Microbiología Clínica | Práctica 8

Práctica 8. Análisis de exudado nasal y faríngeo.

1. Objetivo
Realizar protocolos de identificación: tinción de Gram, cultivos, observación de colonias,
pruebas bioquímicas, para la determinación de las bacterias presentes en un exudado nasal y un
exudado faríngeo.

2. Fundamento teórico
La correcta identificación de microorganismos implicados en diferentes procesos clínicos será
fundamental para multitud de aspectos:
 Evaluar la importancia clínica de un patógeno.
 Guiar al médico en las medidas a tomar con el paciente.
 Evaluar la necesidad de realización de pruebas de resistencia a antibióticos.
 Determinar el tipo de tratamiento antibiótico más apropiado.
 Determinar si el microorganismo infectante representará un riesgo para el personal del
laboratorio, resto de pacientes o la población en general.
Existen multitud de pruebas de identificación, por lo que cada laboratorio establecerá sus propios
protocolos de identificación donde se indicará las pruebas y el orden en que se realizarán en cada
caso.

2.1 PREPARACION MEDIOS DE CULTIVO

Los medios de cultivo se pueden preparar a partir de los ingredientes que los componen, aunque
los más habitual es partir de un medio deshidratado comercializado.
Las etiquetas de los productos incluirán la información relativa a su composición, así como las
instrucciones para su preparación y conservación del medio (tanto en su forma en polvo, como
una vez reconstituido). Para cada producto, será necesario seguir escrupulosamente las
indicaciones del fabricante.
Como proceso básico, la preparación de todos los medios deshidratados se desarrollará en tres
fases, disolución del producto en polvo o mezcla de los ingredientes, para conseguir la
composición deseada, esterilización del medio y distribución en placas o tubos.
Antes de su esterilización, los caldos se distribuirán en los recipientes adecuados (tubos,
matraces) y se taponarán. La altura del líquido en el recipiente no excederá 1/3 del volumen total
del mismo. Los medios sólidos se taparán y se esterilizarán en recientes, no en placas Petri,
(límite 1/3 del volumen del recipiente), se taparán y se esterilizarán. Finalizada la esterilización en
el autoclave, se dejarán enfriar a temperatura ambiente. Los medios sólidos contenidos en tubos
deberán inclinarse para que al solidificar adopten la forma de agar inclinado o “slant” si esa fuera
su finalidad. Las placas Petri se prepararán en este momento, se verterá el medio aún fundido y
estéril dentro de las mismas en la proximidad de una llama. También será posible conservar el
medio destinado a las placas solidificado y estéril en tubos que se fundirán al baño María en el
momento de su preparación. Caldos y medios sólidos pueden conservarse, una vez esterilizados,
a temperatura ambiente, sin embargo, para reducir la deshidratación de estos y el consiguiente
cambio en las concentraciones de los componentes, es preferible conservar a 4‫ﹾ‬C.

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2.2 TOMA DE MUESTRAS
Un exudado nasal es una prueba para identificar virus y bacterias que causan infecciones
respiratorias. Ver figura 1.

Exudado nasal. Figura 1.

Se podrá realizar de una persona a otra o una persona así misma. Se procederá siguiendo las
siguientes indicaciones:
 Inclinar la cabeza hacia atrás.
 Insertar suavemente un hisopo estéril en una fosa nasal.
 Girar el hisopo durante 10 a 15 segundos.
 Retirar el hisopo e introducir en la segunda fosa nasal.
 Pasar el hisopo por la segunda fosa nasal. Utilizar la misma técnica.
 Retirar el hisopo.

Un exudado faríngeo es de las muestras más empleadas para el estudio bacteriológico de una
infección de las vías respiratorias superiores. Ver figura 2.

Exudado faríngeo. Figura 2.

