FACULTAD DE
QUÍMICA
LABORATORIO DE ANÁLISIS INSTRUMENTAL
6º. Sem. QFB
PRÁCTICA 10.
DETERMINACIÓN DE PLOMO EN MUESTRAS DE SANGRE POR
ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA CON HORNO DE GRAFITO
OBJETIVOS:
Cuantificar plomo en sangre venosa total por espectrofotometría de absorción
atómica con horno de grafito
ACTIVIDAD PREVIA, CONSULTAR:
¿Cuáles son los fundamentos fisicoquímicos de la técnica de EAA-HG?
¿Cuáles son las principales las diferencias entre la técnica de EAA-HG y EAA-llama?
¿Describa en qué consisten las etapas de calentamiento y análisis de una muestra por
EAA-HG (complemente su respuesta describiendo la tabla 2 de este protocolo)?
¿Qué es y para qué sirve un modificador de matriz en EAA-HG?
¿Cuáles son las ventajas y desventajas de la técnica de EAA-HG con respecto a otras
técnicas espectroscópicas (EAA-llama, Espectrometría de emisión atómica, ICP-MS,
etcétera)?
FUNDAMENTO:
El método para la determinación de metales por espectrofotometría de absorción atómica
se basa en la generación de átomos en estado basal y en la medición de la cantidad de
energía absorbida por estos, la cual es directamente proporcional a la concentración de
ese elemento en la muestra analizada.
MUESTRA: Sangre humana
1. REACTIVOS:
Estándar de Pb 1000 ppm
Ácido nítrico ultra puro 65 %
Agua ultrapura tipo I
Fosfato dibásico de amonio ultrapuro (NH4)2 HPO4.
Octil-fenoxi-polietoxietanol (Tritón X-100)
2. MATERIALES Y EQUIPO:
Espectrofotómetro de absorción atómica
Lámpara de plomo de cátodo hueco
Tubos libres de plomo con antiguagulante K3EDTA
Copas de muestreo de 5 mL y 2 mL
Agujas estériles
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Torniquete
Torundas de algodón
Alcohol etílico
Micropipetas rango 0-100 y 100-1000 µL
Puntas para micropipeta (0-100 y 100-1000 µL)
Matraces aforados 50 mL
Vasos de precipitado 25 y 250 mL
3. PROCEDIMIENTO
3.1. Preparación de disoluciones:
3.1.1. Disolución modificadora de matriz: En un matraz aforado de 25 mL añadir
50 mg de fosfato dibásico de amonio y la cantidad mínima de agua para
obtener su disolución; adicionar 125 µL de Tritón X-100 y 50 µL de ácido
nítrico ultra puro. Mezclar y aforar con agua.
3.1.2. Disolución de lavado para el automuestreador: En un vaso de precipitado
de 1 L agregar 250 mL y 2.5 mL de Tritón X-100, agitar hasta disolución.
3.1.3. Disolución ácido nítrico al 0.1%: Agregar 1.54 mL de ácido nítrico ultra puro
concentrado a un matraz de 1 L y aforar con agua ultra pura tipo I.
3.1.4. Disolución intermedia de plomo 10 mg/L: Diluir 1 mL del estándar de plomo
de 1000 mg/L y aforar a 100 mL con la disolución de ácido nítrico al 0.1%. La
vigencia de esta solución es de un mes.
3.1.5. Disoluciones de trabajo: Diluir los siguientes volúmenes 0, 50, 80, 100, 250
y 500 µL de la disolución intermedia de plomo y aforar a 10 mL con la
disolución de ácido nítrico al 1% (obteniéndose las siguientes
concentraciones; 0, 50, 80, 100, 250, y 500 µg/L).
4. Toma de la muestra
4.1. Lavar perfectamente el sitio de la toma de la muestra con agua y algún producto
limpiador dermatológicamente probado, que arrastre el plomo, enjuagando con
agua desionizada y dejar secar.
