAO, 2012). Es importante
tomar en cuenta que toda ésta producción puede verse afectada por condiciones ambientales,
socioeconómicas, tecnológicas y de origen natural.
Figura 2.1 Tasas de producción mundial de pesca de captura y acuicultura (FAO, 2012).
México es considerado un país con gran diversidad ecológica, encontrando una amplia variedad de
especies nativas y endémicas debido a los diversos cuerpos de agua con los que cuenta. Estas
condiciones permiten que se cultiven diversas especies de peces, moluscos, crustáceos, anfibios,
A pesar de que México ofrece condiciones favorables para el desarrollo de ésta actividad, se
tienen algunos impedimentos que limitan un mayor desarrollo, como:
Figura 2.2 Fotografía de Oreochromis niloticus (Fuente: fishbase.org en Froese y Pauly, 2014)
Las tilapias resisten una amplia gama de temperaturas, siendo su intervalo de tolerancia desde los
10 a los 42°C, lo que las hace relativamente de fácil manejo. En el caso del pH, las tilapias de
diferentes especies pueden encontrarse en un rango muy amplio, desde 5 a 11, sin presentar
efectos adversos; aunque el crecimiento óptimo se encuentra en valores de pH entre 7 y 9. Se
reproducen a temprana edad, alrededor de las 8 o 10 semanas, teniendo una talla entre 7 a 16 cm,
por lo que dificulta el control de la población de los estanques donde se cultiva. El oxígeno disuelto
es una de las principales limitantes de crecimiento en el medio acuático. Las tilapias pueden
tolerar una baja calidad de agua y bajas concentraciones de oxígeno disuelto. Pueden sobrevivir
por corto tiempo expuestas a concentraciones de 0.1 mg/L o incluso menos. Sin embargo, se ha
reportado que a valores de entre 2.3 y 3 mg/L de oxígeno disuelto, sufren depresión en el
crecimiento (Beveridge y McAndrew, 2000), incluso reportan que hay una relación logarítmica
inversa entre el peso corporal y la tasa de respiración.
Tabla 2.2 Parámetros de calidad del agua para lograr una buena sobrevivencia, crecimiento y
reproducción de tilapia (Beveridge y McAndrew, 2000).
Debido a todas éstas condiciones, hoy en día el cultivo de tilapia puede asegurarse de tal forma
que ésta especie sigue siendo una de las más cultivadas. No obstante, en los sistemas de cultivo, la
producción de amonio necesita ser controlada dada su toxicidad. Las tasas de excreción de
amoniaco aumentan bruscamente después de 1 a 5 horas de la alimentación, de tal forma que el
tiempo para la máxima tasa de excreción de ésta sustancia post-alimentación, su magnitud y
duración dependen del consumo de proteína por las especies en el cultivo. Por ello es importante
mantener un buen control de la calidad del agua (Tabla 2.2).
Oxígeno disuelto
(AOB), probablemente debido a que se libera mayor cantidad de energía por oxígeno consumido
de AOB, en comparación de las NOB (Hulle et al., 2010).
Nitrógeno amoniacal
El nitrógeno es un nutriente elemental para los organismos vivos, ya que forma parte de
proteínas, ácidos nucléicos, fosfato adenosinas, nucleótidos de piridina y pigmentos. En un sistema
acuícola, existen diferentes fuentes de residuos nitrogenados, como la urea, el ácido úrico, los
aminoácidos excretados por peces, residuos orgánicos de organismos muertos, alimento no
ingerido, heces y gas nitrógeno de la atmósfera. Las necesidades fisiológicas pueden cubrirse a
bajas concentraciones, por lo tanto el exceso se convierte en un residuo que debe ser removido. El
nitrógeno amoniacal es el mayor residuo metabólico producido por peces. En el agua, éste se
encuentra de dos formas; por una parte, el ión amonio (NH +4) o amonio ionizado y por otra, el
amoniaco (NH3) o amonio no ionizado (Nora’aini et al., 2005), las cuales en conjunto se denominan
nitrógeno amoniacal total (NAT). De todos los parámetros de calidad que afectan a los peces, el
amoniaco es el más importante después del oxígeno. El amoniaco es una sustancia incolora,
inodora y altamente soluble en agua, la cual puede ser acumulada en sistemas de acuicultura y
causar mortalidad directa. Los peces expuestos a bajos niveles de amonio a través del tiempo son
mayormente susceptibles a infecciones bacterianas, tienen bajo crecimiento y no toleran la rutina
de manejo como deberían, debido a su falta de carga y a su liposolubilidad, lo cual facilita el
transporte a través de la membrana celular (Crab et al., 2007). Como regla general, la
concentración de N-NH3 debe mantenerse por debajo de 0.1 a 0.5 mg N-NH3/L. Medido como NAT, la
concentración debe mantenerse por debajo de 3 mg N-NH4/L, sin embargo en algunos casos se ha
reportado toxicidad desde 0.025 mg N-NH4/L, dependiendo de la especie y tamaño de los peces,
además de la presencia de sólidos finos, orgánicos refractarios, compuestos activos en la
superficie, metales y nitratos (Crab et al., 2007).
100
90
80
70
60
50
% de N-NH3 en
40
30
20
10
0
6 7 8 9 10
pH
25°C
10°C 20°C 30°C 15°C
Timmons y Ebeling (2010) proponen una ecuación para estimar la tasa de generación de nitrógeno
amoniacal total, basada en una tasa de alimentación de los animales, como:
𝐹 ∙ 𝑃𝐶 ∙ 0.092
𝑃𝑁𝐴𝑇 =
𝑡
Considerando la cantidad total de NAT excretada por día, dada una alimentación uniforme. La
constante de 0.092 está dada en función del producto de las siguientes estimaciones:
Además:
Ésta concentración representa una alta tasa de producción conservativa de NAT (PNAT).
Nitratos
Los nitratos (N-NO -3) son considerados los compuestos del nitrógeno con menor toxicidad en el
estanque, y son originados como producto final de nitrificación. Los nitratos generalmente no son
de gran interés para los acuicultores, ya los peces pueden tolerar concentraciones hasta de 1000
mg N-NO3-/L en los sistemas de producción (Timmons y Ebeling, 2010). En RAS, los niveles de nitrato
generalmente son controlados por los intercambios de agua o altos tiempos de retención en los
cuales se propicia la desnitrificación.
Nitritos
Aunque el nitrógeno de nitritos no es tan tóxico como el nitrógeno amoniacal, es perjudicial para
especies acuáticas y debe removerse del sistema. Los nitritos (N-NO -2) se originan en un paso
intermedio de la oxidación de amoniaco a nitrato en la nitrificación. Éstos pueden ser tolerados en
altos niveles, por especies acuáticas, aunque en la mayoría de los casos, son adversamente
afectados por largos tiempos de exposición a bajos niveles (<0.2 mg N-NO2- /L) (Schreier et al., 2010).
Se considera que los nitritos son relativamente rápido convertidos a nitrato, ya sea por ozono o
por bacterias nitrificantes en un biofiltro adecuadamente controlado.
Dióxido de carbono
La mayor concentración de dióxido de carbono (CO 2) se produce por respiración de los peces y la
descomposición de materia orgánica. El CO2 es una sustancia muy soluble en agua, su
concentración es proporcional a la alcalinidad en los rangos normales de pH encontrados en
acuicultura, entre 6 y 8.5. La concentración de CO 2 en el estanque debida a la atmósfera se
considera baja debido a su baja concentración en la misma (0.035% en volumen).
pH
Alcalinidad
Figura 2.4 Formas de carbono inorgánico a diferentes valores de pH (Henry y Heike, 1999)
Salinidad
Dependiendo de la cantidad de sales en el agua, ésta puede clasificarse como dulce, salobre o
salada, aunque no hay límites claros en cuanto a la caracterización de cada uno de éstos tipos. Los
peces mantienen la concentración de sales disueltas en sus fluidos corporales, regulando el
intercambio de iones del ambiente. Cada especie tiene un rango óptimo para reproducción,
crecimiento, aunque la tolerancia de la mayoría de las especies acuáticas es bastante amplia. En
los sistemas de agua dulce generalmente se mantienen una concentración entre 2 y 3 ppt
(Timmons y Ebeling, 2010).
