INVESTIGACIÓN PARA LA PRACTICA 2 DE

MICOLOGÍA
“MORFOLOGÍA DE LOS HONGOS”

1. Características generales de los hongos filamentosos: Son estructuras

cilíndricas parecidas a tubos, pueden tener o no tabique o septos en número
variables, son septados o cenocíticos y poseen pequeños poros, su elemento
primario es la hifa o filamento, según las formas que adopten las hifas pueden
ser: vesiculosas, nodulares, pectinados, en raqueta, en candelabro fávico etc.
al conjunto de hifas, ya unidas o entrelazadas se les denomina micelios,
poseen micelios: aéreos o reproductivos que alojan las esporas y micelios
vegetativos o nutritivos por donde absorben el alimento, las colonias se
desarrollan en el micelio aéreo o reproductivo, sus colonias según género y
especie son de diferentes formas (algodonosas, pulverulentas, cerebriformes,
crateriformes, etc.) o colores: rojo, carmelita, violeta, verde, amarillo y otros.
2. ¿Como están compuestos los hongos filamentosos? se caracterizan por tener
un soma vegetativo (talo) similar a las plantas, filamentos microscópicos
continuos más o menos alargados y ramificados con paredes celulares
definidas, la mayoría, constituidas por quitina, dispuestas en microfibrillas
como la celulosa, además de otros polisacáridos como mananos, galactanos y
quitosán reemplazan a la quitina en algunos grupos, con una la pared celular
formada por carbohidratos (80-90 %), y son las proteínas, los lípidos,
polifosfatos e iones inorgánicos el material cementante
3. Tipos de hifas de los hongos filamentosos:
 Hifas generativas: generan estructuras fértiles, con paredes delgadas,
ramificadas, septadas con fíbulas presentes o ausentes.
 Hifas esqueléticas: aseptadas, no ramificadas, con pared gruesa, hialinas o
coloreadas.
 Hifas conectivas o envolventes: aseptadas, paredes gruesas, ramificadas y
extremos acuminados.
4. Definición de micelio: es una estructura de los hongos de apariencia similar a
una raíz, consistente en una masa de hifas ramificadas y de textura como de
hilo, que forman la parte vegetativa de los hongos pluricelulares como las
setas y los mohos.
5. Clasificación de los micelios:
 Micelio no tabicado
Clase ZIGOMICETES: producción de espora de resistencia de origen sexual
llamado zigospora. Micelio filamentoso continuo o cenocítico. Reproducción

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 asexual a través de esporangios con esporangiosporos móviles o inmóviles
(pocas especies con conidios).
 Micelio tabicado
Clase ASCOMICETES: reproducción sexual por medio de ascosporas.
Reproducción asexual diversa por gametos y varios esporos.
Clase BASIDIOMICETES: reproducción sexual por medio de basidiosporos.
Clase DEUTEROMICETES: (Hongos imperfectos); reproducción asexual
solamente. Produce varios tipos de esporos vegetativos.
6. Termino de levadura: El término levadura se refiere básicamente a un grupo
de hongos unicelulares, donde las hifas y/o pseudohifas pueden o no estar
presentes y tienen una fase sexual perfecta o teleomorfa.
7. Características generales de las levaduras: Son importantes porque pueden
descomponer sustancias orgánicas mediante la fermentación y producir
nuevas sustancias, solo se considera como levaduras «verdaderas» a
aquellas que pertenecen a la clase Ascomycota, pueden unirse entre sí y
formar cadenas, una de las más conocidas es la Saccharomyces cerevisiae,
empleada para producir vino, cerveza, pan, antibióticos, hidromiel y otros
productos, se reproducen asexualmente por gemación y sexualmente
formando ascosporas o basidioesporas, son organismos fáciles de modificar
genéticamente, por lo que permite realizar estudios en ellas como los de
proteínas recombinantes, son eucariotas porque presentan su material
genético en el interior de un núcleo, son unicelulares, crecen en hábitats
dulces como frutos, flores y corteza de los árboles, en la industria alimenticia
se comercializa la levadura prensada o deshidratada.
8. Identificación de las levaduras: La identificación de las levaduras se puede
llevar a cabo atendiendo a cuatro criterios diferentes: morfológicos,
bioquímicos, inmunológicos o genéticos. Los criterios morfológicos pueden
ser, a su vez, macro o microscópicos.
9. Crecimientos de hongos en agar:
 Agar Sabouraud Dextrosa: es un medio de cultivo empleado para el
aislamiento de hongos patógenos y no patógenos. Es un agar peptona
suplementado con dextrosa, las peptonas proporcionan compuestos
nitrogenados y la dextrosa proporciona la fuente de energía.
 Agar papa dextrosa: al igual que el agar Sabouraud es ampliamente
usado en el aislamiento de hongos, es una infusión de papa como fuente
de almidones y la dextrosa es la fuente de energía, puede ser
suplementado con antibióticos para inhibir el crecimiento bacteriano.
 Agar mycosel: es un medio selectivo que contiene peptona y dextrosa,
además, tiene cicloheximida que inhibe el crecimiento de hongos
ambientales y cloranfenicol que inhibe a la gran mayoría de Gram

