UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE SAN JUAN DEL RÍO

Reporte:
Separación en columna cromatográfica de una mezcla de tintas (CC) y
cromatografía de papel para una mezcla de tintas (CP)

Asignatura: Análisis Industriales

Profesor: Juan Pablo Francisco Rebolledo

Integrantes:
Arteaga Sánchez Marisol
Briseño San Vicente Arely
Cobaxin García Norma Elena
Ortiz López Lucero Paloma

Ingeniería Química Industrial

San Juan del Río, Querétaro a 31 de enero del 2024

Índice

Introducción .......................................................................................................................... 3
Antecedentes ......................................................................................................................... 4
Metodología........................................................................................................................... 5
Material y equipo................................................................................................................... 7
Reactivos y soluciones ............................................................................................................ 7
Procedimientos ...................................................................................................................... 7
Resultados (CC) ..................................................................................................................... 9
Resultados (CP) ..................................................................................................................... 9
Discusión ............................................................................................................................. 10
Conclusiones........................................................................................................................ 10
Referencias bibliográficas .................................................................................................... 11

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Introducción
La cromatografía es un método físico de separación basado en la diferencia de distribución de
los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una móvil y otra estacionaria. Las
moléculas de soluto de la mezcla son retenidas por la fase estacionaria y arrastradas por la fase
móvil, de manera que, si los componentes de la mezcla presentan diferentes afinidades por
alguna de las fases, sus velocidades medias de avance a lo largo del sistema serán diferentes.
La afinidad viene determinada por fuerzas de tipo Van der Waals, puentes de hidrógeno o
transferencia de carga. Los componentes que sean fuertemente retenidos por la fase
estacionaria se moverán más lentamente a lo largo de dicha fase que aquellos que se unen
débilmente. Como consecuencia de esta diferencia de movilidad los componentes de la mezcla
se separan en bandas discretas, que pueden analizarse cualitativa o cuantitativamente mediante
el uso de los detectores adecuados.
La cromatografía es una técnica muy versátil, que permite la separación de mezclas como la
purificación de productos, la determinación del grado de pureza de un compuesto, el
seguimiento de reacciones o la detección y caracterización de compuestos. Su principal ventaja
frente a otros métodos de separación y purificación consiste en que esta técnica puede aplicarse
a cantidades muy pequeñas de producto.
Las técnicas cromatográficas se pueden clasificar atendiendo a varios criterios:
naturaleza de las fases (sólido, líquido, gas), relación de polaridad de las fases (fase normal,
fase inversa), mecanismo de separación (adsorción, exclusión, intercambio iónico, reparto,
afinidad), disposición de las fases (en columna, en plano) y forma de desarrollo del proceso
(frontal, de desplazamiento, de elución).
En esta práctica se pretende determinar los colores de una mezcla de tintas por medio de una
columna cromatográfica, así como también hacer un barrido de tintas en diferentes soluciones.
Comprobando que los métodos son adecuados para la separación de la mezcla.

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Antecedentes
La cromatografía es un método que se utiliza en diferentes ramas de la ciencia, el objetivo de
la cromatografía es separar, identificar, cuantificar y determinar los componentes individuales
de una mezcla.
Estos procedimientos de separación abarcan varias técnicas para separar basadas en
propiedades físicas de ciertos materiales que interactúan con una sustancia o fluido que
permiten descomponer la mezcla y analizar sus componentes mediante una fase móvil que es
un fluido que eluye a través de la fase estacionaria que puede ser sólida o líquida y que se
queda en la misma posición para que los fluidos la atraviesen y permitan la separación.

El proceso de elución es cuando los componentes de la muestra se van distribuyendo en estas

dos fases, en el momento que la fase móvil atraviesa la fase estacionaria es el momento del
proceso de elución.
La separación de los distintos componentes de la muestra es resultado de repetidos procesos
de sorción–desorción de estos componentes, para finalmente lograr su separación y
visualizarlos en una gráfica que se conoce como cromatograma.
Los procedimientos más relevantes en cromatografía son la cromatografía en papel,
cromatografía en capa fina, cromatografía en columna y la cromatografía de gases.
Cromatografía en papel es una técnica utilizada para análisis cualitativo ya que no requiere de
mucho equipo y su fase estacionaria es una tira de papel filtro o papel cromatográfico, las
interacciones del soluto con el papel hacen que los compuestos se desplacen a velocidades
diferentes. Los diferentes compuestos de la muestra recorren distancias diferentes dependiendo
de la fuerza de sus interacciones químicas con el papel.

