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ENZIMAS

El documento presenta los resultados de un estudio cinético de la actividad de una peptidasa intestinal usando como sustrato la glicilglicina. Se determinaron los parámetros cinéticos Vmax y Km usando cuatro métodos: método de Michaelis-Menten, línea de Lineweaver-Burk, pendiente de Eadie-Hofstee y gráfica de doble inversa. Los valores de Vmax y Km obtenidos con los cuatro métodos fueron similares.

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El documento presenta los resultados de un estudio cinético de la actividad de una peptidasa intestinal usando como sustrato la glicilglicina. Se determinaron los parámetros cinéticos Vmax y Km usando cuatro métodos: método de Michaelis-Menten, línea de Lineweaver-Burk, pendiente de Eadie-Hofstee y gráfica de doble inversa. Los valores de Vmax y Km obtenidos con los cuatro métodos fueron similares.

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UNIVERSIDAD TÉCNICA DE

COTOPAXI
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
Y RECURSOS NATURALES.
CARRERA DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL.
CICLO: SEPTIMO “B”
TEMA: CINETICA ENZIMÁTICA
INTEGRANTES: FAUSTO GUAYAQUIL

FERNANDEZ DAYANA

DOCENTE: ING. ROMERO RENATO


MATERIA: BIOTECNOLOGÍA
Los siguientes datos experimentales fueron obtenidos durante un estudio de la actividad
catalítica de una peptidasa intestinal con el sustrato glicilglicina de acuerdo a la siguiente
reacción:
𝐺𝑙𝑖𝑐𝑖𝑙𝑔𝑙𝑖𝑐𝑖𝑛𝑎 + 𝐻2𝑂 → 2 𝐺𝑙𝑖𝑐𝑖𝑛𝑎

CINETICA DE MICHAELIS MENTEN


Grafica

M. Proximal
V máx.: 0.45
Km: 3
(S): concentración
𝑉𝑚𝑎𝑥(𝑆)
𝑉𝑜 = 𝐾𝑚+(𝑠)

0.45(1.6)
𝑉𝑜 = = 0.15
3 + (1.6)
0.45(2)
𝑉𝑜 = = 0.18
3 + (2)
0.45(3)
𝑉𝑜 = = 0.22
3 + (3)
(S)(Nm) Vo(mM/min) Vo1
0.45(4) 1,6 0,21 0,15
𝑉𝑜 = = 0.25
3 + (4) 2 0,25 0,18
3 0,28 0,22
0.45(8)
𝑉𝑜 = = 0.32 4 0,34 0,25
3 + (8)
8 0,4 0,32
0.45(16) 16 0,45 0,37
𝑉𝑜 = = 0.37
3 + (16)

LINEACION DE LINWORER – BUIK

Lineworer - Buik
5 4,76

4,5 4
4 3,57
3,5 2,94
(1/Vo)(S/MM)

y = 4,4049x + 1,9515
3 2,5
2,5 2,22
2
1,5
1
0,5
0
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7
1/(S) (1/MM)

Y=m x + b
(1/Vo) Y= m x + b
1/(S) (1/MM) (S/MM)
Y= 4.4049 x + 1.9515
0,62 4,76
0,5 4 4.4049= Km/Vmax 1/Vmax=
0,33 3,57 1.9515
0,25 2,94
Km= 4.4049 Vmax V max =
0,12 2,5
1/1.9515
0,06 2,22
Km= 4.4049(0.51) Vmax= 0.51
mM/min
Km= 2.24 mM
0.51(1.6)
𝑉𝑜 = = 0.21
2.24 + (1.6)
0.51(2)
𝑉𝑜 = = 00.24
2.24 + (2)
0.51(3) 1/(S) (1/MM) (1/Vo)(S/MM) Vo2
𝑉𝑜 = = 0.29
2.24 + (3) 0,62 4,76 0,21
0.51(4) 0,5 4 0,24
𝑉𝑜 = = 0.32 0,33 3,57 0,29
2.24 + (4)
0,25 2,94 0,32
0.51(8) 0,12 2,5 0,39
𝑉𝑜 = = 0.39
2.24 + (8) 0,06 2,22 0,44
0.51(16)
𝑉𝑜 = = 0.44
2.24 + (16)

EADIE HOFSTEE

Sustrato [S] V Inicial Vo


(mM) (mM/s) Vo/[s) Vo3
1,6 0,21 0,13 0,21
2,0 0,25 0,12 0,25
3,0 0,28 0,09 0,28
4,0 0,34 0,08 0,34
8,0 0,4 0,05 0,4
16 0,45 0,03 0,45

0,5
0,45
0,45 y = -2,3407x + 0,5167
0,4 R² = 0,9761
0,4
0,34
0,35
0,28
0,3
0,25
Vo

0,25 0,21
0,2
0,15
0,1
0,05
0
0 0,02 0,04 0,06 Vo/[s) 0,08 0,1 0,12 0,14
0.5167(1.6)
𝑉𝑜 = 2.3407+(1.6) = 0.209
Y= m x + b = y= -2.3407 x + 0.5167
0.5167(2) -2.3407= -km V máx.= 0.5167
𝑉𝑜 = = 0.238
2.3407 + (2) km= 2.3407

