CAPITU LO

11
Transport e de ion es y
moléculas peq ueñ as a
través de la me mb ran a
Vista desde el interior de la proteín a acuaporin a ba cter iana, que tran sporta
una
agua y glicerol hacia el interior y el exterior de la cé lula, embebida en
onó m eros idéntico s están colorea dos
membrana de fos folíp idos. Los cuatro m
ente; cada uno tiene un canal cen tral. (Tomado de M.o. Jensen y cols., 2002.
in dividualm
Proc. Noc'I Acod Se, USA 99:673 1-6736).

n todas las células, la membra na plasmática forma la barrera de el interior de otros orgánulos, como el retículo endoplas mático o el

E permeab ilidad que separa el citoplasma del ambiente exterior, lo

que define los límites físicos y químicos de la célula. Al evitar el
movimie nto sin obstácul os de los iones y moléculas hacia el interior
complejo de Golgi, que en el citosol.
Todas las membran as celulares, tanto las plasmáticas como las de
los orgánulos, consisten en una bicapa de fosfolípidos en la cual están
embebidos otros lípidos y tipos específicos de proteínas . Es esta combi-
y desde el exterior de las células, la membra na plasmática mantiene
nación de lípidos y proteínas la que les confiere a las membra nas celu -
diferencias esenciales en la composi ción del líquido extracelular y del
lares sus cualidades características de permeab ilidad. Si las membra nas
citosol; por ejemplo, la concentr ación de NaCl en la sangre y los líqui-
celulares fueran bicapas de fosfolípidos puras (véase la Fig. 10-4), se-
dos extracelulares de los animales , por lo general, supera los 150 mM,
rían excelentes barreras químicas, impermeables a casi todos los iones,
simila r a la del agua del mar en la cual -se cree- todas las células han
aminoácidos, azúcares y otras moléculas hidrosolubles. De hecho, solo
evolucio nado, mientras que la concentr ación de Na+ en el citosol es
algunos gases y moléculas hidrosolubles pequeñas, no cargadas, pue-
diez veces más baja. Por el contrario , la concentr ación del ion potasio
den difundir fácilmente a través de una bicapa de fosfolípidos puros
(K+) es más alta en el citosol que en el exterior.
(Fig. 11 -1). Sin embargo, las membran as celulares no solo deben actuar
Las membra nas de los orgánulo s, que separan el citosol del inte-
como barreras sino también como conductos, transpor tando de modo
rio r de éstos, también forman barreras de permeab ilidad. Por ejem-
selectivo moléculas e iones de un lado de la membra na al otro. La glu-
plo, la concentr ación protónic a dentro de los lisosomas, pH 5, es
cosa rica en energía, por ejemplo, debe ser importad a a la célula, y los
aproxim adamen te 100 veces superior a la del citosol, y se acumula n
deshechos deben ser eliminados.
muchos metabol itos específicos a concentr aciones más elevadas en

CONT ENIDO
474 11 .4 Canales iónicos sin compue rta y potencia l
11 . 1 Genera lidades del transporte transmembrana de membra na en reposo 495
477
11.2 Transpo rte faci litado de glucosa Y agua 11 .S Cotrans porte por simporta dores y antiport adores 502

11 .3 Bombas impu lsadas por ATP y ambient e iónico 508

483 11 .6 Transporte transcel ular
intracelu lar
 Comenzamos nuestro an álisis de las proteínas de transpo
Gases '>--~
)-_~ ·~
¿= . . . rte d
~=--~ membrana re visando algunos de 1os prmc1p1os generales de lransp e
. . . d t t 1 . Orte a
t rav és d e la Jnembrana y d1stmgu1en o en re res c ases prmcipal d
Permeable
~=-=¿-<
=~ . . . . es ee;
~= , as Ei las secciones s1gu1entes, descnb1mos la estructu ·
Moléculas ~
t as pro te U1 . 1 . . ra y lo;
polares Etanol ejemplos específicos de cada clase; ~1m1smo, mostramos de qué rnodo
Permeable
pequeñas los miembros de las familias de prote'.nas ho~ólogas_de transporte tienen

;-7 ---
no cargadas
Ag ua, urea -+ • d d s di·cerentes que les permiten a diversos tipos celulares
prop1e a e 1 1
• , operar
Explicamos tamb1en de qué modo tanto la mernb
~
ad ecua d amente • . . rana
L1geramente ~

plasmática como las de los orgánulos contienen combinaciones específi.

p ermeable
cas de proteínas de transporte que les_permiten a las célulasUevar a cabo
Moléculas
procesos fisiológicos esenciales, que mcluyen el mantenimiento del PH
1

polares 1

grandes 1 citosólico, la acumulación de sacarosa y sales en las vacuolas de las células

Glucosa, fructosa
no cargadas
~
lm permeable
vegetales y el flujo direccional de agua, tanto en los vegetales como en los
animales. El potencial de la membrana en reposo es una consecuencia
Iones
K+, Mg 2+, Ca 2+, c1 - ,
-.........1
~ )
importante del transporte iónico selectivo a tr~vés de la,s membranas,)'
analizamos el modo en el que surge este potencial. Las celulas epiteliales,
~

HC0 3- , HPO/ -
~
lm permeable
como las que tapizan el intestino delgado, emplean una combinación de
proteínas de membrana para transportar iones, _azúcares, otras pequeñas
Moléculas moléculas y agua desde un lado de la célula hacia el otro. Veremos cómo
Aminoácidos, ATP,
polares
cargadas
glucosa 6-fosfato,
proteínas, ácidos nucleicos :)
lm permeable
la comprensión de estos procesos condujo al desarrollo de las bebidas
deportivas, así como a los nuevos tratamientos para el cólera.
Nótese que en este capítulo abarcamos solo el transporte de peque-
ñas moléculas e iones; el transporte de moléculas de mayor tamaño,
Figura 11-1 Permeabilidad relativa de una bicapa fosfolipídica pura a
como proteínas y oligosacáridos, se trata en los Capítulos 13 y 14.
varios iones y moléculas. Una bicapa es permeable a muchos gases y a mo-
léculas pequeñas, sin ca rga, hidrosolubles (polares). Es ligeramente permeable
al ag ua y esencialme nte impermeable a los iones y moléculas polares grandes.
11 .1 Generalidades del transporte
transmembrana
El movimiento de casi todos los iones y moléculas pequeñas a tra-
vés de las membranas celulares está mediado por proteínas de trans- En esta sección, describimos, en primer término, los factores que ejercen
porte de membrana (proteínas integrales de la membrana embebidas influencia en la permeabilidad de las membranas lipídicas; luego, descri-
en múltiples dominios transmembrana en las membranas celulares) . bimos brevemente las tres clases principales de proteínas de transporte
Estas proteínas que se insertan en la membrana actúan de diversas de membrana que permiten que las moléculas y los iones las atraviesen
maneras, como tran sportadores, canales o bombas para transportar Los diferentes tipos de proteínas embebidas en la membrana llevan a
moléculas o iones a través del interior hidrofóbico de la membra- cabo la tarea de movilizar iones y moléculas en diferentes formas .
na . En ciertas ocasiones, los iones o moléculas son transportados de
una concentración más alta a una más baja, en un proceso favorecido
termodinámicamente, impulsado por un incremento de la entropía. Sólo los gases y las pequeñas moléculas sin carga
Ejemplos de ello son el transporte de agua o glucosa, desde la sangre atraviesan las membranas por difusión simple
hasta la mayo ría de las células del organismo. En otros casos, las mo-
léculas o los iones deben ser bombeados de una concentración más Con su núcleo hidrofóbico denso, una bicapa de fosfolípidos es -<'íl
baja a una más alta, un proceso desfavorable termodinámicamente gran medida- impermeable a los iones y las moléculas hidrosolubles.
que solo puede producirse cuando hay una fuente de energía exter- Solo los gases, como el 0 2 y el C0 2, y las pequeñas moléculas polares
na disponible para empujar las moléculas "cuesta arriba" contra un sin carga, como la urea y el etanol, pueden moverse con facilidad por
gradiente de concentración. Un ejemplo es la capacidad de la célula difusión simple a través de una membrana artificial compuesta por
para concentrar protones en el interior de los lisosomas con el fin de fosfolípidos puros o fosfolípidos y colesterol ( véase la Fi g. 11 - I ). Las
generar un pH bajo en la luz. Con frecuencia, la energía necesaria moléculas de este tipo también pueden difundir a través de las mem-
es proporcionada mecánicamente acoplando la hidrólisis liberadora branas celulares sin la ayuda de las proteínas de transporte. No se re·
de energía del enlace fosfoanhidrido terminal del ATP con el movi- ·
quiere gasto d e energía metabólica porque e1mov1m1ento
· · es· desde una
miento de una molécula o de un ion a través de la membrana. Otras . . d b . oncentra-
reg1ón de alta concentración de la molécula a una e ap c .
proteínas aco plan el movimiento de una molécula o de un ion contra . , . ( mo se VIO
ción, a favor de su gradiente de concentraoón qu1m1Ca. 0
su gradiente de concentración con el movimiento de otro a favor de · n un
en el Capítulo 2, estos movimientos so n espontáneos porque oene
t un va 1ar
su gradiente, empleando la energía liberada por el movimiento cuesta 1
valor 11S positivo (incremento de la entropía) y, por o tan °,
abajo de una molécul a O de un ion , con el impulso termodinámico t.G negativo (disminución de la energía lib re) .
del movimiento cuesta arriba de otro. El adecuado funcionamiento • · t vés de ui 13
La tasa de difusión relativa de cualq uier susta ncia, a ra
de cual quier célula radica en el preciso equilibrio entre esta importa- . d . te de con-
bicapa de fosfolípi dos puros, es proporcional a su gra 1en _
ció n y exportaci ón de varios iones y m oléculas. . . . . . d - o; el n, o
cen trac1ó n a través de la b1 capa , a su h1drofob1c1da Y taman

4 74 CAPÍTULO 11 • Transporte de iones y moléculas peque ñas a través de la membrana

 cargadas también se ve afect a d o por cualquier .
,,¡ miento. de , moléculas
. , Si una sustancia lleva una carga neta, su movi m iento a través de la
otenoa1 electnco a traves de la membrana . Cua nd o una icapa deb'
P membrana se ve rá afectado tanto por su gradiente de concentración
fosfolípidos. .pu ra separa dos espacios acuosos ' O "co mpart1m1entos" . .
como por el potencial de membrana, el potencial eléctrico (voltaje )
la permeabilidad de- la membrana puede determinarse e, •1m
iac1 ente ana-
_ '
. a través de la membrana . La combinación de estas dos fuerzas, deno-
diendo una pequena cantidad de material radiactivo .
. . . d . . . a un compart1- minada gradiente electroquímico, determ ina la dirección energética-
rn1ento y m1d1en o su velocidad de apanción en el ot C
. ro. uanto mayor mente favorable del movimiento de una molécula cargada a través de
sea el. grad1ente de. concentración de la sustancia , mas , rap1, 'd a será su
. , una membrana. El potencial eléctrico que existe a través de la mayoría
velocidad de movimiento a traves de la bicapa.
de las membranas celulares es el resultado de un pequeño desequilibrio
La hidrofobicidad de una sustancia se determ ma · ·d ·
. . ., m1 1endo el coefi- en la concentración de iones con carga positiva y negativa, a ambos
oente de part1oon K, la constante de equilibrio p . .,
. ara su part1c1on entre lados de la membrana. En las Secciones 11 .4 y 11 .5, analizaremos el
el agua .y el aceite. Cuanto. ,mayor sea el coeficiente e parttc1on d • . , de una
modo en el que surgen y se mantienen este desequilibrio iónico y el
sustancia (la mayor fracc1on encontrada en el ac ·t .,
, .. ei e en re1ac1on con el potencial resultante.
agua ),. mayor sera .la solubilidad en lípidos y' por lo t anto, mas rap1da , , . su
.
a través de la bicapa · El pnmer ·
velocidad . de. mov1m1ento paso, y el que
resulta hrrntante de la velocidad en el transport e por d'fu •, .
. . I s1on simple Tres clases principales de proteínas de membrana
es el mov1m1ento de una molécula desde la sol uc1·ó n acuosa h acia . el'
. . . . . transportan los iones y las moléculas a través de las
mtenor h1drofób1co de la bICapa fosfolipídica qu
, e se parece a 1 •
aceite de
. .
propiedades químicas. Esta es la razo' n por 1a cua1 cuanto biomembranas
ohva , . en sus , .
mas h1drofob1ca es una molécula , más rápido di' fund e a t raves , d e una Como resulta evidente en la Figura 11-1 , muy pocas moléculas y nin -
bicapa. fosfolipídica pura. Por e¡·emplo , la diet '
1 Jurea , n un grupo et1·1 o
co gún ion pueden atravesar una bicapa fosfolipídica pura, a velocidades
umdo a cada átomo de nitrógeno: apreciables, por difusión simple. Así, el transporte de la mayo ría de
o las moléculas hacia el interior y el exterior de las células requiere la
11 asistencia de proteínas de membrana especializadas. Aun en el caso de
CH 3 -CH 2 -NH-C-NH- CH 2 -CH 3 moléculas con coeficientes de partición relativamente grandes (p. ej .,
urea, ácidos grasos) y ciertos gases, como el CO 2 ( dióxido de carbo-
tiene una K de 0,01, mientras que la urea no) y el NH 3 (amoníaco), el transporte, con frecuencia, es acelerado
por proteínas específicas porque, a menudo, la difusión simple no se
produce con la rapidez suficiente como para satisfacer las necesidades
celulares.
Todas las proteínas de transporte son proteínas transmembrana
tiene una K de 0,0002. La dietilurea, que es 50 veces (0,01/0,0002) más que contienen múltiples segmentos que se expanden en la membrana;
hidrofóbica que la urea, difundirá a través de membranas que son bica- éstos son, por lo general, hélices a. Se cree que, al formar vías tapiza-
pas de fosfolípidos aproximadamen te 50 veces más rápido que la urea. das por proteínas a través de la membrana, las proteínas de transporte
De modo similar, los ácidos grasos con cadenas hidrocarbonadas más permiten el movimiento de sustancias hidrofilicas sin que éstas entren
largas son más hidrofóbicos que los que tienen cadenas más cortas y a en contacto con el interior hidrofóbico de la membrana. Aquí presen-
tamos los tres tipos principales de proteínas de transporte de la mem-
todas las concentraciones difundirán con más rapidez, a través de una
brana tratados en este capítulo ( Fig. 11 -2).
bicapa fosfolipídica pura.

fJ EJ
D Canales iónicos Transportadores
Bombas impulsadas por A TP
(10 7-10 8 iones/s) ( 102- 10 4 moléculas/s)
(10º-103 iones/s)

vC•o:]lf"º VOJ i®\7 vwv

Exterior •

c;,o,of) • • •
•ATP ADP + P;
Compuerta
i
1
Uniportador Simportador Anti portador

Et m 11
de pequeñ as moléculas específicas o iones. Los uni portadores transport an
Figura 11-2 Panorama general de las proteínas de transport~ de la un solo tipo de moléc ula a favor de su grad iente de co ncentración. m
Las
membrana. Los g radientes están indicado s por tria ngulas rnyos ~ert1_ces se proteína s cot ran spo rta doras (simpo rtadores, ID, y anti portadores, l!I) ca ta liza n
dirigen hacia la zona d e menor co ncen tració n, menor potencial_electrico o
el movimiento de una mo lécula en contra de su g radien te de conce ntración
a
ambos. Las bombas emplean la energía liberada por la h1drolis1s del ATP para
(círc ulos negro s), im pul sada po r el movimiento de uno O más iones a favor de
1mp 1 ·ones y molécu las (círcu los roJoS) en [Link]
t de los 1
u sar e1t rans por e . un gradiente electroquímico (círcul os rojos). Las diferen cia s en los mecanismos
. • ·co fJ Los canales perm iten el movimiento de iones
Su gra d 1ente e1ectroqu1m1 . . . de transpor te para esta s tres cl ases principales de proteínas d an cuen ta de sus
específicos (o ag ua) a fa vor de su grad iente electroqu1m1co. lJ Los transpor-
d iferen tes velocidades de movi miento del solu to.
t' d t n d en tro de los tres g rupos facil itan el mov1m1ento
~ ores que se enc uen ra

11 .1 Generalidades del transporte transmembrana 4 75

 Lisina

ATP (o simplemente bombas ) so n

Las bombas impulsadas por 'd 61 ' . d I ATP para movili- Exterior
1 ' de la h1 r 1s1s e
ATPasas que emplean a energ1a mbrana en contra
, ¡ - s a través de una me · ¡ eléctrico o Membrana
zar iones o molecu as pequena • · · un potenoa
de un gradiente de concentración qu1m1ca , t' es un e¡·em - plasmática
'd t ansporte ac 1vo,
ambos. Este proceso, conoc1 o como r e caso el transporte
' ra-
Citosol 2 Na•
lo de reacción quím ica aco plada (Cap. 2). En ,~st
Pd . oléculas pequeñas "cuesta arriba , en contra de un_g ADP + P;
e 10nes o m , 1d la hidró-
diente electroquímico, que requiere energía, esta acop_ a ~ .ª. ATP
.. d ATP que libera energía. La reacción total -la h1drohs1s ~e K+ ATP
l1s1s e , ,, . , ¡ uenas- es Canal Simportador
. . to "cuesta arriba de 10nes o mo 1ecu as peq K+ Na+/lisina
y e1 mov1m1en
energéticamente favorable. 'd
Los canales transportan agua, iones específicos o moléculas h1 ro-
fílicas pequeñas a través de las membranas a favor de sus grad1en~es · as de transporte de la membrana
, lf les protein
Figura 11-3 Las mu •P b ana plasmática de las células de los
de concentración o de potencial eléctrico. Como este proc~so requie- · to en la mem r
operan en conJun . . ·nd icados por triángulos cuyo vértice se-
re proteínas de transporte pero ~o :nergí~, en ci_e:tas ?,cas10nes se lo . L gradientes estan 1
~etazoar1os. os . ás ba·a. La ATPasa Na+/K+ de la membrana plasmática
conoce como "transporte pasivo o d1fus1ón facilitada , aunque se lo
nala la concen~racion ;a or !a hidról isis del ATP pa ra bombear Na+ hacia el
designa más adecuadamente como transporte facilitado. Los canales utiliza la energi~ liberaK+ :acia el interior; esto crea un gradiente de concentra-
forman un "tubo" hidrofilico o pasaje a través de la membrana, por me- exterior de la celula Y . de la célu la que dentro de ésta, y uno
. . d N + ue es mayor en el exterior
dio del cual se mueven simultáneamente múltiples iones o moléculas cion e ª q d d la célula que en el exterior. El movimiento de los
d K+ que es mayor entro e . .
de agua, en fila india, a una alta velocidad. Algunos canales permanece_n e . • mente fuera de la cél ula, a traves de prote1nas canal
iones K+ carga dos pos1t1va . . .
abiertos la mayor parte del tiempo; éstos se conocen como canales sin otencial electnco a traves de la membrana
de K+ de la mem brana, crea Un P
compuerta. La mayoría de los canales iónicos, sin embargo, s~ abren .. · · 11 ·ca es negativa con respecto a la cara extracelular-.
plasmat1ca - la cara c1toso . . ..
solo en respuesta a señales químicas o eléctricas específicas. Estos se +¡¡·s· na un cotran sportador típ ico sod10/am1noac1do,
Un transporta dor Na 1 1 , .
conocen como canales con compuerta porque una "compuerta" protei- ·¡· d · es Na+ 1·u nto con una lisina desde el medio extracelu lar
mov1 iza os 10n . " . , .
ca, alternativamente, bloquea el canal o libera el camino para abrirlo hacia el interior de la célula. El movi miento " cuesta arriba del am1noac1do es
(véase la Fig. 11 -2). Los canales, como todas las proteínas de transporte, impulsado por el movimiento "cuesta a~ajo" de _los iones Na+, promovidos ,
. ambos por el grad iente de concentracion exterior mayor que el interior de Na
son muy selectivos para el tipo de molécula que transportan .
y por el potencial negativo en el interior de la ~embrana cel~lar, que atrae los
Los transportadores (denominados también acarreadores) movi-
iones Na+ cargados positivamente. La fuente ultima de energ1a para impulsar
lizan una gran variedad de iones y moléculas a través de las membranas la importación de aminoácidos proviene del ATP hidrolizado por la ATPasa Na'/
celulares, pero a una velocidad mucho más lenta que los canales. Se han K+, ya que esta bomba genera tanto el gradiente de concentración del ion Na'
identificado tres tipos de transportadores. Los uniportadores transpor- como, a través de los canales K+, el potencial de membrana que, en conjunto,
tan un solo tipo de molécula a favor de su gradiente de concentración. impul sa el influjo de iones Na+.
La glucosa y los aminoácidos atraviesan la membrana plasmática, en
la mayoría de las células de mamífero, con la ayuda de uniportadores.
Colectivamente, los canales y los uniportadores, a veces, son llamados
expone un sitio de unión ( o sitios de unión) a un lado de la membrana
transportadores facilitados, lo que indica el movimiento a favor de un
en una conformación y al otro lado, en una segunda conformación.
gradiente de concentración o electroquimico.
Por el contrario, los antiportadores y los simportadores acoplan el Puesto que cada ciclo de este tipo da como resultado el movimiento
movimiento de un tipo de ion o molécula en contra de su gradiente de solo una molécula (o unas pocas) de sustrato, estas proteínas están
de concentración, con el movimiento de uno o más iones diferentes a caracterizadas por velocidades relativamente bajas de transporte, entre
favor de su gradiente de concentración en la misma (simportador) o 10° y 104 iones o moléculas por segundo (véase la Fig. 11-2). La mayo-
diferente (antiportador) dirección. Estas proteínas, con frecuencia, se ría de los canales iónicos fluctúan entre un estado cerrado y un estado
denominan cotransportadores, en referencia a su capacidad para trans- abierto, pero muchos iones pueden pasar a través de un canal abierto
portar dos solutos o más simultáneamente. sin ningún cambio de conformación posterior. Por esta razón, los ca-
nales se caracterizan por velocidades muy rápidas de transporte, ha ª
st
Al igual que las bombas de ATP, los cotransportadores median
reacciones acopladas en las cuales una reacción energéticamente des- 108 iones por segundo.
favorable (el movimiento cuesta arriba de un tipo de ion o molécula) Con frecuencia, varios tipos distintos de proteínas de transporte
está acoplado a una reacción energéticamente favorable ( el movimien- trabajan de modo concertado para lograr una funci ón fisiológica. Un
to cuesta abajo de otra molécula). Nótese, sin embargo, que la naturale- ejemplo de ello se observa en la Figu ra 11 -3, en la que una ATPasa
t
za de la reacción que suministra energía e impulsa el transporte activo bombea Na+ hacia el exterior de la célula e iones K+ hacia adentro; eS ª
de est,as dos cla_ses, d_e . proteínas difiere. Las bombas de ATP emplean bomba, que se encuentra en casi todas las células de los metazoarios,
en_ergia de la hidrolJSJs del ATP, mientras que los cotransportadore s establece gradientes de concentración en direcciones opuestas de iones
utilizan la energía almacenada
. en un grad,·en t e eIec t roqmm1co.
, · Este
Na+ YK+ a través de la membrana plasmática ( concentraciones relativa·
. .
ultimo proceso, en ciertas ocasiones , se conoce c t . , ) que se
. orno ransporte activo mente elevadas de K+ dentro de las células y Na + fuera de estas ,
secun dano. emplean para impulsar la importación de los aminoácidos. El genonia
conformación son esenc·1a1es para Ja fu nc1on
. , de
. de
Los cambios humano codifica cientos de tipos distintos de proteínas de transporte
·
todas las protemas de transporte. Las bombas 1mpu 1 d
sa as por ATP y que utilizan la energía almacenada a través de la membrana plasmát1ca
los transportadores sufren un ciclo de camb,·os d e coniormac1on
e •, . . 1 l ' . asocia·
que en e1gra d 1ente de concentración d e Na + y su potencia e ectnco

476 · d e la membrana
- a traves
CAPITULO 11 • Transporte de iones y moléculas pe quenas
 Cuadro 11 - 1 Mecanismo de transporte de ion 1·
es Ymo eculas pequeñas a través de las membranas celulares
Propiedad Difusi ón simple
Transporte facilitado Transporte activo Cotransporte*
Requiere proteína
+ + +
específica

Soluto transportado en
+ +
contra de su gradiente

Acoplado a la hidrólisis
del ATP
+

Impulsado por el movi-

+
miento de un ion cotrans-
portado a favor de su
gradiente
Ejemplos de moléculas 0 2 , C0 2, hormo nas Glucosa y aminoácidos Iones, pequeñas moléculas Glucosa y aminoácidos (sim-
transportadas esteroides, n umerosos (uniportadores); iones hidrofílicas, lípidos (bom - portadores ); varios iones y
fármacos y agua (canales) bas impulsadas por ATP) sacarosa (antiportadores)
• Denominado también transporte activo secunda rio.

do para transportar una amplia variedad de moléculas hacia el interior

• Los canales forman un "tubo" hidrofílico a través del cual se movilizan
de las células en contra de sus gradientes de concentración.
los iones o el agua a favor de un gradiente de concentración, un proceso
El Cuadro 11- 1 resume los cuatro mecanismos mediante los cuales
conocido como transporte facilitado o difusión facilitada .
los iones y las moléculas peque ñas son transportados a través de las
membranas celulares. En la siguiente sección, consideraremos algunas • Los transportadores se encuentran dentro de tres grupos: los uní-
de las proteínas de transporte de membrana más simples, las causantes portadores transportan una molécula a favor de su gradiente de con-
del transporte de glucosa y agua. centración ( transporte facilitado), los simportadores y antiportadores
acoplan el movimiento de un sustrato en contra de su gradiente de
concentración al movimiento de un segundo sustrato a favor de su gra-
diente de concentración, un proceso conocido como transporte activo
secundario o cotransporte (véase el Cuadro 11 - 1).
CONCEPTOS CLAVE DE LA SECCIÓN 11.1 • Los cambios de conformación son esenciales para la función de todas
Generalidades del transporte transmembrana las proteínas de transporte de membrana; la velocidad del transporte
depende del número de sustratos que pueden pasar a través de una
• Las membranas celulares regulan el tránsito de moléculas y de iones proteína a la vez.
hacia el interior y el exterior de las células y sus orgánulos. La velocidad
d e Ia d [Link] s10n
· · s1mp
· 1e de una sustancia a través de .una membrana
. . es
. 1
proporciona a su gra d1·ente de concentración y su h1drofobic1dad.
· O y CO ) y las moléculas hidro- 11.2 Transporte facilitado de glucosa y agua
• Con excepción de los gases ( p. e¡ ., 2 2
_ . ga la mayoría de las moléculas no pueden
so1u bles pequenas, sm car , . , . . fi
difu ndir a través de una bicapa fosfohp1d1ca pura a velocidades su - La mayoría de las células animales emplean glucosa como sustrato para
. e
cientes como para sat1S1acer Ias ne cesidades celulares. la producción de ATP; habitualmente, utilizan un uniportador de glu-
, d t de la membrana proporcionan un paso cosa para captarla desde la sangre u otro líquido extracelular. Muchas
• Las pro temas e transpor e , d ¡ células emplean proteínas de transporte de membrana del tipo de los ca-
. ,. lé ulas y los iones se desplacen a traves e
h1d rofíhco para que 1as mo c nales, denominadas acuaporinas, para incrementar la velocidad del mo-
interior hidrofó bico de una membrana. vimiento de agua a través de sus membranas de superficie. Aquí, analiza -
, t nsmembrana median el transporte de io- mos la estructura y función de éstos y otros transportadores facilitados.
. Tres cl ases de protemas ra . , b
, . á .d s y otros metabolitos a traves de las mem ra-
nes, azucares, ammo c1
.
° d
ulsadas por ATP, canales y transporta ores
nas celulares: bom b as 1mp El transporte con uniportador es más rápido
(véase la h g. l 1-2). y más específico que la difusión simple
. d ATP acoplan el movimiento de un sustra-
• Las bombas 1mpu1sa as por . .. El transporte mediado por proteína de un solo tipo de molécula, como
. t de concentración a la h1dróhs1s de ATP, un
to en con tra de su gra d 1en e . la glucosa u otras moléculas hidrofílicas pequeñas, a favo r de un gra-
proceso conocido como transporte activo. diente de concentración a través de una membrana celular es conocido

11 .2 Transporte facilitado de glucosa y ag ua 47 7

 o
E
o
(.) X
Vm áx

. .
, , distinguen e1 uniporte de la di- >:.} 500
.
como umpor t e. Varias
, carac tensticas ~ (ti

fusión simple: 8::, .§

)(

. . sustrato por los uniportadores es ci ·E

Q)
l. La velocidad de mov11111en1_
~ dd Je a través de una bicapa fosfo - -o -o
mueho ma'so"Ita que por d1fus10n s1111p .§~
lipídica pura. -~.2
..., Q)
250 -- -
~>
. a trans ortada nunca ingresa en e1nuc , leo hi- u (ti

2. Puesto que la molecul ~ r ~d - a su coeficiente de partición K es Q) -;;;

-o -o
drofóbico de la bicapa fos o 1p1 ic ,
ro ai
irrelevante. 'ü 'éo
·-...,
e e
·- Q)
uce a través de un número limitado de molé- -o(ti (.)... l'L.J....-!--1--:---:4- '5
J. El transporte se prod . h y una velocidad de transporte -o o 3 6 7 8 9 10 11 12 13 14
1 'portadoras. En consecuencia, a 'ü o. O . , externa de glucosa (mM)
o Concentrac1on
cuáxima
as um v que d de del número de uniportadores en la mem-
m
epen
d I adiente
., ,
de concentrac10n a traves ~ Km
b La v se alcanza cuan o e gr
máx
t ción celular de glucosa mediada
d:ª1:ª~emb~:~a es muy grande y cada uniportador está operando a su 4
FIGURA EXPERIMENTAL l l - La cap :inética enzimática simple, La velo-
, GLUT muestra una 1 ·¡·¡·
velocidad máxima. Por las prote1nas · · de glucosa v (medida en micromo es por m111tro de
cidad inicia l de captaoon ' dos se representa como un porcentaje
los primeros segun .. .
. Y1a d'Irecci'ón de éste cambiará si la direc-
4, El transporte es reversible, células por hora ), en de una concentrac1 on creciente de
.d d máxima V á en contra ., . . .
ción del gradiente de concentración lo hace. de la ve1oo a mx E te experimento la concentraoon inicial
dio extracelula r n es '
glucosa en e me 1
. · Tanto la GLUTl expresada por los eritro-
1 n las células siempre es 0· '
5. El transporte es específico. Cada uniportador transporta so!amente de g ucosa e d las célula s hepáticas, catalizan la captación
2
citos, como la GLUT , expre~a ª ~or canela) Al ig ual que las reacciones cata-
un tipo de molécula o un grupo único de moléculas muy relac10nadas.
de la glucosa (curvas collor org o~~ ~e gluco~a facilitada por la GLUT exhibe
Una medida de la afinidad de un transportador por su sustrato es ~a !izadas por las enzimas, a captac10 ., 1 1 'd d
. , . (V ) La K es la concentrac1on a la cual a ve oc1 a
Km, que es la concentración de sustrato a la cual el transporte es sem1- una velocidad max1ma máx · m d •
de captación de glucosa es semi máxima. La GLUT2,_con una Km e aproxima-
máxima.
damente 20 mM (que no se muestra) tiene una afinidad mucho menor por la
glucosa que la GLUTl , con una Km de aproximada mente 1,5 mM.
Estas propiedades también se aplican al transporte mediado por las
otras clases de proteínas que se muestran en la Figura 11 -2.
Uno de los uniportadores mejor conocidos es el transportador de
glucosa denominado GLUTJ, que se encuentra en la membrana pl_as- eritrocitos) que en la célula, el uniportador GLUTl , en general, cata-
mática de la mayoría de las células de mamífero. El GLUTI es especial- liza la importación neta de glucosa desde el medio e:xtracelular hacia
mente abundante en la membrana plasmática de los eritrocitos. Como el interior de la célula. La Figura 11-5 muestra la secuencia de eventos
estas células tienen una membrana simple y carecen de núcleo u otros que ocurren durante el transporte unidireccional de glucosa desde el
orgánulos internos (véase la Fig. 10- 7a), las propiedades de la GLUTI exterior celular hacia el interior del citosol. La GLUTl también pue-
y de muchas otras proteínas transportadoras de los eritrocitos madu- de catalizar la exportación de glucosa del citosol al medio extracelular,
ros se han estudiado ampliamente. La estructura simplificada de estas cuando la concentración de glucosa es más alta dentro de la célula que
células hace que el aislamiento y la purificación de una proteína de fuera de ésta.
transporte sea un procedimiento relativamente sencillo.
La cinética del transporte unidireccional de glucosa desde el ex-
La Figura 11 -4 muestra que la captación de glucosa por los eri-
terior de una célula hacia el interior, por medio de la GLUTl, puede
trocitos y los hepatocitos exhibe una cinética similar a la de una reac-
ser descrita por el mismo tipo de ecuación empleada para describir
ción simple, catalizada por enzima que implique un único sustrato. La
una reacción química simple catalizada por enzimas. Para simplificar,
cinética de las reacciones de transporte mediadas por otros tipos de
proteínas es más compleja que las de los uniportadores. Sin embargo, supongamos que el sustrato glucosa, S, está presente inicialmente solo
todas las reacciones de transporte asistidas (facilitadas) por proteínas ~n-e_l exterior de la célula; esto puede lograrse mediante la incubación
producen más rápido que la difusión simple a través de la bicapa, son 1mc1al de las células en un medio que carezca de glucosa, de modo tal
específicas para el sustrato y exhiben una velocidad máxima ( VmáJ. que sus depósitos internos estén vacíos. En este caso, podemos escribir