Tipos de cromatografía
Los tipos de cromatografía se clasifican según el estado de la fase móvil:
● Cromatografía líquida: la fase móvil es un solvente o mezcla de ellos y la fase
estacionaria un sólido que interacciona con las sustancias a separar. Existen diferentes
tipos para este tipo de cromatografía, pueden hacerse en columna, papel, capa fina o
HPLC (cromatografía líquida de alta resolución).
● Cromatografía de gases: la fase móvil es un gas inerte y la fase estacionaria es un
sólido (cromatografía gas-líquido). Este tipo de cromatografía se realiza siempre en
columna.

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 ● Cromatografía con fluido supercrítico: la fase móvil es un fluido por encima de su
temperatura y presión crítica. Se utiliza para el análisis y purificación de moléculas de
bajo a moderado peso molecular.

Metodología
Diagrama 1. Procedimiento para cromatografía en papel

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Diagrama 2. Proceso para cromatografía en columna

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Material y equipo
Tabla 1. Material y equipo para la experimentación.
1 pipeta de 1 mL 1 pipeta pasteur

1 perilla 5 vasos de precipitados 50 mL

1 gradilla 1 soporte universal

5 tubos de ensaye con tapa 2 pinzas mariposa

5 tubos de centrífuga 2 pinzas de tres dedos

2 capilares 1 regla

1 papel filtro 1 tijera

1 varilla de vidrio tinta de lapicero de diferentes colores

Algodón Sílica en gel

1 probeta 10 mL

Reactivos y soluciones
Tabla 2. Reactivos
Etanol C2H6O Hidróxido de amonio NH4OH

Agua H2O Hexano C6H14

Acetona C3H6O Tolueno C6H5CH3

Alcohol isopropílico C3H8O Dióxido de silicio SiO2

Procedimientos
Separación en una columna cromatográfica de una mezcla de tintas.
Preparación de la muestra
1. Colocar aproximadamente 0.05 mL de cada tinta (negra, azul y café) con
aproximadamente 10 mL de etanol.
Preparación de la columna
1. Colocar en una columna de vidrio un tapón de algodón, después agregar de 10-12 cm
de sílica en la columna.

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 2. Condicionar la columna con etanol agregar poco a poco hasta que esté quedo
aproximadamente 1 mL de la sílica agregada anteriormente.
Preparación de la fase móvil
1. Se realiza una mezcla de alcohol isopropílico, hidróxido de amonio y etanol (60:20:20).
Procedimiento para llevar a cabo una separación de una mezcla de tintas
1. Colocar aproximadamente 0.2 mL de la muestra en la columna previamente
acondicionada es importante no alterar la fase estacionaria.
2. Proceder a eluir agregando 2 mL/min de la fase móvil.
3. Ir recogiendo la fase móvil por la parte inferior de la columna en tubos de centrífuga en
aproximadamente muestras de 1 mL (es necesario marcar el mL en los tubos para
obtener muestras de la misma cantidad)
Separación cromatográfica de papel para una mezcla de tintas
1. Cortar rectángulos de 15 cm de largo por 1 cm de ancho de papel filtro.
2. Con un lápiz pintar una línea base a un 1 cm del borde inferior
3. Con un capilar, colocar una pequeña cantidad de la tinta sobre la línea que se marcó
anteriormente.
4. Enumerar 5 tubos de ensayo y colocar los en la gradilla.
5. Adicionar 1.5 mL de los siguientes solventes: Agua, Etanol, Acetona, Tolueno y
Hexanos.
6. Colocar el papel para cada solvente y dejar que esta suba por el papel, arrastrando parte
de la tinta según avanza es importante tener en cuenta que este solo debe de tocar la
punta del papel por ningún motivo debe de tocar la tinta.
7. Una vez se haya completado la subida (para 1 cm final del papel) sacar del solvente y
dejar secar.
8. Una vez seco colocar una línea hasta donde la tinta subió, medir y señalar las manchas
encontradas.
9. Calcular el factor de retención y llenar las tablas.

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Resultados (CC)

Figura 1. a) Muestra agregada a la columna, b) Elución de muestra a través de la columna, c) Separación de los colores por
medio de la cromatografía

Resultados (CP)

Compuesto Hexano Tolueno Etanol Acetona Agua

Rf 0.55 0.125 0.11 0.1 1.25

Figura 2. Muestras de tolueno, hexanos, acetona

y agua para el método cromatográfico.