Procedimiento para realizar un exudado faríngeo:

 Mantener la boca abierta para visualizar la faringe.
 Con un hisopo estéril, hacer presión hacia abajo sobre la lengua y flotar con el hisopo la
faringe y las amígdalas, se tendrá cuidado de no tocar los dientes ni la lengua al extraer el
hisopo.

2.3 CULTIVOS
“Un medio de cultivo es una mezcla equilibrada de nutrientes y otros componentes que
permiten el crecimiento de microorganismos in vitro.”
El diseño de los medios de cultivo dependerá del microorganismo a cultivar y de la
determinación que se llevará acabo. Se deberá de tener en cuenta la fuente de energía, de
carbono, de nitrógeno y de azufre. Hay gran variedad de medios comerciales.
Los constituyentes habituales de los medios de cultivo:

 Agar gelificante: agar o gelatina.

 Extractos

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  Carbohidratos
 Sangre, suero o plasma
 Peptonas
 Amortiguadores e indicadores de pH
Otros contribuyentes:
 Bilis y sales biliares
 Agentes reductores
 Colorantes
Se clasifican:
 Según su consistencia: sólidos, semisólidos o líquidos.
 Según su origen: complejos, definidos o sintéticos o enriquecidos.
 Según su utilización: generales, selectivos, inhibidores, diferenciales o de
enriquecimiento.
 Según su presentación: deshidratados o preparados.
En esta práctica se utilizarán los siguientes medios de cultivo. Ver tabla 1.

Permite el Medio
AGAR SANGRE Rico en crecimiento de la diferencial.
nutrientes mayoría de las Bacterias
bacterias. hemolíticas o no.
Detección y Diferenciación de
MANITOL Medio selectivo aislamiento de especies
SALADO estafilococos. coagulasa + y
coagulasa -
AGAR THAYER Medio Medio selectivo Aislamiento de
MARTIN enriquecido Neisseria bacteria
Medio general Recomendado
PCA para el recuento
de bacterias
AGAR DNasa Medio Staphylococcus S. epidermis
diferencial aureus (positivo)
Medios de cultivo. Tabla 1.
2.4 TINCION DE GRAM
Realizar esta tinción sobre extensiones obtenidas directamente de la propia muestra biológica
remitida al laboratorio, será extremadamente útil puesto que la identificación de determinados
morfotipos bacterianos hará sospechar del agente etiológico causante de una enfermedad. Este
dato puede servir al clínico para iniciar un tratamiento, a la espera de resultados definitivos y al
laboratorio para orientar la ruta de identificación (medios que sembrará, pruebas que efectuará,
etc.).
El fundamento de la tinción de Gram se desarrollará en tres fases:
 Fase primera: tinción con un colorante catiónico, (cristal violeta), capaz de unirse a la
pared bacteriana y estabilizando este con un mordiente con yodo, (Lugol), que formará
un complejo insoluble en agua con el cristal violeta.
 Fase segunda: decoloración con una mezcla de alcohol-acetona en proporción 1:1, en la
que el complejo cristal violeta-yodo si será soluble. La mezcla alcohol-acetona es un
disolvente lipídico, capaz de disolver la membrana externa de las bacterias gramnegativas
y extraer rápidamente el colorante de la delgada capa de peptidoglicano. El tiempo de
decoloración será el factor limitante de la técnica, puesto que, si se prolongará
excesivamente, las baterías grampositivas también se decolarían.
 Fase tercera: coloración de contraste con un colorante rojo, como safranina, que teñirá la
pared de las bacterias gramnegativas, previamente decoloradas. Las bacterias

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 grampositivas estarán teñidas con el cristal violeta y no se teñirán con este segundo
colorante y permanecerán azules o violáceas.
Géneros bacterianos con importancia clínica humana, clasificados según la tinción de Gram,
ver tabla 2.

BACTERIAS GRAMPOSITIVAS BACTERIAS GRAMNEGATIVAS

Staphylococcus Escherichia
Streptococcus Enterobacter
Corynebacterium Shigella
Lactobacillus Salmonella
Listeria Helicobacter
Enterococcus Legionella
Bacillus Pseudomonas
Proponibacterium Neisseria
Géneros bacterianos con importancia clínica humana, clasificados según tinción de Gram. Tabla 2.

