UNIVERSIDAD CIENTÍFICA DEL SUR
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
CURSO: Bioquímica
PROFESOR(A): Ubillus Borja, Elizabeth Noelia
INFORME DE PRÁCTICA
PRÁCTICA N°: 2
N° DE MESA: 1
TÍTULO: Determinación de proteínas totales y fraccionadas
INTEGRANTES:
- Caicedo Valentin, Melanie Kates - 100096649@[Link]
- Cumpa Rossi, Camila Nicolle - 100114367@[Link]
- Diaz Mendoza, Christina Brigitte - 100075657@[Link]
- Roque Rivera, Jarissa Antuaned - 100117799@[Link]
SECCIÓN: 2P2
HORARIO DE PRÁCTICA
FECHA DE REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA: 29 / 08 / 2023
FECHA DE ENTREGA DEL INFORME: 03 / 09 / 2023
LIMA, PERÚ
2023
I. INTRODUCCIÓN
Las proteínas son moléculas grandes y complejas que desempeñan muchas
funciones críticas en el cuerpo. Dos de las proteínas más importantes son la
albúmina y la globulina.
La albúmina, es una proteína fundamental que cumple distintas funciones. La
albúmina se encarga de mantener la presión oncótica, transportar hormonas,
fármacos, controlar los niveles de pH, entre otros. Se encuentra en el plasma
sanguíneo y es sintetizada por el hígado. Entre los tipos de albúmina encontramos:
seroalbúmina (proteína del suero sanguíneo), ovoalbúmina (albúmina con mayor
proporción en la clara del huevo), lactoalbúmina (albúmina de la leche). La albúmina
en valores puede ser provocada por diferentes enfermedades como mieloma
múltiple, anemia hemolítica, lupus, artritis reumatoide, enfermedades renales,
hepáticas, etc. La albúmina en valores bajos puede ser causada por malnutrición,
enfermedades hepáticas, diabetes descontrolada, etc.
Las globulinas, son proteínas solubles en agua y se pueden encontrar en animales y
vegetales. Las globulinas permiten que el cuerpo se defienda de infecciones, lleva
las proteínas a los músculos e impide que la sangre se espese evitando que se
dificulte la respiración. Las globulinas se dividen en varios grupos: globulinas alfa (α),
beta (β) y gamma (γ).
Las proteínas totales, es la suma de los distintos componentes de las antes
mencionadas proteínas y las proteínas fraccionadas es la cantidad específica de
cada proteína. Ambas son pruebas necesarias para determinar estados anormales
que puedan dañar el organismo.
II. OBJETIVOS
● Determinar las proteínas séricas totales y albúmina.
● Detectar la concentración específica de albúmina.
III. MATERIALES Y MÉTODOS
MATERIALES IMAGEN
Espectrofotómetro
Cubeta de Espectrofotómetro
Tubos de Ensayo
Gradilla
Piseta de Agua Destilada
Micropipeta de 100 - 1000 μL
Reactivo de Biuret
Reactivo BCG
Método Desarrollado:
Método de Biuret:
Este método es utilizado para la identificación de compuestos con 3 o más enlaces
peptídicos, por lo que podemos identificar presencia de proteínas con el reactivo de
Biuret. Este reactivo se compone de una solución acuosa de sulfato cúprico
(CuSO4) y de hidróxido de potasio (KOH, no participa en la reacción) en un medio
alcalino (NaOH).
Este es un método colorimétrico, debido a que el reactivo presenta un color azul
pero, al estar en presencia de proteínas cambia a color violeta y así es como se
puede saber si hay presencia de proteínas en una sustancia.
Figura 1: Ejemplo de una sustancia dando positivo para la determinación de
proteínas con el reactivo de Biuret.
Método de BCG:
Este es otro método que ayuda a determinar la concentración de albúmina por
medio de este reactivo y el espectrofotómetro. El reactivo de BCG (verde de
bromocresol) se combina con la albúmina para formar un complejo que cambiará el
color ámbar a color verde dando así positivo para la presencia de albúmina.
IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1. Para empezar, hacemos uso de la micropipeta para colocar el reactivo de Biuret, el
reactivo de BCG, estándar y muestra problema para proteínas y albúmina en los 3
tubos de ensayo según lo indican las tablas.
a. Para determinar proteínas séricas totales.
ESTÁNDAR
BLANCO MUESTRA PROBLEMA
(calibrador)
MUESTRA – – 0.02 mL
ESTÁNDAR
– 0.02 mL –
(calibrador)
REACTIVO
1 mL 1 mL 1 mL
(BIURET)
Figura 2: Tubos de ensayo solo con reactivo de biuret.
Figura 3: Primer tubo de ensayo con reactivo de Biuret y estándar (C) y segundo
tubo de ensayo con reactivo de Biuret y muestra problema (M).
b. Para determinar la concentración sérica de albúmina.
ESTÁNDAR
BLANCO MUESTRA PROBLEMA
(calibrador)
MUESTRA – – 0.01 mL
ESTÁNDAR
– 0.01 mL –
(calibrador)
REACTIVO
1 mL 1 mL 1 mL
(BCG)
Figura 4: Tubos de ensayo solo con reactivo de BCG.
Figura 5: Primer tubo de ensayo con reactivo de BCG y estándar (C) y segundo tubo
de ensayo con reactivo de BCG y muestra problema (M).