Sólidos
Los sólidos en el sistema de cultivo son originados como residuos de alimento, materia fecal, algas,
y residuos celulares, entre otros. Éstos pueden clasificarse en sólidos sedimentables, sólidos
suspendidos y sólidos disueltos. Diferentes estudios indican que los peces producen entre 0.3 y 0.4
kg de sólidos suspendidos totales (SST) por cada gramo de alimento, siendo la principal fuente de
demanda química de oxígeno y nutrientes en el sistema. En la operación normal de un cultivo
acuícola en agua dulce, se recomiendan valores de 25 mg SST/L (Timmons y Ebeling, 2010). La tilapia
puede tolerar concentraciones de hasta de 80 mgSST/L, si los otros parámetros están ajustados.
Otros
El cultivo de peces en sistemas controlados, usando sistemas de recirculación (RAS por sus siglas
en inglés: recyrculating aquaculture systems), constituye una tecnología útil en el tratamiento de
aguas residuales. Los países Europeos, como Reino Unido, Irlanda, Italia y Noruega, promueven los
sistemas de recirculación como una opción para el desarrollo de la acuicultura, ya que son capaces
de recircular 90-99 % del consumo de agua y permiten un mejor control sobre el medio y
parámetros de calidad del agua, optimizando el cultivo de peces (Badiola et al., 2012).
Un RAS requiere menos del 10% del agua de “recambio”, fundamentalmente por evaporación y
mucho menos espacio en estanques, para cultivar la misma cantidad de peces, que cuando no se
tiene recirculación. En un sistema de cultivo se puede incrementar la productividad de 6 hasta 48
kg de peces anualmente por cada L/min de agua (Timmons y Ebeling, 2010).
Estos sistemas también ofrecen la ventaja de mantener a los peces en un ambiente monitoreado,
permitiendo el desarrollo de productos controlados. Ésta tecnología es adaptable a especies,
permitiendo a los operadores utilizar el proceso según las necesidades del mercado. Wik y
colaboradores (2009) menciona las siguientes propiedades de un sistema de recirculación:
Otras ventajas son se pueden escalar en forma relativamente fácil y que son ventajosamente
económicos por unidad de volumen.
Tabla 2.3. Uso de agua por kg de producción acuícola (Timmons y Ebeling, 2010)
Intensidad de
Especie y sistema
producción Agua requerida Espacio Agua
(kg/ha·año) (L/kg)
O. niloticus (tilapia del Nilo)
1,340,000 100 1 1
RAS
O. niloticus (tilapia del Nilo)
17,400 21,000 77 210
Estanque
I. punctatus (Bagre de canal)
3,000 3,000 – 5,000 448 400
Estanque
S. gairdneri (Trucha arcoíris)
150,000 210,000 9 2,100
Canal
Camarones Panaeid
4,200 – 11,000 11,000 21,340 177 160
Estanque
Filtración biológica
Influente Filtraci
Tanque de producción
Residuos
ón
El diseño de éste tipo de sistemas debe asegurar que los parámetros importantes, que afectan la
calidad del agua y la productividad de los peces, como el oxígeno, amoniaco, dióxido de carbono y
sólidos suspendidos se encuentran completamente balanceados.
La ecuación de balance de masa de cada uno de ellos en el sistema en condiciones estables puede
describirse como:
Donde Q0 y Q1 son los flujos de entrada de agua limpia y de reciclaje respectivamente, expresadas
como L/d y C0 y C2 son las concentraciones del parámetro en la entrada de agua limpia y de
En un RAS toda el agua es recirculada y no hay descargas, así que Qentrada = Qsalida (Figura 2.6).
Entonces se tiene lo siguiente ecuación de balance de materia:
P Q1
Q1 Sistema de
Ctanque (C1) tratamiento
C1 C2
𝑄1𝐶2 + 𝑃 = 𝑄1𝐶1
El cálculo de las concentraciones de cada parámetro de calidad del agua que sale del tratamiento
(C2), es un indicativo del flujo de masa necesario de cada parámetro de calidad del agua. Al tener
los cálculos necesarios, el sistema se diseña y se debe operar, con los flujos de agua más bajos,
que permitan mantener el valor adecuado de los parámetros de control, al valor de diseño.
Un reactor de lecho móvil (Moving Bed Biofilm Reactor, MBBR), es un modelo que utiliza las
ventajas de lodos activados y los del proceso de biofiltración, tienen poca pérdida de carga
hidráulica, bajos tiempos de retención hidráulica y altos tiempos de retención celular (Rusten et
al., 2006; Alves et al., 2002). La mayor parte del conocimiento actual sobre la operación de los
MBBR han sido obtenidos a través de estudios de tratamiento de agua, por medio del monitoreo
unidimensional de parámetros fisicoquímicos (Zhang et al., 2013), es por ello que es importante
evaluar las diferentes aplicaciones en las que se pretende usar y en condiciones más cercanas a las
condiciones reales de operación, mediante reactores a escala piloto.
mezclado, para mantener el crecimiento de biopelícula debido a que proveen una alta densidad de
área superficial (i.e. 500 m2/m3). Un MBBR, a comparación de un biofiltro de lecho sumergido, no
requiere recirculaciones o retrolavados, por lo tanto pueden ser operados en continuo, además de
no tener pérdidas de carga y problemas de taponamiento (Zhang et al., 2013). En la tabla 2.4 se
muestra una comparación de los sistemas MBBR con un sistema de biofiltración por lecho
sumergido.
Tabla 2.4 Comparación de sistemas de biofiltración de lecho sumergido y lecho móvil (MBBR)
La operación del sistema de tratamiento de agua requiere un clarificador para sedimentar sólidos
desprendidos; éste tipo de sistemas tiene ventajas para el sistema de tratamiento ya que reduce la
carga de sólidos en el clarificador (Metcalf y Eddy, 2003), y pueden operarse en condiciones
aerobias, anaerobias o anóxicas. La turbulencia es importante para el transporte advectivo de
nutrientes. Las condiciones hidrodinámicas afectarán a las propiedades físicas de la biopelícula y a
su vez, a las tasas de consumo en los reactores. La velocidad de circulación y las condiciones del
mezclado se verán afectados por la geometría del reactor, la tasa de suministro de aire y la
densidad de partículas de soporte con biopelícula (Orantes, 2001). En condiciones aerobias, el
movimiento se origina debido a las corrientes de aire suministrado, mientras que en condiciones
anaerobias o anóxicas, se lleva a cabo por medio de un mezclador (Figura 2.7).
Figura 2.7 Sistema de agitación de un MBBR en a) Reactor aerobio; b) Reactor anaerobio (Rusten
et al., 2006)
El volumen de llenado de elementos representa una ventaja, ya que es calculado a preferencia del
diseñador, aunque se recomienda que éste no exceda del 70% del reactor. Finalmente, después
del reactor biológico, también es necesario implementar un un proceso de separación para
retener los sólidos que se desprendieron de la biopelícula (Rusten et al., 2006).
Uno de los materiales comúnmente usados es Kaldnes® (Colt et al., 2006). Ésta tecnología fue
desarrollado por Kaldnes Miljoteknologi (Patente europea no. 0,575,314, Patente EUA no.
