INSTITUTO TECNOLÓGICO DE HUEJUTLA
INGENIERÍA EN AGRONOMÍA
PRACTICA 1: PREPARACIÓN DE MEDIOS
DE CULTIVOS PDA Y MS
MATERIA: MICROBIOLOGIA
TITULAR: BIÓLOGA FANNY JAZMÍN MARTÍNEZ
GONZÁLEZ
3° E
REALIZADO POR:
➢ JORGE ALBERTO TOVAR HERNÁNDEZ
➢ CARLOS ALBERTO SANTANDER CUEVAS
➢ JONATHAN CERVANTES HERNANDEZ
FECHA: 10 DE DICIEMBRE DEL 2022
PRÁCTICA No. 1
PREPARACIÓN DE MEDIO DE CULTIVO PDA
INTRODUCCIÓN
El agar de papa y dextrosa en inglés Potato Dextrose Agar (PDA), y el caldo de
patata y dextrosa son medios comunes de cultivo microbiológico que se preparan a
partir de infusión de patata y dextrosa. El agar de patata y dextrosa es el medio más
utilizado para el crecimiento de hongos y levaduras que atacan a las plantas vivas
o materia vegetal muerta en descomposición.
El agar de patata y dextrosa puede ser suplementado con antibióticos o ácidos para
inhibir el crecimiento bacteriano. Este medio es recomendado para realizar el
recuento colonial. También puede ser utilizado para promover el crecimiento de
hongos y levaduras de importancia clínica.
La base del medio es altamente nutritiva y permite la esporulación y la producción
de pigmentos en algunos dermatofitos. Algunos procedimientos señalan bajar el pH
del medio a 3.5 ± 0.1 con ácido tartárico al 10 %, para inhibir el crecimiento
bacteriano. La infusión de patata promueve un crecimiento abundante de los hongos
y levaduras y el agar es adicionado como agente solidificante
OBJETIVO
Aprender a manejar la técnica para la preparación del medio de cultivo PDA
MATERIAL Y EQUIPO
• Barra de agitación (mosca)
• Probetas de 1 L
• Agar
• Papa
• Sacarosa
• Marcadores
• Espátulas
• Cajas petri
• Un matraz Erlenmeyer de 1L.
• Un vaso de precipitado de 1L.
• Parrilla electromagnética
• Balanza analítica
• Potenciómetro
• Autoclave
DESARROLLO
Medio de cultivo para el estudio morfológico de hongos miceliados y levaduras.
Además, la fórmula es adecuada para la mantención de cultivos y la diferenciación
de ciertos dermatofitos según la producción de pigmentos.
El extracto de papas frescas aporta una gran variedad de nutrientes esenciales,
como carbohidratos complejos y sales minerales necesarios para el desarrollo de
los hongos, permitiendo la expresión de pigmentos y estructuras útiles en la
identificación de especies.
La glucosa aporta la fuente de energía para el metabolismo de los hongos.
El agar actúa como agente gelificante La adición de cloramfenicol y su pH
ligeramente ácido inhiben el desarrollo de muchas especies de bacterias. El agar
de patata glucosado es un medio recomendado para la detección y enumeración de
hongos a partir de alimentos como productos lácteos, cárnicos y frutos secos. Este
medio es selectivo ya que su alto contenido de glucosa y bajo pH favorecen el
crecimiento de los hongos y además el extracto de patata exalta el crecimiento
miceliar aéreo y la formación de pigmentos característicos sobre todo en Fusarium,
Aspergillus y Penicillium.
PROCEDIMIENTO
1.- Cocer 30g de papa, para 1 L de medio de cultivo y ya cocida la hacemos puré.
2.- Una vez hecha el pure se le agrega agua destilada y se disuelve hasta tener una
mezcla homogénea.
3.- Agregar azúcar a razón de 10 g/l en un matraz Erlenmeyer
4.- Depositar en el matraz Erlenmeyer la mezcla homogénea de la papa para que
se disuelva con el azúcar
5.- Disueltos los componentes se vacía la solución a una probeta graduada para
aforarse al volumen final con H2Od, realizado esto se regresa la solución al matraz
para el siguiente paso.