2.5 PRUEBAS BIOQUIMICAS

Las pruebas bioquímicas son las pruebas más habituales en el laboratorio de microbiología,
permiten determinar características metabólicas de la bacteria.
Para llevar a cabo este tipo de pruebas será necesario realizar previamente el aislamiento y el
cultivo de la bacteria, para obtener un cultivo puro y fresco (18-24 horas).
Existen una gran variedad de pruebas químicas que podrán valorar aspectos diversos del
metabolismo bacteriano: la presencia o no de ciertas enzimas, su capacidad para utilizar algunos
nutrientes o fuentes de energía, etc. Ver tabla 3.

ASPECTOS DEL METABOLISMO PRUEBAS BIOQUIMICAS LECTURA

BACTERIANO QUE SE VALORAN
Enzimas vinculadas a la CATALASA Inmediata
respiración OXIDASA Inmediata
OXIDO-FERMENTACION (OF) 18-48 Horas
β-galactosidasa (ONPG) <6 Horas
Voges Proskauer (VP) 18-48 Horas
Estudio de las vías metabólicas Rojo de Metilo 18-48 Horas
Prueba fermentación de azúcares 18-48 Horas
Prueba del agar hierro Kligler (KIA) 18-48 Horas
Agar triple azúcar hierro (TSI) 18-48 Horas
Estudio utilización de compuestos Prueba utilización de citrato 18-48 Horas
Prueba reducción de nitratos 18-48 Horas
Estudio de degradación y Prueba hidrólisis de hipurato <6 Horas
síntesis de compuestos Prueba hidrólisis de esculina 18-48 Horas
Prueba de (CAMP) 18-48 Horas
Estudios de capacidad de Indol <6 Horas
degradación de aminoácidos Ureasa <6 Horas
IMViC
Leucino aminopeptidasa (LAP) <6 Horas
Pirrolidonil arillamidasa (PYR) <6 Horas
Detección de exoenzimas Prueba coagulasa 18-48 Horas
Prueba de la DNasa 18-48 Horas
Prueba de las hemosilisinas 18-48 Horas
Principales pruebas bioquímicas. Tabla 3.
En esta práctica se realizarán las siguientes pruebas, ver tabla 4.

PRUEBA ADNasa PRUEBA COAGULASA PRUEBA CATALASA

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Principalmente para la Diferenciar S. aureus de La mayoría de las bacterias
identificación otras aerobias y anaerobias
de Staphylococcus. especies de facultativas,
Staphylococcus. Sintetizan esta enzima.
Excepciones, Streptococcus ssp y
Enterococcus spp.
Las bacterias de este La coagulasa es una enzima La catalasa hidroliza el peróxido
género producen que convierte el fibrinógeno de hidrógeno en agua y oxígeno.
grandes en fibrina.
Cantidades de ADNasa Determina la capacidad de
Extracelular. la bacteria de coagular el
plasma por acción
coagulasa.

La prueba consiste en La prueba consiste en La prueba consiste en añadir

inocular la placa de incorporar la muestra en un peróxido de hidrógeno a una
medio agar ADNasa, tubo que contenga 0,5 ml de colonia de bacteriana y observar
incubar durante 24-48. Plasma y mezclar por si se forman burbujas.
Inundar la placa con rotación. Incubar durante 4 Esperar 15-20 segundos. Lectura:
ácido clorhídrico 1N, Horas a 37‫ﹾ‬C. Realizar Se forman burbujas: catalasa-
esperar 2 minutos. lectura: positiva
Realizar lectura: Se Coagulasa-positiva: coagulo No se forman burbujas: catalasa-
observará un halo visible. negativa.
transparente alrededor Coagulasa-negativa: sin
de la zona inoculada: coagulo. Se vuelve a incubar
ADNasa- positiva. y
se repite la lectura.

