BIOLOGIA Son eU WNAcidos nucleicos: DNAyRNA . Laura Margarita Vera Arias, Isabel Alicia Loya Aguilar y Oscar Francisco Chacén Camacho INTRODUCCION | descubrimiento de que la informacién genética es codificada alo largo de una molécula polimérica compuesta de cuatro nucledtidos fue sin duda el evento cientifico mas importante del siglo xx. Esta molécula es el acido desoxirribonucleico (DNA), le cual se organiza en genes, los que a su vez son las unidades de la herencia. Esta informacion genética contenida en el DNA se trans- cribe en otro tipo de acido nucleico denominado acido ribonuclei- co mensajero (mRNA) que participa directamente en la sintesis de Proteinas. En este capitulo se describe la estructura basica de estos acidos nucleicos, como base fundamental para el conocimiento de °lros procesos genéticos moleculares. HISTORIA DE LOS ACIDOS NUCLEICOS Practicg . Clicamente desde que el humano existe ha sido consciente de la UNci6 ° : aoe ae on de reproduccién como un fendmeno tinico del mundo de los Seres vi a Bene Fe fuer Vos. Seguin algunos escritos de civilizaciones antiguas, fueron °S filésofos prie ‘ : a. griegos clsicos quienes primero intentaron exPlics OE.. problema del origen y reproduccién de los seres vivos, Sin ¢ BIOLOGIA MOLECULAR HUMANA no fue hasta el siglo xvi cuando se obtuvieron las bas cientificas como respuesta de estos cuestion: 2014; Guevara, 2004). E] 22 de julio de 1822, en Heinzendorf, antigua Silesia (hoy Republica Checa), en el seno de un modesto hogar d, tores, nacié Johann Mendel. Entre 1856 y 1863, Mendel ex, con unas diez mil plantas, en un gran trabajo de investiga, fica donde la practica siempre fue la guia ineludible de la t vara, 2004). Hoy dia, sus trabajos siguen constituyendo una herencia conocida como monogénica. El médico suizo Friedrich Miescher aisl6 por primera vez los acidos nucleicos en 1869, trabajando en las ciudades alemanas de Tubingen y Leipzig. Extrajo un material de una fraccién nuclear de leucocitos presentes en pus obtenido de vendajes quirtirgicos, al que llamo nucleina. Esta era una sustancia albuminoide y fuertemen- te acida, combinada con una base nitrogenada que Miescher crista- lizé y amo protamina (Guevara, 2004). En 1889, Richard Altmann obtuvo el primer material libre de proteina, al cual dio el nombre de “acido nucleico”. Segan sus palabras, “las nucleinas son sustancias ricas en fésforo localizadas exclusivamente en el nucleo celular” (De Necochea, 2004). Posteriormente, se llevaron a cabo estudios para la identifi- cacién de los componentes de los dcidos nucleicos. La guanina (G) habia sido aislada del guano; sin embargo, su relacién con los acidos nucleicos se establecié hasta 1910. Albrecht Kossel y A. Neumann aislaron la adenina (A) y la timina (T) de la glandula del timo. Ascoli y Steudel descubrieron la citosina (C) y el uracilo (U). La ribosa y la desoxirribosa fueron aisladas por Levene en 1909 y 1930, respectiva- mente. Robert Feulgen identificé que el Acido desoxirribonucleico S¢ localiza en los cromosomas (De Necochea, 2004). En 1928, Frederick Griffith, haciendo experimentos en Prev mococcus, descubrié el factor transformante. Esta bacteria pUue : matar a los ratones gracias a la virulencia de la bacteria (polipeptid® capsular) y su aspecto se describio como cepa lisa (virulenta 0 »” . ar, ‘ Primeras ita amientos (A ie. Ceveg 0, aUStriacg © agricul. Perimenty Ci6n cient. €oria (Gue. las bases de —ACIDOS NUCLEICOS OMA Y ANA griamtes 4 la bacteria no producen el polipéptido capsular yale a ee ga rugos avirulenta o R) y se consideran avirulentas porque es. Cuando las bacterias li alos raton as se tratan con calor apacidad virulenta y al inyectarse al animal este sobre Jo esta bacteria tratada con calor se combina con la orto lac m an ysa se produce un efecto tal que el raton muere, y se recu a ruge ' avirulenta en el raton. Alguna propiedad de la bacteria asaba a la bacteria avirulenta produciendo un wl pat : vglabactet! activa por caloi se Pp 7 yo de transtor Ma aeste factor se le denominé “factor transfor sect 7 ote” (Figura | ) (Griffith, 1928). im g eumateral en « «2s bacterianas muertas puede transformar genéticamente gus bacters “NS va i Cepas 3 muerta por calor “"™ Eq Li eae wo. = — i | Cul S vives Sin células $ vivas Sin células S vivas |_snoorarén en coraz6n en coraz6n en Liclosoe una sustancia quimica de una célula es capaz d& transformar genéticamente a otra célula. erimento de Griffith. Identificacion Figura 1.1. Exp th, 1928). de un factor transformante (Griffit En 1944, Oswald’, Avery y colaboradores trataron de identifi- en transformante que se encontraba en Jos neumococos tsos isar ae s con calor, Trataron estos neumococos con sete lode a su 7 acteria, y obtuvieron un lisado que contenta po! isacari Perficie bacteriana, proteinas, RNA y DNA de los neumococos4 oe lisos. Trataron a esos lisados con diversas enzimas (Polisacarig Soe : ee eee E a SIL, proteasas -tripsina y quimiotripsina~, Rnasa y DNasa), Nic no de esos tratamientos modificd la transformacion de las célulage BIOLOGIA MOLECULAR HUMANA. ' Tu. gosas (R) a células lisas (S), excepto el tratamiento con DNasa, con} cual se demostré que el factor transformante era el DNA (Figura 1 » (Avery et al., 1944). Determinando que el DNA es el material hereditario aD | @ Lipidos Célula S y DNA muerta Ho's por calor I 2. Tratamiento con enzimas para destruir 2 ya sea proteinas, RNA o DNA _, Asrega 4 proteinasas Sin proteina an sin DNA 3. Se afiade a cultivo con células R. Observar + + sia ocurrido transformacién al verificar 3, < 2 presencia de células S virulentas Células R Células R Células R Aparecen cellos Conclusion: la transformacién no puede cone ocurrir cuando hay desoxi-ribonucleasa; Ocurre transformacién st n Por lo tanto, el DNA debe ser el material hereditario. eee Figura 1.2. Experimento de Avery. El DNA es el factor transformante (Avery et al,, 1944), En 1952, Alfred D, Hershey y Martha Chase confirmaron, medi- ante la utilizacién de bacteridfagos e isdtopos radiactivos, que el mate- rial hereditario era el DNA (Figura 1.3) (Hershey & Chase, 1952). En la doble hélice, las dos cadenas de DNA se mantienen uni- das Por puentes de hidrégeno, entre Pares de bases de cadenas opues" ia pirimidne especifico, la purina-adenina solo se