5,458,779) en Noruega a finales de los años 80’s y principios de los 90’s (Rusten et al., 2006). En la
tabla 2.6 se muestran algunas características de materiales tipo Kaldnes® en sus diferentes
variedades comerciales.
BIOFILTRACIÓN
Un biofiltro consiste en un reactor biológico, en el que biomasa activa se encuentra formando una
biopelícula, sobre un material de soporte en el sistema de tratamiento. Su operación implica el
flujo de agua residual descendente, ascendente u horizontal (Metcalf y Eddy, 2003) a través de un
volumen de material de soporte donde las bacterias comienzan degradar los residuos hasta
convertirlos en compuestos inorgánicos. Esta conversión depende de la presencia de
microorganismos, que sean capaces de incorporar a su metabolismo aquellos contaminantes del
efluente en cuestión. En el ambiente de acuicultura, el nitrógeno es un componente fundamentar
porque lo contienen las proteínas que requieren los peces. Hay cuatro fuentes principales de
residuos de nitrógeno: amonio, urea, ácido úrico y aminoácidos excretados por los peces, residuos
orgánicos de organismos muertos o en decadencia, alimento no comido y heces en el agua, y
nitrógeno gas a la atmósfera (Timmons y Ebeling, 2010).
Su estructura puede representarse como un conjunto estructurado de capas: primero se tiene una
capa externa de gas y/o líquido, en donde se va a lleva a cabo el transporte de nutrientes por
convección hasta la siguiente capa, donde se encuentran los microorganismos estructurados en
forma de una biopelícula porosa, transportando los nutrientes por difusión; la tercera y última
capa consiste en el medio de soporte (conocida también como sustrato), que es un medio físico de
soporte sobre el cual se desarrolla la biopelícula (Figura 2.9).
Sustrat
Base Gas
Líquido
de película Superficie de
película
Los componentes del medio determinan la presencia de ciertos tipos de microorganismos en una
biopelícula, los cuales modificarán el microambiente de forma específica a su actividad
metabólica. Las biopelículas se encuentran ampliamente estratificadas y con una composición
heterogénea en función a la profundidad, relacionada con la distribución de especies y zonas
aerobias/anóxicas en el mismo. Los componentes principales de una biopelícula son células y
polímeros extracelulares (EPS, por sus siglas en inglés) (Lazarova y Manem, 1995). La cantidad de
EPS puede variar dependiendo de numerosos factores ambientales como el nivel de oxígeno,
disponibilidad de nitrógeno, desecación, baja temperatura, bajo pH, entre otros (Ahimou et al.,
2007). Los EPS se encuentran formados por proteínas, polisacáridos, ácidos nucléicos y lípidos,
cada uno de los cuales puede variar en concentración y estructura en la biopelícula dependiendo
de las condiciones en las cuales se encuentra el reactor (Ahimou et al., 2007). La mayor parte de
los EPS son polisacáridos, entre los que encuentran azúcares comunes como glucosa, galactosa,
manosa, ramnosa, N-acetil glucosamina, ácido glucuronico y ácido galacturónico. En la biopelícula
nitrificante, los polisacáridos se forman por las bacterias heterótrofas, utilizando los SMPs
producidos por las bacterias nitrificantes a través de la nitrificación y los procesos de decaimiento
(Zhang et al., 2013). Los polisacáridos representan arriba del 65% de material extracelular en el
sistema (Lazarova y Manem, 1995).
Las propiedades físicas, químicas y biológicas son dependientes del medio en el cual se acumula la
película. Los microorganismos predominantes modifican el microambiente del sustrato a su
actividad metabólica, además de sus otros componentes mayoritarios, los cuales son
principalmente polisacáridos (Characklis y Marshall, 1989).
El paso inicial de formación de biopelícula tiene un importante rol y tiene un impacto considerable
en la estructura y propiedades fisicoquímicas de la biopelícula madura (Lazarova y Manem, 1995).
El espesor efectivo es importante y depende del volumen de biomasa fija y varía durante los
diferentes pasos del crecimiento microbiano; generalmente es espesor es menor a 100 m
distribuida sobre la superficie del soporte (Rusten et al., 2006). Las biopelículas se consideran muy
hidrófilas debido a la cantidad de EPS, ya que contienen muchos residuos de azúcar hidrofílicos
(Characklis y Marshall, 1989).
Debido a que la biomasa heterótrofa que remueve material orgánico compite con la biomasa
nitrificante a altas cargas orgánicas, en los MBBR de granjas acuícolas lo deseable es que sean
operados a bajas cargas orgánicas, sin embargo, es un parámetro que al que no se le suele dar
prioridad (Rusten et al., 2006).
2.1.12 Nitrificación
El nitrógeno amoniacal puede ser oxidado en el medio acuático, siempre que haya las condiciones
físicoquímicas necesarias y la presencia de bacterias nitrificantes. Hay dos grupos filogenéticos de
bacterias, que llevan a cabo nitrificación colectivamente. Se encuentran categorizadas como
bacterias autótrofas quimiosintéticas, debido a que derivan su energía de compuestos inorgánicos,
opuesto a las bacterias heterótrofas que derivan su energía de compuestos orgánicos. Las
bacterias amonio-oxidantes (AOB) obtienen su energía catabolizando amoniaco no ionizado a
nirito e incluyen bacterias de los géneros Nitrosomonas spp., Nitrosococcus spp., Nitrospiras spp.,
Nitrosolobus spp. y Nitrosovibrio spp. Generalmente se asocia la conversión de nitritos a nitratos a
las del género Nitrobacter spp. Las bacterias nitrificantes son autótrofos obligados, los cuales
consumen CO2 como fuente primaria de carbono inorgánico, y aerobias obligadas, las cuales
requieren oxígeno para crecer. La nitrificación es el proceso biológico de oxidación de amoniaco a
nitritos, y posteriormente de nitritos y nitratos, en condiciones aerobias estrictas. Las dos
reacciones son llevadas a cabo secuencialmente. Debido a que el primer paso tiene una tasa de
reacción cinética más alta que la segunda, la cinética general es usualmente controlada por la
oxidación de amoniaco y como resultado, no deber haber acumulación de nitritos en un reactor
con capacidad nitrificante.
Los factores más significativos en la nitrificación tienen que ver con las características nitrificantes,
como la cantidad de biomasa nitrificante, la velocidad de crecimiento de las bacterias nitrificantes
y el coeficiente de rendimiento, es decir, en cuanto más crecimiento tengan, más amonio será
oxidado (Pollard, 2006; Chen et al., 2006). La actividad y máximo tamaño de población de
bacterias nitrificantes depende de la cantidad de sustratos de energía que estén disponibles, hay
ciertos factores de operación que influyen en el proceso, como la relación C/N, la alcalinidad, la
concentración de oxígeno disuelto, pH, toxicidad, el tiempo medio de residencia celular y
temperatura.