Pruebas bioquímicas. Tabla 4.

3. Materiales y Métodos
2.1 MATERIALES MEDIOS DE CULTIVO
 Matraz 280mL
 Vidrio reloj
 Espátula
 Probeta 280mL
 Embudo PCA. Figura 3 DNasa. Figura 4
 Varilla de vidrio
 Placas de Petri
 Asas de siembra
 Medios de cultivo: PCA y DNasa. Ver figuras 3 y 4.
 Agua destilada

EQUIPOS
 Balanza de precisión
 Microondas
 Autoclave
 Mechero Bunsen
 Estufa de cultivos

2.2 MATERIALES MUESTRA EXUDADO NASAL Y FARINGEO

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  Hisopo estéril (2).

2.3 MATERIALES CULTIVOS (PREPARADOS)

 Placa de agar sangre
 Placa de Manitol salado
 Placa de agar Thayer Martin
 Asas de siembra (3)

EQUIPOS
 Mechero Bunsen
 Estufa de cultivos

2.4 MATERIALES TINCION DE GRAM

 Asa de siembra (4)
 Portaobjetos (4)
 Pipeta Pasteur
 Vaso precipitados
 Pinzas
 Agua destilada

REACTIVOS
 Cristal violeta
 Lugol
 Alcohol-acetona
 Safranina

EQUIPOS
 Mechero Bunsen
 Microscopio óptico

2.5 MATERIALES PRUEBAS BIOQUIMICAS

 Test Catalasa
 Asa de siembra
 Portaobjetos
 Pipeta Pasteur
 Reactivo: peróxido de hidrógeno
 Test Coagulasa
 Tubo de hemólisis
 Plasma
 Prueba DNasa
 Reactivo: HCL 1N
EQUIPOS
 Mechero Bunsen
 Estufa de cultivos

PROCEDIMIENTOS
2.1 MEDIOS DE CULTIVO
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 Cálculos:
PCA VF: 200mL DNasa VF: 100mL
23,5g---------------------1L 42g----------------------1L
Xg------------------------100mL Xg-----------------------100mL
4,7g PCA / 200mL agua destilada 4,2g DNasa / 100mL agua destilada

1. Preparar mesa de trabajo. Ver figura 5.

Mesa de trabajo. Figura 5

2. En un vidrio reloj, con ayuda de una espátula, pesar 4,2g de medio de cultivo DNasa en la
balanza de precisión. Realizar misma operación, pesando 4,7g de PCA. Ver figura 6.

Pesa de precisión. Figura 6

3. Verter en el matraz e ir homogenizando con ayuda de la varilla mientras vertimos el agua

destilada progresivamente, ver figura 7. Para una correcta homogenización, realizar
golpes de calor (20-30sg a temperatura medio alta) intercalados en el microondas antes
de incluir el volumen total (100mL DNasa). Realizar operación de la misma forma con los
dos medios. Ver figura 8.

Homogenizar con varilla. Figura 7.

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 Golpes de calor en microondas. Figura 8
4. Una vez realizada la homogenización, procederemos a preparar los matraces para su
esterilización en el autoclave.
5. Se tapará la boca de cada matraz con papel albal adecuadamente. Pegar cinta de
autoclave en el exterior, (nos dirá si el procedimiento ha sido correcto). Ver figura 9

DNasa y PCA. Figura 9

6. Instrucciones de cómo utilizar el autoclave:

 Abrir la tapa superior.
 Verificar que las válvulas de vapor y desagüe están cerradas.
 Comprobar que el nivel del agua alcanza la gradilla. Si no es así, añadir más agua
(preferentemente destilada).
 Seleccionar la temperatura de esterilización, teniendo en cuenta la relación entre
la temperatura y la presión de vapor saturado. En este caso, seleccionaremos 121
‫ﹾ‬.
 Introducir los matraces con los medios. Para evitar que el matraz flote se le
pueden colocar pesas para matraces. Ver figura 10.