K \I
Sm + GLUTl ~ Sext - GLUTl .,.....:'.'._ Smt + GLUTI
La baja Km del uniportador GLUTl permite que se
transporte la glucosa hacia el interior de la mayoría nd 5
de las células de mamífero do e ext - GLUTl representa GLUTJ en la conformación que mira
al exterior, con una glucosa unida. Esta ecuación es similar a la que
Al igual q~e otros uniportadores, la GLUTJ alterna entre dos estados d_escribe la vía por la cual una reacción simple es catalizada por una en-
conformac1onales: en uno de eilos un sitio de un 1·0• n a 1 1 zima, en la que la proteína se une a un sustrato único y luego lo trans-
. ' a g ucosa en-
frenta el extenor de la célula; en el otro un sitio de un ·o· 1 1 f~rma en una molécula diferente. Aquí, sin embargo, no hay una mo -
• ' 1 n a a g ucosa
enfrenta el c1tosol. Puesto que la concentración de gl h b' dificación química en el azúcar unido al GLUTJ; en lugar de ello, e5!a
ucosa a 1tual-
mente es más alta en el medio extracelular (sangre I d molécula se mueve a través de una membrana celular. Sin embargo, Ja
, en e caso e los
cinética de esta reacción de transporte es similar a la de la reacción sini-
478 CAPITULO 11 • Transporte de iones y moléculas peque - .
nas a traves de la membrana
 Citosol
Co nfor mació n
que mi ra a l e xterior
00 00 Conformaci ón
que mira al interior
11

fJi•J-
D
00
Conformac ió n
que mira al exterior

fig ura 11 -5 Modelo del transporte uniporte por la GLUT1. En te, el transportador sufre el cambio de conformación inverso, y se regenera el
la gl ucosa enfrenta el exter·ior·, en 1auna sitio de unión que enfrenta el exterior (paso B). Si la concentración de glucosa
conformación . , el sitio . ión. a
de un otra, e 1
sitio de un 1on enfrenta el 1nte r1or. La unión de la glucosa al sitio que enfrenta el es más elevada en el interior de la célula que en el exterior, el ciclo operará en
de conformacio' nen el t ransporta d or, sentido inverso (paso D ➔ paso D), lo que dará como resultado el movimiento
exteri or (pa so D) desencadena
.. . .un ca mbio
de modo tal que el s1t10_de union enfrenta ah ora el interior de l citosol (paso D). neto de glucosa hacia el exterior de la célula. Los cambios de conformación
Despues, la glucosa es liberada hacia el interior de la célula (paso ID). Finalmen- reales probablemente sean más pequeños que los que se ilustran aquí.

ple catalizada por enzim a, y po demos utilizar la misma derivación que La GLUTI da cuenta del 2 por ciento de la proteína en la mem-
la de la ecuación d e Michaelis-M enten -en el Ca pítulo 3- para derivar brana plasmática de los eritrocitos. Después de que la glucosa se ha
la sigu iente expresión para v0 , la velocidad inicial de transporte para s transportad o hacia el interior del eritrocito, se fosforila rápidament e
hacia el interior de la célula, catalizada por GLUTI : y forma glucosa 6-fosfato, que no puede salir de la célula. A raíz de
esta reacción, el primer paso en el metabolism o de la glucosa (véase
la Fig. 12-3) es rápido y se produce a una velocidad constante, la con-
V =
o
m
l+-
K (11-1) centración intracelular de glucosa se mantiene baja aun cuando ésta se
e importe desde el medio extracelular. En consecuenci a, el gradiente de
concentració n de glucosa (en el exterior, mayor que el interior celular )
donde C es la concentració n de Sex1 (inicialment e, la concentració n se mantiene lo suficientem ente elevado como para sostener la impor-
de Sin, = O). Vmáx' la velocidad de transporte cuando todas las moléculas tación continua y rápida de moléculas adicionales de glucosa y aportar
de GLUT l contienen una S unida; esto se produce a una concentració n suficiente glucosa para el metabolism o celular.
infinitament e alta d e Sext. Cuanto más bajo es el valor de~, más estrecha-
mente se une el sustrato al transportado r. La Ecuación 11-1 describe la cur-
va para la captación de glucosa por parte de los eritrocitos, que se muestra El genoma humano codifica una familia de
en la Figura 11-4, así como las curvas similares para otros uniportadore s. proteínas GLUT transpor tadoras de azúcares
Para la GLUT l d e la m emb rana d e los eritrocitos humanos, la Km
El genoma humano codifica al menos 14 proteínas GLUT con eleva-
para el transporte d e glucosa es 1,5 mM. Así, cuando la concentraci ón
da homología, GLUTI-GLU T14; se cree que todas éstas contienen 12
de glucosa extracelular es 1,5 mM, aproximada mente la mitad de los
hélices a que se extienden en la membrana, lo que sugiere que han
trans portadores GLUTI con sitios de unión que enfrentan el exterior
evolucionad o de una sola proteína de transporte ancestral. Aunque no
tendrán una gluco sa unida y el transporte se producirá al 50 por ciento
contamos con la estructura tridimensio nal de ninguna proteína GLU T,
de la velocidad m áxim a. C o mo la glucosa sanguínea normalmen te es
los estudios bioquímicos detallados de la GLUTI han mostrado que los
SmM, el transpor tador de glucosa de los eritrocitos habitualmen te está
residuos de aminoácido s de las hélices a que atraviesan la membrana
funcionand o al 77 por ciento de su velocidad máxima, como puede ob-
son predominan temente hidrofóbico s; sin embargo, varias h élices tie-
servarse en la Ecuación 11-1. El transpo rtador GLUTI ( o el transporta-
nen residuos de aminoácido s (p. ej., serina, treonina, asparagina y glu -
dor de gluco sa muy semejante, GLUT3) se expresa en todas las células
tamina) cuyas cadenas laterales pueden fo rmar puentes d e h idrógeno
del o rgan ism o que n ecesitan captar glucosa de la ~~gre, de manera
la velocidad d e captac10n de glucosa por con los grupos hidroxilos de la glucosa. Se considera que estos residuos
·
contmua, a alt as ve loci'd ades·,
' lul as p ermanecerá elevada, independien temente de los forman los sitios de unión de glucosa que enfrentan el interior y el
parte d e estas ce exterior, dentro de la proteína (véase la Fig. 11 -5).
- b. se produzcan en la concentraci ón de la glucosa
,
peq uenos cam 10s que Se cree que las estructuras de todas las isoform as de GLUT son
, 1 concentrac ión sanguínea permanece mucho .mas
sangumea, ya que a
bastante similares, y todas transportan azúcares. Sin embargo, su ex-
alta q ue la Km, y la concentraci ón intracelular de glucosa se mantiene
presión diferencial en varios tipos de células, la regulación d el número
baja debido al metab o lismo. de transportad ores GLUT en las superficies celulares y sus propied ades
Además de la glucosa, los azúcares isoméricos D -manosa y D-ga-
.fi n en su configuraci ón d e la D-glucosa en solo un funcionales específicas posibilitan que d iferentes células d el cuerpo re-
1actosa, q ue d 1 ere .
gulen el metabolism o de la glucosa de m o do d iferencial y, al mism o
átomo de carbono, son trans port ad os por la GLUTl a velocidades me-
v para la glucosa (1 ,5 mM) es mucho más
tiempo, permiten que se m anten ga una concen tración constante de
d [Link]. s·m em argo,
b la '711
mM ). De glucosa en la sangre. Por ejem plo, la G LUT3 se en cuentra en las neu-
· que para ¡a D - manosa (20 mM) o la D-galactosa (30
b a¡a .
ronas del encéfalo. Las n euronas d ependen de u n influjo constante de
este modo, la GLUTI es bastante específica, con una afimdad mucho
glucosa para su m etabolismo, y la baja ~ de la GLUT3 por la glucosa
, e¡eva d a ( in ' da por una Km más baja) para el sustrato normal
' d 1ca
mas (K,r, = 1,5 mM), al igual que la d e la GLUTI , asegu ra que estas células
O-glucosa que para otros sustratos.

11 .2 Transporte facilitado de glucosa y agua 4 79

 . d d s funcionales (s u papel en el movimiento de sustrato
sus prop1e a e . sa
, .d 1 1 es de l encéfalo a una branas) puede ser estudiado solo cuando están a
incorporen glucosa desde los hqu1 os extrace u ar través d e Ias me m . so.
. embran a. Así, la proteína punficada habitual ment .
velocidad alta y constante. ciadas con una m . . , . e se
• J él ulas ~ secre- . mbranas que so n b1capas fosfolip1d1cas puras co
La GLUT2 , que se expresa en los hepatoc1tos y as c remcorpora a me , rno
toras de insulina de los islotes pancreáticos, tiene una Km de -20 mM , . ( é se la Fi g. ¡ 0-3 ), a t ravés de las cuales el transporte d 1
los hposomas v a e
aproximadamente 13 veces más elevada que la Km de la G~UTI . Como irse fácilmente. Las m embranas de los eritroc·t 1 os
sustrato pue d e m e d , .
resultado, cuando la glucosa de la sangre se eleva, despues de una c~- e GLUT 1. Otras son las celulas recombmantes e 1
son buenas fuen t es d u-
· 1 basal des mM a 10 mM aproximadamente, la veloc1 -
m1ºd a, d e su nive . d ,,: 0 que expresan el transgén GLUTI ; con frecuenc·
tivadas e mamuer , . . 1a,
dad de influjo de la glucosa casi se du plica en las células que expresan UTl modificada qu e contiene una etiqueta epíto
una expresa una GL . po
GLUT2, mientras que se incrementa solo levemente en las células que . d n a molécula a la cual puede unirse un anticuerp
(una porc16 n e u o
expresan GLUTI (véase la Fig. 11-4). En el hígado, el "exce~o" de glu- , Cap 9]) fusionado a un extremo N -terminal O C
monoclona1 [vease e1 · . -
cosa que se introduce en las células se almacena como el pohrnero glu- . al ..., d s las proteínas integrales, en cualqmera de estos dos ti pos
termm . 10 a ., .
cógeno. En las células ~ de los islotes, el aumento de la glucosa desen- de células, pueden ser solubilizadas por un detergente no iomco, corno
cadena la secreción de la hormona insulina (véase la Fig. 16-38) que, a •d El uniportador de glucosa GLUTl puede
e1 oct il g1uc 6 s1 o. , ser purifi-
su vez, hace disminuir la glucosa sanguínea al incrementar la captación • d la mezcla solubilizada por cromatograf1a de afinidad
de glucosa y su metabolismo en el músculo, y al inhibir la producción ca d o a parttr e
con anticuerpo (Cap. 3), en una columna que c_o ntenga un anticuerpo
de glucosa hepática (véase la Fig. 15-38 ). De hecho, la inactivación de
monoclonal específico contra GLUTl o un ant1~uerpo específico para
Ja GLUT2 en las células pancreáticas ~ evita la secreción de insulina
el epítopo etiqueta y Juego se incorpore a los bposomas constituidos
estimulada por glucosa y, en los hepatocitos (células hepáticas) , inte-
rrumpe la expresión regulada de los genes sensibles a la glucosa. por fosfolípidos puros. . ,
De modo alternativo, el gen que codifica una protema transporta-
Otra isoforma de GLUT, la GLUT4, se expresa solo en las células
musculares y grasas, las que responden a la insulina al incrementar su dora específica puede expresarse a altos niveles en un tipo celular que
captación de glucosa y la movilizan de la sangre. En ausencia de insuli- normalmente no Jo expresa. La diferencia en el transporte de una sus-
na, la GLUT4 se encuentra en las membranas intracelulares, y no en la tancia por las células transfectadas y las células control no transfectadas
membrana plasmática, y es incapaz de facilitar la captación de glucosa se deberá a la proteína de transporte expresada. En estos sistemas, las
desde el líquido extracelular. Mediante un proceso detallado en la Figura propiedades funcionales de las diversas proteínas de membrana pue-
16-39, la insulina hace que estas membranas internas, ricas en GLUT4, den examinarse sin la ambigüedad provocada, por ejemplo, por la des-
se fusionen con la membrana plasmática, lo que incrementa el número naturalización parcial de las proteínas durante los procedimientos de
de moléculas GLUT4 presentes en la superficie celular y, de este modo, aislamiento y purificación. Por ejemplo, la sobreexpresión de GLUT!
aumenta la velocidad de captación de glucosa. Este es uno de los prin- en las líneas de fibroblastos cultivados incrementa varias veces su velo-
cipales mecanismos por los cuales la insulina provoca un descenso de la cidad de captación de glucosa, y la expresión de las proteínas GLUT!
glucemia; los defectos en el movimiento de la GLUT4 hacia la membra- mutantes con alteraciones en aminoácidos específicos puede identifi-
na plasmática constituyen una de las causas de la diabetes de aparición car residuos importantes para la unión al sustrato.
en la edad adulta o tipo II, una enfermedad caracterizada por la presen -
cia de glucosa elevada, de manera continua, en la sangre.
La presión osmótica provoca el movimiento
La GLUTS es la única proteína GLUT con elevada especificidad
de agua a través de las membranas
(preferencia) por la fructosa; su principal sitio de expresión es la
membrana apical de Jas células epiteliales del intestino, donde trans-
El movimiento de agua hacia el interior y el exterior de las células es
portan la fructosa de la dieta desde la luz del intestino hacia el interior
una característica importante de la vida de los microorganismos, los
de las células.
vegetales Y los animales. Las acuaporinas constituyen una familia de
,
proteínas de_membrana
.
·
qu e permiten que e l agua y otras pocas mole-
Las proteínas de transporte pueden estudiarse
culas pequenas sm carga, como el glicerol, atraviesen las biomembra-
empleando membranas artificiales y células nas de modo eficiente · Ante s d e ana1·izar estas proteínas de transporte,
. .
recombinantes es necesario
. . revisar el con cep t o d e ó smosis, ·
· la fuerza que impulsa e1
movumento de agua a través de las memb
Hay una diversidad de enfoques para estudiar las propiedades intrín- El ranas.
secas de las proteínas de transporte, tales como definir los parámetros agua se mueve de modo espontáneo "cuesta abajo" a través de
una membrana semip bl d
Vm".' Y Km e identificar los residuos clave causantes de la unión. Lama- . ermea e, esde una solución de baja concentra-
ción de soluto (conc t ·ó d
yona _de las membranas celulares contienen muchos tipos diferentes de en raci n e agua relativamente elevada ) hacia una
de alta concentración d
.
¡ (
e so uto concentración de agua relativa mente
prot_emas de _transporte, p_ero una concentración relativamente baja de
b aJa ), en un proceso d · d e
u~ ll~o ~a~ticular; esto dificulta los estudios funcionales de una pro- , . enomma o ósmosis o flujo osmótico. En e1ecto,
1a osmos1s es equivale t "dºfu . ,,
tema mdiv1dual. Para posibilitar los estudios de este tipo, los investiga- . n e a I sión de agua a través de una mem-
d ores emplean dos enfoques d st • d . b rana semipermeabl L · 'ó
. e ma os a enriquecer una proteína de . e. a presión osmótica se define como la pres, n
transporte de mterés, de modo tal que d . h1drostática requ ·d d
ºfi . pre omme en 1a membrana· la en a para etener el flujo neto d e agua a través de una
pun cac16n y la reconstitución en membr ºfi .al · membrana que s - a
. anas art1 c1 es y 1a sobreex . epara so 1uc10nes de diferente concentración acuos
p resión en células recombinantes. - 6
( Fig. l l - ). En otras palabras, la presión o smótica equilibra la fuerza
Según el primer enfoque, una prote' d
ma e transporte específica se
termodinámic ·
ª unp ul sa d a por entrop1a, del gradiente d e concentraci·ón
extrae de su membrana con un detergent . . . de agua. En e st e contexto, la "membrana" puede ser una capa de células
, d e Y se 1a purifica. S1 bien las 0
p rotemas e transporte pueden aislarse de I b . una n:iembrana plasmática p ermeable al agua, p ero no a los solutos.
as mem ranas y purificarse,
La presión osmótica es directamente proporcional a la diferencia de

480 CAPÍTULO 11 • Transporte de iones y molé _

cu 1as pequenas a través de la membrana
 Membrana I
.. ca
. . h"d rostat1
p res1on cuola (véase la Fig. 9-32 ) que en el citosol que, a su vez, tie ne una con-
permea bl e . .
"'- necesaria para evitar centración de solutos más elevada que el espac io extracelular. La pre-
ª 1
agua "'- el flujo neto de agua
sión osmótica, denominada presión de turgencia, ge nerada por la
i entrada de agua al citosol y luego al interior de la vacuola, empuja el
citosol y luego la membrana plasmática contra la pared celular resisten-
Solución A Solución B te. Las células vegetales pueden resistir esta presión, que las ayuda a
CA Ce mantenerse en posición vertical y también a crecer. La elongación celu -
lar, durante el crecimiento, es inducida por una hormona local izada en
una región definida de la pared celular después del influjo de agua ha -
cia la vacuola, que aumenta su tamaño y, de este modo, el de la célul a.■

Aunque la mayoría de los protozoarios (al igual que las células ani-
Flujo de agua si Ce > CA males) carecen de una pared celular rígida, muchos contienen una
Figura 11-6 Presión osmótica. Las soluciones A y Bestán se paradas por una vacuola contráctil que les permite evitar la lisis osmótica. La vacuola
membrana permeable al agua, pero impermeable a todos los solutos. Si e contráctil capta agua del citosol y, a diferencia de la vacuola vegetal ,
(la concentración to'.al de solutos en la solución B) es mayor que CA, el agia descarga periódicamente su contenido a través de la fusión con la
tendera a fluir a traves de la membrana desde la solución A a la B. La presión membrana plasmática. Así, aun cuando ingrese agua continuamente
osmótica 7t entre las soluciones es la presión hidrostática que deberá aplicarse a por flujo osmótico en la célula del protozoario, la vacuola contráctil
la solución Bpara evitar este flujo de agua. La presión osmótica se calcula según
evita que se acumule un exceso de agua en la célula y que se hinche
la ecuación de van't Hoff, como 7t = RT(C8 - C¡J, donde Res la constante de los
gases y Tes la temperatura absoluta. al punto de estallar.

Las acuaporinas incrementan la permeabilidad

concentración del número total de moléculas de soluto a cada lado de al agua de las membranas celulares
la membrana . Por ejemplo, una solución de 0,5 M NaCl es, de hecho,
0,5 M iones Na+ y 0,5 M Cl-y tiene la misma presión osmótica que una La tendencia natural del agua a fluir a través de las membranas celu-
solución 1 M de glucosa o sacarosa. lares como resultado de la presión osmótica plantea un interrogante
El movimiento de agua a través de la membrana plasmática deter- obvio: ¿por qué las células de los animales de agua dulce no estallan
mina el volumen de las células individuales, que debe ser regulado para en el agua? Por ejemplo, las ranas depositan sus huevos en el agua de
evitar daño celular. Los pequeños cambios en las condiciones osmóticas los estanques (una solución hipotónica), pero los ovocitos y los hue-
extracelulares hacen que la mayoría de las células animales se hinchen o vos no se hinchan en el agua, aun cuando su concentración salina
se encojan con rapidez. Cuando se colocan en una solución hipotónica interna (principalmente KCI) es comparable a la de las otras células
(en la que la concentración de solutos que no penetran la membrana es (- 150 mM KCl) . Estas observaciones fueron las que condujeron a los
más baja que en el citosol), las células animales se hinchan debido al flujo investigadores, en primer lugar, a sospechar que las membranas plas-
osmótico de agua hacia el interior. Por el contrario, cuando se colocan en máticas de la mayoría de los tipos celulares -aunque no la de los ovoci-
una solución hipertónica (en la cual la concentración de solutos que no tos de rana- contienen proteínas que son canales de agua que aceleran
penetran la membrana es más alta que en el citosol), las células animales el flujo osmótico de ésta. Los resultados experimentales que se mues-
se encogen a medida que el agua del citosol sale de la célula por flujo os- tran en la Figura 11 -7 demuestran que una acuaporina de la membrana
mótico. En consecuencia, las células animales cultivadas deben ser man- plasmática del eritrocito funciona como un canal de agua.
tenidas en un medio isotónico, que tiene una concentración de solutos y En su forma funcional, la acuaporina es un tetrámero de subun i-
una fuerza osmótica similares a las del citosol celular. dades idénticas de 28 kDa (Fig. l l -8a). Cada subunidad contiene seis
hélices a que se extienden en la membrana y forman un poro central
ft En las plantas vasculares, el agua y los minerales son absor~idos a través del cual el agua puede moverse en cualquier dirección, depen-
lliil desde el suelo por las raíces y ascienden por la planta, a trav~s ~e diendo del gradiente osmótico (Fig. l l -8b, c). En el centro d e cada mo -
tubos conductores (el xilema); la pérdida de agua de la planta, princi- nómero, el canal selectivo para agua de - 2 nm de longitud, 0 poro,
palmente por evaporación en las hojas, impulsa este movimiento de tiene solo 0,28 nm de diámetro -es solo ligeramente más grande que el
agua. A d iferencia de las células animales, las de los vegetales, las algas, diámetro de una molécula de agua-. Las propiedades de cribado mo-
los hongos y las bacterias están rodeados por una pared cel_u lar rígida, lecular del estrechamiento están determinadas por varios residuos de
· • del volumen de la célula cuando .se incrementa
· 1a expans1on aminoácidos hidrofílicos conservados, cuyas cadenas laterales y grupos
que resiste
la presión osmótica intracelular. Sin una pared de este tipo, las células carbonilo se extienden hacia el centro del canal por una pared relati-
ani males se expanden cuando la presión osmótica interna se incremen- vamente hidrofóbica que tapiza un lado del canal. Varias moléculas de
ta - si esta presión aumenta demasiado, las c~lulas _estallarán como glo- agua se mueven simultáneamente a través del canal; cada una forma,
bos que se inflan en exceso-. A raíz de la eXIstencia de la pared celular de modo secuencial, puentes de hidrógeno específicos con los aminoá-
en las células vegetales, el influjo osmótico de ~gua, q~e se produce cidos que recubren el canal y desplaza otra molécula de agua corriente
cuando estas células se ubica n en una solución h1potómca (aunque se abajo. Puesto que las ac uaporinas no experimen tan cambios de con-
trate de agua pura), cond uce a un incremento de la presión intracelu_lar, formación du ra nte el transporte de agua, transportan ó rd enes de aguJ
pero no del volumen celular. En las células vegetales, la concentración más rápido que lo que lo hace la GLUTI con referencia a la glucosa. La
de solutos (p. ej ., azúcares y sales) habitualmente es más alta en la va- formación de los puentes d e h idrógeno, entre los átomos de oxígeno

11 .2 Transporte facilitado de glucosa y agua 481

 rina estalla _: ic:.:ª- - - - - - - - - -
n en soluc1.0, n hipo~t~ó,:n~
expresan la acuapo 2,5 rnin
~ VIDEO : Ovocitos de rana que 3,5 m in

1,5 rn in
0,5 min

permaneció sin
M) El volu men d e Ios ovocitos controlPor e1contrario- ,
La ex resión de la acuaporina en los de
l
sa .,na h'potóni
' ca .(0,035 · asamente per meables al agua. .
bºlºdad al agua. Los ovocitos•
FIGURA EXPERIMENTAL 11 -7 p b estos sond eseque expresan acuaporina se hincharon y luego .
• menta su permea • 1
agua y no expresan la prote1na cam ·ios porque . 0
ovocitos de rana mere - bl al 1
ovocitos micro1ny ecta ~. de agua, lo que indica que la acuaponna es
a esRNA ue codifica acuaporina. Estas os . mot,co
rana, que normalmente son impermecon m q . e M Preston Y Peter Agre,Johns Hopkins Universiry
acuaporina, fueron
· · ctados
m1cro1nye I célula inferior de cada pa nel) y ovootos . influJO osa (Cortesía de Gregory ·
stallaron por el
un canal protei co de agu · Nor. Rev. Mo. Cett. Biof. 5:687-698.)
fotografías muestran ovoc,tos _contra (d el) en los tiempos indicados, des- · D· Kozono y P. Agre, 2004 •
Schoof of Medicine. Véase L. S. K,ng,
d ( ·1 1 superior de ca a pan ··
microinye cta os ncia de una soluoon sa ,na .,sotónica (O,1 M) a una soluc,on
ce u a . . ¡-
pués de la transfere

(e)

Vestíbul o
extracelular

1
Poro

(b)

Exterior ~ - N

Citosol '
Vestíbulo
NH 3 + coa- citosólico
rina. (a) Mod~lo
Figura 11 -8 Estructura del canal proteico de agua acuapo rras
varia
estructural de la proteína tetramérica que compren de cuatro su bunidad
es 1den- del poro (en una subunidad individual de acuapor ina en la cual
d
. s molécula
ticas. Cada subunidad forma un canal de agua, como se observa en esta vi sta .
e1agua ox1genos roJos .
. e hidrógen os blancos) pueden verse co n la compue .

desde arriba de la proteína, del lado exoplasmático. Uno de los monóme

ros se
· 1 a1agua, de 2 nm de longitud
se ect,va que separa los vest,'b uIOs citosóilco h·sn· Y
la cual puede notarse la entrada al La compue rta contiene residuos d e ar ginina ed 1
nas
muestra con una superficie molecular según extrace
d1 ular llenos de agua. ' .

esquemá tico de la topología de una subunida d individua l de muy conserva dos, así como los dos residuos de asparag ,na,
- euyasca e.
poro. (b) Diagrama .na
1
.
acuaporina en relación con la membran [Link] pares de hélices a transme
mbra- aterales forman puentes de hidrógeno con las molécul as de agua transpor
opuesta con d (L a . . f srnan
na homólog as (A y A; 8 y B'y C y C') están orientada s en dirección ta as. os residuos . clave de la compue rta que incluyen las d os sparag,na
hidrofílicos . or d un
respecto a la membrana y se encuentran conectad as por dos bucles estan · resa1tados en azul). Las moléculas de agua transporta das ta mb1en
y tienen d ·nopal echo
que contienen hélices cortas que no se expanden en la membra na puentes e h1drogen • • o con los grupos carbonil o de las cadenas pri
interior de . . el estre
residuos de asparagina (N) conservados. Los bucles se curvan en el .
residuo
d 1
. .
de c1ste1na. La disposic ión de estos puentes de h1drogen o Y . nes
..ametro deI poro de 0,28 nm evitan el paso de protones (H3o•)
ran
la cavidad constituida por las seis hélices transmembrana, que se encuent u otros 'º 6: '
parte de la compue rta selectiva al agua. (c) Vista lateral T Zeuthen, 200 1, T,e l Bochen>
' \o 2
en el centro, para formar (Tomado de H. Sui ycols., 2001 , Norure 414:872 Véase también nd """"'
y K. Murata y cols., 2000, Noture 407:S99.)
del agua y los grupos amino de las cadenas laterales de los dos aminoá-
cidos, asegura que sol~ el a~ua sin carga (H 20, pero no H Q +) pasa a de Km, la expresión en los diversos tipos celulares y las especificidades
3
través del canal; las onentac1ones de las moléculas de agua en el canal por los sustratos son importan tes para el adecuado metabolismo de los
<"Vitan que los protones salten de una molécula a la siguiente y, de esta azúcares en el orga nismo.
manera , el movimien to neto de protones a través del canal En c
• onse- • Dos sistemas experimentales com unes, para estudiar las fu nciones de
cuenc ia, se mantiene n los gradiente s iónicos a través de las memb
ranas, las proteínas de transporte , son los liposomas que contienen una pro-
aun cuando fluye agua a través de éstas mediante las acuaporin as.
teína de transporte purificada y las células transfecta das con el gen que
codifica una proteína de transporte en particula r.
e:; Los mamíferos expresan una familia de acuaporinas; once de es- • La mayoría de las membran as biológicas son semiperm eables, más
1111 tos genes se conocen en los seres humanos · La acua porma
· permeables al agua que a los iones o la mayoría de otros solutos. El agua
1 se
expresa en ab unda~cia en l~s ~ritrocitos, y la acuaporin a 2 homóloga se se desplaza por ósmosis a través de la membran a, desde la solución de
enc uentra ~n las celulas epiteliales de los riñones, que reabsorben agua menor concentración de soluto hacia una de mayor concentra ción de
desde la orma; de este modo, se controla la cantidad de agua en el orga- soluto.
nismo. La act1v1dad de la acuaporin a 2 está regulada por la vasopresina,
• La pared celular rígida que rodea a las células vegetales evita que se
llamada también hormona antidiurética. La regulación de la actividad
hinchen y conduce a la generación de una presión de turgencia , en res-
de la acua porina 2, en las células renales en reposo, se asemeja a la de la
puesta al influjo osmótico de agua.
GLUT4 de la grasa y el m úsculo en lo siguiente: si no se requiere su
actividad, cuando las células están en estado de reposo y el agua se ex- • Las acuaporinas son proteínas canal de agua que incremen tan espe-
creta para fo rmar orina, la acuaporin a 2 se secuestra en las membran as cíficamente la permeabilidad de las biomemb ranas al agua (véase la
de las vesículas intracelulares y, por lo tanto, es incapaz de mediar la Fig. 11 -8).
importaci ón de agua a la célula. Cuando la hormona polipeptídica va-
• La acuaporina 2 de la membran a plasmática de ciertas células renales
sopresina se une al receptor de vasopresin a en la superficie celular, ac- es esencial para la reabsorción de agua desde la orina en formación ;
tiva una vía de señalización que emplea cAMP como señal intracelular la ausencia de acuaporina 2 conduce a la enfermed ad conocida como
(detallado en el Cap. 15 ); esto hace que estas vesículas que contienen
diabetes insípida.
acuaporin a 2 se fusionen con la membran a plasmática, lo que aumenta
la velocidad de captación de agua y su retorno a la circulación , no a la
orina. Las mutaciones inactivado ras en el receptor de vasopresina o el
gen de acuaporin a 2 producen dia betes insípida, una enfermedad ca-
11 .3 Bombas impulsa das por ATP y ambien te
racterizad a por la excreción de grandes volúmenes de orina diluida.
Este hallazgo demuestr a que el nivel de acuaporin a 2 es limitante de la iónico intracelular
velocidad para la reabsorció n de agua desde la orina que está siendo En secciones previas, nos hemos centrado en las proteínas de trans-
fo rmada por los riñones. ■ porte que movilizan moléculas a favor de sus gradientes de concen-
tración (transporte facilitado) . Aquí, nos centramo s en una clase
Otros miembros de la familia de las acuaporin as transporta n moléculas principal de proteínas - las bombas impulsada s por ATP- que em-
que contienen hidroxilos, como glicerol, en lugar de agua. La acuapo- plean la energía liberada por la hidrólisis del enlace fosfoanhidrido
rina 3 humana, por ejemplo, transporta glicerol y es similar en su se- terminal del ATP para transporta r iones y varias pequeñas moléculas
cuenci a de aminoáci dos y en su estructura a la proteína de transporte a través de las membran as en contra de sus gradientes de concentra -
de glicerol GlpF de la Escherichi a coli. ción. Todas las bombas impulsadas por ATP son proteínas transmem -
bra na que poseen uno o más sitios de unión para el ATP, localizado s
en subunidad es o segmentos de la proteína, que siempre enfrentan el
citosol. Estas proteínas comúnme nte se denomina n ATPasas y nor-
CONCEP TOS CLAVE DE LA SECCIÓN 11.2 malmente no hidrolizan ATP para formar ADP y Pi, a menos que
se transporte n simultáne amente iones u otras moléculas . Dado este
Tra nsporte faci litado de glucosa Y agua estrecho acoplamiento entre la hidrólisis de ATP y su transport e, la
• El transporte catalizado por proteínas de los sol u tos b'.ológicos _a tra- energí~ almacenada en el enlace fosfoanhi drido no se disipa como
, calor smo que se emplea para mover iones u otras m oléculas cuesta
ves de una mem b rana se produce más rápido que la d1fus1ón simple,
arriba, en contra de un gradiente electroqu ím ico.
muestra una V m áx cuan do el número limitado de moléculas ,
transpor-
,
tadoras está saturado con el sustrato y es altamente especifico para este
(véase la Fig. 11 -4 ).
Existen cuatro clases principales de bomba s
• Se cons1·d era que ¡as pr oteínas uniportad oras, como los transporta do- impulsadas por ATP
res de glucosa (GLUT ), se mueven entre dos estados de conf~rmación,
uno en e1 cua11 os S1·t·os
1
que unen sustrato enfrentan el extenor y otro Las estructuras generales de las cuatro clases de bombas impulsada s
en el cual los sitios de unión enfrentan el interior (véase la Fig. 11 -5 ). por ATP se muestran en la Figura 11 -9, con ejemplos específicos de
, Todos los m iembros de la familia de proteínas GLUT transporta n cada clase en la lista que se encuentra debajo de la figura. Nótese que
azúcares y tienen estructura s similares. Las diferencia s en sus valores los miembros de tres de las clases (P, F y V) solo transportan iones, al
igual que algunos miembros de la cuarta clase, la superfa milia ABC. La