aparea con ieee nina, Mientras que la purina-guanina solo se apate4 con la pirimidina Cilosina, Por tanto, el numero de adeninas es iguere erence et aea ae ACIDOS NUCLEICOS: ONA y RNA 4 nimero de timinas, mientras el namero de guaninas y citos; también es igual. Estas son conocidas como las reglas de Genie fueron descritas por Edwing Chargaff en 1949 utilizande charge y . ca ada cromatografia para analizar | ici Jlamada cromatog' P Zar la composicién d tal, 1949). lel DNA (Char- gaff ¢ proteina [—— _ Radioactividad en cubierta Mezclar en proteica licuadora be Centrifugar —4 Infecta E.coli no marcada Proteina Mezclar en 2 . LS © Radioactividad decélula @p . Centri = ’*P Infecta E. coli os Fago no marcada ? Reproduccién @ Figura 1.3. Experimento de Hershey y Chase. Se confirma que el DNA es el material hereditario (Hershey & Chase, 1952). Los bacteriéfagos son virus que infectan a las bacterias como la Es- cherichia coli (E. coli). La parte externa del virus se le denomina capside y es rica en proteinas, mientras el DNA viral se encuentra dentro del virus y es rico en fosfatos. A su vez, las pro- teinas contienen azufre (S) que no contiene el DNA, y el DNA contiene fésforo (P), elemento que no se encuentra en las proteinas. Ellos utilizaron radionucledtidos como marcadores para marcar el azufre (8) y fosforo (?2P) en los bacteriéfagos. Cuando en laboratorio se incuban por Un tiempo los bacteridfagos y las bacterias, se mezclan los dos. Posteriomente, se centrifugan £n un tubo de ensayo y pueden verse claramente dos partes, una superior de liquide deno- minado sobrenadante, y una inferior que se denomina sedimento, que consiste en el total de CElulas(bacterias) que resultaron de la centrifugacién. El experimento demostré que la parte {e Sobrenadante se marcaba con "5, por lo mismo era rico en proteinas, mientras que el sedi- He se encontraba marcado con ”P, por tanto, las bacterias se encontraban marcadas con €1"® delvirus. onclusién al marcase las bacterias con #P, el DNA del viruses el que infecta 2 la bacteria transmitiendo su material genético (DNA).6 os BIOLOGIA MOLECULAR HUMANA. = ‘i imi -fisicg comienzos de los afos cincuenta, la quimica: lind at abrié una linea de investigacion sobre a fetus estructura del DNA mediante difracci6n ‘ e ret 7 7 cont el DNA podia hallarse en dos formas helicoidales distintas Con los fostatos hacia el exterior (las formas que hoy conocemos con DNa. A y DNA-B) (Franklin & Gosling, 1953). En 1952, Alexander Tod demostré que los enlaces fosfodiéster 3’-5’ unen los nuclestidos de} DNA (Claros, 2003). En 1953, James Watson y Francis Crick publicaron en la Tevista Nature un articulo que decia “ los dcidos nucleicos que es c cipales del diagrama de rayo: Rosa. © de la tr que Hemos formulado una estructura para ompatible con las caracteristicas prin- s X y con los principios 8enerales de |a ce, antiparalela y osalind Franklin y de Edwing Chargaff (Watson & Crick, 1953), En 1956, Arthur Kornber, tractos celulares de bacterias ydACIDOS NUCLEICOS: ONA ¥ RNA método Crecimiento de bacterias en medio - Transferte algunas bactertas 'N (pesado) ‘a medio "N (ligero) Omin 20min 40min Todas las muestras 0, 20 minutos (posterior a una nites « bacterias a a. ne t vay ronda de aplicacion y ser a i io igero siypey 40 minutos (dos rondas) (om | DNA “NAN oun it ‘ Parental 1" generacién 28 generacién (pesado) —_(intermedio) _(mitad ligero y mitad intermedio) 1 Penne Resultados RATS ROO Posterior a 2 genesociones, la PRA mitad del DNA era intermedio y cod , rire la otra mitad Unicamente ligera; on sd sin DNA pesado Cadena nueva “N > se puede observar si cada molécula de DNA contiene un molde A, por lo que la replicacién de DNA es semiconservativa Figura 1.4. Experimento de Meselson y Stahl. Ellos demostraron el cardcter semiconservativo de la replicacion del DNA. En un tiempo basal (cero) incubaron bacterias con nitrogeno 15 (5N onitrogeno pesado). Al centrifugar en un tubo de ensayo el DNA obtenido se marcaba con el nitrégeno pesado produciendo en el tubo de ensayo una banda pesada que se asentaba hasta el fondo. Posteriormente, esas bacterias basales se incubaron, pero ahora con nitrogeno 14 (“No nitrégeno ligero) durante 20 minutos permitiendo un ciclo de replicaci6n. Se centrifugo en un tubo de ensayo y pudo verse una banda intermedia (hibrida), y se dedujo que una de las dos cadenas de DNA tenia una hebra pesada (originaria del DNA del estado basal marcado con nitrégeno pesado) y otra hebra ligera (que debia ser la hebra recién sintetizada porque se marcaba con nitrogeno ligero). En ese momento se dedujo que siempre hay una hebra del DNA original (marcado con nitrogeno pesado) y otra hebra nueva m este experimento se demostro el caracter semiconservativo del DNA. arcada con nitrogeno ligero. Con de Aunque el DNA debe cargar la informacion para la sintes mplado debido a que la tra- Proteinas, estaba claro que no era el tet : duccién se leva a cabo en el citoplasma; entonces se penso que la informacion debia pasar a una segunda molécula que se moviera del nucleo al citoplasma para que sirviera de templado, yse fijo la aten- cién en un segundo acido nucleico, el RNA. Torbérns, Casperson y—_—_ 8 uecuuar HUMANA uel RNA residia en el citoplas_ erto a cadena de DNA podria ser. ma y era fact ey emar und cadena de RNA complementaria De vir de molde para formal pid, en 1956, Gore a DNA esta forma Francis asand0 la informacion en el citoplasma pasando por RNA y este a olipéptidos (Watson, 1963). A esto se puede formar una cadena i de la genctica, y actualmente se le le conocid como dogma cen| I, informacion genética y ha sido mo. prefiere llamar como flujo de i la retrotr nscripcion, replicacién dificada con la Ino cos Contemporaneamente, en 1955, os ae a eo gue para ‘a sintesis de proteinas tenia que Serum ae adaptadora de RNA que atara a los aminoici- dos y que fuera capaz de interaccionar con las bases sobre el RNA. Ese adaptador fue identificado pocos afios después y se le denomi- no RNA de transfererencia (tRNA) (Crick, 1958). Tempranamente, en los aftios 1960, Charles Yanosfsky y Sydney Brenner, junto con la ayuda de Crick, utilizando un elegante andlisis de mutaciones sobre proteinas bacterianas, establecieron que grupos de tres nucledtidos (codones) son utilizados para