Pesas de matraces. Figura 10 Autoclave. Figura 11

 Cerrar la tapa del autoclave mediante giro del volante hasta el fondo y ejercer
una ligera presión.

 Seleccionar el tiempo de esterilización, en este caso 15 minutos (programa 4).

Ver figura 12.

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 Programar autoclave. Figura 12

 Accionar el interruptor “start”. La temperatura comenzará a elevarse. El

autoclave va provisto de una válvula de expulsión automática de aire, por lo que
durante el calentamiento hasta 110‫ﹾ‬esta válvula permanecerá abierta expulsando
el aire del interior del autoclave. Al llegar a 110‫ ﹾ‬la válvula se cierra
automáticamente. Una vez alcanzada la temperatura seleccionada, comienza a
contar el tiempo de esterilización. Ver figura 13.

Inicio de la esterilización. Figura 13

 Cuando el temporizador llega a cero (fin del tiempo de esterilización

programado), se desconecta automáticamente.
 ¡ATENCION! No abrir la tapa superior hasta que el manómetro esté a cero y la
válvula de vapor abierta. Si se han esterilizado sólidos se podrá desvaporizar
rápidamente abriendo la válvula de vapor.
7. Preparar las placas de Petri.
 Una vez terminada la esterilización y comprobado que las cintas han cambiado de
color, (esterilización realizada con éxito). Se procederá a la distribución en placas
de Petri.
 Identificar las placas. Ver figura 14.

Placas identificadas. Figura 14

 Distribución de las placas. Se llevan los matraces a una zona estéril, se deja
enfriar el medio hasta 45-50‫ ﹾ‬y se distribuyen en placas Petri estériles, (zona de
trabajo estéril alrededor de un mechero Bunsen). Deberemos verificar el
volumen del medio que debemos incluir en cada placa o el grosor que se
recomienda para ese medio. En las placas de 90mm de diámetro dispensaremos
15-20 ml de medio para obtener un grosor de 2-3mm. Ver figuras 15 y 16.

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 Pasar la boca por la llama. Figura 15 Posicionar las placas un poco abiertas en
dirección a la llama. Figura 16.

 Seguidamente se dejan enfriar, con lo que el medio adquirirá consistencia sólida.

 Las placas preparadas y ya frías se colocan en bolsas de plástico en posición
invertida, para prevenir la desecación del medio. En estas condiciones y
debidamente etiquetadas para saber el medio que contienen y la fecha en que se
han preparado, se guardarán refrigeradas a 2-8‫ ﹾ‬C, en estas condiciones se
conservarán en buen estado hasta 4-6 semanas. Los medios de cultivo con agar
no deben guardarse por debajo de los 0‫ ﹾ‬C para no alterar la estructura del gel.
2.2 TOMA DE MUESTRAS Y SIEMBRA EN PLACA DE AGAR SANGRE, MANITOL SALADO Y
THAYER MARTIN.
Las muestras se tomarán de una compañera que se encuentra resfriada.
Las placas con medios de cultivo que utilizaremos ya están preparadas. Ver figura 17.

Placas agar sangre, manitol saldado y agar Thayer Martin. Figura 17.

1. MUESTRA NASAL:
 Inclinar la cabeza hacia atrás.
 Insertar suavemente un hisopo estéril en una fosa nasal.
 Girar el hisopo durante 10 a 15 segundos.
 Retirar el hisopo e introducir en la segunda fosa nasal.
 Pasar el hisopo por la segunda fosa nasal. Utilizar la misma técnica.
 Retirar el hisopo.
 Prepararemos mesa de trabajo en un lugar de trabajo estéril (mechero Bunsen).
 Dividir las placas de cultivo a la mitad, identificando cada parte, una para el
exudado nasal y otra para el exudado faríngeo.
 Realizar con el hisopo impregnado en la muestra, una siembra por estría en cada
medio de cultivo.
 En primer lugar, medio con agar en sangre, (sospecha Staphylococcus: colonias
grandes, blancas, borde entero y betahemolíticas y sospecha Streptococcus:
colonias pequeñas betahemolíticas), seguido de agar manitol salado, (sospecha
Staphylococcus aureus) y, por último, agar Thayer Martin, (sospecha Neisserias).
 Sembraremos en cada uno de los cultivos sin arrastrar el hisopo. Ver figura 18.