11.3 Bombas impulsadas por ATP y ambiente iónico intracelular 48 3

 4W
Cara 2H'

Cara
citosólica
ADP + P 1
ATP ADP

A DP + P; ATP
ADP + P¡
S uperfam ilia ABC
Bombas prot ónicas clase F
Bombas clase P Bombas protónicas clase V M em brana plasmática de las
Membra na plasmá t ica de bacte rias (t ran sportad ores
Membra na plasmát ica de los veg etales y Membra na vacuola r de los
las bacteria s de ami noácido s, az úcares .,
de los hongos (bom ba W ) vegetales, levadura s y otros
hongos Membr ana interna de la s pé pti dos)
Membra na plasmática de los eucarion - mitocon drias
t es superiores (bom ba Na+/K+) Membra na de los endoso mas Membr anas pl asm át icas de
y lisosomas, en las células Membra na tilaco ide del los mam íferos (transpo 11a-
Membra n a plasm ática apical del animale s cloropla sto dores de fosfo lípi dos,
estómag o de lo s mamíferos (bo m ba pequeñ as susta nci as
W/K+) Membra na plasmát ica de los
osteocla stos y algunas célula s lipof íl icas, cole ste rol y otras
Membra na plasm ática de todas las de los tú bulos renales molécu las peq ueñas)
2
células eucarión ticas (bomba Ca +)
Membrana del retícu lo sarcopla smát ico
2
de las célu las m uscu lares (bomba Ca +)

de un gradiente de concentración, mientras que las bombas clase

F. norma•-
as por
Figura 11-9 Las cuatro clases de proteínas de transporte impulsad inversa para utiliza r energía en una concemr ac,2-
están indicadas debajo de mente, operan en dirección
ATP. La s localizaciones de las bombas específica s ; G:
clase P están compues ta s por dos su bunidade s catalíti - protónica o gradiente de voltaje para la síntesis de ATP Todos los miembro
cada clase. Las bombas n dos domin ios transmem brar,
dos subunida des la gran su perfamilia de proteína s ABC contiene
cas a , que se fosforilan como parte del ciclo de tran sporte. Las
(T) y dos dominios citosólicos de unión al ATP (A) que acoplan la hidrólisis
Oi'
p presentes en alguna s de estas bombas pueden regu lar el transport e. Solo corre
ATP al movim iento de solutos. Estos dominio s centra les están presentes
se muestran una su bunidad a y una sub un idad P. La s bombas clase
Vy F no
aquíl, pe·:
tran sportan solo protones . subunidades separada s en algunas proteínas ABC (que se muestran
forman intermediarios fosfoprot eicos, y casi todas proteínas ABC. (Vease T N,sh" '-' ;2,: ':
similare s, pero ningu- se fusionan en un solo polipépt ido en otras
Sus estructuras son semejant es y contienen proteínas
O. Mc,ntosh 200: ·.~-- •
P Las 2002, Narure Rev. Mol. Cell Biol. [Link] C. Toyosh,ma y col s., 2000, Narure. 40S:647;
na de sus subunidades están rela cionadas con las de las bombas clase
ATP al transpor te de protones en contra Srruct. Biol. [Link] y T. Elston, H. Wang y G. Oster. 1998, Na rure 391 :SI O.)
bombas clase V acoplan la hidrólisis del

·
mayoría de los miembr os de esta superfamilia transpo rtan molécul
as Las estructu ras de las bombas iónicas clase Vy clase F son sim ilJ
y otras m olé- res entre sí, pero no están relacion adas con las bo m bas clase P y so,i
pequeñas, como aminoác idos, azúcares, péptidos , lípidos
n , ·J -
culas incluidas en numero sos tipos de fármacos. más complejas que éstas. Las bombas clase V y clase F contiene
!.;,
Todas las bombas iónicas clase P poseen dos subunid ades catalíti- rias subunid ades transm embran a y citosóli cas diferent es. Casi todas
al transpo rtan solo protone s, y lo hacen en ur~
cas a idénticas, cada una de las cuales contien e u n sitio de u nión bombas V y F conocid as
ades p más pequeña s que, proceso que no involucr a u n interme diario fosfopro teico. Las bombJ,
ATP. La mayoría también tiene dos subunid
1•
por lo general, tienen funcion es de regulaci ón. Durante el transpo
rte, clase V, en general, funcion an para generar el bajo pH de las ,\1(uol.
s acidi<"a~ en !J,
al menos una de las sub unidade s a se fosfori la ( de allí el nombre de los vegetales y los lisosom as, así como otras vesícula
1 l.i
de clase "P", por -fosfori lada- phosph orylated en inglés) y los iones células an im ales al bombea r protone s desde la cara citosólica h.1<"i,
0·
transpor tados se mueven a través de la subunid ad fosforila da.
Las cara exoplas mática de la memb rana, en contra de un gradiente: ele.:tr
secuencias de aminoác idos que rodean los resid uos fosfori lados son quí m ico de p rotones. Por el contrar io, las bombas de H • que generan
en [Link]
hom ólogas en diferentes bombas . Esta clase incl uye la ATPasa Na+/
K+ Y mantien en el potencia l eléctrico de la m embran a plasmát ica
riJs, pertenec enª la,
de la membra na plasmática, que genera la baja concen tración citosó- células vegetales, en los hongos y en muchas bacte
lica de Na+ Y la alta concent ración de K+, típicas de las células an ima- bombas protóni cas de la clase P.
les ( véase la Fi g. 1 1- 3 ). Ciertas ATPasas de Ca 2+ bombea n iones Ca2+ Las bombas de la clase F se encuent ran en las membra nas pl as má·
el de ]as
f~era del citoso l hacia el medio externo; otras bo mbean ca2+ desde ticas bacteria nas, en las mitocon drias y cloropla stos. A diferencia
c1tosol hacia, el retículo endopl as mático O a I RE- especia . . d d eno- mente funcion an como bombas protón '. ·
. 1iza o bombas de la clase V, general
mmado retlculo sarcoplasmático , present·e en 1as ce, 1u 1as m uscu 1ares . cas inversas, en las cuales la energía liberada por el movimi ento energe·
.
O tro miembr o de la clase P, que se encuent r a en Ias célu 1as secretor as . l
te favorecido de protones, desde la cara exop asmat1ca · la
, . hacia
, . , t1camen
.
o de los mamíferos , tra, nsportcl proton es ( 10nes ?r
de aodo del estomag
+ . . . cara citosólica de la membra na a favor del gradien te electroquímico
5la ·
H ) haoa el extenor e iones K+ al interior de la célula . proton es, es emplead a para impulsa r la sín tesis energéti ca mente de

de la membrana
484 CAPITULO 11 • Tran sporte de iones y moléculas pequeñas a través
 vo rable de ATP a parti r de ADP y P¡.. Dada su importa nc1a ,
· en la srntes1 .s
de ATP en los cloropl astos y las m1tocondrias las bo b as protónicas . Cuadro 11-2 Concentraciones iónicas intracelulares y
, . ' m
de clase F, comunmente denomrnadas ATP sin tasas extracelulares típicas
. , . , son tratadas por
separado en el Ca pi tulo 12 (Energetica celular) . Célula (mM) Sangre(mM)
Ion
La clase fi nal de bombas impulsadas por ATP c ·
. .. . . . onstituye una gran
familia de muJt1ples miembros que son más dive rsos en fu nc1ón . que Axón de calamar
aquellos de otras clases. Conocida como la superfamili (invertebrado*)
. 1, T . . a ABC (por su
nom b re en rng es A P bindrng cassette O cassett 20
• • . ' e que une ATP) esta 400
clase incluye vanos cientos de proteínas de tran sporte dº1strntas . '
. pre-
sentes en los organismos, desde las bacterias h as t a 1os seres humanos Na+ 50 440
, ,
Como se detallara mas adelante, algunas de esta t , d ·
.d ºfi . . . s pro ernas e transpor- c1- 40-150 560
te se I ent1 caron m1c1almente como proteínas d e res1stenc1a · .
, a múlti-
se sobre expresan en 1as ce'!u1as cancerosas, 10
ples farmacos, que, cuando . Ca 2+ 0,0003
exportan farmacos. antICancerígenos y hacen q ue 1os tumores se tornen
. , x-t 5-10
resistentes. a su acc1on. Cada proteína ABC es espec1'fi ca para un sustra- 300-400
un grupo de sustratos re! aCJona · d os que pueden
to en . particular, o para . , . Célula de mamífero
ser
. , .10nes, azucares,
. amrnoac1dos ' fosfolípidos , colest ero I, p épt1·d os, po- (vertebrado)
hsacandos o mcluso proteínas · Todas las protern' as d e t ransporte ABC
estructural que consi·ste e n cua t ro d om1- · 139 4
comparten
. " , ,, organización
una . .
nios nucleo
. : dos dom1mos, transmembrana (T) , que e 1
wrman e pasa¡e · 12 145
a traves del cual las moleculas transportadas atraviesan la membrana," y
do_s dominios citosólicos que unen ATP (A). En algunas proteínas ABC, c1- 4 116
pnnc1palmente en las bacterianas, los dominios núcleo están presentes 12 29
en cuatro polipéptidos separados; en otras, los dominios núcleo están
fusionados en uno o dos polipéptidos multidominio. x- 138 9
Mg2+ 0,8 1,5

Las bombas iónicas impulsadas por ATP generan Ca 2+ <#0,0002 1,8

y mantienen gradientes iónicos a través de las •El gran axón nervioso del calamar ha sido ampliamente utilizado en estudios del me-
membranas celulares canismo de conducción de los impulsos eléctricos.
tx- rep resenta las proteinas que tienen una carga eléctrica negativa neta al pH neutro
La composición iónica específica del citosol difiere habitualmente, de la sangre y las células.

en gran medi da, de la del líquido extracelular que la rodea . En casi

todas las células -incluso los microbios, las células vegetales y ani -
males-, el pH citosólico se mantiene cerca de 7,2 independientemente
del pH extracelular. En el caso más extremo, hay una diferencia de las células nerviosas y renales se emplea para el transporte iónico, y
un millón de veces en la concentración de H + entre el pH del citosol los eritrocitos humanos consumen hasta el 50 por ciento de su ATP
de las células epiteli ales que recubren el estómago y el pH del con- disponible para este propósito; en ambos casos, la mayoría de este
tenido estomacal, después de una comida . Además, la concentración ATP se utiliza para impulsar la bomba de Na+/K+ (véase la Fig. 11 -3 ).
citosólica de K+ es mucho más elevada que la de Na+ . Tanto en los Los gradientes de Na+ y K+ resultantes, en las células nerviosas, son
invertebrados como en los vertebrados, la concentración de K+ es esenciales para su capacidad de conducir las señales eléctricas con
20 -40 veces más elevada en el citosol que en la sangre, mientras que rapidez y eficiencia, como detallamos en el Capítulo 22 . Ciertas enzi-
la concentra ci ón d e Na + es 8 - 12 veces más baja en el citosol que en mas necesarias para la síntesis proteica en todas las células requieren
2
la sangre ( Cu a dro J J -2 ). Parte del Ca + del citosol está unido a los elevada concentración de K+ y son inhibidas por elevadas concentra-
ciones de Na+; esta cesaría sin la función de la bomba de Na+/K+. En
grupos carga dos n egativamente del AT~+en las ~roteín:s. y º~,ras mo-
las células tratadas con venenos que inhiben la producción de ATP
léculas, pero es la concentración del Ca no umdo (o_ hb_re ) la que
(p. ej ., 2,4-dinitrofenol en las células aerobias), el bombeo se detie ne
resu lta crítica para sus funciones en las vías de señahzaCJón y en la
·, J La concentración del Ca2+ libre en el citosol y las concentraciones iónicas en el interior de la célula se aproxim an
con t racoon m u sc u ar.
· · o 2 · molar (2 x 10-7 M) ' mil veces.
generalmente es mfenor a , micro
gradualmente a la del ambiente externo a medida que los iones se
mueven espontáneamente a través de los canales de la membrana
0
más inferior a la de la sangre. Las células vegetales y muchos mi-
plasmática a favor de sus gradientes electroquímicos. Finalmente,
croorgani smos mantienen concentraciones elevadas similare~ de K+
las células tratadas con el veneno mueren : en parte, porque su sín -
y bajas concentraciones de Ca 2 + y Na+ aun si las células se cultivan en
tesis proteica requiere una alta concentración de iones K+, y en parte
so luci o nes salina s mu y diluidas .
porque en ausencia d e un gradiente de Na+ a través de la membrana
La s bombas iónicas analizadas en esta sección son responsables,
celular, una célula no puede importar ciertos nutrientes tales como
en gran medida , de establece r y mantener los gradientes iónicos ha-
·t l é d las me m branas plasmáticas e intracel ulares. Al aminoácidos (véase la Fig. 11 -3 ). Los estudios sobre los efectos de
b 1 ua es a tra v s e esos venenos proprocionaron evidencias iniciales sobre la existencia
as células gastan una cantidad considerable
11 eva r a ca b o es t a tarea , l
, p ·emplo hasta el 25 por ciento del ATP producido por y la importancia de las bombas iónicas.
d e ene rg1 a . o r eJ ,

11 .3 Bombas impulsadas por ATP y ambiente iónico int racelular 485

 _
scu lo en rep oso per ma n elca
. . , . d C 2+ libr e en el mú
trac ión c1to soh ca e ª
por deb ajo de O, 1 µ M ·
de pe nd e de las ATPasa~
La relajación muscular
2
a de Ca +
2 + desde el citosol hacia . de ac ció n de la bo mb
de Ca 2 + qu e bo mb ea n Ca El me ca nis mo
rcoplasmático
el int eri or del retículo sa se co no ce en de tal le
2
concentran Y 80 por cie nto de la prote1..
uel éticas, los iones Ca + se alcio con stit uye má s del .
En las células musculare s esq especializado bom b a d e c ,
se pun fica fác ilrne
almacenan en el retículo sar
coplasmático (RS), un tipo 2
Co mo la
. bra nas del RS del mu scu lo, d. d . nte
ion es Ca + alma- 1 as me m o am plia men te la
retículo end opl asm átic o (RE ). La libe raci ón de los na integral en , d I me mb ran a y se ha
. est u ia ·
de otra s pro temdas ¡ e ªtru ctu ra trid ime nsi ona l de . esta pro teína
de ales iónicos en ,
en el citosol mediante los can 'ª·
cenados, desde la luz del RS, rá en el Cap ítu lo 17. . .,
ª es ren tes pas os en 1
lar, como se analiza det erm ma c10dn e e ma ció n que rep res ent an dife e
provoca la contracción mu scu RS del mús- .
,
a
lizada en la me mb ran a del nos estados e coDtor rev ela do mu cho ace rca de su me cam sm o de c-
Una ATPasa de Ca + clase P loca
2
atrá s, al inte rior de ha
culo esq uelético bombea Ca
2+ desde el citosol hac ia proceso d e b om b eo rad igm a par a com pre nde r mu cha s de las bornb as
jaci ón mu scu lar. . n y sirv. e com o pa
manera la rela c1ó
la luz del RS, e induce de esta 2
.,
s, la con cen trac ión de Ca
+
En el citosol de las célu las mu scu lare
lula s de ATPasa de la clase P. el me can ism o de acc 10n de la ATPasa Cal-
{, M (cé El mo del o act ual sob re
ula s en reposo) y más de 10-- for ma cio nales.
libre oscila entre 10- M (cél
7
Ca 2 + en la lica mú ltip les est ado s con
que la con cen trac ión tota l de en la me mb ran a del RS imp cuales los dos
en contracción), mientra s con tien e dos mo s en est ado s El , en los
como 10- M. La luz del RS Por sim plic ida d, los agr upa
2
luz del RS puede ser tan alta da pro teín a 2 +, loc aliz ado s en el cen tro del dom inio que se
ecuestrina y la así den om ina sitios de uni ón par a el Ca
proteínas abundantes, la cals une mú ltip les enf ren tan el cito sol ; Y los
est ado E2 , en los
s
, cada una de las cuales extiende en la me mb ran a,
que une Ca + con alta afinidad átic a de la mem-
2
enf ren tan la car a exo pla sm
2 + de la luz del
. Al uni r gran par te del Ca cuales estos sitios de uni ón
iones Ca 2+ con alta afinidad Ca 2 + "libres " de la hidrólisis de
la concentración de iones del RS . El aco pla mie nto
RS, estas proteínas reducen trac ión de bra na y señ ala n hac ia la luz s de conformación
reduce el gra die nte de con cen es req uie re var ios cam bio
en las vesículas del RS. Esto dis min uye la ATP con el bom beo de ion def inid o, como se
z del RS y, en consecuen cia, pro duc irse en un ord en
Ca 2 + ent re el citosol y la lu 2 + hacia el RS desde el en la pro teín a que deb en
á en la conforma-
energía necesaria par a bom
bea r los iones Ca O. Cu and o la pro teín a est
rem ent a a mu estr a en la Fig ura 11 - 1 de alta afinidad
de la AT Pasa de Ca 2+ mu scu lar se inc 2 une n a dos siti os de uni
ón
citosol. La actividad 2 + libre en el citosol lo hac e. En las ción El, dos ion es Ca + se cen trac ión cito-
medida que la con cen trac ión
de Ca sól ico ; aun cua ndo la con
la bom ba de calcio de la me
mb ran a accesibles des de el lad o cito ion es cal cio todavía
células musculare s esq uel étic as, ase el Cu adr o 11 -2 ), los
sólica de Ca + sea baja (vé
2
Ca + similar,
2
certada con una bom ba de
del RS ope ra en forma con la can een - llenan estos sitios.
plasmática, par a ase gur ar que
localizada en la me mb ran a

Siti os de
Luz del RS 2
uni ón al Ca + E1 E1 El
Un ión de cal cio Fos for ilac ión
Ca 2+
yA TP del asp art ato
r- 7
\
---a-. --a-.
\ ¡

Cito sol

Asp arta to
fos fori lad o ATP

Siti o
de uni ón
Ca mb io de
con form aci ón •• Ca mb io de
con for ma c ión

al ATP De sfo sfo ril aci ón Lib era ció n

de cal cio

~ +-11-

E2 E2
, .
E2
Figura 11-1 OMod elo
RS operativo d 1a ATPasa Ca2+ en la m
de mús e P d -
de las célu las I
esq uelé tico. Solo se mu estra em
bra na del me mb ran a En la figu ra ' - in 1ca un enl ace asp arti lfo sfat o de alta energ 1
a, -P
lítica s o d:u o .
sub un1dades cata una de las dos in d 1ca un enlace de b aJa ene rg,a Com 0 I fi 1dad d e Ca2+ p o r los s1t1os de
, esta bornba_cla se p· E1 y E2 son con f • aa n
alternat ivas de la pro¡ e1na en la c 11 2 orm ac,ones ·
uni ón en El que enf re n tan al c,to sol 1O
· n d C afin idad del
ua
bles a las cara s cito sólica Y exoplasrn · -
os sitio s de unio
e a + so . es 00 veces ma yor que la
Ca + por los sitios que e n ren tan el ex 1
n acces1- 2 f
a11ca (luz del RS), resp [Link] m ba transport a
secuenc ia orde nad a d e op asm a en E2, esta bom
e pasos segú
de ÁTP n se muestra aqu
í, res ult ente . Una ª2+ un1d1 rec c,o nal me n t_e d esd e el Clto sol hac ,a la luz del RS Véanse el texto
acoplamien to la hidr ólisis Y el tran spo rte d . a esencial para el Y la Figura J 1-11 pa ra mas det alle s (Véa , Ann RPv s,.,, l ·r •>'
e iones Ca2+ a través de la se C Toyosh1rna y G lne•,, 2004
73 :269-292)

48 6 CAPÍTULO 11 • Trans porte de iones y 1 ,

rno eculas pe -
que na s a trav és d e 1ª me mb ran a
- - - -- --
 este capít ulo: a med ida que
citos ólica (paso DJ. El que enco ntraremos reiter adam ente en
Luego , un ATP se une a un sitio en la cara de sus ag uas de hidra tació n ,
ión que requi ere Mg2+, y el los iones se unen , pierd en la mayo ría
ATP unido se hidro liza a ADP en un a reacc no de las prote inas que se
uo específico de aspar tato en pero inter actúa n con los átom os de oxíge
fos fa to liber ado se trans fie re a un resid a los átom os de oxíge no del
de alta energ ía deno mina do encu entra n con una geom etría simil ar
la proteína y form a el enl ace fosfa to acilo ión acuo sa. Esto reduc e la
un camb io de conf orma - agua que están unid os a los iones en soluc
El _ p (paso D ). Desp ués, la prote ína sufre ione s a la prote ína y perm ite
de los dos sitios de unió n a barre ra term odin ámic a para la unió n de
ción que gene ra E2 , en el cual la afini dad e soluc ion es de conc entra cio-
le en la sigui ente fig ura) y la unió n estre cha de los iones aun desd
c a 2 + se reduc e (lo_ qu e se mues tra en detal
ibles a la luz del RS (paso D). La nes relat ivam ente bajas.
en la cual estos s1t1os ahor a son acces 2
de Ca + cons iste en tres
e as parti l fosfato en el E 1 _ p es La regió n citop lasm ática de la bom ba
energía libre de la hidró lisis del enlac sí en el estad o E 1 ( Fig. 11 -
esta redu cción de la energ ía dom inios que están bien sepa rado s entre
mayor que en el E2-P, y pu-::de de_c irse que cone ctad o a las hélic es que
lsa el camb io de conf orma ción 11 b ). Cada uno de estos dom inios está
libre del enlace aspar t1l-fo sfato impu segm ento s corto s de am i-
se extie nden en la mem bran a medi ante
El ➔ E2. inios citos ólico s, dura nte
2 nte de los sitios de baja noác idos. Los mov imie ntos de dicho s dom
Los iones Ca + se disoc ian espo ntán eame ntos de los segm ento s que
porq ue aun cuan do la ele- el ciclo de bom beo, prov ocan mov imie
afini dad para ingre sar en la luz del RS, imie ntos de las hélic es a que
2+ allí sea más alta en el citos ol , es más los cone ctan que se trans mite n a mov
vada conc entra ción de Ca plo, el resid uo fosfo rilad o,
2 en el estad o de baja afini dad se expa nden en las mem bran as. Por ejem
baja que la Kd para la unió n de Ca + La fracc ión de aden osin a del
osfat o es hidro lizad o (paso Asp 351, se local iza en el dom inio P.
(paso 19). Fina lmen te, el enlac e aspa rtil-f y del ATP se une a resid uos
con la unió n ulter ior de Ca2+ ATP se une al dom inio N pero el fosfa to
D ). Esta desfo sfori lació n, acop lada el mov imie nto de los do-
2+, estab iliza el estad o con- específicos del dom inio P, lo que requ iere
citos ólico a lo s si tios de unió n E I Ca desp ués de la unió n de ATP
pued e afirm arse que impu lsa mini os, tanto N como P. De este mod o,
form acion al El con relac ión al E2, y en posic ión adya cente al
ril) . Ahor a, El está listo y Ca 2+, el fosfato y del ATP unid o se ubica
el camb io de conf orma ción E2 ➔ El (paso ir el fosfa to . Aun que aún no
2 s. Así, el ciclo se comp leta, aspa rtato del dom inio P que debe recib
para trans porta r 2 ione s Ca + adici onale camb ios conf orma cion ales
drido del ATP ha impu lsado el están claro s los detal les preci sos de los
y la hidró lisis de un enlac e fosfo anhi imie ntos de los dom inios N
2 de su grad iente de conc entra - de éstas y de otras prote ínas, los mov
bom beo de do s ione s Ca + en cont ra y P se trans mite n medi ante mov imie
ntos del tipo de palan cas de
ción hacia la luz del RS . igura cione s de varia s hélic es
les y biofísicas avalan el los segm entos que se cone ctan en conf
Gran parte de las evide ncias estru ctura a que se expa nden en las mem bran as.
Estos camb ios son espe cial-
- 10. Por ejem plo, la bomb a de
mode lo que se ilust ra en la Figu ra 11 ment e apare ntes en las 4 hélices que cont
ienen los 2 sitio s de unió n
to unid o al resid uo clave de Ca 2+ unid os retro ceda n
calcio del músc ulo se ha aisla do con fosfa de Ca 2•: los camb ios evita n que los iones
os han detec tado ligeras al-
aspar tato, y lo s estud ios espe ctros cópic les perm iten disoc iarse en el
ína dura nte la conversión hacia el citosol cuan do se liber en, pero
terac iones en la conf orma ción de la prote espac io exop lasm ático (luz) .
tamb ién pued en ser distin gui- inde pend iente ment e del
El ➔ E2. Los dos estad os fosfo rilad os Todas las bomb as iónic as de la clase P,
ón de ADP al El fosfori -
dos medi ante prue bas bioq uími cas; la
adici en un resid uo de aspa rtato
inver sa del paso El de la tipo de ion que trans porte n , se fosforilan
lado da como resul tado la sínte sis de ATP,
la de trans porte . Com o se de-
al E2 fosfo rilado no altam ente cons ervad o dura nte el proce so
Figura 11 - 1O, mien tras que la adici ón
de ADP , las subu nida des catal íticas
del ciclo de reacción dujo a parti r de las secue ncias de cDNA
lo hace . Cada camb io conf orma cion al princ ipal la fecha tiene n secu encia s
ptibi lidad distin ta a a de todas las bomb as P exam inada s hasta
tamb ién pued e ser carac teriz ado por
una susce , se supo ne que tiene n conf i-
de amin oácid os simil ares y, por lo tanto
va rias enzim as prote olític as, como la trips
ina. mem bran a y dom inios A, p
gurac iones seme jante s de hélices a trans
tridim ensio nal de la bomb a la Fig. 1 l - 10). Estos halla zgos in-
La Figura I J- 11 mues tra la estru ctura y N que enfre ntan el citosol (véase
e obse rvars e en los 2 paneles de la de este tipo evol ucio naro n
de ca2+ en el estad o El. Com o pued dican fuert emeñ re· que todas las prote ínas
ior de la figura, las 10 hélices a trans porte n iones disti ntos.
derec ha de Ja parte c, en la mita d infer de un precu rsor comú n, aunq ue ahor a
la subu n!~a d catalí_tica; ~orman simil itude s de las estru ctu-
que se expa nden en la mem bran a, en Esta sugerencia se gene ró a parti r de las
iones Ca . Los am1~oac1dos de la ATPasa Na+/ K + con la de
el paso a travé s del cual se muev en los ras tridim ensio nales de los segm entos de
unió n de alta afim dad El por 2 la mem bran a (véas e la Fig.
4 de estas hélices form an los 2 sitios de la bom ba del Ca + en la zona inser ta en
se form a con átom os de oxígeno 3 dom inios citop lasm ático s
Ca2 + (Fío0 . ¡ 1- l la , izqui erda) . Un sitio (COO -) de las cadenas 11 - 12); las estru ctura s mole cular es de los
d ¡ boxil o lo oper acion al de la Figu ra
carga dos nega tivam ente e os grup os car í como de las moléculas de tamb ién son muy seme jante s. Así, el mode
.

t t as las bom bas iónic as de la

latera les del gluta mato y d eI aspa r a o, los átom os de oxígeno de las 11 - 11 es, por lo gene ral, aplic able a todas
·· e ma a parti r de
ag ua. El otro s1t10 se 1or J A , 2+ se unen clase P impu lsada s por ATP.
· ·pa . s1, a med 1"da que los iones Ca
caden as latera les y pnno alme nte
2+ · d n )as molé culas de agua que norm .
a 1a bom b a d e C a p1er e F1g. 2-7), pero
d C 2+ en la soluc ión acuo sa (véase la de la mem brana
La calmodulina regula las bom bas
.
ro d ean un 10n e a ' tomo s de oxígeno con una geom.e-
tracione s de
esta s aguas son reem p 1aza d as por a ína de trans porte . Por el contr ano,
., plasmática que controlan las concen
· ¡¡ ar, que son par te de la prote
· s1m
t na
. ¡ ¡ 11 a , derec ha) varia s de . estas cade nas. de umon Ca 2 + en el citosol
en e1 esta d o E2 (F1g. - r
· es de nanó metr o y son incapaces de inter actua much os tipos de célul as, ade-
·d
se h an mov1 o acc1on
fr
del esta- Com o explicaremos en el Capí tu lo 15, en
· e 2+ ·dos , ¡0 que da cuen ta de la baja afinidad
con los ion es a um más de las musculares, pequ eños incre ment
os en la conc entració n de
2 . . . . 2 cade nan una variedad de res-
do E2 para los iones Ca +. 2+ ilustr a un princ1p10 los iones Ca + libres en el citosol desen
·, d · s ca2+ a la bom ba de Ca 2 en la señalización intra celul ar,
La un10n e 10ne trans porte puest as celulares. Para que el Ca + opere
· , d e 1·0 nes a los canal es y prote ínas de
gene ra l d e la u n10n
ente iónico intrac elular 487
11 .3 Bombas impul sadas por ATP y ambi
 Estado E2
(a) Estado E1 Baja afinidad por Ca 2•
Alta afinidad por ca 2, No hay Ca 2 ' unido
Dos ca 2• unidos

Ca 2'

°!º~
\

ºº
(b) (e)
ºº
Ca 2'

;')
_,., :

"
coo-
Ca2• .
Citosol
00 NH
~

J_
'\ .
L -vY
\;
Dominio
actuado r (A) Sitio de
Dominio de fosforilació n
fosforila ción (P)
Dominio de unión
al nucleóti do (N)

figura 11-11 Estructura de la subunid ad a catalítica en la ATPasa 2 en la unión del Ca 2+. El segmento citosólico forma 3 dominios: el dominio
Ca + Nque
del músculo . (a) Sitios de unión a Ca 2+ en el estado El (izquierda), con une nucleótido (azul), el dominio P de fosforilación (verde) y el dominio
dos actua-
iones calcio unidos, y el estado de baja afinidad E2 (derecha) sin iones dor A (beige) que conecta dos de las hélices que se expanden en
unidos. la membrana
Las cadenas laterales de los aminoácidos clave son blancas, y los átomos (c) Modelos de la bomba en el estado E1 (izquierda) y E2 (derecha)
de . Nótense las
oxígeno en las cadenas laterales del glutamato y el aspartato son rojas. diferencias entre los estados E1 y E2 en las conformaciones de los
En la dominiosque
conformación E1 de alta afinidad, los iones Ca 2+ se unen a dos sitios entre
las unen nucleótido y actuador; estos movimientos impulsan los cambios
hélices 4, s, 6 y 8 dentro de la membrana. Un sitio se forma con átomos de con-
de oxí- formación en las hélices o que se expanden en las membranas (púrpura).
geno con carga negativa de las cadenas laterales del glutamato y el aspartato que
y constituyen los sitios de unión del Ca2+, y los convierten de uno en
molécula s de agua (que no se muestran), y el otro se forma con átomos el cual los
de oxi- sitios de unión de Ca 2+ son accesibles a la cara citosólica (estado E
geno de las cadenas laterales y principal. Siete átomos de oxígeno rodean 1la uno en el
el ion cual el Ca 2+, ahora unido laxamente, es accesible a la cara exoplásm
Ca2+ en ambos sitios. (b) Modelo tridimensional de la proteína en el estado 1ca (eS{ado
E1, E2). (Adaptado de C. Toyoshima YG. lnesi, 2002, Narure 418:605-6 11; C. Toyoshima y G lnes• }(X>A.
basado en la estructura determinada por cristalografía de rayos X. Hay i er
1Ohélices Rev. Biochem. 73:269-292; Y E. Gouaux y R. MacKinnon. 2005, Sc,ence 310:
a transmembrana, 4 de las cuales (púrpura) contienen residuos que participan 1461)

la concentración de los iones Ca 2+ libres en el citosol habitualmente L · ·d d

ª acttY1 , · a está
debe mantenerse por debajo de O, 1-0,2 µM. Las células animales, las le- a de las ATPasas Ca 2+ de la membra na plasmau c 1,
vaduras y- probablemente- las células vegetales expresan ATPasas Ca 2+ regulada por la calmodulina, una proteína citosól ica que une Ca,
( v'ease 1ª F. · • o induce
· 1ª union
de la membrana plasmática, que transportan Ca 2+ hacia el exterior de ig. 3-31 ). Un mcreme nto en el Ca 2+ citosóhc
de 1 · 2
ión de
las células en contra de su gradiente electroquímico. La subunidad ca- os iones Ca + a la calmodu lina, lo que desencadena la acuvac ·
.
talítica a de estas bombas de la clase P es semejante en su estructura y
la ATP e
asa a2+ . eorno resultado, la exporta ció n de 10nes. ea2+ desdt' dla
' lul
secuencia a la subunidad a de la bomba Ca 2+ del RS. ce ª se acelera, y se restablece con rapidez la baja concentracio ·' n e
Ca2+ c·t 1 os ól.
1ca l'b
I re caracter ística de la célula en reposo.

