Tema 1

Bases moleculares de la herencia

 Naturaleza del material hereditario
 Ácidos nucleicos: composición y estructura
 Técnicas básicas de manipulación del ADN
 Replicación del ADN

La gran estabilidad del ADN hace

posible su extracción de muestras
antiguas como estos huesos de
Neanderthal de más de 30.000
años.
 Naturaleza del material hereditario
 ¿Cuál es la naturaleza del material
hereditario?
 Debería ser una molécula con capacidad de
albergar información.

 Debería ser una molécula con capacidad de ser

copiada en réplicas idénticas.

 Las proteínas eran el principal candidato.

 Naturaleza del material hereditario
 Transformación Bacteriana

Se recuperan bacterias S
Naturaleza del material hereditario
 El principio transformante es el ADN.
 (Experimento de Avery, MacLeod y McCarty)

Oswald Avery 1944

Naturaleza del material
hereditario
 El principio
transformante es el
ADN.
 (Experimento de Avery,
MacLeod y McCarty)
 Naturaleza del material hereditario
 El fago T2 está
compuesto por
un 50% de
proteína y un
50% de ADN.
Naturaleza del material hereditario
Ciclo lítico
 Naturaleza del material
hereditario
 Inyección del ADN
 Naturaleza del material
hereditario
 Lisis
 Naturaleza del
material hereditario
 Experimento de Hershey-Chase:
Experimento con fagos radiactivos

Martha Chase Alfred Day Hershey

 Naturaleza del
material hereditario

 Las células
eucarióticas pueden
adquirir nuevos
caracteres como
resultado de la
introducción de ADN.
 Naturaleza del material hereditario
 En algunos virus el material hereditario es
el ARN.
 Fraenkel-Conrat y Singer 1957

Naturaleza
del material
hereditario
 En algunos
virus el
material
hereditario
es el ARN.

The common virus produces R

a green mosaic disease,
but a variant Holmes rib
grass (TMV-HR), produces
ring spot lesions.
Naturaleza del material hereditario
 Ácidos nucleicos: composición y
estructura
 La vida es posible
gracias a la
existencia de una
molécula que porta
la información
genética: EL ADN
 Capaz de contener
información.

 Capaz de hacer
réplicas idénticas.

Title: Butterfly Landscape (The Great Masturbator in

a Surrealist Landscape with D.N.A.) 1957
Artist: Salvador Dalí
 Ácidos nucleicos: composición y
estructura
 Hipótesis de Levene (1931).
 Sucesión de tetranucleótidos (politetranucleótidos).

 Reglas de Chargaff:
 1. La cantidad total de nucleótidos de pirimidina (T + C)
siempre es igual a la cantidad total de nucleótidos de
purina (A + G). T+C=A+G

 2. La cantidad de T siempre es igual a la cantidad de A,

y la cantidad de C siempre es igual a la cantidad de G.
Pero la cantidad de A + T no es necesariamente igual a
la cantidad de C + G. T=A y C=G
El ADN está formado por una
sucesión de nucleótidos
Bases nitrogenadas de los
nucleótidos
 La carrera por determinar la
estructura del ADN

J. D. Watson y F. H. Crick R. Franklin

Cristalografía por difracción
de rayos X
Cristalografía por difracción
de rayos X
El ADN es una doble hélice
Cadena del ADN
Los parea A-T y G-C tienen la misma
distancia entre los Carbonos 1’
 La doble hélice
del ADN
 Artículo original publicado
por J. D. Watson y F. H. C.
Crick.
La doble hélice del ADN
Distintas representaciones de la
doble hélice
*

* Nota: Groove significa surco

Surcos mayor y menor del ADN
 Las dos cadenas del ADN son
complementarias y antiparalelas