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 Siembra por estría. Figura 18.

2. MUESTRA FARINGEA:
 Mantener la boca abierta para visualizar la faringe.
 Con un hisopo estéril, hacer presión hacia abajo sobre la lengua y flotar con el
hisopo la faringe y las amígdalas, se tendrá cuidado de no tocar los dientes ni la
lengua al extraer el hisopo. Ver figura 19.

Toma de muestra faríngea. Figura 19.

 Retirar el hisopo.
 Prepararemos mesa de trabajo en un lugar estéril (mechero Bunsen).
 Realizar con el hisopo impregnado en la muestra, una siembra por estría en cada
medio de cultivo en la parte indicada para el exudado faríngeo.
 En primer lugar, medio con agar en sangre, seguido de agar manitol salado y, por
último, agar Thayer Martin.
 Sembraremos en cada uno de los cultivos sin arrastrar el hisopo.
 Incubar 24 horas en estufa de cultivo a 37‫ﹾ‬C.
 Una vez terminado el periodo de incubación, observaremos macroscópicamente
las colonias aisladas que nos hayan crecido en cada placa y anotaremos los
resultados.

2.3 CULTIVOS
Para poder mantener las colonias aisladas en cultivos relativamente frescos. Sembraremos
colonias aisladas crecidas en los medios anteriores (agar sangre, manitol salado y Thayer Martin)
en placas plaqueadas anteriormente, (apartado 2.1 medios de cultivo PCA y DNasa).

 Las placas con medio de cultivo DNasa y PCA, las dividiremos en cuatro cuadrantes.
Identificando la procedencia de las colonias que sembraremos en cada uno de los
cuadrantes, (exudado nasal o faríngeo y el medio de cultivo del que proceden).
 Prepararemos la mesa de trabajo en lugar estéril (mechero Bunsen) .
 Con la ayuda de un asa de siembra, sembraremos por estría cada colonia aislada en el
cuadrante que proceda en la placa con PCA.
 En la placa de DNasa, sembraremos con el asa de siembra con giros circulares, (en masa).
 Incubar en estufa 24 horas.

2.4 TINCION DE GRAM

Una vez pasado el tiempo de incubación, realizar tinción de Gram de las colonias aisladas
con sospecha de Staphylococcus y Streptococcus.
1. Realizar los frotis:

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  Preparar mesa de trabajo en un lugar estéril, (mechero Bunsen), e identificar los
portaobjetos.
 Con ayuda de una pipeta Pasteur, pipetear una gota de agua destilada en cada
portaobjetos.
 Con el asa de siembra retirar una colonia aislada de cada placa de cultivo, en
nuestro caso, dos colonias con exudado nasal en la placa con medio manitol
salado y dos colonias con exudado faríngeo, una con medio de agar en sangre y
otra con medio agar Thayer Martin.
 Homogenizar al asa de siembra en la gota de agua y extender con movimientos
elípticos a lo largo del portaobjetos, teniendo cuidado de guardar distancia con
los bordes.
 Fijar la preparación por calor, con ayuda de la pinza, pasar varias veces al
portaobjetos por encima de la llama del mechero Bunsen hasta que se seque la
muestra. Ver figura 20.

Fijación de la muestra con mechero Bunsen. Figura 20.

 Repetir la misma operación con cada colonia aislada retirada.