488 CAPITULO 11 • Transporte de iones y moléculas pequeñas a través

de la membra na
 Figura 11-12 Comparacio nes estructurale s de la ATPasa Na+/K+ y de la
ATPasa ca2+ muscular. Estructura tridimensional de la ATPasa Na+/K+ (dorado)
comparada con la de la ATPasa Ca2+ muscular (púrpura), vista desde la superfi-
cie citoplasmática; a M 1-1o denota las 1O hélices a de la ATPasa Na+/ K+ que se
expanden en la membrana. (Tomado de J. P. Nonh ycols.. 2007 Nature 4S0:1043 y H. Ogawa y
cols.. 2009, Proc. Nat' Acad. Sci. USA 106:1 3742.)

la Fig. 11 - 12). El polipéptido transmemb rana ~ glucosilado peq~eñ~,

, · 1· d d d d1·recto en el bombeo .1óm-
aparentemente, no esta unp 1ca o e mo o
co. Durante el ciclo catalítico de la ATPasa Na+/K+, ésta mueve 3 JOnes
Na+ hacia el exterior y 2 iones K+ hacia el interior de la célula por cada
molécula de ATP hidrolizada. El mecanismo de acción de la ATPasa
Na +/K+, esquematizado en la Figura 11 - 13, es semejante al de la bom~a
de calcio del RS, excepto porque los iones se bombean en ambas di-
recciones a través de la membrana, y que cada ion se mueve en contra
de su gradiente de concentración. En su conformaci ón El, la ATPasa
Na+/K+ tiene 3 sitios de unión de alta afinidad que unen Na+ Y 2 sitios
La ATPasa Na+/K+ mantiene las concentr aciones de baja afin idad que unen K+ accesibles a la superficie citosólica de la
proteín a. La Km para unir Na+ o estos sitios citosólicos es 0,6 mM, un
intracelu lares de Na+ y K+ de las células animales
valor considera blemente más bajo que la concentraci ón intracelular de
Una bomba iónica importante de la clase P, presente en la membra- Na+ - 12 mM ; corno resultado, los iones Na+ normalmen te ocupan
na plasmática de todas las células animales, es la ATPasa Na+/K+. Esta completame nte estos sitios. Por el contrario, la afinidad de los sitios de
bomba iónica es un tetrámero con una composició n de subunidades unión por K+ es lo suficienteme nte baja como para que los iones K+,
a;/3 2 , y comparte homología estructural con la bomba de Ca 2+ (véase transportados hacia el interior a través de la proteína, se disocien de la

~ ANIMACI ÓN GENERAL: lnterconv ersiones de energía biológica

■
■ 2 K+
Exterior El El El Cambio de
E2
Unión de Na+ Fosforilación
yATP del aspanato conformación
Na +

VD
Citosol
K+
---11---+ --D---+

3 Na + ATP A DP
Liberación del Na+
y unión del K+

+ Liberación de K+
Desfosforilació n
y cambio de
conformación
•••
+-D-

El El E2
2
Figura 11-13 Modelo operativo de la ATPasa Na+/K+ de la membrana los de la ATPasa Ca + muscular (véase la Fig. 11 -1 1). En este ca so la hidrólisis del
plasmática. Solo una de las dos subunidades a catalítica s de esta bomba clase intermediario E2-P impulsa el cam bio de conformación E2 ➔ E y el transporte 1
P se muestra. No se sabe si solamente una o ambas subunidades, en una molé- concomitante de dos iones K+ hacia el interior. Los iones Na+ se indican con
cula de ATPasa simple, rra nsportan iones. El bombeo iónico por la _ATPasa Na+/ círculos rojos; los iones K+ con cuadrados púrpura; el enlace fosfato acilo de al ta
K• implica fosforilación, desfosfori lación y cambios de conformac1on s1m1lares a energía con un - P; el enlace fosfoéster de baja energía, con - P

11.3 Bombas impulsadas por ATP y ambiente iónico intracelular 489

 E I en el citosol, a pesar de la al ta concent ra ción de K+ intracelular. Du - Por sí solas, las bo mbas p ro tó n icas impulsad as por ATP no
, . Pueden
rante la tra nsició n El ➔ E2 , 3 io nes Na + un idos se to rn an accesibles en acid ifi car la luz de un organulo (o el es pacio extracelular ) por
, . d . que es.
la cara exoplasm ática y, simultánea m ente, la a finid ad de los 3 si tios d e tas bombas son electrogemcas; es eo r, se p roduce un m ovim ie nt0
neto
u n ió n po r Na + caen . Lo s 3 iones Na+, un idos aho ra a si tios de unió n de d e carga eléctrica durante el t ra nspo rte. El bo mbeo de solo unos
. d . H+ Pocos
baja afinidad po r Na +, se d isocian un o po r vez hacia el med io extrace- roto n es gen era un a acumulació n e 10nes cargados posit iva
P . . mente
lula r, a pesar de la alta co ncen tración extracelular de Na+. La transición en la cara exoplasmática (el m tenor ) de la mem brana del o rgánu lo. p
. . ( . Or
d e la con fo rmació n E2 tam bién genera dos sitios K+ d e alta afin id ad cada H + bo mbeado a través, un ion negativo p . eJ., OH - o CI-) será "d
e-
accesibles a la cara exoplasmática . Como la Km para la un ión d e K+ a jado atrás" en la cara citosólica, lo que provo cará allí la acu mulación de
estos sitios (0,2 m M ) es m ás baja que la concen tración extracelular de ion es cargados negativam ente. Estos 10nes con cargas opuestas se atraen
K+ ( 4 mM ), estos sitios se llenarán con io n es K+ a medida que los iones en las caras opuestas de la m emb ran a, generando una separación de car-
Na+ se d isocien. De m odo semejante, duran te la transición posterior gas, 0 potencial eléctrico, a t ravés de ella. De este m odo, la membrana
E 2 ➔ El los 2 iones K+ unidos se transportan h acia ad ent ro y luego se del lisosoma fun ciona com o un co ndensador en un circuito eléctric o,
libera n en el citosol. que almacen a cargas opuestas (a niones Y cationes) en lados opuestos de
Ciertos fá rmacos (p. ej., la o uabaína y la di goxin a) se unen al do - una barrera imperm eable al m ovimien to de partículas cargadas.
minio exoplasm ático de la ATPasa Na+/K+ d e la membrana plasm áti- A m edid a que se bo mbean m ás p ro tones y se acumula un exceso
ca e inhiben de modo específi co su actividad de ATPasa. La alteración de cargas positivas en la cara exoplasm át ica, la energía necesaria para
resultante del eq u ilibro Na +/K+ de las células es una fuerte evidencia mover protones adicio nales en contra de este gradiente de potencial
del papel crítico d e esta bomba iónica en el m antenimiento de los gra- eléctrico creciente aumenta notablemente y evita el bombeo de proto-
dientes norm ales de con cen tración iónica de K• y Na+ . El Experimento nes adicionales mucho antes de que se establezca un gradiente de con -
Clásico 11 . 1 que sigu e inm ed iatamente a este capítulo describe el d es- centración transmembrana d e H+ significativo (Fig . l l - l4a ). De hecho,
cu brimiento d e esta importante enzima necesaria para la vida. ésta es la manera en la que las bombas H+ de la clase P generan un
potencial negativo en el citosol a través de las membranas plasmáticas
de los vegetales y de las levaduras.
Las ATPasas H+ clase V mantienen la acidez
de los lisosomas y de las vacuolas

Todas las ATPasas clase V transportan solamente iones H +. Estas bombas

protónicas, presentes en las membranas de los lisosomas, endosomas y
(a) ATP ADP + P¡
vacuolas de los vegetales, funcionan para acidificar la luz de estos orgá-
nulos. El pH de la luz lisosómica puede medirse con precisión en las cé-
lulas vivas mediante el empleo de partículas marcadas con un colorante
fluorescente sensible al pH. Cuando estas partículas se añaden al líquido
extracelular, las células las engloban e internalizan (fagocitosis; véase el
Cap. l 7) y, fin almente, las transportan hacia los lisosomas. El pH de los
lisosomas puede calcularse a partir del espectro de fluorescencia emitido.
G Potencial
pH neutro eléctrico
El DNA que codifica para una proteína naturalmente fluorescente cuya
fluorescencia depende del pH puede ser modificado (por la adición de
segm en tos de DNA que codifican "secuencias de señalización", detalladas Luz
en los Caps. 13 y 14), de modo tal que la proteína sea dirigida hacia la
(b) ATP ADP + P¡
luz del lisosoma; las mediciones de fluorescencia pueden, entonces, ser
empleadas para determinar el pH de la luz del orgánulo. El manteni -
m iento del gradiente protónico de unas 100 veces o más entre la luz del
lisosom a (pH - 4,5-5) y en el citosol (pH - 7) depende de la ATPasa clase
V Y, así, de la producción de ATP en la célula. El bajo pH de los lisosomas
es necesa_rio para la función óptima de muchas proteasas, nucleasas y
~tras en zunas hidrolíticas de la luz; por otra parte, un pH citosólico de 5 No hay
m ~erru m pirá las funciones de muchas proteínas que se encuentran opti- pote nc ial
eléct rico
m izadas para actuar a pH 7, y conducirá a la muerte celular.
El bombeo de relativamente pocos protones es n ecesario para acidi-
ficar una .vesícula
, in tracelular.
. Para comprender p or que,
, recuerd e que
una soluc1on de p H 4 t iene una concentración de iones H + d 10 -4 Figura 11-14 Efecto de las bombas H+ clase V en la concentración de los
. _7 1
. e mo es gradientes de concentración de H+ y los gradientes de potencial eféc·
por l1tro o 1O moles d e 10nes H + por mililitro. Com 0 h 23 ,
ay 6 ,02 10 ato- trico a través de las membranas celulares. (a) Si un orgá nulo intracelular
m os de H por m ol (n úmero de Avogadro) un mili!·1·tro d •,
• • ' e una so1uc1on contie ne solo dos bombas clase V, el bombeo de protones gene ra un potencial
pH 4 contiene 6,02 x 10 16 10nes H +. De este m odo a pH 4 1· eléctrico a través de la me mbrana (lado que enfrenta el citosol negativo Y lado
, , un 1sosoma
esférico prim ar io con un volumen de 4,18 x 10-1s mL (diámetro de , luminal positivo), pero no hay un camb io sign ificati vo en el pH intra luminal. (b)
02
µm ) contendrá exactamente 252 p rotones· A pH 7, el m i·sm o organu • o Si la membra na del orgánulo tamb ién contiene canales CI-, los aniones siguen
1
tendrá un promedio de solamen te 0,2 protones en su luz y así bo mbeará pasivamente a los protones bombeados, lo que da como resultado una acumu·
lación de iones H+ y CI· en la luz (bajo pH luminal), pero sin potencial eléctricoª
aproxim ad amente solo 250 proton es para acidificar el lisoso m a.
través de la me mbrana.

490 CAPITULO 11 • Transpo rte de iones y moléculas pequeñas a través de la membrana

 Para que la luz de un orgánulo o un espacio extracelular (p. ej., nicas clase F, de estructura similar, que describiremos en el Capitulo
la luz del estómago) se tornen acíclicos, el movimiento de protones 12, normalmente operan en dirección "inversa" para generar ATP más
debe estar acompañado de (1) el movimiento de un número igual de que para bombear protones; su estructura y mecanismo de acción se
aniones (p. ej ., C}-) en la misma dirección o por el (2) movimiento de conoce con gran detalle.
números equivalentes de un catión distinto en la dirección opuesta. El
primer proceso se produce en los lisosomas y las vacuolas vegetales, cu-
yas membranas contienen ATPasas H+ clase Vy canales aniónicos a tra- Las proteínas ABC exportan una gran variedad de
vés de los cuales se mueven los iones c1- acompañantes (Fig. l l -14b).
fármacos y toxinas desde la célula
El segundo proceso tiene lugar en el recubrimiento del estómago, que
contiene una ATPasa H+/K+ clase P que no es electrogénica y bombea Como se mencionó previamente, todos los m iembros de la s~perfa mi-
un H+ hacia el exterior y un K+ hacia el interior. La operación de esta lia ABC, muy grande y diversa de proteínas de transporte contienen dos
bomba se analizará posteriormente en el capítulo. dominios transmembrana (T) y dos dominios de unión al ATP citosó-
Las bombas protónicas impulsadas por ATP en las membranas de licos (A) (véase la Fi g. 11-9). Los dominios T, cada uno formado por
las vacuolas y los lisosomas se han solubilizado, purificado e incorpo- diez hélices a que se extienden en la membrana, forman la vía a través
rado a liposomas. Como se muestra en la Fi gura 11-9, estas bombas de la cual la sustancia transportada (sustrato) atraviesa la membrana
protónicas clase V contienen dos dominios discretos: un dominio hi- (Fig. 11 -l Sa) y determina la especificidad del sustrato de cada proteína
drofílico citosólico (V 1) y un dominio transmembrana (V0 ), con múl- ABC. Las secuencias de los dominios A son aproximadamente 30-40
tiples subunidades que fo rman cada dominio. La unión y la hid rólisis por ciento homólogas en todos los miembros de esta superfamilia, lo
de ATP por las subun idades B, en V 1, proporcionan la energía para el que indica un origen evolutivo común.
bombeo de los iones H+ a través del canal que conduce protones fo r- El descubrimiento de la primera proteína eucarióntica ABC que
mado por las subunidades "c" y "a" de V0. A diferencia de las bombas fue reconocida provino de estudios en células tumorales y células
iónicas de la clase P, las bombas protónicas de la clase V no se fosfor ilan cultivadas que exhibían resistencia a varios fármacos con estructuras
y desfosfo rilan durante el transporte de protones. Las bombas protó - químicas no relacionadas. Estas células, finalmente, expresaron nive-
les elevados de una proteína de transporte de resistencia multifármaco
(MDR) de nominada MDRJ y conocida actualmente como ABCBl.
Esta proteína utiliza la energía derivada de la hidrólisis del ATP para
exportar una gran diversidad de sustancias desde el citosol hacia el me-
dio ext racelul ar. El gen Mdrl con frecuencia está amplificado en las
(a) células con resistencia a múltiples fármacos, lo que da como resultado
Dom inios una superp roducción de la proteína MDRI. Contrariamente a lo que
transmem brana ocurre con las proteínas bacterianas ABC, construidas con 4 subunida-
Exterior
des discretas, los 4 dominios ABCBI de los mamíferos se fusionan en
una proteína única de 170 000 MW.

Interior

o Figura 11-15 El transportador multifármaco ABCBl (MDRl ): estructu-

Dom inios de ra y modelo de exportación de ligando. (a) Corte transversal a través del
unión al ATP

1 • centro de una proteína ABCBl unida a dos moléculas de un fár maco análogo
qz59-sss (negro), que revela la localización central del sitio de unión al ligando
con relación a la bicapa fosfolipídica: la cavidad central de unión al ligando se
encuentra próxi ma a la interfase entre ambas \amelas de la membrana. Durante
el transporte, esta cavidad de unión queda alternativamente expuesta a la
(e) superficie exoplasmática y citosólica de la membrana. Las serinas 289 290
(b)
afectan la especificidad por el ligando del tra nsportador y se muestra: como
esferas rojas, para resaltar su yuxtaposición al ligando unido. Los residuos de
Exterior
superficie están coloreados en amarillo para denotar hidrofobicidad y en azul

·-----º--- para denotar h1drofil1c1dad de los aminoácidos. (b) Estructura tridimensional

de la ABCB l con su sitio de unión al ligando que enfrenta el interior hacia el
citosol. En esta conformación, un ligando hidrofílico puede unirse directamente
desde el citosol. Un ligando más hidrofóbico puede distribuirse en la \amela
Interior !t intern~ de la membrana plasmática y entrar luego en el sitio de unión al ligando

o a traves de un espacio en la proteína que es accesible directamente al núcleo

hidrofóbico de la lamela interna. (e) Modelo para la estructura de la ABCB 1
con su sitio de unión al ligando que enfrenta el exterior, sobre la base de las
estructuras de proteínas bacterianas ABC homólogas. Cuando el transportador
asume esta conformación, el ligando puede difund ir a la \amela exoplasmática
o directamente hacia el medio extracelular acuoso. (Tomado de o Gutman y cols.. 2009.
Trends B,ochem Su 35:36-42. Estructuras tomadas des G Aller y cols . 2009, Sc,ence, 323:1718-1 722.J

11 .3 Bombas impu lsadas por ATP y ambiente iónico intracelular 491

 Estos sustratos de la ABCB l de los mamíferos son, esencialmente, las moléculas hidrofíl icas entren al sitio de unión directamente d d
, . . es r el
moléculas planas, liposolubles, con una o más cargas positivas; todas citosol. Existe una brecha en la proteina accesible directa mente d d
. . es e ti
compiten entre sí por el transporte, lo que sugiere que se unen al mis- úcl eo hidrofóbico de la !amela intern a de la b1capa de la memb
11 . . rana•
mo sitio o sitios que se superponen en la proteína. Muchas sustancias esto posibilita el ingreso de las mol éc ulas h1drofób1cas al sit io de unión'
transportadas por la ABCB I difunden desde el medio extracelular a directamente desde la !amela interna ~e la b1capa fosfo lipídica ( hg:
través de la membrana plasmática, sin la ayuda de proteínas de trans- 11-156). Después de producido el cambio de conformación impu lsado
porte, hacia el citosol celular, donde bloquean varias funciones de la por ATP que mira hacia el extenor, las moléculas ~ueden sali r del sitio
célula. Dos fármacos de este tipo son la colchicina y la vinblastina, que de unión en la )amela de la membrana exoplasmat1ca o directamente
bloquean el ensamblaje de los microtúbulos (Cap. 18). La exportación hacia el medio extracelular (Fig. 11 - l Sc).
impulsada por ATP de estos fármacos, por la MDRl , reduce su concen- Actualmente, se reconocen aproximadamente 50 proteí nas de
tración en el citosol. Como resultado, se necesita una concentración de transporte ABC en los mamíferos ( ~ u adro 1l_-_3: · Va~i~s se expresan en
fármaco extracelular mucho más elevada para eliminar las células que abundancia en el hígado, los intestmos y el rmon - s1t1os donde se eli-
expresen ABCB 1 que la que se requeriría para no hacerlo. La ABCB 1 minan los productos tóxicos naturales y los productos de desecho del
es una bomba impulsada por ATP de pequeñas moléculas que ha sido organismo- . Los sustratos de estas proteínas ABC incluyen azúcares,
demostrada en liposomas que contienen la proteína purificada . Dife- aminoácidos, colesterol, ácidos biliares, fosfolípidos, péptidos, proteí-
rentes sustancias aumentan la actividad de ATPasa de estos liposomas nas, toxinas y sustancias extrañas. La función normal de ABCBl proba-
de modo dependiente de la dosis, en concordancia con su capacidad blemente consista en transportar varias toxinas naturales y metabólicas
para ser transportadas por ABCB 1. hacia Ja bilis O la luz intestinal para que se excreten en la orina que se
Las estructuras tridimensionales de ABCBl, junto con las de los está formando en los riñones. Durante el transcurso de la evolución, la
transportadores bacterianos ABC homólogos, revelaron su mecanismo ABCB 1 parece haber adquirido la capacidad de transportar fármacos
de transporte, así como su capacidad para unir y transportar un am- cuyas estructuras son similares a los de estas toxinas endógenas. Los
plio espectro de sustratos hidrofílicos e hidrofóbicos (Fig. J l - J5). Los tumores derivados de los tipos celulares que expresan MOR, como los
2 dominios T forman un sitio de unión en el centro de la membrana hepa tomas (cánceres hepáticos), con frecuencia, son resistentes a casi
que alterna entre una orientación que enfre nta el interior (Fig. J 1-156) todos los agentes qu imioterapéuticos; por lo tanto, resultan difíciles de
y el exterior (Fig. l l -15c). La alternancia entre estos dos estados con- tratar, presum ibl emen te, porque los tumores exhiben una expresión
formacionales de la proteína es impulsada por la unión de ATP a las 2 elevada de ABCB 1 o una proteína relacionada con ABC.
subunidades A y la hidrólisis posterior a ADP y Pi, pero no se conoce
con precisión el modo en que esto sucede. Ciertas proteínas ABC "voltean" fosfolípidos
La cavidad de unión al sustrato, fo rmada por ABCBl , es grande. y otros sustratos liposolubles desde una lamela
Parte de los aminoácidos que recubren la cavidad tienen cadenas late-
de la membrana hacia la otra
rales aromáticas, principalmente tirosina y fenilanalina, lo que permite
que la ABCBl se una a múltiples tipos de ligandos hidrofó bicos. Otros Como se muestra en la Figura l l -5b y c, la ABCBl puede mover o
segmentos de la cavidad están recubiertos por residuos hidrofílicos, "bombear" una molécula de sustra to hidrofóbica o antipática desde la
y esto permite que se unan moléculas hidrofílicas o antipáticas. En la !amela interna de la membrana hacia la !amela externa. Esta es una
conformación que mira hacia la cara interna, el sitio de unión se abre reacción , por lo demás, energéticamente desfavorable, impulsada por
directamente a las soluciones acuosas que lo rodean, permitiendo que la actividad de ATPasa acoplada de la proteína. El apoyo para este - así

Cuadro 11 - 3 Proteínas ABC humanas seleccionadas

- -- - - -
Proteína Expresión en tejidos Función
Enfermedad causada por la
proteína defectuosa
ABCBl (MDR l ) Suprarrenal, riñón, cerebro Exporta sustancias lipofílicas
ABCB4 (MDR2) Hígado Exporta fosfatidilcolina a la bilis
ABCBll Hígado Exporta sales biliares a la bilis
CFTR Tejido exocrino Transporta iones CI
Fibrosis quística
ABCDl Ubicua en la membrana Influencia la actividad de las enzimas de los Adrenoleucodistrofia (ADL)
de los peroxisomas peroxisomas que oxidan ácidos grasos de
cadenas muy largas
ABCG5/8 Hígado, intestino Exporta colesterol y otros esteroles P-sitosterolemia
ABCAl Ubicua
E_~ orta coleS terol Yfosfo lípidos para la capta- Enfermedad de Tangier
cwn ª hpoproteínas de alta densidad (HDL )

492 CAPITULO 11 • Transporte de iones y moléculas pequeñas a través de la membrana

 denominado- m o d elo d e fl ipasa d e transpo rte por ABCB ¡ proviene d e de vari o s lipid os, pres u mib lem en te, po r m eca n is mos sim ilares a los de
experimen tos realizados en la ABCB4 (lla m ada o riginalm ente M DR2 ), la ABC BI (véase el C uadro 11 -3).
un a p roteína h o m ólo ga a la A BCB 1, prese n te en la regió n de la mem - Se so spechó inic ialmen te que la ABCB4 tení a activid ad d e fli pa-
brana plasm áti ca de los hepato citos q ue vira hac ia los canalículo s bilia- sa d e fos fo lípid os po rq ue lo s raton es que presen taban mutacio nes con
res. La ABCB4 mu eve fosfati d ilcolina desd e la !amela citosólica hacia la pérdida de la fu nció n en el gen ABCB4 exh ibían d e~ectos e n la secre-
exoplas m ática de la m embrana plasm ática para la liberació n posterior ció n d e fosfatid ilco lin a hacia la b ilis. Para determ inar d irect am ente
hacia la bilis, e n com bin ación con el colesterol y los ácid os biliares, que si la ABCB4 -en efecto- era u na flipasa, los investigadores Llevaro n a
son transportados po r otros miembros de la familia ABC. Varios otros · bl "6 homogén ea d e vesículas pur ifi -
caba exp erim entos en una po ao n
miembros d e la su perfamilia ABC participan en la exportació n cel ular · · d d I aduras especiales co n ABCB4
cadas aislad as a partir e m utantes e ev

Lípidos e xternos ma rcados:

no protegidos,
desact ivados ~ Lípidos internos marcados :
D " prot egidos, fluorescentes
Ad ició n de fosfol ípidos > " 1 '
flu o re s cente s
"'
{ '&
~
~
'-¡;_,, .~
·~v
~
fJ
de ATP
~~11"/ ~ ' .