Debido a los efectos de difusión, las tasas de nitrificación son muy dependientes de las
+
concentraciones de N-NH 4
y OD. Normalmente el oxígeno es el sustrato limitante a altas
+ +
concentraciones de N-NH 4
y, por el contrario, el de N-NH lo es a bajas concentraciones de
oxígeno. Altas concentraciones de OD mejoran las velocidades de nitrificación, pero inhiben el
proceso de desnitrificación (Meng et al., 2008). Las bacterias nitrificantes obtienen energía para su
actividad celular, incluyendo el anabolismo, a partir de la oxidación. Sin embargo, la energía
obtenida a partir de la la oxidación de amonio ionizado y de los nitritos, las bacterias nitrificantes
se reproducen muy lentamente. Bajo condiciones óptimas de operación, la generación de éste tipo
de bacterias es de 8 a 10 horas. La generación de éstas bacterias también es dependiente de la
temperatura, son más activas y se reproducen sobre un rango entre 5 y 40°C, con una media de
30°C (Gerardi, 2006). Estas bacterias son quimiolitoautótrofas, ya que obtienen su energía para la
síntesis celular por consumo de carbono inorgánico, es decir CO 2; el consumo de éste por bacterias
autótrofas nitrificantes es en forma de alcalinidad por bicarbonato (HCO -),
3 que se disuelve en
H2CO3 H+ + HCO -
3
Por cada gramo de N-NH +4 oxidado a nitrógeno de nitratos, se consume aproximadamente 4.18g
de oxígeno y 7.07g de alcalinidad (como CaCO 3). Si la fuente de carbono es baja en alcalinidad, se
debe monitorear éste parámetro con la adición de bases. Algunas de las comúnmente usadas son
Ca(OH)2, CaO, Na2CO3 y NaHCO -3 (Losordo et al., 1998).
El pH deseado para el proceso se encuentra entre 6.8 y 7.2, aunque el proceso se ve favorecido a
pH mayores. Los niveles de pH por debajo de 4.5 son peligrosos para peces, y a pH por debajo de 7
reducen la actividad nitrificante de las bacterias (Rusten et al., 2006). En el proceso se producen
0.17g de biomasa (Chen et al., 2006).
El producto inicial de oxidación de amoniaco, el nitrito, puede ser tolerado a altos niveles por
especies acuáticas, aunque muchos son adversamente afectados por largos tiempos de exposición
a bajos niveles (<0.2 mgN- NO2/L) (Schreier et al., 2010b)
El cambio de concentraciones de amoniaco y nitratos generalmente son usados para estimar las
tasas de nitrificación y ésta es proporcional a la concentración de sustrato (Chen et al., 2006). Las
pruebas moleculares podrían indicarnos cuantas bacterias nitrificantes se encuentran en la
comunidad microbiana, sin embargo no pueden medir que tan rápido están creciendo (Pollard,
2006). La concentración mínima de NAT para biofiltros nitrificadores sumergidos encontrada por
Zhu y Chen (1999) fue de 0.07 ± 0.05 mg/L a 27.2°C. Rusten y colaboradores (2006) reportan una
tasa de remoción de 1 g N-NH +4/(m2.d) a una concentración de oxígeno de 5mg/L.
𝐾𝐶 × (𝑁𝐴𝑇𝐸𝑛𝑡 − 𝑁𝐴𝑇𝑆𝑎𝑙) × 𝑄𝐹
𝑉𝑇𝑅 = 𝑉𝑀𝐸𝐷𝐼𝑂
Donde:
La tasa de nitrificación por área, se calcula dividiendo entre el área superficial específica el VTR del
filtro, para obtener la tasa de nitrificación con respecto al área, el cual indica los gramos de NAT
removidos por metro cuadrado de medio. Otra forma de medir la remoción de nitrógeno es de
forma porcentual, el cual se determina dividiendo el cambio en la concentración de amonio en el
filtro entre la concentración inicial del mismo en el influente (Pfeiffer y Wills, 2011).
Antecedentes
Los sistemas acuícolas recirculados han sido desarrollados desde hace más de cuarenta años. La
ingeniería en éste tipo de sistemas, ha sido ampliamente desarrollada por Timmons y
colaboradores desde 1992.
Estudios de biopelícula relacionados con tratamiento de aguas crudas para potabilización pueden
ser comparables a sistemas acuícolas, debido al bajo contenido de N-NH 3 que se tiene en los
efluentes. Akker y colaboradores (2011) utilizan como criterio para evaluación del desempeño de
la biomasa, la composición y estructura de biopelículas nitrificantes en un filtro percolador,
utilizando cargas orgánicas crecientes y ligando éste parámetro con su funcionalidad y
competencia entre bacterias autótrofas y heterótrofas.
Zhang y colaboradores (2013) caracterizan por varias técnicas la biopelícula formada en reactores
de lecho móvil, para tratamiento de agua residual cruda, obteniendo relaciones lineales de
componentes de la biopelícula (polisacáridos, proteínas, ácidos húmicos, sólidos volátiles) con las
tasas de nitrificación en el reactor, especificando la factibilidad de establecer éstos datos con la
determinación del estado de la biomasa y el estado de operación de un sistema.
3 MATERIALES Y MÉTODOS
En el presente capítulo se describirá los materiales y se señalan los métodos analíticos que fueron
utilizados para llevar a cabo la parte experimental. Además de describirse la metodología utilizada
para llegar al objetivo planteado anteriormente, como base para la obtención de resultados
descritos en el capítulo 4 de este documento. El esquema general de la metodología planteada se
muestra por medio de un diagrama a continuación (Figura 3.1).
a) Cultivo acuícola
La granja acuícola del laboratorio de Biología Acuática de la UMSNH cuenta con un sistema
externo y un sistema interno. El primer paso fue realizar una evaluación de la eficiencia del
sistema de tratamiento de agua (Viveros et al., 2013) El efluente proveniente del sistema externo,
el cual consta de 15 tanques acuícolas de cultivo de (Oreochromis niloticus) en variedades de
hembras Stirling, supermachos, hembras de chitralada y supermacho Stirling, con densidades
desde 1.25 hasta 20 peces/m 3 (0.875 a 14 kg/m3). El cultivo se encuentra acoplado a un sistema de
recirculación cuyo tratamiento era por medio de biofiltración utilizando un lecho sumergido. Los
tanques iniciaron su operación un año antes de la evaluación del biofiltro y operan con una tasa de
recambio promedio de 2% del volumen de agua por día.
b) Biofiltro
El filtro biológico (Figura 3.2) recibe el efluente con un flujo de 3.2 L/s. Para su estudio, el
filtro ha sido separado en 3 etapas, en cada una de las cuales tiene lecho sumergido, como se
muestra en la figura.
Figura 3.2 Sistema de recirculación acoplado al sistema externo de la granja acuícola de la UMSNH
El filtro opera en condiciones aerobias, con un TRH de 49.2 min. El influente llega con
concentraciones de 7 mg/L de oxígeno disuelto. La temperatura no estaba controlada y oscila
entre 15.3 y 18.4°C. El pH tiene una media de 7.2±0.5. El medio filtrante para el sistema de
recirculación es grava de tezontle, con diámetro medio de partícula de ¾’’. Este se encuentra
empacado en bolsas de red plástica, sumergidas en cada una de las etapas del filtro (Tabla 3.1).
Tabla 3.1 Características del material de soporte utilizado en el biofiltro de lecho sumergido
(Viveros, 2013)
Material de soporte
Material Tezontle
Diámetro de partícula ¾’’
Área superficial 2375 m2
Volumen aparente 0.25 m3/m3
Densidad de área superficial 250 m2/m3
d) Análisis de remoción
Con el fin de determinar la eficiencia de remoción de contaminantes por medio del biofiltro, se
realizó la evaluación de diferentes parámetros de calidad del agua en cuatro puntos del reactor,
correspondientes a la entrada de efluente, punto medio de la etapa 1, punto medio de la etapa 2
y punto medio de la etapa 3. Los parámetros evaluados corresponden a demanda química de
oxígeno (DQO), sólidos suspendidos totales (SST), nitrógeno amoniacal total (NAT), nitrógeno de
nitratos (N-NO3-), oxígeno disuelto y temperatura. Se toman muestras dos veces por semana por
un periodo de dos meses, por los métodos descritos en la tabla 3.2.