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 positivos y negativos, se emplea principalmente para el aislamiento de
dermatofitos.
 Agar de infusión de cerebro-corazón: es un medio de cultivo rico en
minerales, nitrógeno, carbohidratos y vitaminas, se le puede adicionar
antibióticos para hacerlo selectivo, este medio habitualmente se emplea
para enfermedades fúngicas sistémicas o invasivas.
7. Características macroscópicas de las colonias de hongos filamentosos y
levaduriformes: En la práctica, los hongos filamentosos y las levaduras también
se diferencian en el laboratorio en dos grupos según el aspecto macroscópico
de sus colonias: las levaduras forman colonias húmedas, cremosas, opacas o
pastosas, y los hongos filamentosos producen colonias algodonosas, lanosas o
pulverulentas.
8. Aspectos a considerar en la identificación de los hongos de cultivos puros: La
identificación se basa fundamentalmente en el análisis de una o dos regiones
del dna ribosómico: secuenciación de los dominios d1/d2 del gen 28s rrna y/o
de la región its (espacios intergénicos its1 e its2 y que incluye el gen 5,8s rrna).
Su comparación con las secuencias disponibles en las bases de datos públicas
permite asignar las cepas a una especie concreta cuando el porcentaje de
homología de sus secuencias es superior o igual a 99% (kurtzman y robnett,
1998) (kurtzman, 2014). Adicionalmente, la secuenciación de otros genes como
actina, β-tubulina y/o factor de elongación de la traducción 1α puede ofrecer un
mayor nivel de resolución en determinados grupos de microorganismos. El
análisis de dichas secuencias permite establecer relaciones filogenéticas y
mejorar la identificación a nivel de especie en aquellas especies donde las
regiones del dna ribosómico no son suficientemente resolutivas. Los genes
secuenciados dependen del taxón al que pertenece el aislado.
9. Tecnicas de estudio utilizadas en la identificacion de hongos:
 Identificación directa a partir de muestras de orina:La orina es una de
las muestras que mejor se ajustan a las condiciones ideales para trabajar
con EM MALDI-TOF sobre muestra directa. Es un líquido estéril en
condiciones fisiológicas, la carga bacteriana en la orina infectada es alta en
la mayoría de los casos, y las limitaciones en cuanto al volumen de muestra
y a la obtención de nuevas muestras si es necesario, son mínimas. Se han
publicado estudios con resultados excelentes, con concordancias en la
identificación que llegan al 90-95% en comparación con los sistemas
automatizados. Se han descrito diferentes protocolos de procesamiento de
muestras, coincidiendo todos ellos en la necesidad de un cribado previo
(citometría de flujo, tinción de Gram) para discriminar entre muestras
positivas y negativas, y limitar el uso de la EM a las muestras inicialmente
positivas. Con pequeñas variaciones, la preparación de las muestras suele
consistir en someterlas a una serie de centrifugaciones y lavados con agua