desa~vador
+luz
J det~gente
~ -l~i Micela :
~~~
no proteg idos,
Dominio todos los lípidos
ATPasa
ABCB4 transmembrana - ~
l • ,a,
desactivados
(flipasa) '..í:J}
-y.J?-1

ATP
ADP ADP
Adición Adición
de A TP de desactivador
0

Adición
de detergente
0

Tiempo (m in)

FIGURA EXPERIMENTAL 11- 16 Ensayo de desactivación de la fluores- la memb rana, denomi nado ditio nita, al med io que rodeara las vesículas. La d itio-
· · ·t de detectar actividad de la flipasa de fosfolípidos nita reacciona con el grupo fluore sce nte de la cabeza destruyendo su capacidad
cen cIa m vI ro que pue .
de ABCB4 . Un a población homogé nea de vesículas secretoras q ue contienen de flu orescer (g ris). En presencia del desactivad o r, solo el fosfol ípido marcado en
la proteína ABCB4 se obtuvo introdu ciendo e l cDNA que cod ifica la ABCB4 de el ambiente protegido de la lamel a interna flu o resce ria. Después d e la ad ición
mamífero a una mutan te d e levadura sensi ble a la te mperatu ra sec, de modo tal del agente desactivador, la fl uorescencia total disminuye con e l tiem po hasta
que la ABCB4 se localizara intracelula rmen te en vesícu las del retículo endo- q ue alcanza un plateau e n el pu nto en el cual tod a la fl uorescencia externa
plasmático en su orien tación nor ma l y con la ca ra citosólica d e las vesículas se apaga y solo pued e detecta rse la fluorescencia del fosfolípido inte rno. La
[Link] ndo el exte rio r (véase la F1g. 14-4). Paso D: los fosfol ípidos sintéticos q ue observación de mayor fl uo resce ncia (menor desactivació n), en prese ncia de
con tienen un grupo de la cabeza modific ad o co n fluoresce ncia, si ntético'. (en ATP y en ause ncia de éste, ind ica q ue la ABCB4 ha cam biado de lug ar par te del
azul) se inco rporaron primero a las lame las ci tosó licas externas de las ve_s1culas fosfo lipido ma rc ad o al inte rior. No se mu est ran aq uí vesíc ulas "control' aislada s
n
purific adas. Paso si ABCB4 actuar a como una flipasa, en tonces al ad1c1o nar de cél ulas qu e no expresan ABCB4 y qu e no exhibieron la actividad de fli pasa.
ATP al exte ri or de las vesículas, una peq ue ña fracció n de los fo sfolípidos ma rca- Paso fil la ad ic ió n de dete rge nte a las vesículas ge ne ra mice las y, baj ando la
n
dos que e nfre nta n e l exterior pasa rían a la la me la intern a. Paso el camb io de fl uoresce ncia a valores basales, hace que todos los líq uidos fluo rescentes sean
la rnela se detecta ría al añad ir un compuesto q ue se d esactiva, impe rmeab le en accesi bles al agente de de sactivado. (Adaptado de [Link] y p Gros, 1994, Ce// 11: 10?1 )

11.3 Bombas impulsad as por ATP y am biente iónico intracelular 493

en la membrana y co n la cara citosó lica dirigida hacia el exteri o r ( Fig. a d ecua d amen t e Y m o verse h ac ia la superficie
. celul ar, donde no
r111a1.
.
mente ac t ua . Resulta interesa nte que s1 las células que expresa n la Pro.
l 1- 16). Después de purifica r estas vesíc uJas, los investigadores las mar- .
teína mutante se incuban a temperatura ambiente, la proteína se a
caron in vitro con un derivado fl uorescente de la fos fatidilcolin a. El . d cu.
· que se descn·be en la .Fi - m ula normalmente en la m embrana plasmáttea, onde funcio na ca .
ensayo de desactivació n de la flu orescencia,
. como e1canal CFTR de tipo silvest re. Actualme nte esta·n d. \i
tan b 1en
gura 11-16, se empleó para demostrar que las vesíc ulas que conteman . _ ' 1ri.
ABC B4 exhibían una ac tividad de flipasa dependiente del ATP. g iéndose n otables esfuerzos a la ident1ficac1ó n de pequeñas moléc ul
• as
que permitirían que la proteín a mutante ,_ en 1os paci entes con FQ, se
desplazara nor m alme nte hacia la su perficie celul ar y, de este modo, se
El regulador transmembra na ABC en la fibrosis
revertirían los efectos de la en fe rm ed ad . ■
quística (CFTR) es un canal de cloro, no una bomba

Varias enfermed ades genéticas humanas están asociadas con pro teínas
ABC defectuosas (véase el Cuadro 11-3 ). La mejor estudiada y la más
extendida es la fibrosis quística (FQ ). Ésta es provocada por una mu- CONCEPTOS CLAVE DE LA SECCIÓN 11.3
tación en el gen que codifica el regulador transmemb ran a de la fi brosis
Las bombas impulsadas por AJP Y el ambiente
quística (CFTR , también llamado ABCC7). Al igual que otras proteí-
nas ABC, el CFTR tiene 2 dom inios T transmembrana y 2 dominios iónico intracelular
citosólicos A o de unión al ATP. El CFTR contiene 1 dominio R (de • Cuatro clases de proteínas transmembran a acoplan la energía liberada
reguJación ) adicional en la cara citosólica; el R une las dos mitades ho- por la hidrólisis del ATP con el transporte de sustancias en contra de
mólogas de la proteína, creando una organización general de dominio sus gradientes de concentración, que requiere energía: las bombas cla-
de Tl-Al -R-T2-A2. Pero el CFTR es un a proteína de canal de c 1-, no ses P-, V- y F- y las proteínas ABC (véase la Fi g. 11 -9 ).
una bomba iónica . Se expresa en las membranas apicales de las células
epiteliales del pulmón, las glándulas sudoríparas, el páncreas y otros te- . La acción combinada de las ATPasas Na+/K+ clase P de la membrana
jidos. Por ejemplo, la proteína CFTR es importante para la recaptación, plasmática y las ATPasas Ca 2 + homólogas de la membrana plasmática 0
en las células de las glándulas sudoríparas, del c 1- que se pierde por el retículo sa rcoplasmático crea el medio iónico habitual de las células
sudo ración; los bebés con fibrosis quística, si se los lame, con frecuencia animales: alto K+, bajo Ca 2+ y bajo Na+ en el citosol; bajo K+; alto Cah
tienen sabor "salado" porque esta recaptación se encuentra inhibida. y alto Na+ en el líquido extracelular.
El canal de Cl- de CFTR normalmente está cerrado. La apertu ra del
• En las bombas clase P, la fosforilación de la subunidad a (catalítica)
canal se activa por la fosforilación del dominio R por una proteincina-
y los cambios en los estados de conformación son esenciales para el
sa (PKA, que se analizará en el Cap. 15) que, a su vez, se activa por un
acoplamiento de la hidrólisis de ATP al transporte de iones H+, Na+, K'
incremento del AMP cíclico (cAMP ), una pequeña molécula de seña-
o Ca 2+ (véanse las Figs . 11 - 10 a 11- 13 ).
lización intracelular. La apertura del canal requiere, además, la unión
secuencial de dos moléculas de ATP a los dos dominios A (Fig. 11 - 17). · Las ATPasas clase V y F, que transportan exclusivamente protones, son
complejos grandes de múltiples subunidades que presentan un canal
que conduce protones en el dominio transmembrana y sitios de unión
~ Aproxim adam ente dos tercios d_e todos los casos d_e en~ermos que al ATP en el dominio citosólico.
U padecen FQ pueden ser atnbu1dos a una mutación umca en el
• Las bombas de H + clase V en las membranas de los lisosomas yendo-
CFTR: la deleción de Phe 508 en el dominio de unión Al al ATP. A la
tem peratura del organism o, la p ro teína mutante no puede plegarse somas animales, y las membranas de las vacuolas de vegetales cumplen

Figura 11-17 Estructura y función del regula- Cara Canal

dor de transmembrana en la fibrosis quís- externa CFTR
Cerrado
tica (CFTR) . Interpret ación est ru ctu ral del ci clo
d ependi ente de compu erta de ATP de los canales
Ü ATP Ü ATP
fo sfo ri lados CFTR. El dominio reg ulatorio (R) (que no
\._
se muestra) deb e fo sforilarse antes de que el ATP
sea ca p az de sostener la apertu ra del canal. Un ATP Cara • .. \, ►
(circulo amar illo) se une est rech amente al dom inio citosólica
A 1 (verd e) La u nión del segundo ATP al dominio A2
(a zu l) es seg ui da de la formació n d e un heterodíme -
ro int ramolec ular estrecho A 1-A2 y la lenta ape rtura
Dominios
del can al. El estado de apert ura rela t ivamente esta-
que unen ATP
b le se d esestabil iza por la hid ró lisi s del ATP unido a
A2, al pa sar a ADP (med ialuna roja) y Pi. La poste rior
rot ura d el di mero estrecho A 1-A2 conduce al cierre
del cana l. T = dom in io t ra nsm em bra n a; A= d om inio
d e unió n al ATP en el citoso l (To mado de DC.G atsbyy cols .
2006. Norure 440 :447 and SG Aller. 2009, Sc,ence 323: J 718 ¡

494 CAPITULO 11 • Tra n sporte d e iones y mol éculas peque ñas a través de la membra n a
 ento en la
cesos b iológicos. Com o se no tó anter iorme nte, un increm
nulos que en reg ulació n im por-
la funció n de mante n er un pH más bajo dentro de los orgá concen tración de ca2+ citosól ico es una señal de
el citosol que los rodea (véase la Fig. 11 - 14). n d e las células m uscu la res y dese_nca-
ta n te, que inicia la con tracció
ió n d e proteí n as, como las enzima s
y diversa, de dena, en mucha s cél ulas, la secrec
, Todos los miemb ros de la superf amilia ABC, gra nde as. En numer osas_ células a~i-
dos dom inios digestivas desde las células del páncre
proteínas de transp orte co n tiene n 4 dom inios centrales: nte de concen tració n de Na y
de solutos y males la fuer za com bin ada del gradie
transm~mbrana qu~ for m an una vía para el m ovi m iento impuls an la captac ió n d e ami-
citosól icos que el pot:ncial eléctrico de la memb rana
dete rminan la especdic1dad del sust ra to y dos domin ios ntes _de concen -
unen ATP (véase la Fig. 11 - 15 ). noácid os y de otras molécu las en contra de sus gradie
an tiporte (véans e la Fig. l l -3 ~ la
tración , por proteín as de simpo rte y
y permea sas células nervio -
. La superfamiJ ia ABC incluye am inoáci dos bacter ianos Sección 11.5 ). Más aún, la señaliz ación eléctri ca en las
50 proteín as de mamíf eros (p. ej ., ¡ es · ,
10mco · s en r espues ta a
de azúcares, y ap roX1 madam ente sas depend e de la apertu ra y el cierre de cana
varied ad de sustrat os, 22 ).
ABCBJ, ABCA 1), que trans porta n un amplia los cambi os del potenc ial eléctri co de la memb rana (Cap.
péptid os y proteín as hacia el ial eléctri co de Ja memb rana
in cluso toxi nas, fár m acos, fosfo líp idos, Aquí analizamos el origen del potenc
la célula. inado con frecue ncia el
inter ior y el exterio r de en las células no neuron ales en reposo , denom
en el que los canale s ióni-
ABCBl forman "potencial de reposo" de las células; el modo
, Los dos do minios T del transp ortado r multif ármac o a través de una memb rana
memb rana; los cos median el movim iento selecti vo iónico
un si tio de unión al ligand o en el medio del plano de la caracte rizar las propie dades
o desde ]a ]amela y las técnicas experi mental es útiles para
ligandos pueden un irse directa mente desde el citosol
a. funci onales de las proteín as canal.
de la memb rana interna , a través de un hueco en la proteín
directo que
· Los experim entos bioquí m icos demue stran de modo
pido (véase la Fig.
El movi mien to selectivo de los iones crea un
ABCB4 (M DR2 ) posee activid ades flipasa de fosfolí
1J- 16). grad iente eléctrico a través de la mem bran a
de c1 -, no una
· La CFT R, una p roteín a ABC , es una proteín a canal potenc ial eléc-
adenad a por una fos- Para ayudar a explica r el modo en que puede surgir el
bomba ió nica. La apertu ra del canal es desenc memb rana plasmá tica, consid erarem os en prime r
dos domin ios A (Fig. trico a través de la
for ilació n pro teica y po r la un ión del ATP a los ficado s en los
términ o un conjun to de sistem as experi menta les simpli
J J - 17 ). NaCl/1 5 mM
cuales una memb rana separa una solució n 150 mM de
de los M e-
KCl (si milar al medio extrac elular que rodea las células
50 mM KCl
tazoos) a la derecha de una solució n 15 mM de NaCl/1
Se conect a un
(simila r a la del citosol) a la izquie rda (Fig. ll - 18a).
11 .4 Canales iónicos sin com puer ta y potencial potenc iómetr o (voltím etro ) a ambas solucio nes para
medir cualqu ier
rana . Si la mem-
de mem bran a en reposo diferencia de potenc ial eléctri co a través de la memb
n iones a través
que transp or- brana fuer a imperm eable a todos los iones, no fluiría
Además de las bo mbas iónica s impuls adas por ATP, nen un númer o igual
de concen t ración , la memb rana de ella. Inicial mente, ambas solucio nes contie
ta n io nes en con t ra d e sus gra di entes aún, no habrá diferen cia
qu e permi ten que los princip a - de iones con carga positiva y negativ a . Más
pl as mática con tien e p ro teí nas canal co a través de la memb rana ,
y Ci-) se mueva n a través de éstos de voltaje o gradie nte de potenc ial eléctri
les iones celular es (Na+, K+, Ca2 + 18a .
como se observa en la Figura ll -
de sus gradie ntes de concen tración.
a d iferentes veloci d ad es a f avor nas canal
bomba s y los movim i entos Supon gamos ahora que la memb rana contie ne proteí
Los gradie ntes ió n icos gen erados por las pero excluy en los iones K+
para Na+ qu e acomo dan los iones Na+
ca nales consti tuyen el princip al me -
selectivos de io nes a través de los y Cl· (Fig. 11 - 186 ). Entonc es los iones Na+ tiende n a mover se a fa-
rencia de voltaj e, o potenc ial eléctri co,
canism o por el cua l una d ife desde el lado derech o hacia
tica. En otras palabr as, las vor de su gradie nte de concen tración
se ge nera a través de ]a memb ra na plasmá iones c1- negati vos, en com -
el izquie rdo, lo que deja un exceso de
AT P genera n diferen cias en las con -
bomba s ió nica s im p ulsada s p or derech o, y genera un exceso de
na plasm ática, y los canale s paraci ón con los iones Na+ del lado
centra ci on es ió n icas a t ravés de la m embra c1- en el lado izquie rdo. El
para genera r un iones Na+, en compa ración con los iones
iónicos utiliza n esto s gradi entes de concen tración derech a perma nece cerca
a través de la memb ra- exceso de Na+ a la izquie rda y de c1- a la
pote ncial eléc tri co est rech ament e contro lado e el exceso de
de las superf icies respec tivas de la memb rana porqu
. . o por el exceso
na (véase la Fi g. 11 -3).
eléctnc o, por cargas positivas a un lado de la memb rana es atraíd
En todas las células, ]a m ag nitud de este potenc ial nte d e carga
ica dentro de ~a de car~as negati vas al otro lad?. La separa ción resulta
lo general , es _ 70 m ilivoltios (mV), con la cara citosól co O voltaje
to a la cara exopla sma- a traves de la memb ran~ consti tuye un potenc ial eléctri
me mbran a celu lar sie mp re negativa con respec con un exceso de
qu e consid eramo s que con el lado izquie rdo ( c1tosó lico ) de la memb rana ,
tica . Este valor no parece muy probab l e hasta carga positiv a con respec to al derech o .
solame nte - 3,5 nm. Así, el
el grosor de ]a mem bra n a plas m ática es de los canale s
plasmá tica es de 0,07 Y A medid a que más iones Na+ se mueve n a tr avés de
gradi ente de voltaje a través de la memb rana cia de carga
centím etro ! (Para aprecia r el atrave sando la memb rana, la m agni t ud de esta d iferen
por 3,5 x 10-7 cm , iº 200 000 voltios por ento conti -
n de las líneas de alto (es decir, voltaje ) se increm enta. Sin emba rgo, el m ovimi
significado de esto, co nsi dere que la tran smisió fin almen te,
roxim adame nte nu o d e derech a a izqu ierda de los iones Na+ es inh ibido,
voltaje para la electricid ad em plean gradie ntes de ap posit ivas (Na +),
5 por la repuls ión mutua ent re el exceso d e ca rgas
200 000 voltios por kiló metro, i l 0 veces menos! ) y la at racció n de
de la m em - acumu lad as en el lado izq u ierd o de ]a m embra n a,
Los gra d ien tes ió nicos y el potencial eléctrico a través en el lad o de-
crucia les en mucho s pro- io nes Na+ al exceso de cargas n egati vas ac umu ladas
brana plasmá tica desem peñan fu ncio nes

11.4 Canales iónicos sin compu erta y potenc ial de

membr ana en repo so 495
 GURA EXPERIMENTAL 1 1-1 8 La generación de . un
. potencial eléCII(..
FI
(a) Memb ra na impermeabl e a Na+, K+ y cI - co t ransmembrana (voltaje) depen d e d e1. mov1m1ento selectivo de
los iones a través de una membrana sem1p~rmeable. En este sisternd
• ntal una membrana separa una soluc1on 15 mM de Na( I/I , 0
experim e , " rnr1,
Potencial eléct rico KCI (izquierda) de una solución 150 mM NaCl/ 15 mM KCI (derecha); estas
Poten ció m etro - - de la membrana = O concentraciones iónicas son similare s a las presen tes en el_citosol y Id sangr~
. amente Si la membra na que separa ambas sol uciones es irnpn
respec t 1v • . ., . , drne0 ó,
•ones (a) no habrá movimiento 1on1co a traves de la membra f
a to dos 1os 1 , , . .. na n, ·.,
. , d'ferencia de potencia l electri co en el potenc1ometro que cone ·
registrara I Cia 1.,
. es s·, la membrana es selec tivam ente permea ble solo a ¡01 ,0 · •
dos so 1uc1on . , n~1
Na+ (b) o K+ (c), la difusión de iones a traves de sus cana les respec ti vos condu, '
Citosol Medio
auna separa Cl·o· n de cargas a través de la.,membra na. En eq . uil ibrio' el Pote",.r ,,
celular extracelular de membrana provocado por la separac_1~n de car?as es igual al potenc,dl dé
registrado en el potenc1ometro Vease el tex to para arnpl,ar
15 mM 150 mM Nernst (E Na ) O Ek 'º
Na+cI - Na+cI - información.
150 mM 15 mM
Cara K+cI- K+c1 -
citosóli ca Cara
exoplasmática

recho. El sistema rápidamente alcanza un punto de equ ilibrio en el

cual Jos dos factores opuestos que determinan el movimiento dt
(b) Membrana permeable solo al Na+ los iones Na+ -el potencial eléctrico de la membrana y el gradiente
de concentración iónica- se equilibran entre sí. En equilibri o, no
O Potencial eléctrico de la hay movimiento neto de iones Na+ a través de la membrana. Así,
membrana=+ 59 mV, cara
+ 60 - 60 citosólica de la membrana esta membrana, al igual que todas las membranas biológi cas, actúa
positiva con respecto a la como un condensador -un dispositivo que consiste en una lám ina

-----
- - - - - '- - - - - • 11
----- cara exoplasmática
delgada de un material no conductor (el interior hidrofóbico ) ro-
deado a ambos lados por un material conductor de la electricidad
(los grupos de las cabezas polares de los fosfolípidos y los iones en
la solución acuosa que las rodea) que pueden almacenar cargas po-
sitivas de un lado y negativas del otro.
Si una membrana es permeable solo a los iones Na+, entonces en
equilibrio, el potencial eléctrico medido a través de la m embrana iguala
Canal de Na+
al potencial de equilibrio del Na+ en voltios, ENa· La magnitud de E,,
+
+ es dada por la ecuación de Nernst, derivada de los principios básicos de
+ la fisicoquímica:
+
+
+
l+-----+l E = _BJ_ In INa,.,J (l 1-2)
Separación de cargas a través de la membrana Na ZF INa,,,]

~onde R (la constante de los gases) = 1,987 cal/(grados·mol ), o 8,28

JOules/(grados · mol) ; T (la temperatura absoluta en grados Kelvin)
(c) Membrana permeable solo al K+
= 293 °K a 20 ºC; Z (la carga, también denominad a valencia ) aqui
o = + l; F (la constante de Faraday) = 23 ,062 cal/ (mol • V) o 96 OOO
Potencial eléctrico de la
membrana = + 59 mV, cara coulombs/(mol · V) ; [Na;,q) y [Nade, l son las concentraciones de Na'
+ 60 - 60 citosólica de la membrana ª los lados izquierdo Y derecho, respectivamente, en equ ilibrio. Por
negativa con respecto a la
cara exoplasmática
convención, el potencial se expresa como la cara citosólica de la mt'm·
--- - ------ brana con relación a la cara exoplasmática, y la ec uación se escribe
-- - - -
- + con la concentración de los iones en la solución extracelular (aq uí,
+ el lado derecho de la membrana ), ubicada en el numerado r; Yla del
+
citosol, en el denominador.
A 20 °C, la Ecuación 11-2 se reduce a:

[Na j ( 11 -3)
Canal de K+ E = o,os91og - "'-'
00
N., INa,,,, J

s·1 [Nader]/[ Na;, ] = 10, un coCiente

• .
de concentraciones de d'iez, eom
0
9 1
en la Figura l l - 18b, en ton ces E Na = +0,059 V (o+ 59 mV), con e
Seoa ración de caroas a través de la b lado izqu ierdo, ci tosóli co, p ositivo con respecto al lado derecho, cxo·
mem rana
plasm áti co.

496 CAPITULO 11 • Tran sporte de iones y molécul •

as pequenas a través de la m em brana
 Si la m embran a fue ra perm eab le solo a ion es K+ ·
.. . . Y no a 10nes Na +
0 c 1-, una ec uac 10n s1 m 1lar describiría el p o ten cial de
·¡·b •
.· . equ11 no de po-
tasio f k. Potenciómetro
+80 ' - ~ ~-_, - 80
E 0,059log [K".,J
K = '° [K,,,1 (11-4 )

La magnitud del potencial eléctrico de membrana l · Microelectrodo Electrodos de

. . es a misma (59 mV
pa ra una d1 ferenc1a de 10 veces en la concentrac 1·ó d · lleno con referencia en contacto
. . . n e iones) excepto solución salina con el medio de baño
que el lado. 1zq u1erd o, c1tosó lico ' ahora será negat zvo
. con respecto al
~
conductora
derecho ( F1g. 11 -. l Sc ), opuesto a la polaridad obt eni·d a a traves
. de la
membra n a selectivamente permeable a los iones Na+.
Medio de baño

+ + + + + ++++++ + +
El potencial
• de membrana en reposo en las cél u1as
anima 1es depende en gran medida del flujo de Citosol
-\ Membrana plasmática
iones K+ a través de los canales K+ abi ertos
FIGURA EXPERIMENTAL 11 -19 Puede medirse el potencial eléctrico
Las mem branas plasmáticas de las células animales contienen muchos a través de la membrana plasmática de las células vivas. Se inserta un
canales abiertos K+, p ero pocos canales abiertos de Na+ , c1- o c a2+. microe lectrod o construido con un tubo de vidrio de un diámetro, muy delgado,
con un líquido conductor -como una solución de KCI- en una cé lu la, de m odo
Co mo res ultado de ello, gran parte del movimiento iónico a través de
tal que la membrana de la superficie se se lle alrededor de la punta del electro-
la membrana plasmática es de K+, desde el interior hacia el exterior, im- do. Se coloca un electrodo de referencia en la solució n d e baño. El potencióme-
pulsado por el gradiente de concentración de K+, que deja un exceso de tro que co necta los dos electrodos registra el potencial, en este caso -60mV, con
cargas negativas en la cara citosólica de la membrana plasmática y crea la ca ra citosólica negativa con respecto a la cara exop lasmát ica de la membrana.
un exceso d e cargas positivas en la cara exoplasmática, similar al sistema Se registra una diferencia de poten cial solo cuando el m icroe lectrodo se inse rta
en la célula; no se detec ta diferencia de pot encial si el mi croelectrodo se en-
experimental que se muestra en la Figura 11 - l 8c. Este eflujo de iones
cuent ra en la so lución de baño.
K+ a través d e estos canales, denominados canales de K+ en reposo, es
el princi pal d eterminante del potencial de membrana negativo en el
interior. Al igual que todos los canales, éstos alternan entre un estado
abierto y uno cerrado ( Fig. 11 -2 ), pero como su apertura y cierre no se terior de las células deja atrás un ion CJ-, lo que genera un gradiente de
ven in fluidos por el potencial de membrana o por pequeñas moléculas potencial eléctri co (cara citosólica negativa) a través de la membrana.
de señalización , estos canales no son de compuerta. Los varios canales de En las bacterias aerobias, el potencial negativo en el interior de la célula
compuerta de las células nerviosas ( Ca p. 22) se abren solo en respuesta a se origina por un bombeo de los protones hacia el exterior durante el
ligandos específicos o a cambios en el potencial de la membrana. transporte electrónico, en un proceso similar al del bombeo de proto-
Cuantitativamente, el potencial d e m embrana en reposo habitual nes en las membranas internas de las mitocondrias, que se analizará en
de - 70 m V está cerca del potencial d e eq uilibrio del potasio, calculado detalle en el Capítulo 12 (véase la Fig. 12- 16).
a partir d e la ecuación de Ne rnst, y las concentraciones de K+ en las cé- El potencial a través de la membrana plasmática de las células gran-
lulas y el medio que las rodea, que se muestra en el Cuadro 11 -2. Habi- des puede ser medido por un microelectrodo insertado dentro de la
célula y un electrodo de referencia ubicado en el líquido extracelular.
tualm ente, el potencial es más bajo (menos negativo) que el calculado a
Los dos están conectados a un potenciómetro capaz de medir pequeñas
partir d e la ecuación d e Ne rnst, por la presencia de ~nos pows canales
diferencias de potencial (Fig. 11 - 19). El potencial a través de la su per-
abi ert os d e Na+. Estos canales abiertos de Na+ permiten el influ10 neto
ficie de la membrana de la mayoría de las células animales, por lo ge-
de io n es Na+, lo que hace que la cara citosólica d e la membra_na plas-
. · · · · d · menos negativa que la predicha por neral, no varía en el tiempo. Por el contrario, las neuronas y las células
mat1ca sea mas pos1t1va, es ecir, . +
.• d N t ara el K+ El gradiente de concentración de K , musculares - los principales tipos de células con actividad eléctrica- ex-
1a ecuac1o n e erns p · perimentan cambios controlados en su potencial de membrana, como
. fl . d •ones a través de los canales de K+ en reposo, se
que 1mpu1sa e1 UJO e 1 . . . analizaremos en el Capítulo 22 .
+¡K+ ATPasa descrita antenormente (veanse las F1gs.
genera por 1a N a • h .b .d 1
. de esta bomba O cuando está m 1 1 a, e
11 - 3 y 11 - 13 ) . E n ausencia ' .
. d . . de K+ no puede mantenerse, la magnitud
gra d 1ente e concentraoon
. d b ana cae a cero y la célula finalmente muere. Los canales iónicos son selectivos para ciertos iones
d e1 potenoa 1 e mem r _ . .
+ en reposo desempenan la función dom1- en virtud de un "filtro selectivo" molecular
Aunque los canaIes d e K , . .
.ó del potencial electnco a traves de la membrana
nan te en 1a generac1 n Todos los canales iónicos exhiben especificidad por iones particulares: los
. . d •1 las animales esto no es lo que ocurre en las bac-
p 1asmat1 ca e 1as ce u , . . canales de K+ permiten que los K+ pero no los iones Na+ muy relacionados
· l h s El potencial de membrana con el mtenor ne-
te n as, vegeta es y ongo • ingresen, mientras que los canales de Na+ admiten los Na+ pero no los K+.
• •tul egetales y los hongos, se genera por el transporte
ga t1vo, en 1as ce as v . . La determinación de la estruct,ura tridimensional de un canal bacteriano
sitivamente (H +) hacia el extenor de la celula,
d e protones carga d os p O de K+ mostró, en primer término, de qué modo se logra esta exq uisita
. d b b protónicas impulsadas por ATP, un proceso se-
po r m e d 10 e om as . selectividad iónica. Las comparaciones de las secuencias y estructuras de
· d ce en las m embranas de los hsosomas carentes
meJante a 1que se pro u . otros canales de K+ de organismos tan distintos como bacterias, hongos Y
de canales d e c1- (véase la Fig. l l - l 4a ): cada H + b o mbeado hacia el ex-

11.4 Canales iónicos sin compuerta y potencial de membrana en reposo

497
 ,,

(a ) Subun idad indiv idual (b ) Canal tetram érico

Segme nto P
Filtro de Exterio r
selecti vo

Hélice P
Hélice
Hélice
/ interna
/ (S6)

Citoso l

FIGURA 11 -20 La estruct ura de un canal de K+ en

reposo de la bacteria plata); consisten en dos "torrecillas" no helicoid ales que cubren la
Streptomyces lividans. Todas las proteínas canal de K+son parte superior
tetrámeros com- del poro; una hélice a corta y un bucle extendido que sobresale hacia
puestos por cuatro subunidades idénticas, cada una de las cuales la parte
contienen más estrecha del poro y fo rma el filtro de selectividad iónica. Este
dos hélices a conservadas que se extienden en la membrana, denomi filtro permite
nadas por que pase el K+ (esferas púrpura) pase, pero no otros iones. Más allá
convención SS y S6, y un segmento P más corto o segmen to poro. del filtro, se
(a) Una de encuentra la cavidad central o vestíbul o tapizado por las hélices internas
las subu nidades, en una vista lateral, con sus caracter ísticas estructu o. o S6.
rales clave La subunidades en los canales K+ con compuerta que se abren y
indicadas. (b) El ca nal tetramérico comple to en vista lateral (izquierd se cierran en
a) y la pa rte respuesta a estímulos específicos contienen hélices transmembrana
superior o extremo extracelular (derecha) . Los segmentos P (rosado) adicionales
se localizan que no se muestran aquí; éstas se analizan en el Capítulo 22. (Vease
cerca de la superfic ie exoplasmática y conectan las hélices a SS y [Link] ycols.
S6 (amarillo y 2001 Narure 414:4 3.)

seres humanos estableció que todos comparten una estructu

ra en común selectivo a los iones para permitir K+ preferencialmente antes
y, probablemente, hayan evolucionado de un solo tipo de canal que Na+
proteico. en sus canales K+ se debe, principalmente, a los oxígenos
Al igual que otros canales de K+, los canales de K+ de las del esqueleto
bacterias carbonilo de los residuos localizados en la secuencia Gly-Tyr
están construidos por cuatro subunidades transmembran -Gly, pre-
a idénticas sente en la posición análoga en el segmento P en cada canal
dispuestas de modo simétrico alrededor de un poro central K+conocido.
(Fig. 11 -20). Cuando un ion K+ ingresa en el filtro selectivo estrecho -el
Cada subunidad contiene dos hélices a que se expanden en espacio entre
la membra - las secuencias filtro del segmento P al que contribuyen cuatro
na (SS y S6 ) y un segmento P (poro) corto que penetra subunida-
parcialmente des adyacentes- pierde sus ocho moléculas de agua de hidratac
en la bicapa de la membrana, desde la superficie exoplasmática ión, pero
. En el se une con la misma geometría a ocho oxígenos del esquele
canal de K+ tetramérico, las ocho hélices transmembrana a to carboni-
(dos de cada lo, dos del bucle extendido de cada uno de los cuatro segmen
subuni dad) forman un cono invertido, lo que genera una tos P que
cavidad llena recubren el canal (Fig. ll -2la, parte inferior izquierda). De
de agua denominada vestíbulo, en la porción central del este modo,
canal que se se requiere poca energía para eliminar las ocho moléculas
extiende a mitad de camino, a través de la membrana, hacia de agua de
el lado cito- hidratación de un ion K+ y, como resultado, se requiere
sólico. Cuatro bucles extendidos que son parte de los cuatro relativamente
segmentos poca energía de activación para el paso de iones K+ hacia
P forman el filtro iónico selectivo real, en la parte estrech el interior del
a del poro, cerca canal, desde una solución acuosa. Un ion Na+ deshidratado
de la superficie exoplasmática, por encima del vestíbulo. es demasiado
pequeño como para unir los ocho oxígenos del carbonilo que
Varias evidencias relacionadas avalan el papel de los segmen recubren el
tos P filtro selectivo con la misma geometría que un ion Na+, rodeado
en la selección de los iones. En primer término, la secuen por sus
cia de ami- ocho moléculas normales de agua en la solución acuosa . Como
noácidos del segmento P es homól oga en todos los canales resultad o
de K+ co- de ello, los iones Na+ "preferirán" permanecer en el agua,
nocidos y es diferente de la de los otros canales iónicos en lugar de
. En segundo ingresar en el filtro de selectividad y, así, el cambio de energía
lugar, la mutación de ciertos aminoácidos en este segme libre para
nto altera la el ingreso de los iones Na+ al canal es relativamente elevado
capacidad de un canal de K+ de distinguir entre Na+ y (Fig. l l · 21ª·
K+. Finalmen- derecha). Esta diferencia en las energías libres favorece el
te, el reemplazo del segmento P de un canal K+ de las bacteri paso de iones