6.- Ajustado el pH se agrega el agente gelificante, aquí usaremos agar-agar a razón
de 18g/l, en el matraz seco
7.- se devuelve el contenido de la probeta al matraz Erlenmeyer.
8.- posteriormente se tapa el matraz y se enciende el calor de la parrilla para fundir
el agar con la solución. Colocarlo sobre una parrilla electromagnética con una
mosca en su interior y encender la agitación para mezclar el puré de papa con el
agua destilada.
9.- Puesto en agitación se toma lectura del pH y se ajusta en caso necesario; si éste
se encuentra por debajo del nivel requerido, 7, se deberá agregar una solución
básica, en este caso NaOH [1, 0.1, 0.01M], o si fuera el caso contrario se deberá
agregar algún acido, en nuestro caso H2SO4 a las mismas concentraciones, según
sea necesario.
10.- Una vez fundido, se lleva a esterilizar en autoclave a 121 °C durante 20 min.
Junto con las cajas Petri necesarias para hacer el vaciado del medio en campana.
11.- Cuando se halla finalizado la esterilización se deberá dejar que baje
completamente la presión de la autoclave para sacar el medio de cultivo, dejarlo
enfriar a temperatura ambiente, hasta que podamos tocar el matraz con la mano sin
quemarnos.
12.- Posteriormente limpiaremos y entenderemos la campana de flujo laminar. Y
dejaremos unos 10 min antes de empezar a vaciar el medio en las cajas Petri.
13.- Vaciaremos el medio de cultivo en las cajas Petri y dejaremos que gelifique.
PRECAUCIONES PARA SU USO ADECUADO
✓ No debe usarse pasado su fecha de expiración.
✓ No debe usarse si el empaque o el producto esta deteriorado. Material
garantizado solo con sus sellos intactos.
✓ No debe usarse si se observa contaminación biológica.
✓ No debe usarse si presenta signos de deshidratación, congelación o
agrietamiento
✓ Ambientar la placa sin sello antes de su uso. No resellar.
✓ Conservado refrigerado entre 2º y 8º C es estable hasta la fecha de
caducidad. El medio de cultivo se debe almacenar sellado y con la cubierta
de la placa (tapa) abajo.
CONCLUSIÓN
En esta práctica aprendimos a realizar un medio de cultivo llamado PDA, tiene la
infusión de papa como fuente de almidones y la dextrosa que son la base para el
crecimiento de hongos y levaduras, para ello es muy portante llevar todo el
procedimiento como debe de ser, respetando los pasos y tiempos estimados para
llegar a los resultados que queremos y que se gelifique para poder producir los
hongos y bacterias que necesitamos.
PRACTICA 2
PREPARACIÓN DE MEDIO DE CULTIVO MS (1962)
INTRODUCCIÓN
Para la propagación de las especies vegetales, existen diferentes medios de cultivo,
los cuales le permitirán al explante desarrollarse con las mejores condiciones. El
medio que más se destaca es el medio conocido como Murashige y Skoog. El medio
nutritivo Murashige ySkoog (MS) fue desarrollado en el año de 1962 con el fin de
generar un bioensayo de callo de tabaco, para facilitar el estudio de las citoquinas,
a partir de allí es muy utilizado para los cultivos in vitro de diferentes especies
vegetales. Este medio de cultivo se encuentra conformado por macroelementos (C,
H, O, N, S) y microelementos (B, Mg, Mo, Cu, Fe y Zn) esenciales, junto con
diferentes reguladores de crecimiento que le permiten al explante tenerlas
condiciones óptimas para su desarrollo.
OBJETIVO
Aprender a manejar la técnica para la preparación del medio de cultivo MS (1962)
a partir de soluciones Stock.
MATERIAL Y EQUIPO
• Barra de agitación (mosca)
• Probetas de 1L
• 7 Pipetas
• Soluciones madre
• Agar
• Sacarosa
• Cajas petri
• Marcadores
• Espátulas
• Un matraz Erlenmeyer de 1L.
• Un vaso de precipitado de 1L.
