General requirements for the competence of testing and calibration laboratories

HUGO P. GUERRERO POSTIGO

 BJETIVOS DE PRENDIZAJE
La validación y verificación de métodos es un proceso mediante el cual los laboratorios de ensayos demuestran que tienen las condiciones
adecuadas y capacidades para usar métodos normalizados o usar métodos no normalizados ajustados al uso previsto; para ello se debe
estudias las características de desempeño de los métodos según normas internacionales como ISO 5725, ISO 11843, ISO 13530, ISO 11269, ISO
16140 entre otras.

Este proceso es un requisito fundamental en la norma ISO/IEC 17025 para la implementación del sistema de gestión y posterior acreditación

ONTENIDO  INTRODUCCIÓN (Requisitos de ISO/IEC 17025:2017 relativos a verificación y validación de métodos, criterios
de calidad, conceptos fundamentales, normas internacionales aplicables)
 PLAN DE VERIFICACIÓN Y VALIDACIÓN DE MÉTODOS (Objetivo, Definición de características de desempeño,
Requisitos especificados y diseño de las mediciones (por parámetros y diseño experimental), Recursos
(trazabilidad), Cronograma de ejecución) (ISO 10005, ISO 7218, ISO/IEC 17025, ISO 35)
 ESTUDIOS DE PRECISIÓN (Introducción, Fuentes de dispersión y evaluación de precisión, Herramientas
estadísticas para los estudios de repetibilidad, Herramientas estadísticas para los estudios de reproducibilidad
interna) (Normas ISO 5725, ISO 16140, ISO 11269)
 Estudio de veracidad (Introducción, Fuentes que afectan la posición y errores sistemáticos, Valores de
referencia, Evaluación del sesgo, Evaluación de la veracidad relativa, Exactitud relativa métodos cualitativos,
Estudio de linealidad, Evaluación de la linealidad (ISO 16140-2, ISO 5724-4, ISO 35, ISO 80, ISO 11095)
 Estudio del rango de trabajo (Introducción, Rango de trabajo, Límite detección y límite de cuantificación,
LOD50) (ISO 13530, ISO 11843, ISO 16140-4))
 ESTUDIO DE SELECTIVIDAD, ESPECIFICIDAD Y ROBUSTEZ (Introducción, Selectividad y especificidad, Robustez,
Análisis de datos) (ISO TR 12845)
 EVALUACIÓN, PROCESAMIENTO DE DATOS E INFORME (Introducción, Revisión, cálculo y procesamiento de datos,
Resultados y evaluación de especificaciones, Establecimiento de trazabilidad, Control de calidad, Informe)
 "TALLERES DE APLICACIÓN PRÁCTICA
 General requirements for the competence of testing and calibration laboratories

VALIDACIÓN Y VERIFICACIÓN DE MÉTODOS DE ENSAYO, PARA

PADRÓN DE EVALUADORES Y MIEMBROS DE LOS OEC
HUGO P. GUERRERO POSTIGO
 Aprendizaje
esperado
1. Introducción Conocimiento y comprensión
2. Rango de trabajo de los criterios y fundamentos
de los estudios del rango de
3. Límite detección y rango de trabajo
trabajo

4
Determinación de características de desempeño (proceso experimental)
1 2 3
4
Diseño y
Determinación
desarrollo de Evaluación y Informe de
de los
plan de procesamiento verificación o
parámetros
verificación de datos validación
característicos
validación

Medir Analizar Mejorar Controlar

Si los parámetros de desempeño de un método cuantitativo son evaluados en un solo punto del rango de
trabajo, la verificación o validación de considera inadecuada y se debe repetir el proceso.
Las mediciones deben realizarse según el diseño realizado en el taller 1 y 2. 5
 El rango de trabajo está caracterizado por
Las mediciones deben ser realizadas en todo el
rango de trabajo incluido las mediciones para los
estudios de precisión, exactitud relativa, efectos de
matriz y robustez. Lo que lleva a que el laboratorio
cuente con cepas de referencia, material de
referencia certificado y muestras naturales con
concentraciones dentro del rango de trabajo, lo que
a veces no es práctico y para ello se debe usar
algún mecanismo (p. e. reconstituciones de cepas de
referencia y adiciones a muestras naturales) para
evaluar los parámetros de desempeño en forma
correcta
Definición según

RANGO DE TRABAJO
Intervalo en el cual el método proporciona resultados con una incertidumbre aceptable
(EURACHEM)
2. Mediciones condiciones de reproducibilidad interna y procesamiento de datos