En la tabla 3.3 se muestra la caracterización por unidad de área en el filtro y tanto las cargas
orgánicas como las cargas amoniacales de trabajo.
Tabla 3.3 Características del operación del biofiltro por etapa (Viveros, 2013)
El segundo paso fue analizar la biodegradabilidad del efluente acuícola (Cázares y Orantes, 2014),
con objeto de evaluar las cargas orgánicas más convenientes para la operación del sistema y poder
determinar las relaciones C/N, basados en la materia orgánica biodegradable, en las condiciones
de operación de los reactores en el laboratorio.
a) Efluente acuícola
Se utilizó el efluente proveniente del sistema externo de la granja acuícola, en el cual se tenía
cultivo de tilapia, ubicado en el laboratorio de biología acuática de la UMSNH, mismo que fue
descrito en el punto 7.1.
b) Rectores batch
Se utilizaron 3 reactores de forma ovalada de acrílico translúcido (Figura 3.3), con volumen de
operación de 10 L, con un orificio que permite la entrada de una manguera difusora de aire, para
suministrar el oxígeno necesario para la degradación de la materia orgánica por las bacterias y
mantener al menos una concentración de 2mg/L de oxígeno disuelto, y una válvula para la toma
de muestras de la suspensión, que se mantenía completamente mezclada.
c) Ensayos de biodegradabilidad
Cada corrida experimental tuvo una duración de 120 h y en todos los casos se ajustó el pH a 7 ±
0.2 por medio de la adición de ácido sulfúrico 1N. La evaluación de los parámetros indicados se
realizó cada hora durante la fase exógena esperada (aproximadamente 6 horas) y en la fase
endógena el periodo de muestreo se realizó cada 24 h, hasta el término de cada corrida.
Concentración Volumen de
Corrida Relación S0/X0 inicial de DQO inicial sustrato
experimental mgDQO / mgSSV biomasa (mgDQO/L) exógeno
(mgSSV/L) utilizado (mL)
I 0.05 750 84 0
II 0.1 800 75 0.5
III 0.3 825 118 2.95
IV 0.5 1150 101 6.37
V 0.7 1100 115 9.35
El trabajo experimental se llevó a cabo en un reactor de lecho móvil (MBBR), el cual implementado
a partir de la modificación del reactor de lecho sumergido, con material de soporte pétreo, para
transformarlo en un reactor de lecho móvil, con soporte plástico. Se transformó, dado que se
reportan mayores eficiencias para este tipo de reactores y, finalmente se evaluó su desempeño, su
cinética de remoción y la actividad de biopelícula.
El sistema de tratamiento consiste en una instalación de concreto con volumen total de 9.12 m 3,
dividido en cinco etapas con las mismas dimensiones como se especifica en la tabla 3.5.
H h L B V
Etapa (m) (m) (m) (m) (m3)
1 1.05 0.76 1.20 2.00 1.82
2 1.05 0.76 1.20 2.00 1.82
3 1.05 0.76 1.20 2.00 1.82
4 1.05 0.76 1.20 2.00 1.82
5 1.05 0.76 1.20 2.00 1.82
La reingeniería del sistema de tratamiento incluyó no solo la modificación del proceso biológico,
sino de todo el sistema modificando el tren de tratamiento del efluente (Figura 3.4). Se incluyeron
los siguientes procesos: (i) una etapa de separación, por medio de filtración con una malla con
diámetro de poro de 100 m, para una remoción parcial de sólidos suspendidos, (ii) el proceso
biológico, donde se adaptó para usarse como reactor de lecho móvil; se colocó material de
soporte tipo K1 de Kaldnes® con volumen de material variable, según la carga amoniacal (Tabla
3.8). En el reactor biológico se instaló un sistema de aireación, por medio de cuatro difusores de
burbuja fina de 9’’ de diámetro de la marca FlexAir®, según los requerimientos de diseño. El flujo
de aire se determinó considerando (i) suministrar el oxígeno necesario para el crecimiento de los
microorganismos, (ii) garantizar una mezcla correcta del material de soporte y evitar zonas
muertas y (iii) evitar fuerzas cortantes demasiado altas, que pudieran inducir un desprendimiento
de la biopelícula en el material de soporte. Posteriormente se instaló (iii) otra etapa de separación,
para realizar la función de un sedimentador secundario y, para finalizar (iv) se instaló un cárcamo
de bombeo que envía el efluente tratado al sistema de cultivo (Figura 3.5).
REACTO CARCAMO
FILTRACION 1 SEDIMENTADO
R Figura 3.4 Tren de tratamiento DE
R
El medio de soporte consiste en elementos de polietileno Kaldnes® K1, con área superficial
específica de 500 m2/m3 (Tabla 2.6).
3.1.5 Preinoculación
Con objeto de preparar y permitir un mejor desarrollo de la biopelícula del reactor de lecho móvil
se llevo a cabo un proceso de preinoculación, antes de colocar el material de soporte ya
colonizado en el reactor biológico. Inicialmente se preinoculó durante un periodo de 13 semanas,
un volumen aparente de 0.2 m3 de material de soporte Kaldnes® K1.
Para inocular se alimentó con una solución de sacarosa, nitrógeno como urea y fósforo como
fosfato de amonio dibásico, utilizando una relación C/N/P inicial de 150/15/1 suministrando una
carga orgánica de 1 g DQO/m2·d (Rusten et al., 2006) ajustando el pH entre 7 y 8 (Hoang et al.,
2013) por medio de la adición de HCl 0.1N o NaOH 1N, según el caso. La temperatura no fue
controlada durante ésta etapa experimental. Posteriormente se fue modificando la relación C/N
en tres etapas: 1) C/N = 10; 2) C/N = 5; 3) C/N = 0. Esta modificación se realizó con el objetivo de
colonizar inicialmente con bacterias heterótrofas e ir gradualmente poniendo condiciones apra
promover el crecimiento de bacterias nitrificantes en la biopelícula formada (Anexo B).
El cultivo acuícola del sistema interno del Laboratorio de Biología Acuática, consta de 4 tanques
con volumen de producción de 5.4 m 3 y 3 tanques de 4m3. En este estudio se utilizó el efluente
proveniente de un tanque de volumen de 5.4 m 3 con cultivos de supermachos tilapia (Orechromis
niloticus), con una densidad de peces de 35 kg/m 3. El estanque contenía alrededor de 323 peces
durante el periodo de estudio, con tallas entre 300 y 800 g. Los peces fueron alimentados 3 veces
por día, con un alimento comercial (pellets de 7.5mm, NUTRIPEC®) con un contenido de proteína
del 25% (Timmons y Ebeling, 2010). Éstas son consideradas como condiciones de cultivo intensivo.
Para minimizar la cantidad de alimento no comido, se alimentó a saciedad, obteniendo una media
alimentación de aproximadamente un 1.43% de la biomasa de peces.
3.1.7 Operación
El tratamiento biológico se realizó con temperatura controlada a 25°C, dado que se acondicionó
para tener esta temperatura en los tanques de cultivo y favorecer el desarrollo de los peces. Se
suministró aire de forma continua, verificando que siempre se mantuviera en el reactor una
concentración mayor a 2 mg/L de oxígeno disuelto.