4.2. Etiquetar e identificar con tinta indeleble cada tubo para la toma de las muestras
al menos con la siguiente información: a) nombre de la persona y b) número de
clave o código asignado por el laboratorio.
4.3. Realizar la punción venosa y tomar la muestra. Obtener al menos 2 ml de sangre.
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4.4. Agitar suavemente por inversión el tubo donde se colectó la muestra, mínimo 20
veces, para mezclar el anticoagulante.
NOTA: Para que los resultados de las determinaciones de plomo en sangre sean
confiables, la colección y el manejo de muestras son factores importantes que hay que
controlar adecuadamente, por lo que la muestra debe ser colectada por punción venosa
en un lugar cerrado fuera del área de exposición y con las condiciones de higiene
adecuadas para evitar la contaminación de la misma.
5. Preparación de estándares de calibración y de las muestras:
5.1. Los estándares de calibración y las muestras se preparan directamente en la
copa de muestreo y se le debe agregar modificador de matriz (dilución 1:9).
5.2. Preparar los estándares de calibración y las muestras como se describe en la
tabla 1.
Tabla 1. Preparación de los estándares de calibración y las muestras de sangre
Disolución QC
Modificador Disoluciones de trabajo Muestras
de ácido
de matriz de
nítrico al
Estándar 50 80 100 250 500 sangre
0.1 %
(µL) µg/L µg/L µg/L µg/L µg/L (µL)
(µL)
Blanco
de 900 100 - - - - - - -
reactivo
Estándar 100
900 - - - - - - -
50 µg/L µL
Estándar 100
900 - - - - - - -
80 µg/L µL
Estándar 100
900 - - - - - - -
100 µg/L µL
Estándar 100
900 - - - - - - -
250 µg/L µL
Estándar 100
900 - - - - - - -
500 µg/L µL
100
Muestras 900 - - - - - - -
µL
100
*QC 900 - - - - - - -
µL
*Control de plomo en sangre con certificado de análisis
6. Procedimiento para la determinación de plomo
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6.1. Se introducen 20 μl de patrones y muestras, preparados como se indicó en 5.1 y
5.2, en el horno de grafito con un muestreador automático.
6.2. El análisis se efectuará con el programa de temperaturas que se muestra en la
Tabla 2.
6.3. Analizar los estándares de calibración y las muestras, usando la longitud de onda
de 283.3 nm y el corrector de fondo. Realizar la determinación por triplicado.
Tabla 2. Programa de temperatura y parámetros, para la determinación de plomo en
sangre.
Temperatura Tiempo Rampa Tipo de gas Flujo de gas
Etapas
(°C) (s) (°C/s) (Ar) (L/min)
Secado
1 80 20.0 5 Inerte 0.2
2 130 25.0 5 Inerte 0.2
3 200 10.0 5 Inerte 0.2
4 400 10.0 50 Inerte 0.2
Pirólisis
5 600 10.0 50 Inerte 0.2
6 800 10.0 50 Inerte 0.2
Atomización
7 1200 3.0 0 Inerte 0
Limpieza
8 2400 3.0 0 Inerte 0.2
7. CÁLCULOS
7.1. Para calcular la concentración de plomo de muestras, se interpola el valor de
absorbancia integrada en la gráfica de la curva de calibración.
7.2. Para muestras que se han diluido considerar el factor de dilución.
7.3. La concentración de plomo en las muestras se reporta en μg/dl, con una cifra
decimal.
8. REFERENCIA
8.1. Diario Oficial de la Federación. Norma Oficial Mexicana NOM-199-SSA1-2000,
Salud ambiental. Niveles de plomo en sangre y acciones como criterios para
proteger la salud de la población expuesta no ocupacionalmente.
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8.2. Flores R. Desarrollo y validación del método fisicoquímico en la detección de
plomo en sangre por espectrofotometría de absorción atómica con horno de
grafito. Tesis de Licenciatura, Universidad Autónoma de Yucatán, Mérida, México,
Noviembre, 2015.