as por el K+ a través del canal, más que el de Na+ en un factor 1 000.
segmento homólogo de un canal de K+ de mamífero da Como el Na+
como resulta- Yel ion Caz+ deshidratado son más pequeños que el ion K+
do una proteína quimérica que exhibe selectividad norma deshidratado,
l por el K+ •
no pue d en mterac , d
preferencialmente frente a otros iones. Así, se considera .
tuar adecuadamente con los atomos e OJU'geno ..en el
que todos los fil tro selectiv . d
o. Además puesto que el ion Ca 2+ tiene os cargas pos1nvas
canales de K+ emplean el mismo mecanismo para disting ,
uir K+ con y une oxígenos del agua más estrechamente que un . N + o K+con
respecto a otros iones . ion ª d
una sola carga positiva, se requiere más energía para separar
Los iones Na+ son más pequeños que los iones K+. ¿Cómo las aguas t'
, entonces, hidratación del Ca 2+ que para hacerlo del K+ o del Na+.
puede un canal proteico excluir iones Na+ más pequeños b. ·r-
y permitir, no . 1
obstan te, el paso de iones K+ de mayor tamaño? La capaci
Estudios cristalográficos de rayos X reoent es reve an qu e tanto. a .ic.
dad del filtro e 10nes K dentro deI filt ro select1vo, sin
to como cerrado, el canal contien . . +

498 CAPÍTULO 11 • Transporte de iones y moléculas pequeñ

as a través de la membrana
 . ) te en los cana-
a) Los iones K+ Y N a + en el poro d e un cana l d e K+
(vist a superior Figura 11-21 Mecanis mo de selectivi dad iónica Y transpor
( hidratados en
les K+ en reposo. (a) Dia g ramas esquemá ticos de iones K+ Y Na+
K+ en el agua Na + en el agua un canal K+. A medida q ue los iones K+ pasan a través 1 1
solución y en el poro de
-=- - - H del filtro de selectivid ad pierden sus molécu las de agua u nidas
Y se unen a los 1

cua les (según se

oxígenos de un esqueleto de ocho ca rboni lo s, cuatro de los
H ucle del filtro de
muestran) son parte de los aminoáci dos conserva d os en el b
que tapiza el canal de cada seg m ento P. Los iones Na+ más peque-
selectividad
pueden coordina r
ños con su cubierta más estrecha de moléculas de agua no
ta nto, pasan a
perfectam ente con los átomos de oxígeno del canal y, por lo
electrónic a de alta
través de éste solo en raras ocas iones. (b) Mapa de den sidad
m uestra los iones K+
resolución obtenido a partir de cristalog ra fía de rayos X, que

a 0'0
K+ en el poro de K Na+ en el poro de K (esferas púrpuras) que atraviesan el filtro de selectivid ad. Solo se observan dos d e
filtro se lectivo, cada
las subunida des del canal opuesta s en d ia gona l. Dentro del
carbonilo (pali llos
ion K+ no hidratado interactú a con ocho átomos de oxígeno
nida d es, com o
+ rojos) que recubren el canal, dos de cada una de las cuatro subu
ción del mapa d e

c?r para m imetizar las ocho aguas de hidratac ión. (c) Interpreta
es p o r los cuales los
o densidad electrónica, que muestra los dos estados alternant
os desde arriba
iones K+ se mueven a través del canal. En el estado 1, numerad
puede observar -
hacia abajo, desde el lado exoplás mico del canal hacia adentro,
su s ocho molécula s de ag ua unidas, los iones K+ en la s
se el ion K+ hidratado con
mente hidratad o
posiciones 1 y 3, dentro d el filtro selectivo, y un ion K+ completa
lateral) en el estado 1 se
(b ) Los io nes K+ en e l poro de un cana l de K+ (vista dentro del vestíbulo. Durante el movimie nto de K+, cada ion

•• • desplaza hacia adentro y forma el estado 2. Así, en el estado

2, el ion K+ q ue se
de sus ocho
encuentr a en el lado exoplasm ático del cana l ha perd ido cuatro
hacia la posición 2, y
Cara aguas, el ion en la posición 1 -en el estado 1- se ha movido

exoplasrnát~ ~ el ion de la posición 3 -en el estado 1- se ha movido hacia la

posición 4. Al pasar
el vestíbulo y
del estado 2 al estado 1, el K+ en la posición 4 se desplaza hacia
molécula s de agua, mientras que otro ion K+ hidratado se desplaza
recoge ocho
hacia abajo. Nótese
~ hacia el canal y lo abre; los otros iones K+ se mueven un paso
lado exo p lasmático
que los iones K+ que se muestran aquí, se movilizan desde el
de movimie nto
del canal hacia el lado citosó lico porque es la direcc ió n normal
O xígenos ~ .., la dirección t ípica d el m ovimien to de K+

~
de las bacteria s. En las cél ulas animales,
de c. Armstrong . 1998.
~ -; \ es la inversa - desde el interior hacia el exte rior. (La parte [al. adaptada
del cacbo:U o

,'""" b ~ ,)
[bl y le], adaptadas de Y Zhou y cols.. Norure 414:43).
Soence 280:56. Las partes

s
e-- Agua éstos, probablemente colapsaría. Se cree que los iones K+ están presente
Vestíbu lo - - - - ¡ - - . rodeado por ocho átomos
en las posiciones 1 y 3 o en las 2 y 4, cada uno
de oxígeno de carbonilo (Fig. 11 -216 y c). Varios iones K+ se mueven

• •
- - K+
en
simultáneamente a través del canal, de modo tal que, cuando el ion
de
la cara exoplasmática -que ha sido parcialmente separado de su agua
a la
hidratación- se mueve a la posición 1, el ion de la posición 2 salta
(e} Movi m ien t o de iones a través del filtro selectiv
o
posición 3 y el de la posición 4 sale del canal ( Fig. 11 -2 lc).
Aunque las secuencias de aminoácidos de los segmen tos p en los
O 00 O canales de Na+ y K+ difieren en cierta medida, son lo suficien temente
o O 00 O
similares como para sugerir que la estructu ra general de los filtros
de
o o• o selectividad iónica son comparables en ambos tipos de canales . Pre-
-
suntamente, el diámetr o del filtro en los canales de Na+ es lo suficien

:fo~
temente pequeño como para permiti r que los iones Na+ deshidr atados
se unan a los oxígenos del esqueleto carboni lo, pero impida el ingreso
de los iones K+ de mayor tamaño , aunque la primera estructu ra tridi-
mensional de un canal de sodio fue determi nada a finales de 20 l l
mecanismo de selectiv idad iónica está en estudio en estos momen
y el
tos.

la técnica de fijación de memb rana permi te

la medición de los movim ientos iónicos a través
de canales individuales
Estado 2 un
Estado 1 En cierta ocasión, se notó que en la mayoría de las células hay so lo
canal o unos pocos canales iónicos por micróm etro cuadrad o de mem-
brana plasmática, por lo que resulta posible regist ra r los movimi entos
des
iónicos a través de canales iónicos ind ividuales y medir las velocida

11 .4 Canales iónicos sin compue rta y potencia l de membra

n a en reposo 499
 FIGURA EXPERIME NTAL 11 -22 El flujo de corrient
. ..
e a través de los e
ana.
.. . . . .d se mide mediante la fiJacion de membrana
(a)
Dispositivo para ~antene~ les 1omcos md1v1 ua I es . . , d fl · d . · 1aJ
. .. . . I
constante el voltaJe a tra~es de D1 spos1c1on experimen tal básica para la med,oon e UJO..e comente a trave1 .
la membrana y pa ra medir el ., .
de los canal es 1onIcos . d' iduales en la membra na P1asmat1ca de una Célul
in iv . a
.
flujo de corriente a través de la viva El electrodo 11eno con una solución salina conductora , • sde la corriente se
· .
mem b rana en el extremo de un aplica con una ligera suco•ón a la membrana plasmat,ca. u. , extremo .
de O5
, µrn
electrodo de fijación en un
de diámetro cubre una reg i•ón que contiene solo un cana b
1 IonIco o unos Po
.
parche de la membrana
Un segundo electro do se in • serta a t ravés de la mem ra na, en el cItosol. Uncos.
' . .
.. . .d
dispos1t1vo de reg istro mi e el fl uJO de comente solamente a traves de los ca-
, . (b) F · ,
Electrodo de fijación a un nales en ese sector d e Ia membrana plasmatica. d otom1crogra f1a del cuerp
. . o
parche de la membrana lleno celular de una neurona en cultivo y de la punta. e una pi peta que está tocanct
d fi• ., d 0
con solución salina conductor a ·ferentes configuraci ones e Jac1on e la membran
Electrodo la membrana cel u1ar. (c) DI fi . a
. .
intracelul ar
/ / Canales iónicos Regiones aisladas d espren didas son las mejores .. .
con gurac1ones para el estudio
b 1
.
de los efectos de diversas co ncentraciones IonIcas so re os cana . es.y de dist,n-
1
MMMM~~MM~~~MMMHHMM~M
tos solutos como hormonas extracelulares y segundos . men saieros intracelula-
Célula intacta . ' P) U
res (p. eJ., •o· n de membrana invertida, en la que una zona de una
cAM . na reg1 . . .
, · vierte con el interior enfrentado al exterior,
celula se fo rma y 1uego se in se utiliz·
o
. d I F'gu
en el experimento e a 1 ra 11 -23. (La pane [b],tomada. [Link], .
1992,Neuron a,6¡,
,
(b ) . bl d
[Nobel lectura]; tambien pu ,ca O en · E Neher y B. Sakmann, 1992, So. Am. 266[3] .44. La parte le]. adapia
da de B. Hille, 1992, Ion Chan neis of excirobie Membranes, 2d ed., Sinauer Associates, p.89.)

en pequeños estallidos cuando el canal se abre. El dispositivo eléctrico

"pinza" 0 fija el potencial eléctrico a través de la membrana, a un valor
predeterm inado (de allí el término fijación de membranas) .
El movimiento de los iones hacia el interior y el exterior, a través de
una zona de la membrana , se cuantifica a partir de la cantidad de co-
rriente eléctrica necesaria para mantener el potencial de membrana en
un valor "fijo" particular (Fig. l l -22a y b). Para preservar la electroneu-
(c) Extrem o de una m icrop ipet a
tralidad y mantener el potencial de membran a constante aun aunque

(.,..-...¡~ ----- Caaa l ló oloo

los iones se muevan a través de los canales en esa zona de la membrana,
el ingreso de cada ion positivo (p. ej. , unión Na+) a la célula, a través

~~
de un canal en esa zona de la membrana , se equilibra con la adición
de un electrón al citosol, por medio de un microelectrodo insertado
en éste; un dispositivo electrónico mide el número de electrones (co-
La fijación en una zona (región) de un a célula m id e el efecto
in d irect o de los solutos extracelul ares en los canales dentro de rriente) necesario para contraequilibrar el influjo de iones a través de
un área de la membrana en la célula intacta los canales de la membrana . Por el contrario, la salida de cada ion po-
sitivo desde la célula (p. ej., unión K+) se equilibra al quitar un electrón
Cara .~ Cara ica ~ desde el citosoL La técnica de fijación de zonas de la membrana puede
citos~ ( h _ exopla s~lti emplearse en las células completas o en zonas de la membrana aisladas
para medir los efectos de diferentes sustancias y concentraciones ióni-

~
Zona (región) desprendida,
~
Región desprendida, invertida,
cas sobre el flujo de iones (Fig. l l -22c).
Los trazos resultantes de la fijación de membrana que se muestran
en la Figura 11-23 ilustran el uso de esta técnica para estudiar las pro·
i nvertida , que mide los efectos en el que se m id en los efectos piedades de canales de sodio dependientes de voltaje, con compuerta
de los solutos intr acelu lares en de los solutos extracelul ares
los cana les en un parche o zona sobre los canales dentro de
en la membrana plasmática de las células musculare s. Como analiza-
aislada de la membrana una zona aislada remos en el Capítulo 22, estos canales normalmente están cerrados en
las células musculare s en reposo y se abren después de la estimulación
nerviosa. Las zonas de la membran a muscular, cada una con un pro-
medio de un canal de Na+, se fijaron a un voltaje predeterm inado que,
en este estudio, era ligeramente inferior al potencial de la membrana en
a las cuales éstos se abren, se cierran y conducen iones específicos, me-
reposo. En estas circunstancias, pulsos tran sitorios de cargas positivas
diante el empleo de una técnica conocida como fijación de membrana . .
(iones Na+) atraviesan la membrana desde la cara exop lasma' t'ca 1 hacia
(patch clamping) o fijación de voltaje. Como se ilustra en la Figura
la cara citosólica, a medida que los canales in . d'1v1'd ua les de Na' se. abren
11-22, una pipeta diminuta se aplica firmemente sobre la superficie de
y luego se cierran . Cada canal se encuentra comp1etamen te abierto 0
una célula; el segmento de membrana plasmática comprendida dentro
cerrado. A partir de estos trazos, es posible • .
determmar e1 tiemp . o que
de su extremo contendrá solo uno o pocos canales iónicos. Un dispo- .
un canal permanece abierto . . é
y el fl u¡o de iones a trav s e s e.d é t Para tos
sitivo de registro eléctrico detecta el flujo iónico, medido en forma de
.
canales medidos en la Figura • d
11 -23, el flu¡o es e aproXJ ma ª1 · d nen te IO
co rriente eléctrica, a través de los canales; habitualm ente, esto ocurre
millones de iones Na+ por ca nal y por segu ndo, un va 1or t1p1co , · )ara lo~
1

500 CAPITULO 11 • Transporte de io nes y molécu las pequeñas a través de ta membrana

 Abierto Cerrado 10 ms
/4~ír"'~...,,,.....,---------'----v-..,. ,.,A. ~1~ mRNA mic roinyectado
D que cod ifica para la
proteína canal de interés
Mem brana
plasmática
FIGURA EXPERIMENTAL 11 -23 El flujo iónico a través de lo scanaIes de
. .
Na+ ind1v1duales pued_e calcularse mediante los registros de fijación
de membrana. Dos regiones con inversión de la membrana d
..
plasmat1cas
.
.
. de musculo fue
el potencial de reposo
.
Los pulsos trans1tor1os de
•
comente
.

, · .
electrica en picoa
b

11
mpere
e mem ranas
ron fiJados a potenciales ligeram ente menores que
de la membrana El electrodo de c.J 1· n contenia. NaCI.
·ac·o
•
s (PA) , registrados
Incubado 24-48 h para la
síntesis y movim iento de
to~ ·
l
~)/
Proteína
c~nal _rec ié n
sintet izada

",_/
. .
como grandes +desv1ac1ones . .
hacia abajo (flechas azules) ,
i
· nd·ica1
n a apertura de
· adentro a
B una proteína canal a la
membrana plasmática
, de Na y el mov1m1ento de cargas positivas (iones Na+) hacia
un canal
rraves
. de la membrana. . Las pequeñas desviaciones de corr·ient e representan e1

ruido de ~~ndo. La comente promedio a través de un ca nal abierto es l ,6 pA0

1,6 x 10~ amperes. Como un ampere= 1 coulomb (C) de carga por segundo,
esta comente equivale al mov1m1ento de aproximadamente 9 900 iones Na+
por canal por mil isegundo: (1,6 x 10- 12 C/s) (1o-3 s/ms) (6 x 1Q23 moléculas/mol)
!~
.;- 96 500 C/mol. (Véase F J Sigwonh y E. Neher, 1980, Na1ure 287:447)

El
Medición de la actividad
de la proteína cana l por
la técnica de fijación de
/
l
:-\. '--
ro Electrodo de fijación
de la membrana

memb rana (patch-clamping) " " '

canales iónicos. El reemplazo del NaCl dentro de la pipeta en esa zona
(correspondiente al exterior de la célula) con KCl o cloru ro de colina
FIGURA EXPERIMENTAL 11 -24 El ensayo de expresión de los ovocitos es
inhibe la corriente a través de los canales, lo que confirma que pueden
útil para comparar la función de las fo rmas normales y mutantes de un
conducir solo iones Na+, no K+ ni otros iones.
canal proteico. Un ovocito folicu lar de rana fue tratado, en primer luga r, con
colagenasa para remover las célula s folicu lares que lo rodeaban, deja ndo el ovo-
Los canales iónicos nuevos pueden caracterizarse cito desnudo; luego, se le microinyectó mRNA que codificaba para la proteína
por una combinación de expresión de ovocitos canal en estudio (Adaptado de T. P. Smith, 1988, Trendi Neuroic,. 11 :250.)
y fijación de la membrana
La clonación de los genes que provocan enfermedades humanas y la ATP, que establece gradientes de concentración Na+ y K+ a través de la
secuenciación del genoma humano han permitido identificar muchos membrana, y los canales de K+ en reposo que permiten el movimiento
genes que codifican proteínas que actúan como canales putativos, in- selectivo solo de iones K+ en contra de su gradiente de concentración a
cluso 67 proteínas que son canales putativos de K+. Una manera de través del medio externo {véase la Fig. 11 -3).
caracterizar la función de estas proteínas consiste en transcribir un
• A diferencia de los canales iónicos de compuerta más comunes, que
cDNA clonado en un sistema libre de células, para producir el mRNA
se abren solo en respuesta a varias señales, estos canales de K+ sin com-
correspondiente. La inyección de este mRNA en ovocitos de rana y las puerta habitualmente están abiertos.
mediciones de patch clamp de las proteínas de canal recién sintetizadas,
con frecuencia, revelan la función (Fig. 11-24). Este enfoq ue experi- • El potencial eléctrico generado por el flujo selectivo de iones a través
mental resulta de especial utilidad, ya que los ovocitos de ra na, por lo de una membrana puede calcularse mediante la ecuación de Nernst
general, no expresan ninguna proteína de canal sobre su membrana (véase la Ecuación 11 -2).
de superficie, de modo que solo el canal en estudio est_á presente en la • En los vegetales y en los hongos, el potencial de membrana se mantie-
membrana. Además, dado el gran tamaño de los ovoc1tos de rana, los ne por el bombeo impulsado por ATP de los protones, desde el citosol
. d e pa teh elamp,·ng son técnicamente más sencillos de llevar a
estu d 10s hacia el exterior de la célula.
cabo en éstos que en células más pequeñas.
• Los canales de K+ se ensamblan a partir de cuatro subunidades idén -
ticas, cada una de las cuales tiene, al menos, dos hélices a que se expan-
den en la membrana y un segmento P no helicoidal que tapiza el poro
iónico y forma el filtro de selectividad (véase la Fig. 11 -20).
CONCEPTOS CLAVE DE LA SECCIÓN 11 ·4
• La especificidad iónica de las proteínas del canal de K+ se debe, pri n-
. , ·,cos 51·n compuerta y el potencial de
Los cana 1es 10n cipalmente, a la coordinación del ion seleccionado con ocho átomos de
rep oso de la membrana oxígeno de los carbonilos de aminoácidos específicos, en los segmentos
. . , trico (voltaje) con interior negativo de aproxi- P, que bajan la energía de activación para el paso de los K' selecciona -
• Existe un poteno a1e1ec , .
és de la membrana plasmatica de todas 1as dos, comparados con Na+ u otros iones (véase la Fig. 11 -2 1).
madamente -70 m V a t ra V
células. • Las técnicas de fijación de la membrana que permiten la medición
. d b ana en reposo de las células animales es el re- de los movimientos iónicos a través de canales únicos se utilizan para
• El potencial e mem r .
- mbinada de la bomba de Na+JK+ impulsada por determinar la conductividad ión ica de un canal y el efecto de varias
sultado de 1a acc16 n co
señales sobre su actividad (véase la Fig. 11 -22).

11.4 Canales iónicos sin compuerta y potencial de membrana en reposo 501

 terio1·n1 ente , dos fuerzas gob ie rn an el mov imiento de los
. iones a tr ave,.
· Las técn icas de DNA recombinan te y fijaci ón de la membrana permi - d e Ias mem b ra nas selectivamente ,
permeables: el voltaJe y el grad 1·ente·
ten la expresió n y caracterización funcional de las proteínas del ca nal de concentración ió nica a traves de la membrana. La suma de est·
, · p as
en los ovocitos de rana (véase la Fi g. 11 - 24). fuerza s constituye el gradiente electroqu1m1co. ara ca Icular el carnb· ·
10
d e energia , l'bI re, u
AG correspond iente al transporte de cualquier .
, . . ion a
traves, d e una rn ernbrana ' necesitamos considerar las contribuc·iones
• d d " t de cada una de las fuerzas al gradiente electroqui'rn
111 epen 1en es . •
1c 0 _

Por eJem. p 1o, c uando el Na+ se mueve desde el , extenor

. hacia el.inte_
11.S Cotransporte por simportadores
no· r d e 1a ce' lul a, eI cambio generado en la energia libre por el grad'1ente
y antiportadores
de Na+ está dado por
En secciones anteriores, hemos visto de qué manera las bombas impul-
sadas por ATP generan gradientes de concentración iónica a través de RT ln INa;ml
~ Ge = INa,..J ( 11-5)
las membranas celulares y de qué modo las proteínas que son canales
de K+ emplean el gradiente de concentración de K+ para establecer un
potencial eléctrico a través de la m embrana plasmática. En esta sección , A las concentraciones de N3m, Y Na,x1que se mueS t ran en la Figura l l-25,
veremos cómo los cotransportadores utilizan la energía almacenada en que son típicas para muchas células de m amíf~~o, ~G,, el cambio en la
el potencial eléctrico y los gradientes de concentración de los iones energía libre debido al gradiente de concentra~10n, e~ - 1,~5 kcal para el
Na+ o H+, para impulsar el movimiento cuesta arriba de otra sustan- transporte de ¡ mol de iones Na+ desde el [Link] hacia el mterior de una
cia, que puede ser una molécula orgánica pequeña como la glucosa, un célula, si se supone que no hay potencial eléctrico de membrana. Nótese
aminoácido o un ion diferente. Una característica importante de este que la energía libre es negativa, lo que indica el movimiento espontáneo de
cotransporte es que ninguna sustancia puede moverse sola; el movi- Na+ hacia el interior de la célula a favor de su gradiente de concentración.
miento de ambas sustancias en conjunto es obligatorio o acoplado. El cambio en la energía libre generado a partir del potencial eléctri-
Los cotransportadores comparten rasgos comunes con los unipor- co de la membrana está dado por
tado res, como las proteínas GLUT. Los dos tipos de transportadores
exhiben ciertas similitudes estructurales, oreran a velocidades equi -
(1 1-6)
valentes y experimentan cambios de conformación cíclicos durante
el transporte de sus sustratos. Difieren en que los uniportadores solo
pueden acelerar el transporte termodinámicamente favorable a favor donde Fes la constante de Faraday [= 23 ,062 cal/(mol · V) ]; y E es
de un gradiente de concentración, mientras que los cotransportadores el potencial eléctrico de la membrana. Si E = -70 m V, entonces t. Gm,
pueden emplear la energía liberada cuando una sustancia se mueve a el cambio de energía libre debido al potencial de la membrana es
favor de su gradiente de concentración para impulsar el movimiento de - 1,61 kcal para el transporte de un mol de iones Na+ desde el exterior
otra sustan cia en contra de su gradiente de concentración. hacia el interior de la célula, si se supone que no hay gradiente de con-
Cuando la molécula transportada y el ion cotransportado se mue- centración de Na+. Puesto que ambas fuerzas, de hecho, actúan sobre
ven en la m isma dirección, el proceso se denomina sirnporte; cuando los iones Na+ el ~G total es la suma de los dos valores parciales:
se mueven en direcciones opuestas, se llama antiporte ( véase la Fig. 11-
2). Algunos cotranspo rtadores transportan solamente iones positivos
(cation es), m ientras que otros transportan solo iones negativos (anio-
~G = ~Ge + ~Gm = (-1,45 ) + (- 1,61 ) = - 3,06 kcal/mol
nes). Otro tipo de cotransportadores median el movimiento tanto de
cationes como de anio nes en conjunto. Los co transpo rtadores están En este ejemplo, el gradiente de concentración de Na+ y el potencial
presentes en todos los organismos, incluso bacterias, vegetales y anima- eléctrico de la membrana contribuyen, casi en igual medida, a la t.G to-
les. En esta sección, describimos la intervención y el funcion amiento de tal para el transporte de iones Na+. Como flG es < O, el movimiento ha -
varios simp ortadores y antiportadores fi siológicam ente impo rtantes. cia el interio r de los io nes Na+ se ve termodinámicamente favorecido.
Como se analizará en la sección siguiente, el desplazamiento hacia el
interior de Na+ se emplea para impulsar el movimiento cuesta arriba de
El ingreso de Na+ en las células de mamífero está otros iones y varios tipos d e moléculas pequeñas hacia el interior o el
termodinámicamente favorecido exter ior de las células animales. El movimiento rápido, energéticamen -
te favorable, de iones Na+ a través de canales de sodio con compuerta,
Las células de mamífero expresan muchos tipos de simportadores también es crítico p ara generar potenciales de acción en las células ner-
acoplados a Na+ . El genoma humano codifica, literalmente, cientos de viosas y musculares, como analizaremos en el Capítulo 22 .
diferentes tipos de proteínas de tran sporte que emplean la energía al-
macenada a través de la membrana plasmática en el gradiente de con-
centración de Na+ y en el potencial eléct rico con interio r n egativo, a Los simportadores ligados a Na+ perm iten a las
través de la membran a, para transportar una amplia variedad de mo-
células animales importar glucosa y aminoácidos
léculas hacia el interior de las células en contra de sus gradientes de
en contra de gradientes de concentración elevados
concentración. Para ver por qué estos transp o rtado res perm iten que las
re a fa vor
células acumulen sustratos contra un considerable gradiente de co n - La mayoría de las células animales importan glucosa des de Ia sang · ,
centración, necesitamos calcular, primero, el cambio de la energía libre . 1 de las prote1-
de un gradiente de concentración de glucosa me d 1ante e uso '
(~G) que se prod uce durante el ingreso de Na+. Como se mencionó an - . .
nas GLUT, para facilitar este transporte. Sm embargo, oertas c élulas · ' coJ11º

502 CAPITULO 11 • Transporte de ione s y molécul as pequeña s a t ravés de la memb rana

 (i) ANIMAC IÓN GENERAL: lntercon v .
- ers iones de energía bio lógica
Figura 11-25 Fuerzas transmem brana que t,
corno ocurre con todos los iones el movim·ientacduan .
sobre los ¡
.. ·
membrana plasmat1ca está gobernado por la sumad o e iones Na+ a t ones é
Na+. Gradiente Pote ncial el éctrico
d f rav s de la de concent ración iónica de la membran a
. . e os uerzas sep d
gradiente de concentración 1ónica y el potencial ele· . d ara as -el
.
las concentraciones de Na + internas y externas tf . ctr1co d
e la memb
rana- a
picas e Ias célu\ d . Interior Exterior Interio r Exterior
fe ro; estas fuerza s, por lo gene ral, actúan en la mis d. . as e mam1-
. , . ma 1recc1 ón para per . . +
movimiento energet1camente favorable hacia ad d . 12 mM Na+ 145 mM Na•
entro, e los iones Na+m t1r e
1 1
, +

<-8 .,.,- -:.70 mV

las que tapizan el intestino delgado y los túbul al

t:,,. Gc -1,45 kca\/mol t:,,.Gm = -1,61 kcal/ mol
, . . .
os ren es, necesitan unpor-
tar g1ucosa d es d e 1os hqwdos extracelulares ( d . .
. pro
orina) en contra de un gradiente de concentra '6 uctos de la digestión u El cambio de energía libre durante
· d gl ci n muy 1 el transporte de Na+ desde el exterior hacia el interior
tración e ucosa más alta en el interior de la célul ) E e evado (concen- ..
. a . ~ c1t ~ ~ ~
un s1mportador dos Na+/ una glucosa, una prote' •
., maque acop1a 1a 1mporta-
c10n de una molécula de glucosa a la importació n de dos iones Na+: Interior Exterior

2 Na \n + glucosa
CXl
~ 2 Na+.mt + glucosa
in!

Cuantitativa mente, el cambio de energía libre para el simporte de dos

iones Na+ y una molécula de glucosa puede escribirse como
t:,,.G = t:,,.Gc + t:,,.Gm = -3,06 kca\/mol

6G = RTln [glucosa;"'] + 2RTln [Na+;) + 2FE

( 11 -7)
[glucosaex, ] [Na\x, ]

el simportad or dos Na+/una glucosa permite a las células acumular una

Así, la 6G para la reacción global es la suma de los cambios de energía concentración muy elevada de glucosa con relación a la concentrac ión
libre, generados por el gradiente de concentra ción de glucosa ( 1 molé- externa. Esto significa que la glucosa presente, aun a concentrac iones muy
cula transporta da), el gradiente de concentra ción de Na+ (2 iones Na+ bajas en la luz del intestino o en los túbulos renales, puede transporta rse
trans portados) y el potencial de membran a (2 iones Na+ transporta - eficientemente hacia las células del tapiz y no perderse del organismo .
dos). Como se ilustra en la Figura 11 -25 , la energía libre liberada por el Se cree que el simportad or dos Na+/ una glucosa contiene 14 héli-
movimien to de 1 mol de iones Na+ hacia la célula de mamífero a favor ces a transmem brana con su extremo N-termina l y e-termina l que se
de su gradiente electroqu ímico tiene un cambio de energía libre 6G de extienden hacia el citosol. Una proteína recombina nte truncada que
aproxima damente -3 kcal por mol de Na+ transporta do. Así, la 6G para consista solo en cinco hélices a transmem brana e-termina les puede
el transporte de dos moles de Na+ hacia el interior será el doble de esta transporta r glucosa, independi entemente del Na+, a través de la mem-
cantidad O aproxima damente -6 kcal. Este cambio negativo de energía brana plasmática a favor de su gradiente de concentra ción. Esta por-
libre en la importac ión de sodio está acoplado con el transporte cuesta ción de la molécula funciona, de este modo, como un uniportad or de
arriba de la glucosa, un proceso con !lG positiva. Podemos calcula~ el glucosa. La porción N-termina l de la proteína que incluye las hélices
gradiente de concentra ción de glucosa, el interio_r mayor que_el extenor 1-9 se requiere para acoplar la unión de Na+ y el influjo al transporte
que pue d e ser es t a blec ido por la acción de este s1mportad or .
impulsado
.,
de glucosa en contra de un gradiente de concentra ción.
por N a +, a1 d arnos cu e n ta de que en el equilibrio para la 1mportac1on La Figura 11 -26 muestra el modelo actual de transporte por los
d e g1ucosa acop 1a d a a I so d 10 , la t:,,G =[Link] sustituir los valores para la
· simportad ores Na+/glucosa. Este modelo comprend e cambios de con-
importaci ón d e sod10 . E '6 11-7 y fijar t:,,G = O, vemos que formación en la proteína, análogos a los que se producen en los trans-
en 1a cuaci n
portadores uniportado res, como la GLUTl, que no requieren un ion
[glucosa;) _ kcal cotranspo rtado (compáres e con la Fig. 11 -5 ). La unión de todos los
o= RTln 6
[glucosaw l sustratos con sus sitios en el dominio extracelul ar es necesaria antes
de que la proteína sufra el cambio de conformac ión que convierte los
iJ'brio el cociente de glucosa;"'/glucosam sitios de unión al sustrato desde el exterior hacia la zona que enfrenta el
y podemos calcular que en equ 1 +
. hacia adentro de dos moles de Na pue d e
'
interior; esto asegura que, en el transporte hacia el interior, la glucosa y
== 30 000. De este mo d o, e1 fl u¡o
. , d glucosa intracelula r que es -30 000 veces los iones Na+ se encuentra n acoplados .
generar una concentraoon e . . · Na+ se portara
., xt nor 51 so1o un 10n i
· m
Nótese que las células utilizan simportad ores impulsado s por Na+
mayor que la concentra oon e e · ,
. k al/mol) por molecula de glucosa, enton- comparab les para transporta r sustancias distintas de la glucosa hacia el
(t:,,G de aproximad amente - 3 c . •
. d , generar un gradiente de concentrac ión interior de la célula en contra de gradientes elevados de concentrac ión.
ces la energía dispo nible po na
. ) de solo ap roximadam ente 170 veces. As1,• Por ejemplo, varios tipos de simportad ores Na+/amino ácidos perm iten
d gI (' terior/ext enor
e ucosa m d dos iones Na+ al transporte de una glucosa, que las células importen numeroso s aminoácid os a su interior.
al acoplar el transporte e

11 .5 Cotranspor te por simportado res y antiportadores 503

(i> ANIMAC IÓN GENERAL: lnterconversiones de energía bio lógica

2 Na+ • • Glucosa
•

\~ H_. N _.. " _. " _. u• -&+ "

Exterior

Glucosa Conformación Conformación

ocluida
Conformación
que mira al interior
• Confo rmación
qu e mira al exterior
Citosol que mira al exterior

Figura 11 -26 Modelo operativo para el simportador dos Na+/ una glu- de Na+ unido y la glucosa en el citosol (paso D) permite que la proteína reviErt,
cosa. La unión simulta nea de Na+ y glucosa a la conformación con los sitios de a su conformación original, enfrentada al exterior (paso DJ, lista para transpor-