Diseño experimental
Influente Carga
Autor
(mgN-NH4/L) (mgN-NH4/m2·d)
Drennan et al. (2006) 15 1
Rusten et al. (2006) 0.63 0 – 450
Terjesen et al. (2006) 0.31- 0.62 90 – 180
Guerdat et al. (2010) 0.69 1014
Pfeiffer y Wills (2011) 0.9 - 1.49 480 – 820
Zhang, et al. (2013) 1-2 136 - 455
Las cargas de trabajo elegidas (Tabla 3.8), se encuentran cerca de los intervalos reportados, pero
adicionalmente, para definir estas cargas, se tomaron en cuenta los resultados de las pruebas de
biodegradabilidad de la materia orgánica previamente realizados (Subcapítulo 3.3.3). Las cargas
amoniacales se calcularon en función de la densidad de peces en el estanque y la producción de
NAT según la metodología de Timmons (Timmons y Ebeling, 2010). La temperatura se mantendrá
con una media de 26°C (condición de salida de los estanques). Cabe notar que se trabajará con
una densidad de peces constante y el ajuste se realizará modificando la cantidad de material de
soporte en la etapa biológica.
amoniacal total (NAT), nitrógeno de nitratos (N-NO 3-), nitrógeno de nitritos (N-NO2-), nitrógeno
total (NT), temperatura (T), pH y oxígeno disuelto (OD) (Tabla 3.9). Se tomaron 3 muestras en cada
condición estabilizada.
Tabla 3.8 Métodos de análisis de calidad del agua utilizados en este estudio
-
N-NO 3
Método de reducción de cadmio a NMX-AA-079-SCFI-2001
-
N-NO 2
Método de diazotación a
SST Gravimetría
APHA - AWWA – WPCF, 1992
Métodos normalizados
SSV Gravimetría
APHA - AWWA – WPCF, 1992
a
Métodos normalizados
Espectrofotómetro Hach DR 2800
La tasa volumétrica de nitrificación, definida como la cantidad de NAT convertida a nitritos por
unidad de volumen de lecho, se calcula por medio de la diferencia de concentraciones de NAT en
la entrada y salida del filtro. Se utilizará la siguiente ecuación (Guerdat et al., 2010):
𝑁𝐴𝑇𝐼 − 𝑁𝐴𝑇𝐸
𝑉𝑇𝑅 = 1.44(𝑄𝑓 )
�
𝑚
Donde:
Existe una relación en base al área superficial, denominada tasa de nitrificación por área ATR (grN-
1
𝐴𝑇𝑅 = 𝑉𝑇𝑅 ( )
Á𝑟𝑒𝑎 𝑠𝑢𝑝𝑒𝑟𝑓𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 𝑒𝑠𝑝𝑒𝑐í𝑓𝑖𝑐𝑎
Donde el área superficial específica para el material de soporte Kaldnes® k1 es de 500 m2/m3
La biopelícula fue analizada cuantificando: sólidos totales en biopelícula (ST bp), sólidos volátiles
(SVbp), contenido de proteína (PN) y contenido de polisacáridos (PS).
Para el análisis de sólidos totales y volátiles en la biopelícula se desprendió la biomasa del material
de soporte, por medio de un baño ultrasónico por 10 minutos (Hamilton et al., 2003), utilizando
como medio de dilución agua destilada. Esto fue realizado por medio de un sonicador Branson
modelo 2510 (117V, 40kHz), tomando 10 piezas de material y bajo diluciones adecuadas.
Posteriormente se determinó el contenido de sólidos totales y volátiles de acuerdo a los métodos
normalizados (Tabla 3.9). Se determinó la densidad de biomasa por unidad de área superficial
(Characklis y Marshall, 1989).
4 RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Tabla 4.1 Resultados de la evaluación de parámetros de calidad del agua para efluente acuícola en
el filtro sumergido.
En los resultados de puede observarse que, en todas las condiciones experimentales, las
concentraciones de DQO residual, después de la biodegradación, fueron menores a loas 30 mg/L.
En todas las cargas orgánicas se presentaron dos etapas: primero, la fase exógena, en la cual la
totalidad de sustrato fue degradado y, posteriormente una fase endógena, en la cual se tiene un
consumo de productos de reserva de energía, dado que se tenía una suspensión en condiciones de
carencia de sustrato (Lobos et al., 2005). También se observó un comportamiento diferenciado
entre las S0/X0 < 0.5 kgDQO/kgSSV. la fase exógena duró menos de 10h, mientras que para S 0/X0 > 0.5
kgDQO/kgSSV la fase exógena duró hasta 55h.
100
50
0
0102030405060708090100 110 120
Tiempo (h)
S/X=0.05 S/X = 0.1 S/X = 0.3 S/X = 0.5 S/X = 0.7
Los resultados muestran que en relaciones S0/X0 de 0.05, 0.1 y 0.3, se observa una tendencia lineal
en la fase exógena. En estos casos puede observarse un aumento en la velocidad de crecimiento
celular (rs) al aumentar la carga orgánica. Mientras que en las dos cargas mayores se observa que
hubo un retardo al inicio de la fase degradativa, que implica que las bacterias tuvieron necesidad
de adaptarse a las nuevas condiciones de operación, posteriormente incrementan sus velocidades,
aunque nunca alcanzan las velocidades alcanzadas en la carga orgánica S 0/X0 = 0.3 kgDQO/kgSSV
(Figura 4.2).
18
16
14
12
10
8
6
4
2
rs
Si analizamos la segunda fase, se puede observar que, en la corrida experimental sin cosustrato
S0/X0 = 0.0.05 kgDQO/kgSSV, al final de la fase endógena se logra alcanzar una DQO menor que la
DQO0, lo cual revela que sí es posible degradar el efluente acuícola, sin la necesidad de una adición
de una fuente de carbono complementaria, como cosustrato, sin embargo la velocidad de
degradación resulta la más baja (Figura 4.2) y, aún en la fase endógena hay una disminución de la
concentración de DQOSol, lo cual implica que sigue habiendo una degradación de los compuestos
orgánicos solubles lentamente biodegradables, es decir, los productos microbianos solubles (SMP)
y la fracción más lentamente biodegradable del efluente acuícola. Con las cargas orgánicas S0/X0 =
0.1 y 0.3 kgDQO/kgSSV, también se logran alcanzar DQO Sol inferiores a la DQO0, lo cual indica que en
estas condiciones de operación también es posible degradar el efluente acuícola en la fase
exógena y se alcanzan velocidades más altas de degradación (Figura 4.2).
Por el contrario, en las cargas orgánicas más altas, no se alcanzan a obtener concentraciones de
DQOSol inferiores a la DQO0, lo que implica que los residuos metabólicos de las bacterias persisten
en forma soluble en el reactor y por lo tanto no es conveniente usar estas condiciones de
operación cuando se va a tratar este efluente acuícola.
4
k
1
0 0.2 0.4 0.6 0.8
0 S/X
Figura 4.3. Coeficiente de decaimiento en corridas experimentales
651.21 mg /m2 d56.25 mgNAT/m2 d64.01 mgNAT/m2 d 75.68 mgNAT /m2 d 80.94 mgNAT /m2 d
3
Alimento
0 0 20 40 60 80 100
Tiempo de experimentación (d)
Figura 4.3 Tasa de alimentación proporcionada a los peces durante el periodo de estudio
Por otro lado, los ajustes practicados al cultivo, por biometría, buscaban lograr condiciones
iniciales similares en cada corrida experimental, para garantizar la uniformidad en el cultivo. Se
puede apreciar que únicamente en la primera carga se tuvo un número ligeramente superior, que
se refleja también en un mayor incremento en la densidad alcanzada al final de la corrida
experimental, sin embargo en ningún caso se tuvo una variación entre las respectivas densidades
superior al 10% (Figura 4.5).
60 400
50 350
40 300
30 250
Número de
20 200
Densidad
10 150
0 100
50
0
020406080100
Carga amoniacal (mgNAT/m2d)
Se operó el reactor para tratamiento del efluente acuícola por un periodo de 112d, durante el cual
el sistema fue alimentado de forma continua con el agua residual proveniente del cultivo acuícola
en recirculación, cuyas densidades se mantuvieron uniformes (Figura 4.5). También se presentan
los valores experimentales de los parámetros fisicoquímicos, con objeto de analizar las
condiciones fisicoquímicas en las que se encontraba el reactor biológico.