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Discusión
La cromatografía es una técnica que tiene como finalidad la separación de mezclas basándose
en la diferente capacidad de interacción de cada componente en otra sustancia.
En esta práctica la separación se realizó sin ningún problema. La fase estacionaria de la
columna fue gel de sílice ya que es un sólido muy poroso y tiene capacidad adsorbente, por
otro lado, la fase móvil fue una mezcla de diferentes disolventes C3H8O, NH₄OH y C₂H₆O los
cuales son compuestos polares y esto nos ayudó a que los compuestos más retenidos en la fase
estacionaria fueran arrastrados más eficazmente lo cual nos dio una elución más rápida.
Se puede observar en la imagen 1 de los resultados como es que estaba originalmente la muestra
de la mezcla de tintas y en la imagen 2 cómo esta empieza a eluir teniendo como resultado que
el primer color que sale de la columna fue el menos retenido.

Por otro lado, para la cromatografía en papel la fase estacionaria fue el papel filtro ya que actúa
como una fase rígida y esto permite la adsorción de las tintas, una vez que se realizó el proceso
de la separación se obtuvieron las medidas mencionadas anteriormente y con eso se pudieron
calcular los parámetros del tiempo de respuesta (Rf).

Conclusiones

Norma Cobaxin: en la cromatografía de columna es primordial hacer un estudio previo para

hacer una correcta elección de la fase estacionaria y la fase móvil. En nuestra cromatografía de
columna la separación se logró apreciar de manera muy marcada y los fluidos a recolectar
fueron fáciles de diferenciar, fue de mucha ayuda que la fase móvil se estuviera suministrado
de manera constante y al mismo volumen para lograr una buena separación de los componentes.
En nuestra cromatografía de papel la primera vez que se realizó se hizo de manera errónea ya
que la muestra depositada en el papel tocó el solvente y la tinta subió de manera muy rápida y
en grandes cantidades hacia el papel filtro, cuando solo debía subir por capilaridad. Lo ideal
era depositar solo unos 5 mL de solución y cuidar que no tocara la muestra del papel filtro.

Arely Briseño: en general la cromatografía nos permite obtener la separación de cierta mezcla
de compuestos en esta práctica se logró entender que la actividad de los componentes de la
muestra que se quiera separar depende de la afinidad que tenga con la fase móvil y de la
polaridad que esta tenga. Logramos obtener los pigmentos de una mezcla de diferentes tintas,
de igual manera se logró observar que cuando nuestra muestra comenzó a eluir el verde fue el
primer color en salir de la columna por lo tanto esto quiere decir que es el que estaba menos
retenido en la fase estacionaria y el morado más retenido ya que fue el último en salir de la
columna.

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Marisol Arteaga: pudimos obtener la separación por medio de la columna cromatográfica
como lo habíamos plantado desde el principio, dentro de esta separación se lograron obtener
las tintas mezcladas previamente recolectando así 1ml de cada una de ellas.
Por otro lado, en la separación por medio del papel filtro la separación se tuvo que realizar dos
veces ya que en la primera vez que se realizó pusimos demasiada tinta lo cual provocó que se
corriera demasiado, en la segunda una corrida del experimento se obtuvieron los resultados
esperados.

Lucero Ortiz: la cromatografía es una técnica utilizada para muchas áreas ya que a través de
ella podemos conocer las diferentes sustancias que contiene una muestra de interés, durante la
práctica aplicamos lo conocido en las clases de teoría con esto pudimos resolver varios
inconvenientes que se nos presentaron anterior al inicio de esta, la práctica originalmente pedía
que la fase estacionaria estuviera compuesta por amoniaco, n-butanol y etanol pero los primeros
dos no se encontraron en almacén por lo que se recurrió a lo visto previamente y se encontraron
dos compuesto con polaridad similar (hidróxido de amonio y alcohol isopropilico) para poder
llevar a cabo la práctica. La práctica de cromatografía en papel se tuvo que repetir ya que se
contaminaron los solventes y estos nos impiden tener un buen resultado por lo que se concluyó
que repetir la práctica resultaba de la mejor manera después de repetirla y mejorar donde se
falló se llegó a los resultados deseados.

Referencias bibliográficas

Operaciones Básicas en el laboratorio de Química. Cromatografía. otros tipos de

cromatografía. (s. f.). https://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/cromatografia_altres.html

Sgariglia, M. A., Soberon, J. R., Sampietro, D. A., & Vattuone, M. A. (2010). Cromatografía:
Conceptos y aplicaciones. Web

Villalonga, A. (2022, 8 marzo). ¿Qué es cromatografía? Cientec.

https://cientecinstrumentos.cl/que-es-cromatografia/

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