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 desionizada, llevando a cabo posteriormente el procedimiento convencional
de la EM MALDI-TOF. Se han realizado modificaciones incorporando a la
alícuota de la muestra SDS al 10% para mejorar la liberación de las
proteínas, o Tween-80 para mejorar los resultados. Los resultados
obtenidos suelen ser mejores con gramnegativos que con grampositivos y
hongos, mejorando mucho la fiabilidad cuando los recuentos son elevados,
por encima de 105UFC/mL.
Un inconveniente de este método ha venido siendo la necesidad de llevar a
cabo el estudio de sensibilidad mediante la metodología convencional. Un
estudio reciente sugiere que, una vez obtenida la identificación por EM
MALDI-TOF, el mismo sedimento se puede usar para realizar un
antibiograma disco placa con excelentes resultados, lo que permite reducir
en 24 h el estudio completo. El importante cambio organizativo que la
introducción de esta metodología supone, y el que se trate de infecciones
en las que, con frecuencia, adelantar unas horas el diagnóstico no es crítico
para el manejo del paciente, han hecho que el diagnóstico de la infección
urinaria mediante EM MALDI-TOF no haya tenido la penetración que ha
tenido, por ejemplo, en el caso de los hemocultivos. Es necesario lograr
tanto una mayor sensibilidad como una mayor normalización de los
métodos para plantearse su introducción en la rutina clínica.
 Identificación directa a partir de hemocultivos: La instauración de un
tratamiento empírico correcto es decisiva en la evolución de las
bacteriemias. La probabilidad de que el tratamiento instaurado sea correcto,
será mayor cuanto más exacta y concreta sea la información que seamos
capaces de proporcionar con rapidez. En este aspecto, la posibilidad
ofrecida por la EM MALDI-TOF de obtener una identificación fiable en un
corto periodo de tiempo tras la positivización del hemocultivo supone un
avance evidente. Se han descrito numerosos protocolos de procesamiento
del hemocultivo (centrifugación diferencial, lisis celular y extracción de
proteínas por métodos químicos, separación mediante gel…). La mayoría
de ellos están basados en la lisis y eliminación de los componentes
celulares, bien mediante centrifugaciones y lavados, en los que se utilizan
diferentes compuestos como saponina, cloruro de amonio o SDS, o bien
mediante el uso de tubos con gel separador de suero y activador de la
coagulación. En definitiva, lo que se busca con estos métodos es aislar y
concentrar los microorganismos hasta alcanzar al menos 105–107UFC/mL,
concentración a la cual la cantidad de proteínas es suficiente para generar
perfiles adecuados en la EM MALDI-TOF. En el caso de los hemocultivos
existe un procedimiento comercial homologado (Sepsityper, Bruker
Daltoniks GmbH, Alemania), consistente en la adición de una solución de
lisis a una alícuota de 1ml del hemocultivo, tras lo cual la muestra es
sometida a varios pasos de lavado y centrifugación y, finalmente, a una
extracción convencional con etanol y ácido fórmico. Los resultados del

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 procesamiento directo de hemocultivos son en general buenos, con
porcentajes de identificación correcta del 80-90%, aunque con algunos
matices. La identificación de los gramnegativos suele ser correcta en el 90-
95% de los casos, mientras en grampositivos es mucho más heterogénea,
oscilando entre cifras similares a las de gramnegativos y cifras en torno al
50%. Dentro de estos, plantean problemas de fiabilidad sobre todo los
estreptococos del grupo viridans y los estafilococos no productores de
coagulasa. Los resultados en casos de fungemia, en los primeros estudios,
eran decepcionantes. Una correcta extracción, indispensable en este caso,
lleva a cifras de identificación superiores al 90%, homologables con las
obtenidas en bacteriemias. Ha de tenerse en cuenta la posible repercusión
de determinados componentes de algunos hemocultivos, como el carbón
activo, que puede interferir la identificación. Asimismo, un tiempo de
incubación prolongado del hemocultivo puede repercutir negativamente en
los espectros obtenidos. No obstante, puesto que el procedimiento habitual
es realizar la EM en, como máximo, unas horas a partir de la positivización,
y más del 80% de los hemocultivos positivos significativos lo son en las
primeras 48 h, el impacto clínico de este aspecto no parece trascendente. A
la hora de valorar la heterogeneidad de los porcentajes de identificación
correcta en los hemocultivos, ha de tenerse en cuenta que no existe un
criterio homogéneo respecto a cómo valorar los scores obtenidos. Algunos
autores consideran una identificación correcta con valores >1,7. Otros
disminuyen esta exigencia hasta 1,5, pero incluyen requisitos como que la
identificación se repita en las dos o tres primeras posiciones de la lista de
identificaciones posibles, o que entre las dos primeras opciones que ofrece
la EM MALDI-TOF exista una diferencia de score de al menos 0,3 puntos.
En general, no somos partidarios de reducir el nivel de exigencia en la
identificación correcta en los hemocultivos, ya que la existencia de un
mayor porcentaje de «no identificaciones» supondrá siempre un menor
riesgo, desde el punto de vista clínico, que la proliferación de
identificaciones incorrectas, que podrían condicionar tratamientos
inadecuados. En cuanto a la utilización de métodos comerciales de
procesamiento, como Sepsityper, los resultados en general son similares en
relación con los métodos de procesamiento manuales. Cada laboratorio
deberá priorizar entre la mayor normalización y el ahorro en tiempo de
procesamiento que propician estos métodos, o el ahorro económico (en
torno a 1 €/muestra) que supone la utilización de un método manual. En
conjunto, la EM MALDI-TOF es un método rápido y fiable para la
identificación directa de microorganismos en hemocultivos. Su combinación
con métodos que permiten detectar mecanismos de resistencia a
determinados antimicrobianos, permite ofrecer una información clínica
valiosa en un tiempo sensiblemente inferior (24-48 h menos) al requerido
por la metodología convencional. Probablemente el principal punto a