 Una vez finalizado el proceso, nos disponemos a realizar la tinción.
2. Realizar la tinción de Gram:
 Taponar el fregadero y añadir agua con legía, para manchar lo menos posible. Poner
una gradilla para colocar los frotis encima. Vamos a realizar la tinción de los cuatro
frotis a la vez.
 En primer lugar, añadir el colorante Cristal Violeta al 1% hasta cubrir las muestras.
 Esperar 1 minuto.
 Decantar y lavar hasta retirar todo el exceso de colorante, con cuidado de que el
agua no arrastre la muestra. Se puede verter el agua sobre el dedo con el que
sujetamos el portaobjetos para así evitar el arrastre.
 Cubrir las muestras con el mordiente (Lugol).
 Esperar 1 minuto.
 Lavar con agua destilada.
 Decolorar con alcohol-acetona 15 segundos. Es importante al realizar los dos frotis
a la vez, lavar rápido.
 Cubrir las preparaciones con el colorante de contraste Safranina al 5%.
 Esperar 1 minuto.
 Decantar y lavar hasta retirar todo el exceso de colorante.
 Dejar secar en posición vertical para que se escurra el agua y se sequen.

 Cuando las extensiones estén secas, observar al microscopio.

 Anotar observaciones.

2.5 PRUEBAS BIOQUIMICAS

1. PRUEBA DE DNASA:
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  Hacer los cálculos de HCI 1N:

VF: 100mL 1N HCL HCL 35% DENSIDAD: 1,18g/mL M: 36,46g/mol

1L
10
3
1 mol 36 , 4 gHCl 100 gdlo 1ml
10 0 mL x molx x x × =8 , 8 mL
1l 1 mol 35 gHCL 1 , 18 gdlo

 Preparar mesa de trabajo, en este caso no se necesitará un lugar estéril.

 La placa agar DNasa cubrirla con HCI 1N, de forma que los crecimientos queden
bien empapados.
 Esperar unos minutos para que el ácido actúe y comprobar la formación de
halos alrededor de las colonias.
 Anotar resultados.
2. TEST DE LA COAGULASA.
Realizaremos dos pruebas de coagulasa, uno con exudado nasal y otro con exudado
faríngeo.
 Prepararemos mesa de trabajo en un lugar estéril (mechero Bunsen)
 En cada tubo de hemólisis 0,3mL de plasma y añadir 1 ó 2 colonias aisladas
sospechosas de cada exudado.
 Mezclar suavemente, por rotación, el plasma con el microorganismo.
 Incubar en estufa a 37‫ﹾ‬C durante 30 minutos, si no se ha coagulado
previamente, volver a observar a las 4 horas.
 Anotar resultados.
3. TEST DE CATALASA
Realizaremos cuatro pruebas de coagulasa, dos con exudado nasal y dos con exudado
faríngeo.
 Prepararemos mesa de trabajo en lugar estéril (mechero Bunsen).
 Dividimos en dos los dos portaobjetos e identificamos cada parte.
 Con ayuda de un asa de siembra, recogeremos una colonia aislada sospechosa y
la depositaremos en el portaobjetos. Repetir operación con las 4 colonias
sospechosas.
 Con ayuda de una pipeta Pasteur, añadiremos una gota de peróxido de
hidrógeno en cada muestra.
 Observar si se producen burbujas o no.
 Anotar los resultados.

4. Resultados
EXAMEN MACROSCOPICO DE PLACAS
Examen de las placas después de una incubación de 24 horas, ver figuras 21,22 y 23.

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 Agar en sangre. Figura 21. Manitol salado. Figura 22.

Thayer Martin. Figura 23.

5. Conclusiones
Analizar los resultados obtenidos en base a los valores esperados teóricamente y, en
caso de no obtener el resultado esperado, explicar las posibles causas.

Si se plantean preguntas en el guion de la práctica se deben responder en este apartado.

6. Bibliografía
Benito Hernández Gimenez, M. T. (2016). Microbiología Clínica. Barcelona: ALTAMAR.

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