4.2.2.1 Temperatura y pH
La temperatura del agua de cultivo fue controlada a 26°C. Sin embargo, el sistema de tratamiento
se encuentra en la parte del laboratorio que se encuentra a la intemperie, y por lo tanto la
temperatura del agua en el reactor es afectada por la temperatura ambiente. Es importante
resaltar éste hecho ya que la temperatura afecta solubilidad del oxígeno disuelto en el tanque y
ésta a su vez, afecta la actividad biológica. En la nitrificación, una disminución de 10°C resulta en la
disminución de la tasa de remoción del 50% (Timmons y Ebeling, 2010). Sin embargo, la
temperatura no mostró descensos importantes, se tuvo una temperatura media y desviación
estándar respectivamente de 25.3 ± 1.2 °C y en todos los casos se mantuvo la temeratura arriba de
los 21 °C (Figura 4.6).
14 35
51.21 56.25 64.01 75.68 80.94
mgNAT/m2 d mgNAT /m2 d mgNAT/m2 d mgNAT /m2 d mgNAT /m2 d
12 30
10 25
8 20
Temperatura
6 15
p
4 10
2 5
0 0
030 60 90
Días de experimentación
pHTemperatura
El pH, no obstante que no se controló, siempre se mantuvo muy estable con una media y
desviación estándar de 7.9 ± 0.20 y respectivamente (Figura 4.6) y, todos los valores se
encontraron en un rango de entre 7.3 y 8.32 en el periodo de estudio. Diversos estudios sugieren
que la actividad de bacterias nitrificantes se presenta con valores entre 6 y 9, con un rango óptimo
para nitrificación entre 7.2 y 7.8 (Timmons y Ebeling, 2010), que prácticamente coincide con el
rango observado en los datos experimentales (Figura 4.6). Por otro lado, el pH cercano a la
neutralidad es favorable al cultivo de peces. Cabe destacar que la proporción de nitrógeno
amoniacal en forma no ionizada (N-NH 3) depende de este valor. Para éste experimento y bajo las
condiciones de operación utilizadas, se estima que el 4.3% del nitrógeno amoniacal se encuentra
como N-NH3 (Timmons y Ebeling, 2010), lo que corresponde a una concentración estimada de
0.012 mg/L, cifra menor al valor tóxico reportado para tilapias (0.02 mg/L) (Beveridge y
McAndrew, 2000).
10
0
0 20 40 60 80 100
Tiempo de experimentación (d)
Puede observarse que en todos los casos, las cargas amoniacales experimentales fueron
considerablemente menores a las concentraciones teóricas, estimadas con base en la metodología
de diseño recomendada para este tipo de sistemas (Timons, 2010). Lo anterior puede deberse al
bajo porcentaje de proteína que contiene el alimento utilizado y a la falta de asimilación por parte
de los peces, debido a la edad, talla o condiciones climáticas. De cualquier forma sería importante
tomar en consideración posibles correcciones a estas estimaciones, dada la importancia de este
parámetro en la operación de los sistemas de tratamiento de agua en los RAS. También se
analizaron las concentraciones de las diferentes formas de nitrógeno presenten en el medio para
cada corrida experimental (Tabla 5.3).
Tabla 4.3 Concentraciones de compuestos de nitrógeno en la entrada y salida del reactor en las
corridas experimentales
C1 C2 C3 C4 C5
(51.21 mgN-
(56.25 mgN- (64.01 mgN- (75.68 mgN- (80.94 mgN-NH4+/m2d)
NH4+/m2d)
NH4+/m2d) NH4+/m2d) NH4+/m2d)
Inf Efl Inf Efl Inf Efl Inf Efl Inf Efl
NAT
(mg/L) 0.29 0.08 0.29 0.08 0.29 0.08 0.30 0.05 0.28 0.05
N-NO2 -
0.12 0.05 0.17 0.05 0.14 0.05 0.24 0.07 0.17 0.07
(mg/L)
-
N-NO3 5.83 11.00 12.10 12.97 10.63 9.83 10.40 8.97 9.27
(mg/L) 6.83
NTOT
(mg/L) 16.75 17.20 21.67 16.33 25.57 25.97 29.90 30.93 19.20 20.30
NTK
(mg/L) 9.80 11.32 10.50 4.23 12.46 15.32 19.82 20.52 10.06 11.03
Las tasas de remoción de amoniaco obtenidas alcanzan valores de hasta 84%, similares a las
reportadas para otros sistemas de tratamientos de efluentes acuícolas (Drennan et al., 2006;
Rusten et al., 2006; Terjesen et al., 2013; Guerdat et al., 2010) con lo cual puede afirmarse que los
reactores MBBR son útiles para los sistemas de acuicultura.
Las tasas de remoción de nitrógeno amoniacal por unidad de área observadas, oscilan entre 31.8 y
67.7 mgN—NH4/m2·d, con valores menores a las observadas por otros autores que trabajaron con
efluentes acuícolas (Terjesen et al., 2013; Guerdat et al., 2010; Pfeiffer y Wills, 2011). Puede
observarse una relación lineal con el aumento de carga amoniacal, lo cual asemeja a lo reportado
por Rusten et al. (2006) y Zhang et al. (2013) para cargas amoniacales bajas. Esta relación lineal
también se aplica al contenido de sólidos acumulada por unidad de área superficial (Figura 4.8).
Cabe notar que si bien se considera que la actividad de la biopelícula no es proporcional a la
cantidad de biomasa en la biopelícula (Lazarova y Manem, 1995), estos resultados si muestran una
correlación entre cantidad de biomasa y tasas de nitrificación, en las condiciones de trabajo
experimentales. Estos resutlados implican que se tienen tasas de degradación de primer, orden en
la remoción de amonio, considerando que esta cinética puede ser linearizada en cargas bajas,
dado que la biopelícula en los reactores de lecho móvil presenta una cinética tipo Monod
(Orantes-Avalos y González Martínez, 2003).
80 6
70
5
60
y = 0.1015x - 2.6124
50 4
R² = 0.9667
40 3
SVbp
y = 1.1818x - 27.603
ATR (mgN-
30R² = 0.9947 2
20
101
0 0
0102030405060708090
Carga amoniacal (mgN-NH4/m2d)
ATRSVbp
Figura 4.7 Relación de la carga amoniacal con las tasas de remoción de NAT y acumulación de
sólidos en biopelícula
Es importante resaltar que no obstante que la relación C/N es considerada determinante para la
presencia de bacterias autótrofas nitrificantes, en esta experimentación no fue controlado, con
objeto de no incrementar los costos de operación del sistema de tratamiendo, derivados de la
adición de sustratos exógenos. Los valores de la relación C/N estimados para esta experimentación
se mantuvieron entre 1.8 y 3.5, medidos como DQO/NTK, lo cual sugiere que efectivamente se
tenía presencia de bacterias nitrificantes en el sistema de tratamiento (Timmons y Ebeling, 2010;
Guerdat et al., 2011). También ha sido reportado que las mayores tasas de remoción de amonio se
obtienen en reactores operados con relaciones C/N bajas (Zielinska et al., 2012; Suhr et al., 2012;
Seixo et al., 2004).