• Parrilla electromagnética
• Balanza analítica
• Potenciómetro
• Autoclave
DESARROLLO
El medio Murashige y Skoog (MS), o MS0, fue inventado por los científicos Toshio
Murashige y Folke K. Skoog en 1962 durante sus investigaciones de nuevos
reguladores del desarrollo vegetal y se ha convertido en el medio más comúnmente
usado en el cultivo in vitro de tejidos vegetales. Como investigador doctoral de
Skoog, Murashige originalmente estaba enfocado en encontrar la hormona del
crecimiento presente en el jugo del tabaco, sin tener éxito. En su lugar, el análisis
del jugo de tabaco reveló altas concentraciones de minerales específicos. Una serie
de experimentos posteriores demostró que variando los niveles de estos nutrientes
promovía el crecimiento sustancialmente, en comparación con formulaciones
existentes. Se determinó que el nitrógeno, en particular, promovía el crecimiento del
tejido de tabaco en cultivo
PROCEDIMIENTO
1.- Pipetear los volúmenes necesarios de cada una de las soluciones stock y
agregarlas secuencialmente al matraz para que se vallan disolviendo.
2.- Depositar en un matraz Erlenmeyer H2Od a la mitad del volumen del medio de
cultivo a preparar.
3.- Agregar azúcar a razón de 30 g/l.
4.- Disueltos los componentes se vacía la solución a una probeta graduada para
aforarse al volumen final con H2Od, realizado esto se regresa la solución al matraz
para el siguiente paso.
5.- Realizado esto se regresa la solución al matraz para el siguiente paso.
6.- Puesto en agitación se toma lectura del pH y se ajusta en caso necesario; si el
éste se encuentra por debajo del nivel requerido (5.7 + 0.1), se deberá agregar una
solución básica, en este caso NaOH [1, 0.1, 0.01M], o si fuera el caso contrario se
deberá agregar algún acido, en nuestro caso H2SO4 a las mismas concentraciones,
según sea necesario.
7.- Ajustado el pH se agrega el agente gelificante, aquí usaremos agar-agar a razón
de 8g/l, posteriormente se tapa el matraz y se enciende el calor de la parrilla para
fundir el agar con la solución.
8.- colocarlo sobre una parrilla electromagnética con una mosca en su interior y
encender la agitación.
9.- Se lleva a esterilizar en autoclave a 121 °C durante 20 min. Cuando se halla
finalizado la esterilización se deberá dejar que baje completamente la presión del
autoclave para sacar el medio de cultivo, dejarlo enfriar a temperatura ambiente,
hasta que podamos tocar el matraz con la mano sin quemarnos.
9.- Posteriormente limpiaremos y entenderemos la campana de flujo laminar. Y
dejaremos unos 10 min antes de empezar a vaciar el medio en las cajas petri.
10.- Vaciaremos el medio de cultivo en las caja petri y dejaremos que gelifique.
RECOMENDACIONES
1.- se requiere preparar las soluciones correspondientes a este medio de manera
concentrada, recibiendo el nombre de soluciones stock (solución madre) dichas
concentraciones podrán estar hechas desde 20-1000X
2.- las soluciones A, C, D, E, F, una vez preparadas deberán conservarse en
refrigerador por un tiempo no mayor de 4 meses.
3.- la solución B algunos optan por no prepararla en virtud de sus altas
concentraciones por litro. Si se prefiere preparar es necesario conservarse en
congelación y descongelarse momentos antes de ser utilizando a temperatura
ambiente o en baño maría a temperatura máxima de 40 oC.
4.-la solución F requiere calor para ser preparada, por tanto, las otras no. Para su
preparación deberán disolverse por separado y posteriormente agregar la solución
de hierro al Na2-EDTA.
5.- la solución G por estar constituido por sustancias orgánicas deberán conservarse
estrictamente en congelación porque sus componentes son altamente termolábiles.
6.- todas las soluciones son fotolabiles, es decir son fácilmente biodegradables por
la luz, por tanto deberán utilizarse contenedores opacos u obscuros para su
preservación.
CONCLUSIÓN
En esta práctica aprendimos a realizar un medio de cultivo llamado MS,que lleva
soluciones madre, para ello es muy portante llevar todo el procedimiento como debe
de ser, respetando los pasos y tiempos estimados para llegar a los resultados que
queremos y que se gelifique para poder producir los hongos y bacterias que
necesitamos.