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 dilucidar, en este momento, es la forma de integrar esta nueva actividad en
los laboratorios de Microbiología, de modo que se optimice la información
ofrecida sin suponer una sobrecarga excesiva en servicios, por lo general,
no precisamente sobrados de personal técnico y con estructuras horarias
muy diversas.
 Identificación directa a partir de otras muestras: El número de estudios
relativos a la aplicación directa de la EM MALDI-TOF a otras muestras
biológicas es más reducido. Como se comenta en otro apartado, la utilidad
de la EM MALDI-TOF en estas muestras viene determinada por varios
factores: por una parte, la muestra debe proceder de un área estéril en
condiciones fisiológicas, y en la que la infección, cuando aparezca, tienda a
ser habitualmente monomicrobiana. Por otra parte, son cruciales tanto la
carga bacteriana presente en la muestra, como el volumen de muestra
disponible para el estudio. Ello hace que muchas muestras distintas de la
orina y el hemocultivo planteen problemas, por el bajo volumen
habitualmente disponible (LCR, exudados purulentos), por la baja
concentración de microorganismos (LCR, líquido peritoneal en pacientes
sometidos a diálisis peritoneal) o por la presencia de cantidades
importantes de proteínas no bacterianas que pueden alterar los perfiles o
interferir en la ionización de las proteínas bacterianas (exudados
purulentos). La baja sensibilidad en aquellos productos en los que la carga
bacteriana no es muy alta, y el volumen de muestra disponible, con
frecuencia limitado, hacen que, en general, sean preferibles para el
diagnóstico rápido las técnicas moleculares, aun con la limitación de que el
abanico de microorganismos detectables en un solo test es mucho menor
que con la EM MALDI-TOF. Se han comunicado ocasionalmente
diagnósticos etiológicos de meningitis bacterianas por EM MALDI-TOF
directa sobre LCR, pero un estudio comunicado al 21 erECCMID indicaba
que, sobre 183 muestras de LCR, de las que 14 fueron positivas por el
método convencional, ninguna fue positiva por EM MALDI-TOF directa
sobre muestra, lo que reafirma el hecho de que, desde el punto de vista de
la sensibilidad, la EM MALDI-TOF no puede competir con la técnicas
moleculares. En otros tipos de muestra la experiencia es muy limitada, no
existen protocolos publicados ni datos respecto a sensibilidad y
especificidad, y por tanto la utilización clínica de la EM MALDI-TOF, en este
momento, no es pertinente.
 Medios cromogénicos: Desde la aparición del primer medio cromogénico
(MC), hace más de 30 años, se han convertido en una herramienta muy útil
para el aislamiento diferencial de microorganismos patógenos. Existen
actualmente multitud de MC comercializados para la identificación de
bacterias y hongos, así como para el estudio de algunos mecanismos de
resistencia a antimicrobianos. El fundamento de estos medios en la
inclusión de un sustrato cromogénico que, al ser hidrolizado por una enzima

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 específica presente en el microorganismo, da lugar a una colonia de
coloración característica, permite su diferenciación. Con frecuencia son
además medios selectivos, que inhiben en mayor o menor medida el
crecimiento de otros microorganismos, favoreciendo la detección de las
colonias coloreadas. Los principales sustratos de los MC comerciales son
derivados indólicos que pueden ser hidrolizados por galactosidasas o
glucosidasas, produciéndose derivados poco tóxicos y que no inhiben el
crecimiento bacteriano.
10. Relación que existe entre el crecimiento de los hongos con el diagnostico
presuntivo de hingis filamentosos y levaduras: En alimentos ácidos y en los de
baja actividad de agua, los hongos filamentosos y las levaduras crecen con mayor
rapidez que las bacterias provocando importantes pérdidas por alteración de frutas
frescas, vegetales, quesos, productos derivados de los cereales, alimentos
salazonados y encurtidos, así como en los alimentos congelados y en los
deshidratados cuyo almacenamiento se realiza en condiciones inadecuadas.
En alimentos no ácidos que conservan humedad, los hongos filamentosos y las
levaduras crecen más lentamente que las bacterias y por ello pocas veces
determinan problemas en tales alimentos.
En los alimentos frescos y en los congelados, pueden encontrarse números
reducidos de esporas y levaduras, pero su presencia en estos alimentos es de
escaso significado.
Las levaduras crecen más rápidamente que los hongos filamentosos, pero con
frecuencia junto a ellos. Mientras que los hongos filamentosos son casi siempre
aerobios estrictos las levaduras crecen tanto en presencia como en ausencia de
oxígeno.

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