* Nota: bond significa enlace

 Formas alternativas del ADN
 El modelo de Watson-
Crick es el ADN-B, que
se piensa que es
biológicamente activo.
 El ADN-A es algo más
compacto que el ADN-
B. Los ADN-C, -D y –E
son menos compactos
que el ADN-B.
 El ADN-Z es una doble
hélice levógira.
Formas alternativas del ADN
Comparación entre los tipos A, B y Z del ADN

Tipo de Hélice

A B Z
Forma La más ancha Intermedia La más alargada

Altura par de bases 2,3 Å 3,4 Å 3,8 Å

Diámetro de la hélice 25,5 Å 23,7 Å 18,4 Å

Sentido de giro Dextrógiro Dextrógiro Levógiro

Pares de bases por 11 10,4 12

vuelta de hélice
Separación por 24,6 Å 33,2 Å 45,6 Å
vuelta de hélice
Surco Mayor Estrecho y muy Ancho y bastante Plano
profundo profundo
Surco menor Muy amplio y poco Estrecho y bastante Muy estrecho y
profundo profundo profundo
 Tipos de ARNs
Coeficientes de sedimentación, pesos moleculares y número de nucleótidos de algunos ARNs

Tipo de ARN Abreviatura Coeficiente de Peso Molecular Número de

Svedberg (S) nucleótidos
ARN ARNr 5S, 5,8S, 18S, 35 a 1800 Kdal 120 a 1900
ribosómico 28S
ARN ARNt 5S 23 a 30 Kdal 75 a 90
transferente
ARN mensajero ARNm 5S 25 a 1000 Kdal 100 a 10000
Estructura secundaria del ARN
 Estructura secundaria del ARNr

El ARN ribosómico puede plegarse sobre si mismo produciendo complejas estructuras

secundarias mediante el apareamiento de bases complementarias
 El ARNt contiene bases modificadas

Estructura secundaria y bases modificadas Estructura terciaria

 Técnicas básicas de manipulación
del ADN
 Efecto Hipercrómico, temperatura de fusión y contenido
G+C

tm = temperatura de fusión El contenido G+C está directamente

relacionado con la tm. A mayor G+C
mayor tm
 La densidad de flotación en
gradientes de CsCl

Cs+
Aumenta su
concentración
hacia el fondo Densidad de
flotación

Gradiente de densidad en CsCl

 Desnaturalización del ADN

Zonas localmente ricas en A+T son las primeras en desnaturalizarse al aplicar calor
sobre el ADN
Desnaturalización y renaturalización
del ADN
 Paradoja del valor C

Aunque el contenido en ADN de

las células aumenta con el
aumento de complejidad de los
phyla, existe una gran
variabilidad en los eucariotas
superiores (Paradoja del valor
C), esto se debe al ADN
altamente repetido que puede
variar mucho entre especies.
Tipos de secuencias en el ADN
eucariótico
Electroforesis de ADN
Técnicas de
Southern y
Northern

Southern: Electroforesis de ADN,

transferencia a filtro y posterior
hibridación con sonda.

Northern: Electroforesis de ARN,

transferencia a filtro y posterior
hibridación con sonda.
Localización de secuencias en cromosomas mediante
hibridación in situ fluorescente (FISH)

Se utiliza una sonda de ADN marcada con fluorescencia y se hibrida

sobre los cromosomas.
Reacción en cadena de la
polimerasa (PCR)
Cuantificación de ADN y ARN
mediante PCR

PCR cuantitativa q-PCR

Cuantificación de ADN y ARN
mediante PCR
Cuantificación de ADN y ARN
mediante PCR
 Cuantificación de ADN y ARN
mediante PCR
RT-PCR
RT PCR
ARNm ADNc Amplificación
Secuenciación del ADN. Método de
Sanger
Secuenciación
Automática del
ADN
 Secuenciación masiva del ADN
 Una revolución en la capacidad y el coste de la secuenciación.

 Algunos sistemas actualmente disponibles:

 Illumina NovaSeq 6000 System: 6000 Gb/run, 2 x 150 pb/sec y 40

h/run.