2. Una vez estén las sustancias con su respectivo reactivo en su respectivo tubo de
ensayo se van a homogeneizar por un determinado tiempo, en el caso de las
proteínas se homogeniza por 5 minutos y en el caso de la albúmina se homogeniza
durante 3 minutos.
3. Luego de haber pasado el tiempo necesario para proteínas y albúmina, se debe
llevar a realizar una lectura de las sustancias vertidas en cubetas para el
espectrofotómetro siendo para proteínas una lectura a 540 nm y para albúmina a
625 nm.
Figura 6: Momento en el que se debe pasar la sustancia del tubo de ensayo en la
cubeta para espectrofotómetro.
4. Luego de realizar las lecturas se obtuvo los siguientes resultados:
a. Absorbancia de proteínas con el reactivo de Biuret.
BLANCO ESTÁNDAR MUESTRA PROBLEMA
ABSORBANCIA – 0.386 0.322
b. Absorbancia de albúmina con el reactivo de BCG.
BLANCO ESTÁNDAR MUESTRA PROBLEMA
ABSORBANCIA – 0.715 0.689
5. Dando los siguientes resultados para Factor de calibración.
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟
𝐹𝑐 = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟
PROTEÍNAS ALBÚMINA
FACTOR DE 6.1 𝑔/𝑑𝐿 6.1 𝑔/𝑑𝐿
= 15. 803 = 8. 532
CALIBRACIÓN 0.386 0.715
V. ANÁLISIS DE RESULTADOS
1. Determinacion de proteinas totales:
Muestra 1:
Concentración del estándar: 6.1g/dL
Absorbancia de la muestra: 0.322
Absorbancia estándar: 0.386
2. Determinación de Albúmina:
Muestra 1:
Concentración del estándar: 3.1g/dL
Absorbancia de la muestra: 0.689
Absorbancia estándar: 0.715
VI. DISCUSIÓN
● Los reactivos tuvieron un tiempo de reposo de aproximadamente 3 minutos
con una temperatura de 25 C ,por ende el tiempo de reposo fue menos de lo
necesitado ( 5 minutos), sin embargo de la misma manera recibimos una
reacción positiva.
● Determinamos en el laboratorio que las proteínas séricas que tienen mayor
abundancia son las albúminas y las globulinas, y estás ayudan a mantener la
presión osmótica estable.
● Las proteínas como la albúmina y globulinas según su nivel en el cuerpo,
puede ayudar a determinar diversas enfermedades, y por ende es necesario
que nosotros como personal de salud aprendamos a saber leer los niveles de
proteínas en la sangre de nuestros pacientes.
VII. CONCLUSIONES
● El plasma está constituido por una serie de proteínas, como la albúmina y
Globulina que desempeñan funciones vitales en el organismo. La purificación
de estas, puede ser lograda mediante la utilización de una serie de técnicas
de separación, tales como el Salting-Out que es la técnica más común de
precipitar proteínas y el método de fotocolorímetro de Biuret con el cual se
puede estimar cuantitativamente las proteínas totales y albúmina presentes
en la muestra.
● Para estudiar una proteína es necesario separarla utilizando diferentes
métodos que se basan en las diferentes solubilidades de las proteínas
ocasionadas por el PH (precipitación isoeléctrica), la polaridad (precipitación
con etanol o acetona) ola concentración salina (mediante la adición de sulfato
de amonio).
VIII. RECOMENDACIONES
● Poner o usar de manera correcta el mandil y los guantes, ya que estamos
manipulando sustancias.
● Existen varios métodos para la determinación de proteínas, incluyendo el
método del biuret, el método de Lowry, el método de Bradford y el método de
BCA. Cada método tiene sus ventajas y limitaciones, por lo que es
importante seleccionar el método más adecuado para el tipo de muestra y el
objetivo del análisis.
● Es importante preparar la muestra adecuadamente para evitar errores en la
medición de las proteínas. La muestra debe estar libre de contaminantes y
debe ser homogénea. Además, es importante asegurarse de que la
concentración de la muestra esté dentro del rango de la curva estándar del
método de análisis elegido.
● Antes de realizar el análisis, es importante calibrar el equipo adecuadamente
para asegurarse de que los resultados sean precisos y reproducibles. Se
deben utilizar estándares de proteínas conocidos para calibrar el equipo y
construir la curva estándar.
● Es importante interpretar adecuadamente los resultados de la determinación
de proteínas. Los resultados deben ser comparados con los valores de
referencia y deben ser interpretados en el contexto de la historia clínica del
paciente.
IX. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Müller-Esterl, W. (2020). Bioquímica: fundamentos para medicina y ciencias
de la vida. Reverté, S.A.
[Link]
2. Piña Garza, E., Martínez Montes, F., Riveros Rosas, H., Laguna, J. y Pardo
Vázquez, J.P. (2018). Bioquímica de Laguna y Piña (7.a ed.). El Manual
Moderno
3. ¿Qué son las proteínas y qué es lo que hacen? (n.d.). [Link].
Retrieved September 4, 2023, from
[Link]
na/
4. ALBÚMINA Método BCG. (2020, 9 noviembre). BIOLABO. Recuperado 1 de
septiembre de 2023, de
[Link]