especificar aminoacidos individua- les (Yanofsky et al., 1964). En 1961, Marshall Nirenberg y Heinrich fa diferentes polinuclestidos para — nuvig Ge base para utilizar codificantes Para aminoacidos (Nitenber es ace et 1966 se revelé el codigo genético com ie oniattiash yi2s)) 0 pleto. gio.ocia M . abian descubi aboradores hi ue colaboracor sy de interpreta 4 DEFINICION Y FUNCION DE Los AciDos NUCLEICos bonos] S prima (° > una A @ (’) pa: 5 : Ogenada y ot ta diferenciarlos de otros cat Odge, 2019), nigel 8tupos fosfato (Guevara talmente fueron consideradasa ACIDOS NUCLEICOS: DNA Y RNA 9 moléculas de la herencia, ya que una molécula de DNA doble helicoi- dal lleva instrucciones para fabricar y ensamblar todos los componen- tes de un organismo vivo utilizando mecanismos mediante los cuales la informacién genética se almacena, replica, transcribe y traduce. Conforme avanzaron las investigaciones se supo que esta no iba a ser su unica funcion, determinados derivados de estas sustancias, los nucleotidos, van a tener otras funciones bioldgicas, entre las que pue- den destacarse la de servir de intermediarios en las transferencias de energia en las células (ATP, ADP y otros) o en las transferencias de elec- trones (NAD+, NADP-+, FAD, entre otras), regulacién de la actividad enzimatica, y sefales de transduccién (Galvez, 2009). Hoy dia, los acidos nucleicos no solo se consideran mensajeros 0 repositorios de in- formacion genética. Nuevas funciones y aplicaciones de estas molécu- las han surgido en los ultimos 25 afios impactando diferentes campos como: terapéutica, biologia molecular y quimica analitica. El térmi- no “oligonucledtido funcional” se acuiié en referencia a estas nuevas funciones. Algunos ejemplos de estas actividades oligonucleotidi- cas "no tradicionales” se pueden encontrar en la naturaleza, como en el caso de las ribozimas, microRNA y riboswitches, un conjunto completo de catalizadores (RNA: ribozimas, DNA: DNAzimas) y oli- gonucleotidos de reconocimiento molecular (aptameros) se han pre- parado sintéticamente, ya que pueden obtenerse utilizando técnicas de biologia molecular in vitro. ESTRUCTURA DE LOS ACIDOS NUCLEICOS Como se menciond antes, los acidos nucleicos son macromoléculas formadas por polimeros lineales de nucledtidos unidos mediante en- laces fosfodiéster. Los componentes fundamentales de los nucledti- dos son: a) dos clases de pentosas (carbohidratos de cinco carbonos) llamadas ribosa (C,H,,0,) en el dcido ribonucleico (RNA) y 2-des- “itribosa (C.H,,0,) en el acido desoxirribonucleico (DNA), cuya iferencia es la presencia de un hidroxilo (OH) adicional en el car- ono 2 de la ribosa, que altera fuertemente las propiedades de la mo- lecula; b) bases nitrogenadas de dos anillos (purinas) o de un anillooOo UUOt™~” JO sOLocta MOLECULAR HUMANA fe ‘i lve ; i rupos fosfatos (Figura 1.6) (Galvez, 2009; Gar. (pirimidinas); y c) grupos cia, 1990; Morantes, 2013). Final’ O. RNA Final 5’ ao i u sy 0. Ho Wea H Unién fosfodiéster |O- Figura 1.5. Los 4 icidos nucl lineal de ambo: elcos son polim, Ss acidos eros lineales fo) los enlace: i nucl "mados por nucleoti esta cadena S fosfodiéster. A: adenina Ba aulerda y RNA a dos. ° dos nucleic; en © citosin Nucleicos lleva a,ACIDOS NUCLEICOS: DNA Y RNA au Composicién de un nucledtido HN Nucleotido = N 0 L \ d i N HO— 0 — O OH OH 1 Fosfato Base nitrogenada (purina) Azuicar Figura 1.6. Estructura de un nucledtido. Esta formado por tres elementos: por un azucar (pen- tasa ribosa en la imagen), una base nitrogenada (puricas 0 pirimidicas) y un grupo fosfato (monofosfato en la imagen). El carbono 1 de cada pentosa (1) esta unida mediante un enlace N-glucosidico a una base nitrogenada, y el carbono 5 de las pento- sas (5’) se unen con el acido fosférico mediante enlaces tipo éster. La union de una base con una pentosa se denomina nucledsido (adenosi- na, guanosina, timidina, citidina, uridina) y la unidad formada por un nucledsido y un dcido fosférico se llama nucledtido (adenosina mono- fosfato, AMP; difosfato, ADP; 0 trifosfato, ATP). Un grupo fosfato une la posicién 3° de la pentosa con la posicién 5’ de la siguiente pentosa Mediante enlaces fosfodiéster formando polinuclestidos de cadena li- neal (figuras 1.5 y 1.7) (Galvez, 2009; Minchin & Lodge, 2019).12 ov? LECULAR HUMANA | piotoia MO! a) Base nitrogenada mT a . (8 tt o o 2 L_— nuctedsiso —— Nucledtido A Cadena plinuceoiia de ONA Cadena poinucleotiica de ANA ON Ritremo 5" KL \ Extremo 5' (S2) ° \ GY, \ A». ra nin fosfodister \ \ 0s) —— union fosfodiéster Gvemo ¥ Extremo 3 7, i= - wk LNA) Figura 1.7. La uni ay WY Un nuclegsj unién de la Pentosa ‘ : to for Sido mediante un ent. (Cesoxiribosa en ia i m3 m2 UN MUcleStid (ay. pe oe BlicOsidico, La ys ee COM la base nitrogenads fo" . 7 unid a , PeUDO BON de yo EStIMOS Se Ueno” FE UM Nucledsido con el grupo fos " PUCleStido y un pron nt"® Si Bor medio de un enlace ostodes formang lou PO Sf te, Na cadena lineal de a de otro nucledtido subya¢e” Wuclode so.Acivos NUCLEICOS: DNA Y RNA ESTRUCTURA DE UN NUCLEOTIDO Como se ha referido anteriormente, un nucledtido esta formado sor una pentosa (desox bosa o ribosa), una base nitrogenada y grupo(s) fostato(s). Describiremos de forma precisa y concisa cada uno de estos elementos, a) Pentosas Los carbohidratos (aziicar, sacaridos) son los compuestos organicos mas abundantes en el mundo y son utilizados para almacenar energia en la celula. El término surgié Porque los azticares contienen formu- las moleculares C,(H,0), que contienen abundantes carbonos que se combinan de alguna manera con agua. Se pueden clasificar de forma sencilla en carbohidratos simples (monosacaridos) y complejos (oli- gosacaridos, polisacdrido). Un monosacarido se puede definir como un polihidroxialdehido como la D-glucosa o una polihidroxicetona. A los primeros también se les denomina aldosas (“ald” es por alde- hido, osa es sufijo para los azucares), mientras a los segundos se les llama cetosas. Los monosacaridos también se clasifican de acuerdo al numero de carbonos que tengan: triosas, tetrosas, pentosas, hexosas y heptosas (Galvez, 2009; Acevedo, 2014). Debido a que los monosacaridos tienen un carbono asimétri- Co, pueden presentar dos formas, una serie D que tienen el carbono asimétrico en la parte inferior a la