Paso 1 Paso 2 Paso 5 Paso 6

µ MEDICIONES mg/L X RR
N° FECHA RESPONSABLE MRC/MR ADICIÓN G G≤Gcri
mg/L x1 x2 x3 mg/L (%)
1 2015-10-27 T1 TDMA-51.5 ppm 0.108 0.0998 0.1093 0.1031 0.104 96.36 -0.876 Dato Aceptado
2 2015-10-28 T2 TDMA-51.5 ppm 0.108 0.1055 0.1007 0.1095 0.105 97.44 -0.570 Dato Aceptado
3 2015-10-29 T3 TDMA-51.5 ppm 0.108 0.0987 0.0989 0.0997 0.099 91.76 -2.181 Dato Aceptado
4 2015-10-30 T4 TDMA-51.5 ppm 0.108 0.1023 0.1096 0.1087 0.107 98.95 -0.141 Dato Aceptado
5 2015-10-27 T1 TDMA-64.3 ppm 0.298 0.2832 0.2894 0.2728 0.282 94.56 -1.385 Dato Aceptado
6 2015-10-28 T2 TDMA-64.3 ppm 0.298 0.2957 0.2728 0.2957 0.288 96.67 -0.789 Dato Aceptado
7 2015-10-29 T3 TDMA-64.3 ppm 0.298 0.2978 0.2915 0.2894 0.293 98.29 -0.328 Dato Aceptado
8 2015-10-30 T4 TDMA-64.3 ppm 0.298 0.2769 0.2728 0.2811 0.277 92.93 -1.849 Dato Aceptado
9 2015-11-11 T1 TDMA-70.2 ppm 1.000 1.006 0.998 1.025 1.010 100.96 0.430 Dato Aceptado
10 2015-11-12 T2 TDMA-70.2 ppm 1.000 1.008 1.010 0.998 1.005 100.52 0.304 Dato Aceptado
11 2015-11-13 T3 TDMA-70.2 ppm 1.000 1.038 0.993 1.000 1.010 101.02 0.447 Dato Aceptado
12 2015-11-14 T4 TDMA-70.2 ppm 1.000 1.051 1.020 1.011 1.027 102.72 0.928 Dato Aceptado
13 2015-11-06 T1 LGC.034 ppm 1.500 1.532 1.5038 1.528 1.521 101.42 0.559 Dato Aceptado
14 2015-11-07 T2 LGC.034 ppm 1.500 1.5024 1.5038 1.5097 1.505 100.35 0.257 Dato Aceptado
15 2015-11-08 T3 LGC.034 ppm 1.500 1.5087 1.5128 1.5116 1.511 100.74 0.366 Dato Aceptado
16 2015-11-09 T4 LGC.034 ppm 1.500 1.5098 1.5102 1.5185 1.513 100.86 0.400 Dato Aceptado
17 2015-11-11 T1 LGC.037 ppm 2.00 2.0341 2.0564 2.0706 2.054 102.69 0.919 Dato Aceptado
18 2015-11-12 T2 LGC.037 ppm 2.00 2.093 2.0828 2.0849 2.087 104.35 1.390 Dato Aceptado
19 2015-11-13 T3 LGC.037 ppm 2.00 2.0869 2.0869 2.0442 2.073 103.63 1.188 Dato Aceptado
20 2015-11-14 T4 LGC.037 ppm 2.00 2.0767 2.0564 2.0306 2.055 102.73 0.931 Dato Aceptado
21 7
2. Mediciones condiciones de reproducibilidad interna y procesamiento de datos

Paso 1: Calcular el promedio de las mediciones;

Paso 2: Calcular la razón de recuperación (RR); (µ es el valor de referencia)

Paso 3: Calcular el promedio de RR; (Datos del paso 2)

𝑵
Paso 4: Calcular la desviación estándar del ; 𝒊 𝟏
(Datos del paso 2)
Paso 5: Análisis de valores atípicos intra-ensayos (ISO 16269-4),
Estime “G” de Grubbs , y luego evalúe frente a

𝒄𝒓í𝒕𝒊𝒄𝒐 𝒊

𝒄𝒓í𝒕𝒊𝒄𝒐 𝒊

8 8
4. Evaluación de las razones de recuperaciones 104,0 El intervalo siempre debe contener al valor de referencia

1. Calcular el intervalo de confianza 103,0

t *S 102,0
Intervalo de confianza  IC  1 / 2 RR Use el criterio de ISO
n 16269-6 101,0

100,0
Valor de
2. Evaluar si el valor objetivo (100%) se encuentra dentro del intervalo de 99,0
referencia

confianza LIIC
Promedio
de RR LSIC
98,0



C  RR  t 1 / 2
* S RR
 100  RR  t 1 / 2
* S RR 
  1 97,0

n n  97 98 99 100 101 102 103 10

 