unión que enfrentan el exterior (paso 11) provoca un cambio de conformac ión tar sustrato adiciona l. (Véase H. Krishnamurthy ycols. 2009, Noture 459:347-355 para ob,erva,
en la proteína, de modo ta l que los sustratos unidos queda n ocluidos transitoria- detallesde la estruc tura yel funcionamiento de este transportador que une Na+ yotros transportad,?re:
mente, incapaces de disociarse al medio (paso El). En el paso, la proteina asume relacionados.)
una tercera conformación, con los sitios que enfrentan el interior. La disociación

Un simportad or bacteriano Na+/amino ácido revela o citoplasmático que la rodea. Esta estructura representa un interme-
diario en el proceso de transporte (véase la Fig. 11 -26 ) en el cual la
la forma en que opera el simportad or
proteína parece estar cambiando de una conformación con un sitio de
No hay una estructura tridimensiona l determinada para ningún sim- unión exoplasmático a uno con un sitio que enfrenta el citosol.
portador de sodio de los mamíferos, aunque la estructura de varios
simportadores homólogos de sodio/sustrato en las bacterias haya pro-
porcionado información considerable acerca de la función de los sim - El antiportad or Na+ ligado a Ca 2 + regula la fuerza
portadores. El simportador bacteriano dos Na+/ una leucina, que se de la contracción del músculo cardíaco
muestra en la Figura l l -27a, consiste en 12 hélices a que se extienden
en la membrana. Dos de las hélices (números 1 y 6) tienen segmentos En todas las células m usculares, un incremento en la concentración de
no helicoidales en el medio de la membrana, que forman parte del sitio Ca 2+ citosólico desencadena la contracción. En las células del músculo
2 2
de unión a la leucina. cardíaco, un antiportador tres Na+/ un Ca +, más que la ATPasa de Ca +
Los residuos de aminoacídicos involucrados en la unión de la leu- de la membrana plasmática que analizamos previamente, desempeña
1
cina y los dos iones Na+ están localizados en el medio del segmento el rol principal de mantener una baja concentración de Ca + en el cito-
sol. La reacción de transporte mediada por este antiportador catiónico
que se extiende en la membrana (como se muestra para el simporta-
dor dos Na+/ una glucosa de la Fig. 11 -26) y se encuentran m uy cerca - puede escribirse como
nos en el espacio tridimensional. Esto demuestra que el acoplamiento 3 Na+ext + Ca2+.int 3 Na+.mt + Ca 1+ext
del aminoácido y el transporte iónico en estos transportador es es la
consecuencia de la interacción física directa o casi directa de los sus-
tratos. De hecho, uno de los iones Na+ está unido al grupo carboxilo Nótese que el movimiento hacia adentro de los tres iones de Na+ es
de la leucina transportada (Fig. 11 -276 ). De este modo, ninguna sus- necesario para impulsar la exportación de un ion Ca1+ desde el cito·
tancia puede unirse al transportador sin la otra, lo que indica de qué sol, con una [Ca 2 +] de - 2 x 10-7 M , al medio extracelular, con una
manera están acoplados el transporte de sodio y leucina. Cada uno [Ca 2+] de - 2 x 10-3 M , un gradiente de aproximadam en te 10 000
de los dos iones Na+ está unido a seis átomos de oxígeno. El sodio veces (más elevado en el exterior) . Al disminuir el Ca2+ citosólico, la
1, por ejemplo, está unido a los oxígenos carbonilo de varios ami- operación del antiportador Na+/Ca 1+ reduce la fuerza de la contrac-
noácidos del transportador, así como a los oxígenos carbonilo y el ción del músculo cardíaco.
oxígeno hidroxilo de una treonina. De modo igualmente importante,
no hay moléculas de agua que rodeen ninguno de los átomos Na+ ~ La ATPasa Na+/K+ de la membrana plasm ática de las células
unidos, como en el caso de los iones K+ en los canales de potasio 1111 musculares cardíacas, como las de otras células del organismo,
{véase la Fig. 11 -21 ). Así, a medida que los iones Na+ pierden su agua crea el gradiente de concentración de Na+ necesario para la expor'.a·
2
de hidratación al unirse al transportador , se unen a seis átomos de ción del Ca 2+ por el antiportador Na+ ligado a Ca +. Como se menoo-
oxígeno con un a geometría sim ilar. Esto reduce el cambio energético nó anteriormente, la inh ibición de la ATPasa Na+/K+ por los fármacos
· · ólº d K+ Y' lo
necesario para un ir iones Na+ y evita que otros iones, como el K+, se ouabaína y por la digoxina baja la concen traoó n CJtos ICa e
, , . , 1 l Na+ en el
unan en lugar del Na+. que resulta mas relevan te aq u1, s1multan eame n te e eva e
Una característica sorprendente de la estructura, que se muestra en citosol. El gradie nte electroq uímico reducido de Na+ res ultante,ª tr~:
la Figura 11-27, es que los iones Na+ unidos y la leucina están ocluidos vés de la m em bra na , hace que el antipo rtador de Na+ ligado a Ca
t n me·
- es decir, no p ueden difundi r fu era de la proteína al medio extracelular opere con meno r efi cienci a. Como res ul tado de ell o, se expor a

504 CAPÍTULO 11 • Tran sporte de ion es y moléculas peq ueñas a través de la membrana
 (i) ARCHIVOS DE AUDIO (INGLÉS): Sirnpo t d .
r ª or dos Na + / una leuona

(a)
Hélice 6 Leucina

Cara
exoplasmática

Membrana

Cara
citosólica

Helice 8

Figura 11-27 Estructura tridimensional del simportador dos Na+/ una laterales de carboxilo (rojo), que son pa rte de las hélices 1 (pa rd o), 6 (azu l) u 8
leucina de la bacteria Aquifex aeolicus. (a) La L-leucina unida, dos iones Na+ (anaranjado). Es im portante que uno de los iones sodio tam bién esté unido al
y el ion CI- se mu estran en amarillo, purpura y verde, respectivamente. Las tres grupo carboxi lo de la leucina transportada (parte b). (Tomado de A. Yamashi ta y cols.,
hélices a que se expanden en la membrana y unen el Na+ o la leucina está n 2005 Nawre 437:215; véase también H. Krishnamurthy y cols., 2009, NoMe 459:347-355 para observar
detallesde la estructura y el funcionamienro de este transportador que une Na+ y otros tra nsponadores
coloreados en pardo, azul y ana ranjado. (b, c) La unión de los dos iones Na+ a
relacionados.)
los átom os de oxigeno de la cadena principal de carbonilo o de las ca denas

2
nos iones ca2+ y la concentración citosólica de Ca + aumenta, lo que enzim a citosólica anhidrasa carbónica cataliza la disociación de los
iones HC0 3 importados para formar C0 2 y un ion OH- (hidroxilo) :
hace que el músculo se contraiga con mayor intensidad . Dada su ca -
·
.d d d e mcreme ntar la fuerza de las contracciones citosólicas del
pac1 a . .
, ¡ d ' los ra ' rmacos como la ouabaína y la d1goxma que AnhidrasJ
muscu o car 1aco, 1: .

inhiben la ATPasa Na+/K+ se usan ampliamente en el tratamiento de Hco-3 == co + oH-

carbónic.1

la insuficiencia cardíaca congestiva. ■

Los iones OH- se combinan con los protones intracelulares y forman
agua, y el C0 2 difunde hacia el exterior de la célula. Así, la acció n ge-
. co t ransp ortadores regulan el pH citosólico
Varios neral de este transportador es consumir iones H + citosólicos y elevar,
. b . d la glucosa produce ácido láctico, y el por lo tanto, el pH del citosol. Igualmente importante para elevar
El metabolismo anaero 10 e . el pH citosólico es el antiportador Na+IH+, que acopla la entrada de
. d CO que se combina con el agua para
metabolismo aerobio pro uce z, , . . . un ion Na+ a la célula, a favor de su gradiente de co ncentración, a la
, . , . (H CO ) Estos ácidos debiles se disocian y
formar ac1do carbomco 2 3 · exportación de un ion H+.
. H + ( rotones )· si estos protones -en exceso- no se
pro d ucen 10nes P ' , En ciertas circunstancias, el pH citosólico puede elevarse más allá
. . , pH citosólico descendena abruptamente,
eliminaran de las ce1u 1as, e1 . . de la escala normal de 7,2-7,5. Para manejar el exceso de iones OW
, . las funciones celulares. EX1sten dos tipos
lo que pondna en pe 1igro . , d 1 asociados con el pH elevado, muchas células animales emplean el an-
, t doras que ayudan a eliminar parte e os
de protemas co transpor ª
,,
. -¡ l
dos durante el metabolismo de las ce u as tiportador aniónico, que cataliza el in tercambio uno a uno de HC03- y
protones en "exceso genera c1-, a través de la membrana plasmática. A elevado pH, este antipor-
. tador Na+ HCO 3-/C/-, que importa un ion
animales. Uno es un antipor . . _ tador C/-/HCO3• exporta una molécula de HC0 3- (que puede ser vista
. CO _ lo intercambia al exportar un 10n Cl . La
Na+ Junto con uno H 3 Y

11.5 Cotransporte por simportadores y antiportadores 505

 un polipéptido de globi na una un Pro.
histidina de
1a ca den a 1atera 1d e ando los eri trocitos se encuentran en los capi· Iares
en interca mbio por la importación
. d oH- Y CO) . . tÓn. De este mo d o, Cu hemoglob ina y un
como un comp le;o e 2
inuye el pH del c1toso L La impo rta- é . a se divide en un prot ón que une .
e una mo 1
,ec u1a d e ci-, 1o qu e di·sm . _ s1•st mico s, e1agu para fo rmar un amó n HCO 3-_
d n tra ción (c1-111cdio > Cl citosol ; - · con el CO 2 .
ción de c 1- a favo r de su gra dien te de conce OH que reacciona por el ant1p ortad o r AEl de los glóbuJ os
ón de HC0 3- - 'ón catalizada .
véase el Cuadro 11 - 2) im pulsa la exportaci En una reacc 1 -
do hacia afuer a .
de los eritro C1-
, ·d d de e~-ras tres prote ínas antip ortadoras está reg ulada . HCO 3_ Cl·tosóli·co es trans porta
La act1v1 a roJOS, e1 'ón c 1- que ingre sa:
- ól" qu" proporciona a las célul as .
un mecanism o de .
por el pH CI 1os ICO, ~ tos y se intercambia con un am
del citosoL Los dos ant1p ortadores que
fi
a;·uste no para , el pH
controlar
se activan cuando el p~ de - ___,.. HCO J - ext + CJ - >nt
operan para incrementar el pH del citos ol HCO [Link] + CJ ext ._--
un incre mento de pH por encim a
éste desciende , De modo semejante,
HCO lo que conduce a una ex-
de 7,2 estimula el antiportador e¡-¡ 3- ,

del pH citosólico. De io aniónico se cornplet a

portación más rápida de HCO 3-y a un desce nso , ¡a p·1g. 11 -28 a ). El proceso de inter camb
(vease
creci miento se mantiene dura nte el cual se exportan 5 x
este modo , el pH citosó lico de las célul as en en el término de 20 milisegundos (ms),
- ion es, desde cada célula,
a fav~ r de_su ~rad ien te de conce n-
muy próximo a 7,4. 109 Hco 3
10 amó mco durante períodos
tración. Si no se produjera el intercamb
cant idad de C~2• el HCO3-,se
como el ejercicio, cuando se genera gran
l hasta alcanzar mveles tóxicos, a
Un anti por tado r aniónico es esencia acumularía en el interior del eritrocito
inter camb io de HCO 3- (igual
para tran spo rtar CO 2 en los erit roci tos medida que el citosol se alcalinizaría. El
citosol permanezca casi neu-
a oH- + co 2) por c1- hace que el pH del
es esencial para una función cient o del CO 2 de la sangre es
El intercambi o aniónico transmembrana tro. Normalmente, alrededor del 80 por
porte de CO 2 de desecho desde el inter ior de los eritrocitos;
important e de los eritrocitos -el trans transportado como HCO 3- generado en
ones , en la exhalación- . Ei CO2 xima dam ente dos tercio s de
los tejidos periféricos hacia los pulm el intercambio anió nico perm ite que apro
as hacia la sangre de los capilares, a sang uíne o externo a las cé-
de desecho, liberado desde las célul este H CO 3- sea trans porta do por el plasm
bran a de los eritrocitos (Fig. l l- que pued e ser transportado
difunde libremente a través de la mem lulas , lo que incrementa la canti dad de CO 2
disue lve escas amente en las solu- éstos , dond e el dióxido de car-
28a ). En su forma gaseosa, el CO 2 se desde los tejidos hasta los pulmones. En
el plasm a sang uíneo , como resulta general de este proceso de
cione s acuosas, como el citosol o bono abandona el organism o, la dirección
abier to una botel la de una bebida
aparente para cualquiera que haya intercambio aniónico se invierte (Fig. l
l-28 b ).
de la poten te enzima an -
carbonatada. Sin embargo, la gran canti dad
La AEl cataliza el inter camb io secu encial preciso, uno a uno, de
o del eritro cito combina el
hidra sa carbónica que se encuentra dentr a, requ erido para preservar
para form ar anion es bicar bonato aniones en lados opue stos de la mem bran
CO2 con los iones hidroxilo (OH-) la electroneutralidad celular; solo una vez
cada 10 000 ciclos de trans-
se lleva a cabo mien tras los eritro-
hidro solubles (HCO 3-). Este proceso porte , aproximadamente, un anió n se mue ve de man era unidireccional
icos (de los tejido s) y liber an
citos se encuentran en los capilares sistém la desde un lado de [Link] mbra na hacia el otro. La AEl está compuesta por
La liber ación de oxíge no desde
oxígeno hacia el plasma sanguíneo. ado en al menos doce hélices
conf orma ción que perm ite que un dominio inserto en la mem brana, pleg
hemoglobina induce un cambio en su

(b) En los capilares pulm onar es

(a) En los capilares sistémicos Baja pres ión de C0 2
Alta presión de C0 2 Alta pres ión de 0 2
Baja presión de 0 2
Re,::oglo~ -t-
; ;:~ m•,
Hemoglobina

~
0
C0 2 Residuo ~~ CO,

- ~ al N /
H20~
H20 - - - -
----. H+ /
--+ N
e
# --.C
1

t ---- W ~(! ---e11

J -- -- +
C0 2 + OH- HC0 3-
\ w-C
\
11
\
C02 + OW +- -- --
Anh idras a
HCo 3 -
\w- C
\
H
Anhidrasa
H
carbónica
~ e•~ •
~/
Membrana plasmática Proteína AE 1
del eritrocito

- ión gene ral hace que el HC03 ·

Figura 11-28 El transporte de dióxi
do de carb
. ono en la sang re requ iere Cl-y HC03- a travé s de la membrana . La reacc
or CJ-/HCO _ ( ) E ial para el transporte máxirno
3 • a n 1os cap1lare · · · sea libera do desde la célula , lo que resulta esenc
un antip ortad
s ~1stem1 cos, el gas dióxido de mantener la neutra lidad de
carbono difunde a través de la membrana de C02 desde los tejidos hacia los pulm ones y para
med· d I plasm at1ca del eritrocito y se con-
vierte en HC03 - soluble por · •
1_ rasa car bon1ca . donde se excre ta el dióxido de
, 10 e a enzima anh·d
h ; al mismo pH en la célula sa ngu ínea (b) En los pulmones,
o, el oxíge no aband ona la célula , el texto para mayor detalle.
tiemp YIª emog
.
lob1na un. e un proton. El carbono, la reacc ión genera l se invierte. Véase
anti portador aniónico AE1 (púrpura) ca tal,za e1intercambi o reversible de iones

506 CAPÍTULO 11 • Transporte d ·iones y mole,culas pequeñas a travé s de la membrana

e
a. transmembrana que catalizan el transporte aniónico, y un domin io El gradiente electroquímico de protones a través de la membrana
lea en gran medida, del mismo modo ,que .
que enfrenta el citosol y ancla ciertas pro teí nas del citoesqueleto a la de Ia vacuo la vegetaI Se emp , a plasmat1ca
la Fig. 17-21). . 1 t , ·co de Na+ a través de la membran
. . .
me rnb rana (véase e1grad1ente e ec roqmm1
· ¡ · pulsar la captación o expulsión selectiva de
de la cé lu1a anima : para 1m .
_ lé . s por varios antiportad ores. En la ho¡a, por
pequenas mo cu1as e 10ne , .
. d e sacarosa generado durante la fo tosmtes1s durante
Numerosas proteína s de transpo rte permite n e¡emplo, el exceso
. durante la noche, la sacarosa almace-
,
que las vacuolas vegetale s acumule n iones y el dia se almacena en 1a vac uo 1a,
nada se mueve hacia el citoplasma y se metaboliza en C02 y H20, con
metabolitos . · d ADP y p.,. Un ant1porta -
1a generación concomitante de ATP a partir e
cuola opera para .acumular
La luz de las vacuolas de los vegetales es mucho más ácida (pH 3_6) dar protón/sacarosa de la membrana d e Ia va
l movimiento hacia adentro
que el citosol (pH 7,5) . La acidez de las vacuolas se mantiene merced a sacarosa en las vacuolas de los veget al es. E
. · · to hacia afuera de H +, que
de sacarosa es impulsado por e1mov1m1en .
una bomba protónica clase V, impulsada por ATP ( véase la Fig. 11-9), d t ·ón (luz > C1tosol) ,y el
.
y por una bomba protónica impulsada por pirofosfato , exclusiva de se ve favorecido por su gradiente e concen rac1
las plantas. Ambas bombas, localizadas en la membrana vacuolar, im- potencial citosólico negativo a través de la membrana vacuolar (vease
portan iones H+ a la luz de las vacuolas en contra de un gradiente de la Fig. 11 -29). La captación de Ca2+ y Na+ por parte de la vacuo!~ desde
concentración. La membrana vacuolar contiene, además, canales c1- y el citosol, en contra de los gradientes de concentración, es mediada de
N0 3- que transporta n estos aniones desde el citosol hacia el interior modo similar por antiportadores protónicos .
de la vacuola. El ingreso de estos aniones en contra de sus gradientes
de concentración está impulsado por el potencial con el interior posi-
tivo generado por las bombas de H+. La operación combinada de estas ~ 1 El conocimiento acerca del transporte de las proteínas . en las
bombas protónicas y canales aniónicos produce un potencial eléctri- ~ membranas de las vacuolas vegetales resulta sumament e impor-
co con el interior positivo de aproximadamente 20 mV, a través de la tante para incrementar la producción agrícola en suelos de alta salinidad
membrana de la vacuola, y también un gradiente de pH significativo (NaCI), que se encuentran dispersos en todo el mundo. Como la mayo-
(Fig. 11 -29). ría de las cosechas útiles no pueden crecer en estos suelos salinos, los
científicos especializados en agricultura han buscado, desde hace tiem-
po, desarrollar plantas tolerantes a la sal, por los métodos de injerto tra-
dicionales. Con la disponibilidad de genes clonados que codifican el
anti portador de las vacuo las Na+ /H+, los investigadores, en la actualidad,
pueden producir plantas transgénicas que sobreexpresen esta proteína
Proteínas que bombean W
transportadora, lo que conduce al secuestro elevado de Na+ en el inte-
ADP + P¡ rior de las vacuolas. Por ejemplo, las plantas transgénicas de tomate que
sobreexpresan el antiportador vacuolar Na+/H+ pueden crecer, florecer
y fructificar en presencia de concentraciones de NaCl en el suelo, que
matarían las plantas de tipo silvestre. Resulta interesante que, aunque las
hojas de estas plantas transgénicas de tomate acumulen grandes canti-
2W W dades de sal, los frutos tengan una concentración de sal muy baja. ■

Canal iónico ......¡.--++ - CI- Luz de la vacuola vegetal

(pH = 3-6) CONCEPTOS CLAVE DE LA SECCIÓN 11.5
Proteínas ~ - - ~ N0 3 -
Cotransporte por simporta dores y antipor tadores
• El gradiente electroquímico a través de una membrana semiperm ea-
ble determina la dirección del movimiento iónico a través de proteínas
Citosol transmembrana. Las dos fuerzas que constituyen el gradiente electro-
W W W (pH =7,5) químico -el potencial eléctrico de la membrana y el gradiente de con -
Proteínas antiportad oras de protones
centración iónica- pueden actuar en la misma dirección O en direccio -
nes opuestas (véase la Fig. 11 -25).

. , de ,•ones y sacarosa en la vacuola vegetal. • Los cotransportadores utilizan la energía liberada por el movimien to de
F.1gura 11-29 Concentracion , . .
·ene dos tipos de bombas protonicas
. (anaranJado)
. . : un ion (habitualmente, H+ o Na+) a favor de su gradiente electroquímico
La mem brana vacuo Iar con t1
una ATPasa H+ clase v (izquierda) y una bomba protónica que h1drol1za pirofos- para impulsar la importación o la exportación de una molécula peq ueña
fato (derecha) que difiere de todas las otras proteínas de transporte de iones, o de un ion diferente en contra de su gradiente de concentración.
y probablem~nte sea exclusiva de los vegetales. Estas bombas _generan ~n pH
t nc·ial eléctrico con interior. positivo . . a traves de .
la • Las células que tapizan el intestino delgado y los túbulos renales
1um1na
·
aJo, as1•como un po e
1b ·

.d I bombeo de iones H+ hacia el interior. .El potencial contienen proteínas simportadoras que acoplan la entrada energéti-
rnem brana vacuo Iar deb o a
· · to de c1 - y NO3_- desde el otosol• a .
I

·
con mterior positivo im pulsa el mov1m 1en camente favorable de Na+ a la importación de glucosa en contra de
,
· de prote1nas d al separadas (púrpura). Los ant1portado res proton1cos
tra ves e can 2 su gradiente de concentración (véase la Fig. 11 -26), Los aminoácidos
(verde) impulsados por el gradiente H+ acumulan Na+, Ca +y sacarosa en el
también ingresan en la célula mediante simportado res acoplados a Na+.
interior de la vacuola. (Tomado de B. J Barkla YO. PantoJa, 1996, Rev. Planr Phyllal Planr Mol B,ol
47:159-184 y p A. Rea y cols .. 1992. Trends Brachem Sci 17:348)

11 .5 Cotransporte por simportadores y antiportadores 507

 . La estructura mole cular de un sm1p · tador Na+/a m inoác ido bacte -
or . ,
riano revela el modo en el que la unión Simportador
de Na+ y _lel'.cm a estan aco -
· GLUT 2
p1ad os y proporcio na un pan oram a de un inte rmed iario . de tra nspo rte
.
2 Na+/ glucosa

[Link] en e1 cu al Ios sus t ra tos un idos no pued en d1fund1r fue ra de la Gluc osa ..._~ 3;; ~- Glucosa
prote ína (véase la Fig. 1 1-27).
• En las células musc ula res cardíacas, la expo
D r\1"' ¿_ 1~
rtació n de Ca 2+ está aco- ATPasa
plada a la impo rtaci ón de Na+ y es impu Na+;K +
ls~da por é:te a _trav~s de _un
antip ortad or catió nico que transporta tres
10nes Na hacia el mten or, K+
por cada ion Ca 2+ expo rtado. Mem bra na
apical
• Dos cotranspo rtado res activados a bajo Mem brana _
pH ayudan a mantener el pH
citosólico en las célula s animales, muy cerca basolater al
no a 7,4, a pesar de la pro-
ducción metabólica de ácido carbó nico y
láctico. Uno, un antip ortad or Sangre Citoso l Luz int estinal
Na+/H +, exporta el exces o de p roton es. Elevado Na' Bajo Na' 1
El otro, un cotra nspo rtado r Glu cosa de la dieta 1
Na+H C0 3-;c1-, impo rta HC0 - que se disoc Ba jo K' Elevado K' Elevado Na' Cr de la dieta j
3 ia en el citosol para gene-
rar iones OH- que eleva n el pH .
Figura 11 _30 Transporte transcelular de
glucosa desde la luz del intesti-
• Un antip ortad or C1-/H CQ - activ ado, no hacia la sangre. La ATPasa Na+/ K+ de
3 a eleva do pH, expo rta HC0 - la superficie basolateral de la mem-
cuando el p H citosólico se incre ment a por 3 brana genera gradientes de concentración
encim a de lo norm al y pro- de Na+ \K+ (paso D). El movim iento
hacia afuera de los iones K+ a través de canale
voca un descenso del pH. s de K sin compuerta genera un
potencial de membrana con el interio r negat
ivo a través de toda la memb rana
• El AEl , un antip ortad or CI-/H C0 - de plasmática. Tanto el gradiente de concentrac
3 la mem brana de los eritroci- ión de Na+ como el potencial de
tos, aumenta la capacidad de la sangre para membrana se emplean para im pulsar la capta
trans porta r C0 2 desde los ción de gluco sa desde la luz del
intestino media nte un si mpor tador de dos
tejidos hacia los pulm ones (véase la Fig. Na+ / una gl ucosa localizado en
11-28 ). la superftcie de la mem brana apical (paso f))
. La gluco sa sale de la célula por
• La capta ción de sacar osa, Na+, Ca 2+ y otras medio de difusión facilitada cata lizada por
sustancias por parte de las la GLUT2, un uniportador de glucos a
vacuolas veget ales es llevada a cabo por antip localizado en la memb rana basolatera l (paso
ortad ores protónicos de la ~ -
mem bran a de las vacu olas. Los canales iónic
os y las bomb as protó nicas
de la mem bran a son críticos para gene rar
un gradiente de conc entra -
ción protó nico lo sufic iente ment e eleva do
como para imp ulsar la acu-
mulación de iones y meta bolit os en las vacuo
las por estos antip ortad o-
res protó nicos (véase la Fig. 11 -29).

van de un lado al otro a través del espac

io extra celul ar existente entre
las células. Por esta razón , la absor ción
de much os nutri entes desde la
luz del intes tino a través de la capa de célul
as epiteliales y, finalmente, a
la sangre se lleva a cabo en un proce so de
dos etapa s llama do transp or-
11.6 Transpo rte transcelu lar te trans celula r: la impo rtaci ón de molé culas
a travé s de la membrana
plasm ática, desde el lado apical de las célul
as del epitelio intestinal, y
Las seccio nes previas ilustr aron el modo su expo rtació n a través de la mem bran a
plasm ática del lado basolateral
en que vario s tipos de trans - ( que enfre nta la sangr e) (Fig. 11 -30). La
portadores opera n en conju nto para desem porc ión apica l de la membrana
peña r funci ones celulares plasmática, que enfre nta la luz intes tinal,
impo rtant es. Aquí, ampl iamo s este conc está espec ializada para la ab-
epto al centr arnos en el trans - sorci ón de azúcares, amin oácid os y otras
porte de vario s tipos d e moléculas e iones molé culas prod ucidas a partir
a través de células polar i- de los alime ntos por múlti ples enzim as
zadas, que son células asim étricas (con digestivas .
diferentes "lado s") y posee n
regiones diferentes de la mem bran a plasm
ática , desde el punt o de vista
bioqu ímico . Una clase parti cular ment e bien
estud iada de células pola-
rizad as son las epiteliales que form an capas Se requieren múl tiple s pro teín as de
del tipo de lámin as (epi- transporte
telios) que cubren la mayo ría de las super para movilizar la glucosa y los aminoá
ficies exter nas e inter nas de cidos
los órgan os del cuerp o. Las célula s epiteliales
se anali zarán con mayo r a través de los epitelios
detalle en el Capítulo 20. Al igual que much
as células epiteliales, una
célula del epitelio intestinal implicada en La Figur a 11 -30 muestra las prote ínas
la absor ción de nutri entes, que median la absor ción de la
desde el tubo diges tivo, tiene una mem brana gluco sa desde la luz del intes tino hacia
plasm ática organ izada en la sang re e ilustra el impo rtante
dos regiones discretas princ ipales : la super conc epto según el cual difer entes tipos
ficie que enfre nta el exter ior de prote ínas están locali zadas
del organ ismo , deno mina da superficie apica en las mem bran as apical y basol atera l
l o parte supe rior, y la cara de las célu las epite liales. En la
que e~frenta el interior (cara que enfre nta prim era etapa de este proce so, un simp
el to rrente sangu íneo) del ortad or do s Na+/ un a glucosa,
organismo, llama da superfici e baso lateral localizado en la mem bran a apical , impo
(véase la Fi g. 20-1 O). rta la glucosa, contra su gra -
Las r~gio nes especializa das de la mem bran dient e de conc entra ción , desde la luz del
a plasm ática , deno m i- intesti no a través de la super-
nadas uruones fuertes, separan las mem fi cie apica l de las célul as epiteliales. Com
brana s apical y basolateral y o se vio anter iorm ente, _eS te
evi tan que muchas , aunq ue no todas, susta simp ortad or acop la el ingre so energética
ncias hidro solub les se mue- ment e desfa vorable hao a el
inter ior de una molécula de gluco sa al
t ransp orte hacia aden tro, ener- 1

508
m
CAPITULO 11 • Tra nsporte de iones y molé
culas pequeñas a través de la membran a

J
 géticamente.
fa vorable,
.
de dos iones Na+ (véase la Fi g. J J-26) . En e1 es-
intestin o, a través de la capa de células ep itelia les y, finalmen te , a la
tado estac10nano, todos los iones Na+ transportados desde la I d
· h · 1· . uz el sangre. Así , dar a un ni fi o afectado una solución de azúcar y agua para
intestino ac1a e mtenor de la célula du ran te el simporte Na+/ ¡
· ·1 1 • g ucosa beber (pero no de sa l o azúcar sola mente) provoca un increme nto del
0 el proceso s1m1 ar a s1mportador Na+/aminoácido que t
. , am b1'é n ocu- transporte de sodio y azúca r a través del epitelio y, en consecuencia,
rre en la membrana ap1Cal , son bombeados al exterior a través de la
un fl ujo osmótico elevado de agua hacia la sangre desde la luz del
membrana basolateral que enfrenta a la sangre · Así , se m an t'1ene ¡a b a¡•a
intestino, lo que conduce a la rehidratación. Las solucio nes azúcar- sal
concentración intracelular de Na+. La ATPasa Na+/K+ 11
que eva a cabo de este tipo constituyen la base de las bebidas populares que consu -
este proceso se encuentra exclusivam ente en la memb b ¡
, . . . rana aso ateral men los atletas para adminis tra r azúcar y ag ua al orga nismo de modo
de las celulas del ep1teho mtestin al. La operación coo d' d d
, r ma a e estas rápido y eficiente. ■
dos protemas. de, transporte
. perm ite el movimiento cuest a arn'ba de
glucosa_y ammoacid os, desde el intestino hacia el interior de la célula.
Esta pnmera etapa en el transporte transcelular, fi na¡mente, esta, im- ·
Las células parietales acidifican el contenido del
pulsada por la hidrólisis de ATP por la ATPasa Na+/K+.
estómago y mantienen el pH citosólico neutro
En la segunda etapa, la glucosa y los aminoácidos concentrados
dentro
. de las células intestinales por los simportadores ap1ca
· ¡es son El estómago de los mamíferos contiene una solución O, 1 M de ácido
importados a favor de sus gradientes de concentración a la sangre me - clorhídrico (HCl). Este medio muy ácido elimina m uchos patóge-
diante proteínas u niportadoras de la membrana basolateral. En el caso nos ingeridos y desnaturaliza numerosas proteínas, de modo tal que
de la glucosa, este m ovimiento está mediado por GLUT2 (véase la Fig. pueden ser degradadas por enzimas proteolíticas (p. ej., pepsina ),
11 -30). Como se com entó previamente, esta isoforma GLUT tiene una que funcionan a pH ácido. En el estómago, el ácido clorhídrico es
afinidad relativamente baja por la glucosa, pero incrementa su veloci- secretado por células epiteliales especializadas denominadas células
dad de transporte de modo notable cuando el gradiente de glucosa a parietales (con ocidas también como células oxín ticas ) de la cubierta
través de la m embran a aumenta (véase la Fig. •l 1-4). estomacal. Estas células contienen una ATPasa H+ /K+ en su mem-
El resultad o fin al de este proceso de dos etapas es el movimiento brana apical, que enfrenta la luz del estómago y genera un gradiente
de iones Na+, glucos a y am inoácidos desde la luz del intestino, a de concentración de H+ de un millón de veces: pH - 1,O en la luz
través del epitelio intest inal, hacia el medio extracelular que rodea del estómago frente a un pH -7 ,2 en el citosol celular. Esta proteína
la superficie b asolateral de las células del epitelio intestinal y, final- de transporte es una bomba iónica clase P, impulsada por ATP, de
mente, a la san gre. Las uniones fuertes entre las células epiteliales estructura y función similar a la ATPasa Na+/K+ de la membrana
evitan que estas m o léculas difundan nuevamente hacia la luz del in - plasmática analizada anteriormente. Las numerosas mitocondrias de
testino. La presió n o sm ótica elevada, creada por el transporte trans - las células parietales producen abundante ATP para ser empleado
celular de sal, glucosa y aminoácidos a través del epitelio intestinal, por la ATPasa H+/K+.
arrastra agua desde la luz del intestino principalmente a través de Si las células parietales simplemente exportaran iones H+ en in-
las uniones est rechas al medio extracelular que rodea la superficie tercambio por K+, la pérdida de protones conduciría a un incremento
basolateral ; las acuaporinas no parecen desempeñar una función de la concentración de iones OH· en el citosol y, de este modo, un au-
central. En un sen t ido, las sales, la glucosa y los aminoácidos, "lle- mento pronunciado del pH citosólico. (Recuerde que [H+] x [OH-]
van" el agua junto con ellos. es siempre una constante, 10- 14 M 2 ) . Las células parietales evitan este