derecha, y la serie L que tienen el srupo OH del carbono asimétrico en la parte inferior a la izquier- da. Un monosacarido en una proyeccién lineal de Fischer, el grupo Carbonilo siempre se coloca arriba (aldosas) o tan cerca de la parte “Uperior como sea posible (cetosas). Los simbolos D y L indican la “onfiguracién de un centro asimétrico, pero no indican si el com- Puesto hace girar la luz polarizada a la derecha (+) 0a la izquierda (-) (Blas-Pastor, 2006; Bruice, 2008; Morantes, 2013). ere Los monosacaridos, principalmente los de 5 y 6 carl nos Pueden existir en formas ciclicas. Estos se forman cuando un grup i forme iacetal ‘ldehido reacciona con un grupo OH para formar un hemiaces a “mar un anillo en proyeccién de Haworth. Con esta proy 13a 14 NA Huma! oGla MOLECULAR Biot jon solo difiere en ¢| ¢. cién sol | cuya noe en la forma de cadena ‘cares ilo fos forman dos an grupo a anomérico. Los pre: no ra carbo! que ¢} fijos Q ina car nae no se le ee en torno al capone anomérico, 60 Ase carbo! la configuracion el plano, respectivamente, Nun 8 representan ‘ jo el plano o sobre ‘entacion baj tacion una orien! jemplo de una aldosa rth, La D-ribosa esun ee moa Pole oo con un anillo de cinco : fc iacetale: ; an — (Figura 1.8) (Bruice, 201 -D-r Arbon aber, 1 HCeO. : 2 on un Hoch, O 5 Hoch on OV on 0" A 7 on a I, iran 1 ‘4 + s \ i 4 on } C ry OH OH to) OH OH OH OH — sotioH D-ibosa Dribosa © Deribosa D+tibosa Figura 1.8, Estructura lineal Yciclica de la ribosa. Tienen una estructura Ciclica Parecidos al furano, Alos aziicares Con un anillo de ¢; na furanosas (nomb te que proviene di ico miembros se les denomi- carbonos), Por lo cual a la el furano, un éster ciclico de 5 -ribosa también se Je lama D-ribofura- nosa, Pentosa de] - Si uno de los 8TUpos OH esté sustituido por i" hidrogeno en los Monosacéridgg se forma un desoxiaziicar, que a © Se perdié. De ésta forma la 2-desoxirribost (Bruice, 2008), in Posicion 2 ’ ribosa) es Ja Pentosa del DNA , an inclu- T8anicos ciclicos que in ys ODparte Ro i n Compuesto, SO atomos de Nitré, No, §,A nucledsidos, nucledtidos, nucledtidos Ciclico; C1008 NUCLEICOS: OWA Y RNA jares), dinucledtidos (poderes reductores) . (mensajeros intracelu.- ses puricas tienen la estructura fundamental Nucleicos. Las ba- Las bases ppuctuclinteas derivan del anillo de . heterociclo Purina. na (A) ¥ Ia Cae (G) son purinas, yla cree La adeni- uracilo (U) son pirimidinas. La T es exclusiva a ), citosina (C) y Ues exclusivo del RNA (Figura 1.9) (Blas-P el DNA, mientras el Acevedo, 2014). S- Pastor, 2006; Galvez, 2009; 4 NH Kt : He al eer 7 wc il foe wo Ney MK " c WN, swt Sg os t 1@ 3! wee NON nT ees Pirimidina Citosina H Uracilo Timina t i 1" Noy N. a ww C7 NN 4 Nee J a \ tet, NRE — Ci | Wo sway wo SN AEX H ql | Purina Guanina ‘Adenina Figura 1.9. Bases nitrogenadas. En la parte superior de la imagen se observan las pirimidinas, mientras en la parte superior las purinas. Los puentes de hidrégeno: permiten el apareo entre bases nitrogenadas de las cadenas antiparalelas del DNA. La diferente ubicacion de grupos aceptores Y donadores de electrones da a las bases su identidad estructural unica que les permite servir como ya que los atomos de hidr6- Portadores de la informacién genética, ui Seno de los grupos amino proveen donadores de enlaces ‘ 7 No, mientras que los 4tomos de oxigeno y los Deere : le a a los aportan aceptores de hidrogeno- La adenine y i tina ee ‘omplementarias y unidas por dos puentes dem eo, como hee tela guanina y la citosina Por tres puentes “ nel RNA no existe tblecido por las reglas d¢ Chargaft Pao adenina y uracilo. timina, la commlementariedad se establece entre 15e ANA . . eT de las bases es de vital importancia Para la mentariedad com ola replicacion y la traduccion del RNA lel DNA, ast (Acevedo, 014). a interaccion de atomos de hidrg. oon creat covalentes polares que cote hidrogenos ° , i iz mos electronegativos y que pueden ser uor (F), oxi- unidos a dtomos 0 (N). Se da debido a la carga parcial positiva ae 3 a eae carga parcial negativa que tienen el F OoN, eee dos por el enlace de hidrégeno d n atrai A pesar de que los atomos so d se mantienen separados en virtud de las fuerzas de repulsi6n cau- sadas por los electrones periféricos. La formacion de un enlace de hidrégeno requiere que los tres 4tomos implicados se situen en linea recta, y esto se logra unicamente cuando los enlaces N-glicosidicos de los nucleésidos complementarios forman un Angulo menor a 90°, con una linea imaginaria que une los C-1' de ambas pentosas (Figura 1.10) (Morantes, 2013; Acevedo, 2014). 16 BIOL’ La comple estructura en proteinas geno con w we ™ o=Pp—o Figura 1.10. Puent | les i de hidrogeng de hidrogeng entre bases nj Para la unin entre adeni es nitrogenadas, Se observan dos puentes inay timina; mientras Para G y citosina A en cj doble hélice, E enlaces de hidré, Clertos medios iénicos produc Proceso lam: no entre las dos cadenas dé la © desnaturalizacié zacién permite qU°ACIDOS NUCLEICOS: DNA Y RNA la doble cadena de DNA se Separe en dos cadenas complementarias sencillas, proceso importante a nivel de laboratorio en la realizacion de una reaccion en cadena de la polimerasa (PCR) (Garcia, 1990). c) Fosfatos En la célula, pueden estar en forma libre (Pi) 0 formando parte de compuestos organicos, resultado de un enlace éster entre el Acido fosforico y un hidroxilo. En un nucleotido, el grupo fosfato esta este- rificado al mismo tiempo con dos grupos OH, formando un enlace fosfodiéster. Se pueden presentar también como difosfatos, que son muy inestables por la accién de las Pirofosfatasas; estos aparecen en nucledsidos difosfatados (ADP). Las formas trifosfatadas no apare- cen en forma libre en la célula, estan basicamente en forma de nu- cledsidos-trifosfatados (ATP) (Morantes, 2013). ESTRUCTURA DEL DNA Basados en las evidencias descritas anteriormente en este capitulo, incluyendo las reglas de Chargaff, la unién de nucledtidos por en- laces fosfodiéster y, por supuesto, la demostracién de la estructura helicoidal por difraccién de rayos x, todos ayudaron a la construc- cién del modelo de DNA de Watson y Crick en 1953. Este duplex es llamado forma B del DNA, que es la estructura mas frecuente yla que se describira a continuacion. Una estructura de DNA B confiere ventajas