0.5167(3)
𝑉𝑜 = = 0.290
2.3407 + (3) Sustrato [S] V Inicial Vo
0.5167(4) (mM) (mM/s) Vo4 [EH]
𝑉𝑜 = = 0.325 1,6 0,21 0,209
2.3407 + (4)
2,0 0,25 0,238
0.5167(8) 3,0 0,28 0,290
𝑉𝑜 = = 0.399
2.3407 + (8) 4,0 0,34 0,325
0.5167(16) 8,0 0,4 0,399
𝑉𝑜 = = 0.450 16 0,45 0,450
2.3407 + (16)
GRÁFICA DE [S] VS Vo DE LOS MODELOS (V01-V02-V03-V04)

Vo Vo
Sustrato (Método Vo (LB) (Pendiente Vo (EH)
[S] (mM) proximal de recta)
1,6 0,15 0,209 0,21 0,209
2,0 0,18 0,238 0,25 0,238
3,0 0,22 0,290 0,28 0,290
4,0 0,25 0,325 0,34 0,325
8,0 0,32 0,399 0,4 0,399
16 0,37 0,450 0,45 0,450

Vo (Método proximal Vo (LB) Vo (Pendiente de recta) Vo (EH)

0,5
0,45
0,4
0,35
0,3
0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
1 2 3 4 5 6
Vo (Método proximal 0,15 0,18 0,22 0,25 0,32 0,37
Vo (LB) 0,209 0,238 0,290 0,325 0,399 0,450
Vo (Pendiente de recta) 0,21 0,25 0,28 0,34 0,4 0,45
Vo (EH) 0,209 0,238 0,290 0,325 0,399 0,450
[S]VS VO DE LOS DATOS EXPERIMENTALES

0,5 0,45
0,45 0,4
0,4
0,34
0,35
Vo(mM/min)

0,28
0,3 0,25
0,25 0,21
0,2
0,15
0,1
0,05
0
0 5 10 15 20
(S)(Nm)

(VO) RESULTANTE DE LOS 4 MODELOS.

20
18
16
14
12
10
8
6
4
2
0
1 2 3 4 5 6
Vo (EH) 0,209 0,238 0,290 0,325 0,399 0,450
Vo (Pendiente de
0,21 0,25 0,28 0,34 0,4 0,45
recta)
Vo (LB) 0,209 0,238 0,290 0,325 0,399 0,450
Vo (Método proximal 0,15 0,18 0,22 0,25 0,32 0,37
Sustrato [S] (mM) 1,6 2,0 3,0 4,0 8,0 16

MISMA TABLA MAS DETALLADA (VO) RESULTANTE DE LOS 4 MODELOS.

2 0,450
1,8 0,399
1,6 0,325 0,45
1,4 0,290 0,4
1,2 0,238 0,34
1 0,209 0,28 0,450
0,25 0,399
0,8 0,21 0,290 0,325
0,6 0,209 0,238 0,32 0,37
0,18 0,22 0,25
0,4 0,15
0,2
0
1 2 3 4 5 6
Vo (EH) 0,209 0,238 0,290 0,325 0,399 0,450
Vo (Pendiente de recta) 0,21 0,25 0,28 0,34 0,4 0,45
Vo (LB) 0,209 0,238 0,290 0,325 0,399 0,450
Vo (Método proximal 0,15 0,18 0,22 0,25 0,32 0,37

Vo (Método proximal Vo (LB) Vo (Pendiente de recta) Vo (EH)


ANÁLISIS DE IDENTIFICACIÓN DEL MODELO MÁS PRECISO EN
RELACIÓN CON LOS VALORES DE VO EXPERIMENTALES.

3
0,45
2,5 0,399
0,45
0,325 0,4
2 0,45
0,29 0,34
0,238 0,399
1,5 0,28 0,37
0,209 0,25 0,325
0,29 0,32
0,21 0,238 0,25
1 0,209 0,22 0,32 0,37
0,15 0,18 0,25
0,18 0,22 0,4 0,45
0,15 0,28 0,34
0,5 0,21 0,25

0
1 2 3 4 5 6

Vo(mM/min) Vo
Vo (Método proximal Vo (LB)
Vo (Pendiente de recta) Vo (EH)

En relación con los valores de (vo) experimental tenemos cuenta que el modelo de
cinética de Michaelis Menten (modelo proximal) es el más apto de acuerdo a la gráfica
expuesta.
CON EL MODELO MÁS PRECISO CALCULAR LA (VO) CONSIDERANDO
UNA [S] DE: 12mM Y 18mM.

(S)(Nm) Vo
1,6 0,15
2 0,18
3 0,22
4 0,25
8 0,32
16 0,37

Vo
0,4 0,37
0,35 0,32
0,3 0,25
0,25 0,22
0,18
0,2 0,15
0,15
0,1
0,05
0
0 5 10 15 20
CINETICA DE MICHAELIS MENTEN (s)12nM
M. Proximal
V máx.: 0.37
Km: 3 Vo= 0.29
(S): concentración
𝑉𝑚𝑎𝑥(𝑆)
𝑉𝑜 = 𝐾𝑚+(𝑠)

0.37(12)
𝑉𝑜 = = 0.29
3 + (12)
CINETICA DE MICHAELIS MENTEN (s)18nM
M. Proximal
V máx.: 0.37
Km: 3 Vo= 0.31
(S): concentración
𝑉𝑚𝑎𝑥(𝑆)
𝑉𝑜 = 𝐾𝑚+(𝑠)

0.37(18)
𝑉𝑜 = = 0.31
3 + (18)

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