incremento del pH citosólico en conjunto con una acidificación de
la luz estomacal, con el empleo de antiportadores Cl-/HCO 3- en la
membrana basolateral, para exportar el "exceso" de iones OH· desde
La terapia de rehidratación simple depende. ,
el citosol hacia la sangre. Como ya se mencionó, este antiportador
del gradiente osmótico creado por la absorcion
aniónico se activa a un pH citosólico elevado.
de glucosa y Na+ El proceso general por el cual las células parietales acidifican la
~ El conocimien to de la ósm osis y de la absor~ión in~estinal de luz del estómago se ilustra en la Fi gura 11 -31. En una reacción ca -
11111 sal y gl ucosa forma las bases de u~ tratamiento s_imple que talizada por la anhidrasa carbónica, el OH- citosólico en "exceso" se
·¡¡ combina con el CO 2, que difunde al interior desde la sangre y fo r-
sa l va mi on es de vi·d as cada añ o , en particular, en los, paises. menos
· tos el cólera y otros patógenos mtestmales son ma HCO 3- . Catalizado por el antiportador aniónico b asolateral c 1-¡
desarro 11 a d os. E n es , . .
te en los niños pequeños. Una toxina hbe- HCO 3-, este ion bicarbonato es exportado a través de la memb rana
causas centra1es d e m uer .
rad a por la b acteria activa la secreción de cloro,_desde la superficie basolateral (y, finalmente, a la sangre) en intercambio por un ion c 1-.
a ical de las células epiteliales del intestino haoa la luz; el agua las Los iones c1-1uego salen a través de los canales de c 1- de la membra -
~ , .
s1gue osmoticamen ,
te y la pérdida masiva de agua resultante provo-
.,
na apical e ingresan en la luz del estóm ago . Para preservar la electro-
. d h 'dratación y fi nalmente la mu erte. La curac10n re- neutralidad, cada ion c1- que se moviliza h acia la luz del estómago a
ca diarrea, es i 'b ' , · · través de la membrana apical está acompañado por un ion K+ que se
. . . ció n de las b acterias con anti 10t1cos , smo
quiere no so 1o 1a e1imma • d ¡ desplaza hacia afu era por medio de un canal separado de K+. De este
tam b ién la rehidratación - el reemplazo del agua perdida des e a
modo, el exceso de iones K+ bombeado hacia adentro por la ATPasa
sa ngre y otros tejidos- . H+/ K+ regresa a la luz del estómago, y se mantiene, de este modo, la
. d agua n o ayuda porque se excreta desde la
El simple consumo e , , . concentración int racelular normal de K+. El resu ltado de este proce-
, . . • · ·do como ingresa a traves de esta. Sm embar-
Vla digestiva casi tan rap i d' d so es la secreción de cantidades iguales de ion es H+ y c1- (HCI ) a la
d 'do recientemente, el transporte coor ma o
go, como hemos apren i . . . luz del estómago, m ientras que el pH del citosol permanece neu tro
+ • del ep iteli o mtestmal crea un gradiente os-
de glucosa y Na a traves 1 1 d 1 y el exceso de iones OH-, como HCO 3-, se transportan a la sa ngre ,
, . . . 1 fuer za el m ovimiento de agua desde a uz e
mot1co transep1te11a Y

11 .6 Transporte transcel ular 509

 c1- HC0 3-
Antiportador
Antiportador ' :._-=:_-=:_-=:_-=:_-=:_-=:_-=:_-=:_-=:_-=:_-=:_-=:_-=:_--::..,
,- c1- ¡HC03-
c1- / HC03 - -
1- HC0 3-
CI CI
CanalK+
HC0 3 - HC03- 0H~COz

I
K' Osteoclasto
Anhidrasa
carbónica
ATPasa
ADP + P; W / K+

C0 2 C0 2 + OW ~ H20 ~ W w
Membrana
Membrana
basolateral -apical
Unión fuerte Hueso Un ión
fuerte
Citosol Luz del estómago
Sangre
pH 7,2 pH 1,0
pH 7,4 Bomba de W clase V
L--------------_J 1

Figura 11-32 La disolución del hueso por los osteoclastos polarizados

figura 11 -31 Acidificación de la luz del estómago por las células parie-
requiere una bomba protónica clase Vy el canal de cloro CIC-7. La mem-
tales de la cubierta gástrica. La membrana apical de las células parietales
brana plasmática de los osteoclastos esta dividida en dos dominios separados
contiene una ATPasa H+/K+ (una bomba clase P), así como canales proteicos
CI- y K+. Nótese el transporte cíclico de K+ a través de la membrana apical: los por unión estrecha entre un anillo de membrana y la superficie ósea. El dominio
iones K+ son bombeados hacia el interior por la ATPasa H+/K+ y salen a través de membrana que enfrenta el hueso contiene bombas de protones clase Vy
de un canal K+. La membrana basolateral contiene un antiportador aniónico canales de c1 - CIC-7. El dominio opuesto de la membrana contiene antiportado-
que intercambia iones HC0 3-y CI-. La operación combinada de estas cuatro res aniónicos que intercambian iones HC0 3- y CI- . La operación combinada de
proteínas diferentes de transporte y de la anh idrasa carbónica acidifica la luz del estas tres proteínas de transporte y de la anhidrasa carbónica acidifica el espacio
estómago y, a la vez, mantiene la neutralidad de pHdel citosol. encerrado y permite la resorción ósea; a su vez, mantiene el pH neutro delcito-
sol. (Véase R. Planells-Cases y T. Jentsch, 2009, Biochim. Biophys. Acra 1792: 173 para un análisis del CIC-7.1

La resorción ósea requiere la función coordinada te en el gen que codifica la ClC-7, la proteína del canal de cloro, locali-
de una bomba protónica clase V y un canal proteico zada en el dominio de la membrana plasmática del osteoclasto que
enfrenta el espacio cercano al hueso. Como sucede con los lisosomas
específico de cloro
(véase la Fig. 11-14 ), en ausencia de un canal de cloro, la bomba protó-
El crecimiento neto del hueso, en los mamíferos, se detiene exactamen- nica no puede acidificar el espacio extracelular cerrado y, de este modo,
te después de la pubertad, pero durante toda la edad adulta se produce la reabsorción ósea es defectuosa. ■
un proceso finamente modulado y altamente dinámico de desensam-
blaje (reabsorción) y reensamblaje (formación ósea). Este remodela-
miento óseo continuo permite la reparación de los huesos dañados y
puede liberar calcio, fosfato y otros iones del hueso mineralizado a la
sangre, para ser empleados en cualquier lugar del organismo. CONCEPTOS CLAVE DE LA SECCIÓN 11.6
Los osteoclastos, las células que disuelven huesos, constituyen un Transporte transcelular
tipo de macrófagos mejor conocidos por su función de proteger al or-
ganismo de las infecciones. Los osteoclastos son células polarizadas que • Los dominios de la membrana plasmática apical y basolateral de las
forman uniones muy fuertes entre éstos y los huesos, lo que crea un células epiteliales contienen diferentes proteínas de transporte y llevan
espacio extracelular cerrado (Fig. 11 -32). Después, un osteoclasto ad- a cabo diversos procesos de transporte.
herid~ secreta a este espacio una mezcla corrosiva de HCI y proteasas
• En la célula epitelial intestinal, la operación coordinada de los im-
que d_isuelven los componentes inorgánicos del hueso en Ca 2+ y fosfato,
portadores ligados al Na+ en la membrana apical y las ATPasas Na+/K+
Ydigieren sus componentes proteicos. El mecanismo de secreción de
Y los uniportadores de la membrana basolateral median el transporte
HCl . al empleado por e1estomago
, es similar , .
para generar Jugo . .
digestivo
(vease la F1g 11 -31) e d . transcelular de aminoácidos y glucosa, desde la luz del in testi no hacia
. · • orno suce e con la secreción de HCI gástrico la
anh1drasa carbónica y la pro tema , antiportadora
. . , . son impor-' la sangre (véase la Fig. 11 -30).
amomca
tantes para la función de 1 st 1 st
, . os º eoc ª ºs. Los osteoclastos utilizan una • La presión osmótica elevada, creada por el tran sporte transcelular de
bom ba protonica clase V p .
lh ara exportar iones H+ al espacio que enfren- sal, glucosa Yaminoácidos a través del epitelio in testinal, arrastra agua
ta e ueso de un modo diferente del I h desde la luz del intestino hacia el organismo, un fenóm eno que si rve
impulsada por ATP H+¡p , que O ace una bomba clase P
1
en as celulas del epitelio gástrico. como base para la terapia de rehidratación que emplea soluciones con
sal y azúcares.
~ La rara enfermedad heredit · .
U t d 1 d . ana osteopetros1s, caracterizada por el
• La acción combinada de la anh idrasa carbónica y cuatro proteínas
aumen o e a ens1dad ósea se d b
• ' e e ª una reabsorción ósea
anorma Imente bªJª•Muchos pacientes fienen una mutac1on
., . transportadores distintas permite que las células parietales que tapizan
mactivan -

510 CAPÍTULO 11 • Transporte de · ,

iones y moleculas pequeñas a través de la mem brana
 qu e aumenta la tasa de captación de glucosa. Como ya se mencionó ,
el estómago secreten HCI hacia la luz y, a la vez, ma nte ngan su pH cito- la adición de vasopresina a ciertas células renales permite, de modo
sólico cerca de la neut ralidad (véase la Fig. J 1-31 ). similar, que una acuaporina se desplace hacia la membrana plasmática
. La reabsorción ósea req uiere la fusión coordinad a, en los osteoclastos, incremen tando la tasa de transporte de agua. Pero a pesar de muchas
' claros los .mecanismos celulares
estan por los
de una bomba protónica clase V y de la proteína del canal de cloro · · · , ,
mvest1gac 10nes, aun n 0
. ulan el movúrue nto de las protemas de trans-
ClC-7 (Fig. 11 -32 ). cuales Ias h ormonas es t un
porte hacia la membrana plasmática y desde ésta; tampoco se conoce la
regulación de estos procesos.

Perspectivas para el futuro Palabras clave

potencial de membran a 475
En este capítulo, hemos explicado la acción de las proteínas específica s superfamilia ABC 485
ATPasa Na+/K+ 489
de transporte de membran a y su impacto en ciertos aspectos de la fi - transporte activo 476
patch-clampíng 500
siología humana; este enfoque de la fisiología molecular tiene muchas antiporte 502
bomba clase P 484
aplicaciones médicas. Aun en la actualidad, los inhibidores o activado- acuaporinas 480
bomba impulsada por ATP 476 canal K+ en reposo 497
res específico s de los canales, bombas y transportadores constituyen la
cotransporte 502 potencial en reposo 495
clase de fármacos simples más significativa. Por ejemplo, un inhibidor retículo sarcoplasmático 486
de la ATPasa H+/K+ gástrica que acidifica el estómago es el fármaco más gradiente electroquímico 475
transporte facilitado 476 difusión simple 474
ampliam ente utilizado para el tratamiento de las úlceras gástricas y el simporte 502
síndrome de reflujo gástrico. Los inhibidores de los canales proteicos bomba clase F 484
flipasa 493 unión fuerte 508
renales se emplean, con gran frecuencia, para controlar la hiperten-
canal con compuerta 476 transport ador 476
sión (presión arterial elevada); al bloquear la reabsorción de agua en la
proteínas GLUT 479 transport e transcelular 508
sangre desde la orina formada en los riñones, estos fármacos reducen
hipertónico 481 uniporte 478
el volumen sanguíneo y, así, la presión arterial. Los bloqueantes de los
hipotónico 481 bomba clase V 484
canales de calcio se utilizan ampliamente para controlar la intensidad
isotónico 481
de la contracción del corazón. Las sustancias que inhiben un canal de
potasio, en particular en las células Pde los islotes, incrementan la se-
creción de insulina (véase la Fig. 16-38 ), y son muy utilizados para tra-
tar la diabetes que aparece en la edad adulta (tipo II) .
Con la finalización del proyecto genoma humano, tenemos a nues-
Revisión de los conceptos
tro alcance las secuencias de todas las proteínas de transporte de mem-
l. El óxido nítrico (NO) es una molécula gaseosa con solubilid ad en
brana de los seres humanos . Ya sabemos que las mutaciones en muchas
lípidos, similar a la de 0 2 y CO 2• Las células endoteliales que recubren
de éstas provocan enfermedades -la fibrosis quística, debida a la mu-
las arterias emplean el NO para enviar señales a las células cercanas de
tación de la CFTR, y la osteopetrosis, provocada por mutaciones en
músculo liso para que se relajen, lo que incremen ta el flujo sanguíne o.
el canal de cloro ClC-7, son ejemplos-. Más recientemente, se mostró
¿Qué mecanismo o mecanismos transport arían el NO desde el lugar
que las mutacion es con pérdida de la función en cada subunidad de
en el que se produce, en el citoplasma de una célula endotelial, hacia el
un canal de cloro diferente, ClC-K, producen pérdida de sal por medio
citoplasma de una célula de músculo liso en donde actúa?
del riñón y sordera. Esta explosión de conocimientos básicos, que aso-
2. El ácido acético (un ácido débil con una pK,, de 4,75) y el etanol (un
cian determin adas enfermedades genéticas con proteínas específicas
alcohol) están compuestos, cada uno, por dos carbonos , hidrógen o y
de transpor te, permitirá a los investigadores investigar nuevos tipos de
oxígeno, y ambos ingresan en las células por difusión pasiva. A pH 7,
compues tos que inhiben o activan exactamente una de estas proteínas
uno es mucho más permeable a la membran a que el otro. ¿Cuál es más
de transport e de la membran a, y no a sus homólogas. Sin embargo, co-
permeable y por qué? Prediga de qué manera la permeab ilidad de cada
nocer la función de una proteína individual de transporte, en cada uno
uno se altera cuando el pH se reduce a l, un valor típico del estómago.
de los diversos tejidos en los cuales se expresa, constituye un desafío
3. Los uniportad ores y los canales iónicos sostienen la difusión facili-
importan te.
Otro desafío central es compren der de qué manera cada canal, tada a través de las biomemb ranas. Aunque ambos son ejemplos de la
difusión facilitada, las tasas de movimie nto iónico a través de un canal
transportador y bomba están regulados para satisfacer las necesida- 4
iónico son aproxima damente 10 - 10 veces mayores que la del movi-
5
des de la célula. Al igual que otras proteínas celulares, muchas de estas
proteínas experime n tan fosforilación reversible, ubiquitinación y otras miento de las moléculas a través de un uniporta dor. ¿Qué diferencias
modificaciones covalentes que influyen en su actividad, pero en la gran de mecanismos clave producen esta gran diferencia en la velocidad del
transporte? ¿Qué contribuc ión a la energía libre (~G) determin a la di-
mayo ría de los casos, no compren demos de qué modo esta regulación
rección del transport e?
incide en la fu nción celular. Muchos canales, transport adores y bombas
normalm ente se encuentr an en las membran as intracelulares, no en 4. Nombre las tres clases de transport adores. Explique cuál o cuáles de
la mem brana plasmática, y se movilizan hacia ésta sólo cuando está estas clases son capaces de movilizar glucosa y cuáles movilizan bicar-
presente una hormona en particular. La adición de insulina al músculo, bonato (HCO 3- ) en contra de un gradiente electroquímico. En el caso
por ejemplo, hace que el trasporta dor de glucosa GLUT4 se desplace del bicarbonato, pero no de la glucosa, la ~ G del proceso de transporte
desde las membran as in tracelulares hacia la membran a plasmática, lo tiene dos términos. ¿Cuáles son estos dos términos y por qué el segundo

Revisión de los conceptos 511

no se aplica a la glucosa? ¿Po r q ué los cotransportadores, co n frecuenc ia, difica nara un ca nal K+ putativo de hecho codifica para un
,.. canal K·
se mencionan como ejemplos de transpor te activo secundario? un ca nal Na•1- . ,,
S. Un io n H+ es más pequeño q ue una molécu la de H 20, y un a molé- 13. Las plantas em plea n el gradiente elect roquím ico de los p
.
cula de glicerol - un alco hol de tres carbonos- es mucho más grande. través de la membrana de la vacuo 1a para impulsar la ac um roto 11 ei, .
.

sales y azúcares en el orgá nulo. Esto crea un estado hipertóu ac1 ·

1
Ambas se disuelven fác ilmente en H 20. ¿Por qué las acuaporina s no .
011
di
transportan H+ m ientras que algunas pueden transportar glicerol? qué esto no produce la hinch azón de la célula vegetal y sun1c0 · 1·p\J1
. 1
6. La GLUT l, presente en la membrana plasmática de los eritrocitos, es Aun en co ndiciones isotónicas, hay un a enta fu ga de ionesestal)¡d
ha . º'
.
un ejemplo clásico de uniportado r. interior de las células animales. ¿De qué manera la AT Pasa Na+/K•c,a ti
a. Proyecte un conjunto de experiment os para probar que la GLUT l membrana plasmát ica capacita a las células animales para evita d: 1_ú
es, en realidad, un uniportador específico de glucosa más que un un í- . . .
osm ótica en cond1c1one . ó . ?
s 1sot meas. r Ia l1s11
portador específico de galactosa o manosa. 14. En el caso del transportad o r bacteriano sodio/leucina ·cu·¡
h. La glucosa es un azúcar de seis carbonos, m ientras que la ribosa
. . ' ~ a es \
característic a clave dist intiva de los 10nes unidos de sodio que a ª
es un azúcar de cinco carbonos. A pesar de su tamaño más pequeño, que otros iones, en particular K+, n o se unan? segura
la ribosa no se transporta eficientemente a través de GLUTl. ¿Cóm o 15. Describa el proceso de simporte p or el cual las células que
. ,. recu.
puede explicar esto? bren el intestino delgado importan glucosa. ¿Que 10n es el causante d
c. Un descenso en el azúcar sanguíneo de 5 mM a 2,8 mM o por , . . 1
transporte y cuáles son las d os caractens~1cas particu_ares que facilitanel
debajo puede provocar confusión y pérdida de conocimien to. Calcule el movimient o energéticam ente favorecido de este 1011 a través de la
el efecto de este descenso en el transporte de glucosa en las células que membrana plasmática?
expresan GLUT l. 16. El desplazamiento de glucosa de un lado del epitelio intestinal al
d. ¿De qué manera las células del hígado y del músculo maximizan la otro es un ejemplo central de transporte transcelular. ¿De qué manera
captación de glucosa sin cambiar la Vm } la ATPasa Na+/K+ impulsa el proceso? ¿Por qué las uniones fuertes son
1
e. Las células tumorales que expresan GLUT 1, con frecuencia, tienen esenciales para éste? ¿Por qué la localización de los transportadores
una V mu más elevada para el transporte de glucosa que las células sanas específicam ente en la membrana apical y basolateral, es crucial para el
del mismo tipo. ¿De qué manera estas células incrementa n la V má/ transporte transcelular ? Los suplemento s de rehidratación, como las
f. La grasa y las células musculares modulan la Vmáx para la captación bebidas deportivas, incluyen un azúcar y una sal. ¿Por qué ambas son
de glucosa en respuesta a la señalización de la insulina. ¿Cómo? importante s para la rehidratació n?
7. Nombre las cuatro clases de bombas impulsadas por ATP que pro-
ducen el transporte activo de iones y moléculas. Indique cuáles de estas
clases transportan iones solamente y cuáles transportan principalme n- Análisis de los datos
te moléculas orgánicas pequeñas. El descubrimi ento inicial de una clase
de estas bombas impulsadas por ATP no provino del estudio del trans- Imagine que usted está investigand o el transporte transepitelial de la
po rte de un sustrato natural, sino de sustratos artificiales empleados glucosa radiactiva. Las células del epitelio intestinal se hacen crecer en
como fármacos quimioterap éuticos para el cáncer. ¿Qué piensan los cultivo para formar una lámina completa, de modo tal que el fluido
investigado res, ahora que constituyen ejemplos comunes de los sustra- que baña el dominio apical de las células (el medio apical) está com-
tos naturales de esta clase particular de bombas impulsadas por ATP? pletamente separado del que baña el dominio basolateral de las células
8. Explique por qué la reacción acoplada ATP ➔ ADP + P¡ en el meca- (el medio basolateral) . Se añade glucosa radiactiva (1 4C-marcada) al
nismo de las bombas iónicas clase P no implica directamen te la hidró- medio apical y se controla la aparición de radiactivida d en el medio ba-
lisis del enlace fosfoanhidr ido. solateral, en términos de cuentas por minuto por mililitro (cpm/mL),
9. Describa un mecanismo de retroalimen tación negativa para contro-
una medida de la radiactivida d por unidad de volumen.
lar la concentraci ón creciente de Ca 2+ citoplasmát ico en las células que Tratamient o l : Tanto el medio apical como el b asolateral contie-
requieren cambios rápidos en la concentraci ón de Ca 2+ para su funcio- nen, cada uno, Na+ 150 mM (curva 1) .
namiento normal. ¿De qué modo un fármaco que inhibe la actividad
Tratamient o 2: El medio apical contiene Na+ lmM, y el medio ba·
de calmodulin a afectaría la concentrac ión de Ca 2+ regulada por este solateral, Na+ 150 mM (curva 2).
mecanismo ? ¿Cuál sería el efecto sobre la función de, por ejemplo, una
Tratamient o 3: El m ed io ap ical contiene Na+ 150 mM, y el medio
célula de músculo esquelético?
basolateral, Na+ 1 mM (curva 3).
10. Ciertos inhibidores de la bomba de protones inhiben la secreción
del ácido estomacal y se encuentran entre los fármacos más amplia-
mente vendidos en el mundo en la actualidad. ¿Qué bomba inhibe este
tipo de sustancia y dónde se localiza esta bomba? Radiactivid ad en el m edio basolateral
11 . El potencial de membrana de las células animales, pero no de las ve-
:::¡- 200 Tratam ientos 1, 3
getales, depende -en gran medida- de los canales de K+ en reposo. ¿De E
qué m~era contribuyen estos canales al potencial de reposo? ¿Po r qué l
~
1so
se considera que estos canales carecen de compuerta? ¿De qué modo -o
estos canales logran la selectividad por K+ frente a Na+, que es m ás ro 100
-o
pequeño que el K+? ·;;:
-~ 50
u Tratamie nto 2
12. La fijación de m~mbrana puede emplearse para medir las propie- -~
-o
dades de cond~ct~n c1a de can'.11_es iónicos individuale s. Describa de qué ro o
m an era esta tecmca puede utilizarse para determinar si el gen que co-
ce: o 2 4 6 8 10
Tiempo (min) en 14
C-glucosa

512 CAPITULO 11 • Transporte de iones y moléculas pequeñas a través de la membrana

 sistance in ca ncer: the ea rly years of P-glycop rotein research . FEBS Len. 580:998 -
a. ¿C uál es un a explicació n probable pa ra los diferen tes resul tados o b- 1009.
ten id os en los trata m ien tos I y 3 versus tratamient o 2 ? Guerini, D., L. Coletto, and E. Carafoli. 2005. Exporting calciu m from cells.
b. En est udios ad icional es, el fá rmaco o u abaí n a, que inhibe las ATPasas Cell Calcíum 38:281-289 .
Na •/K+, se incluye según se indica . Gutt mann, D., et al. 2009. Understand ing polyspecificity of m ultidrug
Tratamien to 4 : El medi o apical y basolateral contienen N a• 150 mM y ABC transpo rters: closing in o n the gaps in ABCBI. Trends Biochem. Sci.
el m edio api cal contiene o u a b aína (curva 4).
35:36-42.
Tratamien to 5: El m edi o ap ical y el b asolateral contienen Na+ 150 mM, Hall, M., et al. 2009. Is resistance useless? Multidrug resistance and collate-
y el medio basolater al co nti en e o u abaína (curva 5 ). ral sensitivity. Trends Pharmacol. Sci. 30:546-556 .
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514 CAPITULO11 Transporte de ionesy moléculas pequeñas a través de la membrana

 Tropezando con el transporte activo EXPERIMENTO CLASICO 11 .1
J. Skou, 195 7, Biochem. Biophys. Aaa 23:394

m ediados de 1950, Jens Skou era un jo-

A ven médico que investigaba los efectos de
hidrolizar ATP. Pensando en que esta sería
una enzima ideal para sus propósitos, Skou
sales y otros cofactores que generaban catio-
nes en la reacción. Pudo determ inar fác il-
los anestésicos locales en las bicapas lipídicas mente un pH óptimo y una concentración
se propuso aislar esta ATPasa de una fuen-
aisladas. Necesitaba una enzima asociada óptima de Mg 2+, pero optimizar el Na+ y el
te más accesible: las neuronas de la pata de
a membranas fácil de ensayar para emplear cangrejo. Fue durante su caracterización de K+ resultó más difícil. Independientemente
como marcador en sus estudios. Descubrió esta enzima cuando descubrió la función de de la cantidad de K+ añadido a la reacción, la
una enzima crítica para el mantenimiento del la proteína. enzima era inactiva sin Na+ . De modo simi-
potencial de membrana, la ATPasa Na+/K+, lar, sin K+, Skou observó solo un bajo nivel
una bomba molecular que cataliza el trans- de actividad de ATPasa que no se incremen-
porte activo. El experimento taba al aumentar las cantidades de Na+.
Estos resultados sugirieron que la enzi-
Como el objetivo original de su estudio con - ma requería tanto Na+ como K+ para una
Antecedentes sistía en caracterizar la ATPasa para utili- actividad óptima. Para demostrar que esto
zarla en estudios posteriores, Skou deseaba era así, Skou llevó a cabo una serie de ex-
Durante la d écada de 1950, muchos inves- saber en qué condiciones experimentales su perimentos en los que midió la actividad
tigadores en todo el mundo se encontraban actividad era sólida y reproducible. Como enzimática a medida que variaba tanto las
investigando activamente la fisiología de la suele ocurrir con frecuencia con la caracteri- concentraciones de Na+ como de K+ en la
membrana celular, que desempeña una fun - zación de una nueva enzima, se requiere una reacción (Fig. 1). Aunque ambos cationes
ción en una diversidad de procesos biológi- cuidadosa titulación de los distintos compo- eran claramente necesarios para una acti-
cos. Ya se sabía con certeza que la concen- nentes de la reacción. Antes de hacerlo, uno vidad significativa, algo notable ocurría a
tración de muchos iones es distinta dentro debe asegurarse de que el sistema esté libre altas concentraciones de cada catión . A la
de la célula y fuera de ésta. Por ejemplo, la de fuentes de contaminación externas. concentración óptima de Na+ y K+, la ac-
célula mantiene una baja concentración in- Para estudiar la influencia de los distin- tividad de la ATPasa alcanzaba un máxi-
tracelular de sodio (Na+) y una elevada con - tos cationes, incluidos los tres que resultan mo. Alcanzado este máximo, el incremento
centración intracelular de potasio (K+), con críticos para la reacción -Na+, K+ y Mg 2+-, adicional de la concentración no afectaba
respecto a la que se encuentra en el exterior Skou debió asegurarse de que no hubiera la actividad de la ATPasa. El Na+ se com-
celular. De algún modo, la membrana puede iones contaminantes en la reacción prove- portaba, así, como un sustrato enzimático
regular las concentraciones salinas intrace- nientes de otra fuente. Por lo tanto, todos clásico, de modo tal que al incrementar la
lulares. Además, se ha observado el movi- los tampones empleados en la purificación cantidad, se alcanzaba una actividad máxi-
miento de iones a través de las membranas de la enzima se prepararon a partir de sales ma hasta una concentración de saturación
celulares, lo que sugiere que existe cierto tipo que carecían de estos cationes. Una fuente a la cual la actividad alcanzaba una mese-
de sistema de transporte. Para mantener las adicional de cationes contaminantes era el ta. El K+, por otra parte, se comportaba de
concentraciones intracelulares normales de sustrato ATP, que contiene tres grupos fos- modo distinto. Cuando la concentración de
Na+ y K+, el sistema de transporte no pue- fato, que aporta una carga global negativa. K+ se incrementaba más allá de lo óptimo,
Puesto que las soluciones de ATP almacena- la actividad de la ATPasa declinaba. De este
de descansar en la difusión pasiva porque
das, con frecuencia, incluían un catión para modo, mientras se requería K+ para la ac-
am bos iones deben movilizarse a través de
equilibrar la carga, Skou convirtió el ATP tividad óptima a elevadas concentraciones ,
la membrana en contra de sus gradientes de
utilizado en sus reacciones en la forma áci- se inhibía la enzima. Skou consideró que la
concentración . Este proceso, que requiere
da, de modo que al equilibrar los cationes no enzima debía tener sitios de unión separa-
energía, se denominó transporte activo.
se afectaran sus experimentos. Una vez que dos para Na+ y K+. Para la actividad óptima
En el momento de los experimentos de Skou ,
obtuvo un ambiente bien controlado, podía de la ATPasa, ambos deb ían estar llenos. Sin
el mecanismo del transporte activo aún no
caracterizar la actividad enzimática. Estas embargo, a elevadas concentraciones de K+,
estaba claro. Sorprendentemente, Skou no
precauciones fueron fundamentales para su éste competiría por el sitio de unión Na+ y
tenía in tención de ayudar a esclarecerlo. En-
descubrimiento. conduciría a la inhibición enzimática. For-
co nt ró la ATPasa Na+/K+ por accidente, en
Skou mostró, en primer lugar, que su muló la hipótesis de que esta enzima estaba
su b úsqued a de una actividad enzimática
enzima podía, de hecho, catalizar la escisió n implicada en el transporte activo, es decir, el
ab un da nte fác ilmente medible, asociada con
de ATP en ADP y fosfato inorgánico. Lue- bombeo de Na+ hacia el exterior de la célula
mem bra nas lip ídicas. Un estudio reciente
go, pasó a o bservar las condiciones óptimas acoplado a la importación de K+ al interior.
había m o st rado que las membranas deriva-
para esta actividad; para ello, varió el pH de Los est udios posteriores probaron que eSt a
das de los axones de calamar conten ían una
la reacción , así como las concentraciones de enzima era, de hecho, la bomba que cataliza -
en zima asociada a la membrana, que podía

Tropezando con el transporte activo 515

 •

(a) 40 (b) 40
Mg 6 m M/1
K 120 mM; 1

1<. 200 rnM / I

30 30

K 3 mM/ 1
0. 0.
~ 20 C) 20
:l..

Mg 6 mM/ 1

10 10

KO mM/ 1
NaCI O mM/ 1

20 40 60 o
80 100 120 o 50 100 150 200
KCI mM/1 NaCI mM/1

Demostrac ión de la dependenc ia de la actividad de la ATPasa Na+/K+ en enzima aumenta hasta un máximo y luego se nivela. Esta gráfica demuestra
la concentrac ión de cada ion. La gráfica de la izquierda muestra que al incre- también la dependenc ia de la actividad en los bajos niveles de K+. (AdaptadodeJ
mentar el K+, se conduce a una inhibición de la actividad de la ATPasa. La gráfica Skou, 195 7, Biochem. Biophys. Acra 23:394.)
de la derecha permite observar que al incrementarse el Na+, la actividad de la

ba el transporte activo. Este hallazgo fue tan del transporte activo a nivel molecular. ¿De qué por Na+ y K+ en todas las etapas, obtuvo resul-
estimulante que Skou dedicó sus investiga- manera Skou supo que debía probar tanto el tados daros y reproducibles.
ciones posteriore s al estudio de esta enzima Na+ como el K+? En su conferencia Nobel de El descubrimiento de la ATPasa Na+/K+
que nunca empleó como marcador, como 1997, explicó que en sus primeros intentos para produjo un impacto enorme en la biología
inicialmente se propuso. caracterizar la ATPasa no tomó precauciones de la membrana y permitió una mejor com-
para evitar el empleo de tampones y las solucio- prensión del potencial de la membrana . La ge-
nes de almacenamiento de ATP que contenían neración y la interrupci ón del potencial de la
Discusión Na+y K+. Al evaluar los resultados curiosos y no membrana forma la base de muchos procesos
reproducibles que obtenía, se dio cuenta de que biológicos que incluyen la neurotransmisión,
El hallazgo de Skou de que una ATPasa de las sales contaminantes podían estar ejerciendo el acoplamiento de energía química y eléctri-
membrana empleaba tanto Na+ como K+ como influencia en la reacción. Cuando repitió los ex- ca. Por su descubrimiento fundamental, Skou
sustratos fue el primer paso de la comprensión perimentos , esta vez evitando la contaminación recibió el premio Nobel de Química en 1997.

516 CAPITULO 11 • Transporte de iones y moléculas pequeñas a través de la membrana