tanto para la accesibilidad a la informacién como para el €mpaquetamiento. Este ultimo determina las propiedades fisicoqui- micas dependientes de la secuencia del DNA, por ejemplo, su rigidez, Susceptibilidad a la separacién de cadenas que es importante en los Procesos de replicacién del DNA y transcripcién a RNA (Guevara, 2004; Galvez, 2009; Morantes, 2013). De acuerdo con su estructura, el DNA se estudia con la siguien- 'e clasificacién: a) Primaria. Secuencia de nucledtidos de una cadena lineal. Cada nuclestido es unido por enlaces fosfodiéster entre el gru- Po JOH de un d-NTP (d-ATP, d-GTP, d-CTP, d-TTP) y el 1718 BIOLOGIA MOLECULAR (en direcciones opuestas) yco A-TyG-C. Un filamento corre corre de 5’a3’ en forma antiparalela. La hélice es diestra, lo que signifi- ca que, siesta mirando hacia abajo del eje, la hélice gira en el sentido de las agujas del reloj. Dentro de la doble hélice, las dos cadenas de po- linucledtidos se envuelven entre si, formando una estructura que tie ne un promedio de aproximadamente 0.34 nm de longitud entre cada base, y con una repeticién de 10.5 pares de bases por cada giro (34 nm). El diametro de la hélice es de 2,37 nm (Figura 1.1 1) (Strachan & Read, 2018). azuicar-fosf; HUMANA ono 5’ de la desoxirribosa del nucledtidg n una cadena lineal de DNA hay un x. » fosfato libre, mientras en el otro extre. mo 3’ hay un OH libre (Galvez, ans 2013). b) Secundaria. Es una estructura en doble he oe Cada cadena se une a través de las bases nitrogenadas a través de puentes de hidrégeno (Blas-Pastor, 2006; Galvez, 2009). ¢) Terciaria. Esta estructura se forma cuando el DNA de doble hélice se combina con diversas proteinas para formar la croma- tina, importante para el adecuado almacenamiento del DNA dentro del micleo celular. fosfato unido al carbs subyacente. Siempre el tremo 5’ con un grupe EI DNA es una estructura helicoidal de dos cadenas antiparalelas mplementarias siguiendo el apareo entre de 5'a3', mientras que el otro filamento Los nucledsidos con una disposicién de la base sobre el azucat an conformacién sin, mientras que una disposicién de la base porici ‘ carbohidrato se llama conformacién anti. Esta iltima dis tido hacia | ; ae se encuentra en la doble hélice, una con el nucleo- ’ izquierda y otro hacia la derecha, de forma que las bases queden en el interio; iro ala molécula Ah “ la molécula, dandole un cardcter hidrofob? paralelismo que origi ‘i i 4 Waals o inte ginan las bases nitrogenadas (fuerzas de ¥ as fuerzas de atraccién por la proximida racciones de anjlany; ato ae mes de apilamiento). Por otra parte, los esquelet0s Ponen en el exterior de la doble hélice, los ™ACIDOS NUCLEICOS: DNA Y RNA 19 establecen interacciones con el Medio acuoso, lo I salen noon, » 10 que le da un cardcter Didmetro de la hélice 2.37nm (23.7 A) Doble periodicidad alo largo del eje longitudinal Rotacin de cada par ¢ 0.3m de bases con respecto al anterior: 34.6" (34.6 x 10.4=360°) Surco menor = 1.2nm (12 A) Surco mayor = 2.2 nm (22A) Inclinacién de los pares de bases: 88.8", es decir casi perpendiculares al eje de la helice ' Eje de la hélice (pasa entre los puentes de hidrégeno de los pares de bases) Figura 1.11, Estructura general y dimensiones del DNA de Watson y Crick. A lo largo de la longitud de la doble hélice hay dos surcos que NO son iguales como consecuencia de la geometria de los pares de ba- Ses: surco menor y surco mayor. Estos patrones son OTe de- bidoa que permiten a proteinas reconocer las secuenci sde DNA. La ¢structura helicoidal del DNA de doble cadena permite el descifrado| 20 NA, piovocia MOLECULAR HUMAN nformacién genética, por lo que a ntilla para la sintesis de una cadena 4, en, (Koster et al., 2010). © Doli fiel y la transmision dei de DNA sirve como plai nucledtidos complementaria ESTRUCTURA DEL RNA el RNA es una cadena ide monomeros similares decirse que es heteropolimero lineal no ramifica, de ribonucledtidos (Galvez, 2009). Formados de nucledtidos ae contienen la ribosa, un fosfato y una base nitrogenada. El fosfato es; unido al carbono 5’ de la ribosa y la base nitrogenada al carbono | El RNA contiene cuatro bases: adenina, guanina, citosina y uracil, Presente en células procariotas como en las eucariotas, y es el un: co material genético de ciertos virus (virus RNA, donde puede se: de doble cadena). El RNA es mas labil que el DNA y la mayor parte las moléculas de RNA no forman estructuras secundarias estables, gunas excepciones notables se analizaran a continuaci6n. Tienen te mafios muy variables que van desde 80 bases a varios miles de ells Son siempre de cadena simple, aunque pueden establecer unions entre bases de la propia molécula para dar lugar a una estructurs de doble hélice como bucles 0 asas internas (Minchin & Lodge, 2019 a ae onocieron primero fueron el RNA - eo (RNA), § » RNA mensajero (mRNA), y RNA i : : —- wna que los RNAm son intermediarios viel en noma al aparato dntétion de informacién 7 eee des Z ribosomas porque — ce ae coe re presti como mediador de la forma ribozima, destacando 7 ee as cién de enlaces de péptidos ¥ racciones m de amino IRNA/tRNA. Los tRNA son moléculas transP™ le acidos que realiza vi clon de los amino; sis de ATP, Quimicamente, también podria 00 a in dos funciones. Primero Acidos en En segundo lug rte de aminoacj Minodcidos relacionado al apare? ent i tRNA 7 ciones ee del mRNA, Los rRNA Y tRN: ‘on Structurales, cataliticas y de dec odifica® de transpoACIDOS MUCLEICOS: ONAY RNA QT informacién en el proceso de sintesis de Proteinas (Moore & Steitz, 2010; Morantes, 2013). EI] RNA heteronuclear es una poblacién heterogénea de acidos ribonucleicos, que incluye todas las moléculas de este tipo de com puestos recién sintetizadas, y que se encuentran en el nucleo de las células eucariotas. Es el precursor del resto de los tipos de acido ribo nucleico (Vazquez, 2016). RNA MENSAJERO (mRNA) Son moléculas lineales, sin estructura secundaria. Son los portadores directos de la informacién genética desde el DNA nuclear a los ribo somas citoplasmaticos, para la sintesis de proteinas. Existe un mRNA distinto para cada tipo de proteina que se produce en la célula. Cada molécula de mRNA recoge la informacién de un solo gen y, en gene ral, incluye la informacion para una unica proteina. El tamano de las moléculas