 RR  t
* S RR
Limite inf erio  LI IC 1 / 2

 RR  t
* S RR
Limite sup erior  LS IC 1 / 2

Si el intervalo de confianza no contiene al valor objetivo el

rango e las mediciones no es el rango de trabajo
El rango de trabajo se
define por:

Limite inf erior ( LI )  LC Limite sup erior ( LS )  Vr( más alto )

MÉTODO DE ANÁLISIS
 Límite de detección – LD
Definición según

valor medido, obtenido mediante un procedimiento de medida dado, con una

probabilidad β de declarar erróneamente la ausencia de un constituyente en
ISO 99 un material, dada una probabilidad α de declarar erróneamente su presencia
NOTA 1 La IUPAC recomienda por defecto los valores de α y β iguales a 0,05.
NOTA 2 En inglés algunas veces se usa la abreviatura LOD.
4. Límite de
NOTA 3 No debe utilizarse el término “sensibilidad” en lugar de “límite de
detección
detección”.

MÉTODO
 Criterio según
Límite de detección (LD)
ISO 13530

La evaluación del límite de detección que a continuación se detalla, se basa en el

principio de la aditividad de la varianza

N= 10 (mediciones) N= 10 (mediciones)

Blanco de muestra o Muestra con una

blanco de reactivos concentración
Siendo: LB es el Límite de Blanco; xB son las lecturas promedios de la señal del blanco y SB
la desviación estándar del blanco.
SS es la desviación estándar de concentración de analito que proporciona una señal
cercana o igual a la señal del blanco
Criterio según
Límite de detección (LD)
Criterio según
Límite de detección (LD)
• s es la desviacion estandar estimada de m
0

resultados individuales en o cerca de

concentracion cero.
• es la desviacion estandar usada para
calcular LOD y LOQ.
• n es el numero de replicas de observacion
promediadas cuando se informan
resultados donde cada replica es obtenida
siguiendo enteramente el procedimiento de
medicion.
• es el numero de observaciones de
blanco promediadas cuando se calcula la
correccion del blanco de acuerdo al
procedimiento de medicion.
Criterio según

Límite de detección (LD)

ISO 11843-2

También para determinar el límite detección

se usa los datos del modelo lineal; siendo:

Siendo: Sx/y es la desviación estándar residual; b es la

pendiente; t es el test estadístico a 95%, número
total de mediciones y m en el número de réplicas
Definición según
ISO 16140-1
NIVEL DE DETECCIÓN
concentración mínima de organismos que
producen evidencia de crecimiento en un
medio líquido con una probabilidad de P =
0,95 cuando se inoculan en un medio de
cultivo definido y se incuban en condiciones
definidas

LODx
Concentración de analitos, obtenida por
un procedimiento de medición dado, para
el cual la probabilidad de detección es x

EJEMPLO:
LOD50 es el nivel de detección para el que
el 50 % de las pruebas dan un resultado
positivo.
 Criterio según
ISO 16140

ufc/g
Límite de cuantificación – LC
LÍMITE DE CUANTIFICACIÓN
LOQ
Concentración más baja del
analito concentración que se
Definición según

puede cuantificar con un nivel

aceptable de precisión y
veracidad bajo las condiciones
ISO 16140-1
de la prueba

Si es necesario determinar el LOQ, se analizan

muestras en blanco por tipo/categoría
3. Límite de utilizada.
cuantificación Se utilizará un mínimo de 10 porciones de
prueba de la misma muestra.

MÉTODO
Criterio según

ISO 13530 Límite de cuantificación (LC)

Para la determinación del LC se tiene los siguientes casos:

Caso 1: Si el error total para LD es menor al criterio establecido

Caso 2:
N= 40 (mediciones distribuidos en 5 días)

Muestras con una

concentración
Criterio según

Límite de cuantificación (LC)

Criterio según

Límite de cuantificación (LC)

ISO 11843-2

También para determinar el límite de cuantificación se usa los datos del

modelo lineal; siendo:

Donde : Sx/y es la desviación estándar residual; b ES la

pendiente; t es el test estadístico a 95%, número
total de mediciones y m en el número de réplicas
Criterio según

ISO16140-2
Límite de cuantificación (LC)

• Realice 10 mediciones en muestras por tipo y

categoría
• Determine el promedio de las mediciones
• Determine la desviaciones estándar de las
mediciones

• Calcule el límite de cuantificación según

Criterio de aceptación

MÉTODO
Criterio de aceptación
Los resultados obtenidos deben cumplir con las especificaciones iníciales
establecidas en el plan de validación, Y deben tener el siguiente
comportamiento

0 X blanco ≤ LD= ≤ LC=LIRT LSRT=LSIL

Zona de detección Zona de cuantificación

MÉTODO DE ANÁLISIS
[email protected]

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