 Sistema GS FLX Titanium (454): 0.5 Gb/run, ~700 pb/sec y 12 h/run.

 Solid Platform: Hasta 20 Gb/día y ~75 pb/sec. Mínima tasa de error en

las lecturas.

 Ion Torrent: 10 Gb/run, ~400 pb/sec y 2h/run.

 PacBio Sequel II System: Puede secuenciar moléculas individuales de

30 Kb de media y hasta 20 Gb por SMRT Cell (16 SMRT Cells).

 PacBio HiFi: 99,9% de fidelidad en la secuenciación.

 Oxford Nanopore: MinION Mk 1B: portable, análisis en tiempo real.

Alta tasa de error, secuencia las dos cadenas.
Secuenciación masiva del ADN
PacBio HiFi: 99,9% de fidelidad en la secuenciación.
 Replicación del
ADN
El modelo de replicación del ADN propuesto por
Watson y Crick está basado en la especificidad de los
puentes de hidrógeno entre los pares de bases. Este
modelo se conoce como SEMICONSERVATIVO.
Replicación del ADN
Replicación del ADN

Meselson y Stahl usaron la centrifugación en gradiente

de densidad para distinguir entre el 15N DNA pesado y
el 14N DNA ligero.
Replicación del ADN
 Replicación del ADN

Los experimentos de Meselson y Stahl

(1958) demostraron que la replicación del
ADN se produce según el modelo
semiconservativo
Replicación del ADN
Replicación del ADN
Replicación del ADN
Replicación del ADN
Replicación del ADN
Replicación del ADN
Replicación
del ADN
Replicación del ADN
Replicación del ADN
Replicación del ADN
 Origen de replicación
 Bacterial DNA Replication
 Initiation:
 245 bp in the oriC. (single origin replicon)
 an initiation protein (DnaA in E.coli)
 Unwinding:
 Initiator protein
 DNA helicase
 Single-strand-binding proteins (SSBs)
 DNA gyrase (topoisomerase)
 Origen de
replicación

El origen de replicación de E.
coli, oriC, tiene una longitud de
245 pb. Contiene tres secuencias
casi idénticas de 13 nucleótidos,
dispuestas en tándem, y cuatro
sitios de unión de la proteína
DnaA.
Orígenes de replicación en
eucariotas

En bacterias hay un solo origen de replicación, en cambio, en

eucariotas cada cromosoma tiene múltiples orígenes de replicación.
 Orígenes de replicación en
eucariotas
Eukaryotic DNA Replication Is Similar to Bacterial Replication
but Differs in Several Aspects

 Eukaryotic DNA Replication

 Autonomously replicating sequences (ARSs) 100–120 bps

 Origin-recognition complex (ORC) binds to ARSs to initiate

DNA replication.

 The licensing of DNA replication by the replication licensing

factor

 MCM: Minichromosome maintenance

 Geminin (metazoans)

 Eukaryotic DNA polymerase

Orígenes de replicación en
eucariotas
Orígenes de replicación en
eucariotas
Replicación del ADN
Replicación del ADN
Replicación del ADN
 Replicación del ADN

Los telómeros:
• Permiten que los cromosomas no se acorten con cada replicación del ADN.
• Su estructura protege a los extremos de los cromosomas frente a la degradación por exonucleasas.
• Mantiene la integridad de los cromosomas. En ausencia de telómeros los cromosomas tienden a
fusionarse.

• Las células adultas carecen de actividad telomerasa, esto implica que a la largo de la vida los
telómeros se acortan y limitan la capacidad de divisiones que pueden sufrir las células.

• Las células tumorales tienen una actividad telomerasa elevada, lo que les permite dividirse de
forma indefinida.
Replicación del ADN
 Replicación del ADN
Relación entre el ritmo de acortamiento de los
telómeros y la esperanza de vida
Replicación del ADN
Replicación del ADN
Replicación del ADN