de mRNA es muy diferente, seguin el tamano de la proteina que codifiquen (Galvez, 2009). En el citoplasma, los mRNA van a tener una vida media corta, determinada, por las necesidades concretas de la célula. Se ha obser- vado que algunos mRNA son sintetizados y almacenados en un estado inactivo o latente en el citoplasma, preparados para dar una respuesta rapida en la sintesis proteica. NAS NO CODIFICANTES 3) RNA ribosémico (rRNA) “0s ribosomas contienen rRNA porque el ribosoma es una ribozima. Aduso antes de que se descubrieran las primeras ribozimas a prin- “ipios de la década de 1980, se sospechaba que el rRNA podria ser el Dr ; PANCIpio activo en el ribosoma. Los rRNA constituyen el 80% del RNA celular total y tienen la ables, caracteristica indis- Propieds ‘ 2s Propiedad de que son metabolicamente esl ante la Pens, ; ol ri a ‘ Pensable para el correcto funcionamiento del ribosoma dur Sintes| Ntesis de proteinas.ANA Oia MOLECULAR HUM) Prat a estructura tridimension, ! “t0na esenta un Cada tip? de as la fanciON que realiza, igual que aig acionada ” blecimiento de dicha estructura espaciay & Enel we Jos enlaces por puente de hidrégeng a ani misma cadena, segun el principio de ve (Galvez, 2009). | ticos eucaridticos estan constitudy, 22 ferente, rel las proteinas an un papel tre import bases de la ad de bases ; nas citoplasma a proteinas, p ro moléculas de RNA y de 70 a 80 p que se encuen bunidades ribosémicas: didos entre las a eile 40S (unidades de sedimentacign Svedberg). Contiene un rRNA 18S y el ae de las proteinas, + Subunidad grande. Particula 60S. Contiene los restantes rRNA el 28S rRNA, el 5,85 rRNA y el rRNA mas pequeno, 55, as; como las restantes proteinas. forman en plementaried Los ribosor por cuat! tran divi ‘ + Subunidad pequena. b) RNA de transferencia (tRNA) Los tRNA son moléculas de pequefio tamafio que se encuentran en el citoplasma de la célula, constituyen aproximadamente el 15% del RNA celular total. Se sintetizan en el nticleo y cumplen su funcion en . citoplasma. Se conocen 61 tipos de tRNA en la célula, teniend? . ae — anticodén diferentes. Los tRNA pueden encontrar en la sintesis de — “se ne unidos a aminodcido. Su a inas consiste, inoacido a la cadena de Proteina con la secuencia del Cuando estan unido: un tRNA para un ‘RNA como tRN, dor de Urosina, Todos los mada en « precisamente, en “transferit’ & que se esta formando, de acuert? mRNA que se lee durante la sintesis de proves minoacidos se ha identificado que hay ™* amii Aci = se psf0S inodcido determinado, pudiéndose defini" ests ‘A isoacey Ptores, : - porte figuraria phage ejemplo, un tRNA que és P° IRNA tienen weno imilar. de trébop 7 una estructura secundaria sim! - 7 u * Dentro det © da lugar a una estructura terci@” We teinas el bpp otancia fundamen del tRNA hay dos 20 : “70 antic cal intesis ORNA Con ji — N, que ee eee ‘de ae dos i 16n su ciente para indice ol aminodc 10 9" adebe ACIDOS NUCLEICOS: DNA Y RNA incorporarse a la proteina, y el brazo aminoacil, la zona por donde se une dicho aminoacido al tRNA (véase figura en capitulo de sinte: sis de proteinas) (Galvez, 2009) <) Otros tipos de RNAs no codificantes En 1998, Andrew Fire, Craig Mello y sus colaboradores anuncia ron el descubrimiento del RNA de interferencia (iRNA), el silen ciamiento de la expresion génica por moléculas de RNA de doble cadena, en gusanos nematodos. Originalmente, se descubrio que el RNA bicatenario silenciaba los genes marcando sus intermediarios de mRNA para su destruccion. Se identificaron otros dos mecanis mos mas: bloqueo de la transcripcion (la sintesis de mRNA a partir del DNA) e inhibicion de la traduccion (sintesis de proteinas a par tir del mRNA) (Vazquez, 2016). 1) RNAs pequefios nucleares (snRNA). Son 9 snRNA los que forman parte del proceso de splicing y varian en longitud des- de 106 a 186 pares de bases (pb). U1, U2, U4, US y U6 se en- cuentran en el spliciosoma mayor para procesar los intrones convencionales GU-AG. Por otro lado, Ud4atac, Ul1, y Ul2 forman parte del spliciosoma menor. 2) MicroRNA (miRNA). Son microRNA endogenos de cadena sencilla, que varian de unos pocos miles a 40 mil moléculas por célula. Estan codificados en el genoma pero no participan en la sintesis de proteinas. En cambio, regulan la expresion géeni- ca después de la transcripcién (del mRNA). Son etectivamente bicatenarios en virtud del hecho de que son autocomplemen- larios y se pliegan en el medio. Se han encontrado en todos los organismos multicelulares estudiados (Novina & Sharp, 2004). En animales, los miRNA son moleéculas cortas de RNA de 194 25 nucledtidos de longitud, y son producidos por la enzi- ma Dicer, una RNasa de tipo ut, Los MIRNA pueden aislarse de células, tejidos y tluidos corporales como suero, plasma, lagri- Mas u orina. Los miRNA se localizan en exones e intrones de RNA no codificante, asi como intrones de mRNA no codifican- teen la misma orientacion que los mRNA, lo cual sugiere que 2324 MOLECULAR HUMANA A se podrian oF -mRNA que SU BiovosiA iginar a partir de transcritos de algunos miRN frieron escision (Lu & Rothen. i s de pre intrones de P berg, 2018). Su func nal de los genes dian ion es regular el silenciamiento Postranscripcig. a secuencia especifico en eucariontes, Un ; de apuntar a cientos de mRNA e influir en la solo miRNA puede ap! ones a menudo involucrados en una a expresion eee Se ha demostrado que los miRNA de sal aa patogénesis de muchas enfermedades Ne snaecomo el cancer y enfermedades alérgicas, como asma, esofagitis eosinofilica, rinitis alérgica y eccema, entre otras. Un solo miRNA puede apuntar a cientos de MRNA e influir en la expresién de muchos genes a menudo involucrados en una via de interaccién funcional. Los imitadores de miRNA y los in- hibidores de miRNA actualmente en desarrollo preclinico han demostrado ser prometedores como nuevos agentes terapéuti- cos. También los perfiles de expresién de microRNA difieren entre estados de enfermedad y tejido normal, por lo cual se han utilizado ya en multiples estudios co ticos. Se han aislado micro! saliva, orina, heces, liquido mo marcadores diagnés- RNA de sangre (suero y plasma), va, orina, he folicular, liquido sinovial, jugo pan- eee bilis, jugo Bistrico Y otros fluidos corporales, y se es- med a rede como biomarcadores para