REPLICACIÓN
TEORÍAS DE REPLICACIÓN ADN
Cuando Watson y Crick (1953) propusieron el modelo de la Doble Hélice indicaron que dicho modelo
sugería una forma sencilla de replicación semiconservativo.
- Replicación semiconservativa. En este modelo, las dos cadenas de ADN se desenrollan y cada
una sirve como molde para la síntesis de una nueva cadena complementaria. Esto resulta en
dos moléculas de ADN, cada una con una cadena original y una nueva. Una cadena provenía del
ADN antigua y otra se formaba nueva.
- Replicación conservativa. En este modelo, la replicación del ADN resulta en una molécula
compuesta por las dos cadenas de ADN originales (idéntica a la molécula original de ADN) y
otra molécula compuesta por dos cadenas nuevas (con exactamente la misma secuencia que la
molécula original). Toda la doble hélice estaba formada completamente por el material
genético antigua y la otra doble hélice completamente nueva.
- Replicación dispersiva. En el modelo dispersivo, la replicación del ADN resulta en dos
moléculas de ADN que son mezclas, o "híbridos", del ADN original y las moléculas hijas. En este
modelo, cada cadena individual es un mosaico de ADN original y nuevo.
Meselson y Stahl (1957) diseñaron un experimento para tratar de averiguar la forma en la que se realiza
la replicación del ADN en E. coli. ¿Qué modelo de replicación del ADN sigue E. coli, semiconservativo,
conservativo o dispersivo? 14 generaciones el ADN sintetizado con bases nitrogenadas con Nitrógeno
pesado (N15). Conclusión: Conclusión: El experimento de Meselson y Stahl demostró que el ADN se
replicaba de forma semiconservativa, lo que significa que cada cadena de una molécula de ADN sirve
como molde para la síntesis de una nueva cadena complementaria.
Replicación semiconservativa es la regla (no solo E. coli). Hay de diferentes maneras: circular y lineal
Primera evidencia citológica (mediante observación al microscopio) de la circularidad del cromosoma
bacteriano:
- Dos generaciones sucesivas en un medio que contenía Timidina tritiada
- Desarrolló un sistema para extraer el ADN de E. coli sin romperlo (intacto) y extenderlo sobre
un portaobjetos.
- Autorradiografía, revelar y observar los resultados al microscopio.
- Primera generación de replicación presentaba imágenes de puntos formando un círculo.
- Segunda generación de replicación se observaban imágenes de puntos en forma de la letra
griega q pero que mostraban una región del interior con doble cantidad de puntos
Cairns interpretó:
- Cromosoma de E. coli circular.
- Replicación de modo semiconservativo
- Existía un punto de inicio de la replicación, un origen, y un punto de crecimiento (PC).
Sin embargo, esta interpretación fue errónea, ya que en E. coli existe un solo punto de iniciación de la
Replicación (Ori C) pero existen dos puntos de crecimiento (PC) bidireccional
En células eucariotas:
- Siempre ocurre en dirección 5’ 3’
- Múltiples orígenes de replicación
- Replicación bidireccional
REPLICACIÓN ADN
- La replicación del ADN es semiconservativa. Cada hebra de la doble hélice actúa como molde
para sintetizar una nueva complementaria.
- El nuevo ADN lo sintetiza la ADN polimerasa que requiere un cebador y sintetiza dirección 5’
3’.
- Durante la replicación la cadena líder se sintetiza de manera continua. La otra se sintetiza en
fragmentos pequeños (cadena rezagada).
- La replicación requiere de otras enzimas incluyendo: ADN primasa, ADN helicasa y
topoisomerasa.
Las células necesitan copiar su ADN muy rápidamente y con muy pocos errores (o se arriesgan a
problemas como el cáncer). Utilizan una variedad de enzimas y proteínas que trabajan en conjunto para
asegurar que la replicación del ADN se lleva a cabo sin incidentes y con precisión.
PROTEÍNAS ASOCIADAS
TOPOISOMERASAS – SUPERENROLLAMIENTO
Enzima presente en todas las células que cambia el grado de superenrollamiento del DNA, cortando una
hebra del DNA (topoisomerasas de tipo I) o ambas hebras (topoisomerasas de tipo II)
- Topoisomerasa 1: corta una de las dos hebras
- Topoisomerasa 2: abre las dos hebras y las corta
HELICASA
Rompen los puentes de hidrógeno que unen las bases nitrogenadas.
ADN PRIMASA
Catalizan la síntesis de fragmentos de ARN cortos que utiliza la ADN polimerasa como cebadores
(“primers”).
- Necesaria para iniciar replicación.
1. ADN polimerasa solo “trabaja” con ADN de cadena sencilla como sustrato Helicasa.
2. Hasta que la ADN polimerasa no encentra un grupo 3’-OH, no puede añadir nucleótidos ADN
primasa.
ADN POLIMERASA
Las ADN polimerasas son responsables de la síntesis de ADN: añaden nucleótidos uno por uno a la
cadena creciente de ADN, e incorporan solo aquellos que sean complementarios al molde.
Características clave de las ADN polimerasas:
- Siempre necesitan un molde.
- Solo pueden agregar nucleótidos al extremo 3' de la cadena de ADN.
- No pueden comenzar una cadena de ADN desde cero, sino que requieren de una cadena
preexistente o segmento corto de nucleótidos llamado cebador
- Pueden corregir, o revisar su trabajo, eliminando la gran mayoría de nucleótidos "equivocados"
que se agregan accidentalmente a la cadena (“proofreading”).
Procariota: polimerasas I a V:
I. Síntesis, corrección de errores y eliminación de cebadores de ARN.
II. Reparación
III. Síntesis, corrección de errores
IV. Reparación
V. Reparación
Eucariota polimerasas (más de 15)
α nuclear, replicación de ADN (sin actividad de corrección de errores).
β nuclear, reparación de ADN, sin actividad de corrección de errores.
ε nuclear, reparación de ADN, corrección de errores.
δ nuclear, replicación de ADN, corrección de errores.
γ mitocondrial, replicación de ADN, corrección de errores.
ADN LIGASA
Unen fragmentos de ADN recién sintetizados
para formar una cadena continua.
Cadena rezagada: Fragmentos de Okazaki
Cadenas cortas de ADN recién sintetizadas
en la hebra discontinua. Estos se sintetizan
en dirección 5'→3' a partir de cebadores de
ARN que después son eliminados.
Replisoma: conjunto de proteínas de una
horquilla de replicación.
REPLICACION ADN
PASO A PASO
PASO 1: Apertura de la doble hélice y separación de las hebras
(SSDBPs): Se unen a las hebras separadas y previenen que se vuelva a formar una doble hélice.
Origen de replicación:
Esta secuencia difiere según la especie, pero tiene abundante timina (T) y adenina (A) (unidas por 2
puentes de hidrógeno, en lugar de tres, por lo que estos enlaces serán más débiles y fáciles de
romper).
Intervienen las siguientes proteínas: (helicasas/topoisomerasas y proteínas SSB)
Bacterias: Origen de la replicación, oriC (origin of chromosomal replication) o punto de iniciación
actúa como señal de iniciación.
Arqueas: Comparten algunas, pero no todas, las características organizativas del oriC bacteriano. A
diferencia de las bacterias, las arqueas a menudo inician la replicación a partir de múltiples orígenes
por cromosoma.
Eucariotas: varios cientos (en levaduras) hasta decenas de miles (en humanos) orígenes para
completar la replicación del ADN de todos los cromosomas durante cada ciclo celular