El tiempo de retención celular se define como el tiempo promedio que las células permanecen en
el sistema, el cual puede ser calculado como:
𝑆𝑇𝑏𝑖𝑜𝑝𝑒𝑙í𝑐𝑢𝑙𝑎 ∙ 𝐴
𝑇𝑅𝐶 =
𝑆𝑇𝑒𝑓𝑙𝑢𝑒𝑛𝑡𝑒 ∙ 𝑄
Donde
Los TRC altos, que se relacionan con bajas tasas de crecimiento de microorganismos y
consecuentemente bajas tasas de producción de lodos (Metcalf y Eddy, 2003). Estos TRC altos
permiten además, que se tenga una mayor diversificación de las especies presentes en las
poblaciones microbianas. Esto le da mayor estabilidad al sistema y permiten mayores tasas de
remoción (Orantes, 2001). En la experimentación se estimaron TRC de que se encuentran entre
1.6d y 7.22d, para las cargas amoniacales de 51.21 mg/m 2d y 80.94 mg/m2.d respectivamente
(Figura 4.9). Estos TRC, con excepción del más bajo (i.e. 1.6 mg/m 2d, están ligeramente debajo de
los óptimos (Metcalf y Eddy, 2003), no obstante, se reportan adecuados para que se lleve a cabo
nitrificación (Rusten et al., 1994).
8.0
7.0
6.0
TRC5.0
4.0
3.0
2.0
1.0
0 20 40 60 80 100
0.0 Carga amoniacal (mgN-NH4/m2d)
En las tasas de producción promedio de N-NO -3 y N-NO -, en cada carga amoniacal, no existe una
tendencia marcada. Esto puede deberse a la recirculación en el sistema ya que estos compuestos
de nitrógeno son difícilmente utilizados por las bacterias para síntesis celular, dado que por su
carga iónica, no resultan tan afines al transporte activo a través de la membrana celular. Se sabe
que las formas de nitrógeno menos oxidadas, tienden a oxidarse más fácilmente en presencia de
sustrato (nitrógeno amoniacal) y oxígeno disponible (Timmons y Ebeling, 2010). Es por ello que la
mayoría de estas especies químicas son transformadas en nitratos. Existe un incremento de 20%
en la acumulación de nitritos en las mayores cargas, debido a que existe una mayor cantidad de
sólidos en la biopelícula, lo que podría intervenir en la difusión de sustrato a través de la misma, ya
que el coeficiente de difusión de nutrientes disminuye a medida que el grosor de la biopelícula,
además de que el OD se encuentra menos disponible para las bacterias (Characklis y Marshall,
1989).
La asimilación de nitrógeno, entendida como la cantidad de nitrógeno que fue eliminada del
efluente acuícola y utilizada para la formación de biomasa, se calculó con base en la
determinación del porcentaje de nitrógeno en la biomasa sintetizada. Los resultados indican que
el porcentaje de nitrógeno en la biomasa sintetizada y las tasas de nitrificación se incrementan
conforme aumenta la carga amoniacal, lo cual concuerda con lo reportado por Zhang et al. (2013),
quienes relacionan el contenido de proteínas en la biomasa, con el aumento en las tasas de
nitrificación.
0.1 80
0.09
70
y = -0.0004x + 0.1105
0.08 R² = 0.8453
60
0.07
50
0.06
Nitrógeno asimilado
ATR (mgN-
0.05 40
y = 1.1818x - 27.603
0.04 R² = 0.9947
30
0.03
20
0.02
10
0.01
0 0
0102030405060708090100
Carga amoniacal (mgN-NH4/m2d)
Este análisis fue comparado con la composición de carbohidratos en la biomasa (Figura 4.11), lo
cual muestra que se tiene una relación directamente proporcional entre el contenido de
polisacáridos y la cantidad de biomasa en el reactor y, una relación inversamente proporcional del
contenido de proteías en la biomasa. Esto último difiere de los resultados reportados por Zhang et
al. (2013), quien encuentra una relación directamente proporcional del contenido de proteína en
la biomasa. El aumento en la concentración de carbohidratos puede explicarse como una
acumulación de polímeros (i.e. PHA, polisacáridos) que sintetizan las bacterias como productos de
almacenamiento de reservas de energía, en cargas orgánicas bajas (Lobos et al., 2005). La síntesis
de productos de reserva es más simple y necesita una energía mucho menor que la síntesis de los
compuestos celulares. La síntesis de estos compuestos es relativamente simple y necesita de
energía mucho menor que los compuestos celulares, por ello esta respuesta es mucho más rápida
que el crecimiento (Orantes, 2005).
0.6 0.35
0.59
0.30
0.58
0.25
0.57
0.20
PN (mg/mg
0.56
PS (mg/mg
0.55 0.15
0.54
0.10
0.53
0.05
0.52
0.51 0.00
0102030405060708090100
ATR (mgN-NH4/m2d)
PN asimiladaPS asimilada
C1 C2 C3 C4 C5
(0.051 gN-NH4+/m2.d) (0.056 gN-NH4+/m2.d) (0.064 gN-NH4+/m2.d) (0.075 gN-NH4+/m2.d) (0.081 gN-NH4+/m2.d)
DQOTOT inf
67 54 39 46 34
(mg/L)
DQOTOT inf
55 43 37 34 27
(mg/L)
Remoción (%) 18 20 7 27 21
E (gDQO/m2.d) 2.12 2.16 0.59 3.11 2.16
C1 C2 C3 C4 C5
(0.051 gN-NH4+/m2.d) (0.056 gN-NH4+/m2.d) (0.064 gN-NH4+/m2.d) (0.075 gN-NH4+/m2.d) (0.081 gN-NH4+/m2.d)
DQOSOL inf
56 44 36 36 24
(mg/L)
DQOSOL efl
53 38 30 29 21
(mg/L)
Remoción (%) 5 14 17 19 14
E (gDQO/m2.d) 0.53 1.24 1.32 1.77 0.98
La eficiencia de remoción de DQO (g DQO/m2d) definida como la rapidez con la cual se degrada la
materia orgánica por los microorganismos por unidad de tiempo, puede calcularse de acuerdo a la
ecuación:
𝑄 ∙ (𝐷𝑄𝑂𝑖𝑛𝑓 − 𝐷𝑄𝑂𝑒𝑓)
𝐸=
𝐴
Donde:
3.5 6000
3.0 5000
SV en biopelícula
2.5
DQO
4000
2.0
3000
1.5
1.0 2000
0.5
1000
0.0 0
0.05120.05620.06400.07570.0809
Carga amoniacal (gNAT/m2.d)
DQOTOTDQOSOLSVbp
Figura 4.11. Relación de tasas de remoción de DQO con sólidos volátiles en biopelícula
En cuanto a las tasas de remoción de DQO total tuvo un máximo de 27% en la corrida 4 y un
mínimo de 7% en la corrida 3. De la misma forma, en cuanto al DQO soluble tuvo un máximo en la
corrida 4 con 18% y un mínimo en la corrida 1 con 5%. La remoción de DQO soluble si muestra una
relación directamente proporcional al contenido de sólidos volátiles en biopelícula, ya que la DQO
soluble es la que constituye directamente el sustrato para los microorganismos. La DQO total no
muestra esta relación, dado que los TRH que no llegan a las 2h seguramente limitan la hidrólisis de
los compuestos particulados y consecuentemente su degradación en la biopelícula.
5 CONCLUSIONES
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Anexos
La red de drenaje en el momento del estudio cuenta con la capacidad de drenaje de 3.5 L/s, lo cual
no garantiza el desalojo de contaminantes en condiciones de alta productividad de peces, > 4 L/s,
considerando una productividad de 40 kg/m 3, según la metodología de Timmons (Timmons y
Ebeling, 2010). Es por ello que se modificó la red de tuberías que colecta el agua y la envía al
sistema de tratamiento, colocando un sifón por estanque de cultivo (Figura A.1).
a b
a b c
a b
c d