enfer- terferencis siRNA oan como a) RNA pequeiios de in- (miRNA). Ambos son cn oerfering RNA) y b) microRNAs Bulacion de la ex, resi Componentes de un mecanismo de té- Presion génica basado en transcritos, que fun nte en, ucariontes. Pequeniog (ens POco estudiados son los Tocro, «<"€FOcromaticos, Se hea ne siRNA cay nae eden interve, . observado que los siRNA pa dentro del Modificaciones e a €n la organizacion cromosé” noma (Strachan omticas de regiones especific Read, 2018). Cciona Principalme,ACIDOS NUCLEICOS: DNA Y RNA. 3) RNAs largos no codificantes (IncRNA). Pueden tener mi- les de pb y tienen Papeles reguladores en las células animales. En este grupo se incluyen transcritos antisentido que regulan a las cadenas sentido de RNA y se consideran como formas no codificantes de RNA. Ejemplo es el gen XIST que codifica un IncRNA que regula la inactivacién del cromosoma X, el proce- so por el cual uno de los dos cromosomas X al azar es seleccio- nado para ser condensado en los mamiferos femeninos. Otros como el RNA H19 esta implicado en la represion transcripcio- nal de cualquier alelo paterno o materno de regiones autosomi- cas (impronta) (Strachan & Read, 2018). REFERENCIAS Acevedo-Gonzalez, J. F. (2014). Busqueda de las estructuras triplex del DNA formadas entre los pares de Watson y Crick y las bases canénicas. Facultad de Ciencias Fisico Matemati- cas, Universidad Autonoma de Puebla. Avery, O. T., MacLeod, C. M., & McCarty, M. (1944). Studies on the chemical nature of the substance inducing transformation of pneumococcal types. 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El primer paso para responder esa pregunta es dado por el Proyecto ENCODE (Encyclopedia of DNA Elements), que busca establecer un catalogo de elementos de DNA humano funcio- nales. Este proyecto se dividié en tres fases, la primera relacionada al estudio de las regiones codificantes de proteinas (2003-2007), la Segunda a analizar el 99% del genoma humano, regiones no funcio- nales o no codificantes (2007-2012), y la ultima se dedicd a redefi- hir los resultados previos y aplicar ese conocimiento pee cuestiones biolégicas basicas y estudios de enfermedades a traves del analisis 8enémico a gran escala (Moraes & Goes, 2016).UMANA BIOLOGIA MOLECULAR H E GENOMA DNA de un organismo, ae sus enes & | genoma humano tiene alrededor de tres bit) : ha estimado que ‘ a de DNA, de los cuales solo una Pequeiig fe S de pares de bases t mayorfa de los eucariontes, una gran Proporg, - cién son genes. En ‘a " tiene una funcién aparente han Sido i6n, de sus secuencias que a eoenctiens funciones Putativas « ee “DNA Pasi vaevos genes necesarios para la eyo ane. actian como separadores de genes actos impor! tantes diversas proteinas accedan para mejorar la expresion Benica, Las ge. cuencias en el genoma caen dentro de tres Categorias, las Secuencias Gnicas” que se encuentran en una 0 muy pocas Copias (todos los ge. hes se encuentran en esta categoria), las “secuencias mo. Tepetitivas’, las que existen en 50 a pocos cientos de Ultimo, las “secuencias altamente repetitivas’, las cuale: miles de copias (Gregory, 2005). El genoma humano consiste de 25 di y comprende dos genomas separados: un que contiene la mayor parte de nuestros del total de DNA en la célula, y un genoma mitocondrial simple con tnicamente 37 genes, Pero que en células como el Ovocito puede repre- sentar hasta un tercio del DNA dela célula (Tabla 2. 1) (Gregory, 2011). Tabla 2.1, Genoma Nuclear y mitoco; 28 | DEFINICION D! Un genoma es el OMO te. lucign 0 Para que deradamente Copias Ys por S Tepresentan stintas moléculas de DNA genoma nuclear complejo genes y comprende un 99% Ndrial CARACTERIsTICA be) 17-9 NUCLEAR SENOMA MITOCONDRIAL 3.2 Gb (haploide), 64Gb (diploide) 16.6 kb | 23 (células XX); 0 24 (cé XY) (células 1 molécula circular DNA) fe eel 23(en Bametos), 46 (células Varia segin la célula | diploides) (en algunas hasta miles) Histonas y no histonas Libre de proteinas| —V.. En términos de su actividad bioquimica dividido en tres clases: 1) tegiones que se tranectiben pe ireduern 2) regiones que se transcriben, Pero no se traducen yee foment no se transcriben, Cada una de e: Ch aha les o sin funcion, Otra clasificacién divide al genoma en funci ncional y alquier segmento en el genoma S aquello para lo cual fue selec. no funcional. Funcional se refiere acu cuya funcion de efecto seleccionado e cionado. L | DNA funcional Puede ser dividido en literal e indiferente. Enel DNA literal, el orden de los nucledtidos esta bajo seleccién; es- trictamente, un elemento de longitud “I” es definido como literal si su funcion puede ser realizada por un Pequefio subconjunto de las cua- tro posibles secuencias. Los genes codificantes de proteinas, de RNA y los elementos de control no transcritos son incluidos en esta cate- goria. Por otro lado, el DNA funcional indiferente incluye segmentos genomicos que son funcionales y necesarios, pero el orden de sus nucledtidos en sus secuencias es de poca consecuencia. En otras pa- labras, el DNA indiferente se refiere a secuencias cuya funcién prin- cipal es estar alli, pero cuya secuencia exacta no es importante; sirven como espaciadores, rellenos y protectores contra cambios del marco de lectura. La tercera posicién del codén en los tripletes degenerados es un simple ejemplo de este tipo de DNA (Graur et al., 2015). EI] DNA basura (rubbish) se refiere a segmentos gendmicos que no han sido seleccionados con algiin efecto de funcidn. Puede ser subdividido en DNA junk y DNA garbage. El DNA junk se refiere a un segmento gendmico sobre el cual no opera la seleccién, por tanto, evoluciona neutralmente; aunque se ha mencionado que este DNA puede adquirir una funcién util en el futuro, aunque es un Gait que ocurre muy rara vez. E] DNA garbage se refiere a secuenelas ave existen en el genoma a pesar de estar activamente seleccionado en su Contra (Graur, 2017). COMPOSICION NUCLEOTIDICA DEL GENOMA NUCLEAR edia cerca de 41.5% de Le , - mi ‘a composicién del genoma nuclear pro as desde 38.3% para el . ee om: » Variando entre los distintos cromos 3—_— ‘ij le GC para el cromosoma 19. Las re, in y bajo porcentaje de GC tienen a : lades génicas, respectivamente. Al Itas y bai ymas nucleares de vertebrados, : eae menudo sefialado como CpG 7.9% di nol nae Ati s CAN, ucledtido: a a ( te, ciertas regiones pequenas tienen una dens. No obstante, fostato). b yG no metiladas 0 hipometiladas (islas CPG), las cuales dad alta de CpG no egiones transcripcionalmente activas y que so, con re 8 sagas nf sirachan & Read, 2019). igual que os ina escase? de le u estan assoc marcadoras de genes GENES CODIFICANTES DE PROTEINAS DEL GENOMA NUCLEAR Concepto de gen Un gen se puede definir molecularmente como aquella Secuencia de DNA que forma un producto funcional, ya sea un polipéptido o una molécula de RNA funcional. En su forma mas simple, un gen co- dificante de una proteina puede ser visualizado como un segmento de una molécula de DNA que contiene el cédigo para la secuencia de aminoacidos y las secuencias re; sion. Sin embargo, genes del genoma h guladoras necesarias para su expre- esta descripcién puede ser inadecuada para los transcritos en enel ANA Pero que no estan presentes nel RNA maduro e bido a que son removidos por ung ene: dos los ex, ae 4 Proteina, Ade Se "anscribe in Compuestos traduc; ‘TN Pero que n Ucidas Syy (UTR 0 se trad, 'S que determinan la secuencia ‘mas, las regiones flanqueantes de Por secuencias adicionales qu ‘cen, las llamamos regiones 1° Y que representan muchas vecesORGANIZACION DEL GENOMA HUMANO Jos primeros exones y el (los) tiltimo(s) exdn(es), respectivamente (Nussbaum et al., 2016). Secuencias de nucledtidos adyacentes proveen las sefiales del inicio y final de la transcripcién de un gen. Debido a que un transcri- to de RNA es sintetizado en una direccién 5’ a 3',el inicio de la trans- cripeion es referido como el extremo 5’ del transcrito. Por conven- cion, el DNA gendmico que procede del inicio de la transcripcion 5’ es reterido como secuencia “corriente arriba”, mientras el DNA lo- calizaco en la direccién 3° del sitio de inicio de la transcripcion se de- nomin. “corriente abajo”. En el extremo 5’ de cada gen se encuentra una rey on denominada promotora, que incluye las secuencias res- es para el apropiado inicio de la transcripcidn. Dentro de esta region hay varios elementos conservados que son importantes para la regulacion génica. Los promotores y otros elementos reguladores (localizados en los extremos 5’ y 3; 0 incluso en los intrones) pueden ser sitios comunes de mutacin en diversas enfermedades genéticas y pueden interferir en la expresién normal del gen. En el extremo 3” no traducido hay una sefial para la adicién de una secuencia de resi- duos de adenina (cola poli A) al final del RNA maduro (Figura 2.1) (Nussbaum et al., 2016). pons; nicio de ta poliadenilacion transcripcién @ Promotor Regiones UTR @ ——Exones @ Intrones Figura 2.1, Estructura de un gen. En forma general, un gen puede divirse en una region ae ‘2y una region estructural. La region reguladora se le conoce como promotor. Por anes a "egidn estructural esta formada por exones e intrones. Los exones son las ba codificantes de un gen o las regiones de un gen que se transcriben y se traducen. 3334 oaia MOLEC ar HUMANA 1010 codificantes Genroteinas (de copia unica) jicantes del genome humano es actualm, ih re n cerca de 38 mil-45 mib incluyendo 20,200 genes co . : ‘ ficantes de proteinas y 18 mil-25 mil genes de RNA ho mc ner 2021). Los datos para genes codificantes de proteinas Noh fe del Genoma Humano (Inter an Na. variado desde el final del proyecto e tional Human Genome Sequencing Consortium, 2004); asi, Venn T (2001) encontraron un total de 26,383 genes codificantes pg proteinas, Imanishi et al. (2004) 21,037, mientras que Clamp ; : (2007) 20,500. Mas para los RNAs no codificantes ¢sa cifra si ha . riado constantemente, pasando de cerca de 7 mii en el afo 20104 , mil-25 mil actualmente. ‘ La categoria de gen mas frecuente es la de ias enzimas, abar do cerca del 30% del total de genes humanos. Los genes de u an nucleicos, los factores de transcripcidn y los receptores = ' iguientes categorias mayores (Figura 2.2) (Saitou, 2017) . EE numero de estimado ¢| etal. in celular M170 Chaperong ver 31 Categori: Ties |Categorias de a crisis: genes codificantes de proteinas devant Ml 475 if — Prolene Na Gen Mavic entretuar oldu de adhesion, — “ML T3s Seemed mma Choesqueleto. 9 atportador ME 1028 Mo de shan ee is: 100 693! 000 ve 4000 5000 6000 7000 . de genes Bor; las, re ‘i m Proteinag «. YO"eS de genes codificantes — ene 8enoma humano.ORGANIZACION DEL GENOMA HUMANO. a tipico codificante de proteinas nes tienen una gran variacién en su tamafio y estructura. Los Los ge n organismos simples como la bacteria son usualmente genes ( Kb de longitud), mientras que los genes de eucarion- co mipejos pueden tener une gran diferencia en su tamafio y ge esta forma codificar proteinas muy Pequefias de menos de 100 aminoacidos, 0 proteinas enormes con mas de 36 mil aminoacidos proteina estructural titina). Cuando se determina la distancia en- tre elinicio del primer ex6n y el final del ultimo exén, el gen mas largo conocido actualmente es CNTNAP2, el cual tiene 2.3 Mb, li- ceramente mayor al gen de la distrofina, considerado anteriormen- tecomo el gen mas largo (2.2 Mb). Aunque generalmente hay una correlacién directa entre el tamaiio del gen y el producto proteico, hay también excepciones, y el mejor ejemplo es la distrofina, como mencionamos anteriormente, con 2.24 Mb y al menos 50 veces la longitud del gen de la apolipoproteina B, forma una proteina que es casi 900 aminoacidos mds pequefia que la apoproteina B (Strachan & Read, 2019). __ Para los genes humanos codificantes de proteinas, la media ce exones es de 9 por gen, con un promedio del tamafio del exén de 129 nuclestidos (para mds datos estadisticos del gen véase la tabla ~3). En las dltimas estadisticas descritas se han reportado datos ee asi, hay que notar que el exon terminal ocasionalmente muy con i y que el promedio de la longitud de los exones internos es Cantes de ayaa a los exones, los intrones de los genes codifi- Pocos hana, oie tienen una enorme variacién en su tamano, desde “iontascontiene, de 100 mil nucledtidos. Casi todos los genes euca- Maio del a ne untrones y tienen una correlacién inversa entre el ta- “enen a y o fraccién codificante, de esta forma los genes grandes PreViamente 7 'trones, mientras que los exones como describimos tenen un tamajio uniforme (Saitou, 2017). 35