ÁCIDOS NUCLEICOS, TIPOS

REPLICACIÓN REPARACIÓN
ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DEL ÁCIDO NUCLEICO
EL DNA CONTIENE LA INFORMACIÓN GENÉTICA

• Los genes no funcionan de modo autónomo, su replicación y función están

controlados por diversos productos de gen.
• En DNA contiene información genética y contiene 4 desoxinucleótidos:
desoxiadenilato, desoxiguanilato, desoxicitidilato, y timidilato se mantiene en forma
polimérica por enlaces 3´,5´-fosfodiéster.
• El contenido informacional reside en la secuencia en la cuál están ordenados
estos monómeros (purina y pirimidina desoxirribonucleótidos)
• El polímero posee una polaridad: un extremo tiene un 5´-hidroxilo o fosfato
terminal y el otro tiene un 3´-fosfato o hidroxilo terminal.
 EL DNA CONTIENE CUATRO DESOXINUCLEÓTIDOS

Un segmento de una cadena de una molécula de DNA en la cual las bases purina y
pirimidina: guanina (g), citosina (c), timina (t) y adenina (A)
• Se mantienen juntas mediante un
esqueleto fosfodiéster entre las
porciones 2’-desoxirribosilo fijas a
las nucleobases por medio de un
enlace N-glucosídico
• El contenido informacional del DNA
(el código genético) reside en la
secuencia en la cual están
ordenados estos monómeros —
purina y pirimidina
desoxirribonucleótidos—.
• El polímero como se describe
posee una polaridad; un extremo
tiene un 5ʹ-hidroxilo o fosfato
terminal, mientras que el otro tiene
un 3ʹ-fosfato o hidroxilo terminal
• Las dos cadenas de la hélice bicatenaria se mantienen unidas por medio de enlaces de
hidrógeno entre bases purina y pirimidina de las moléculas lineales respectivas, como de
interacciones de Van der Waals e hidrofóbicas entre los pares de bases adyacentes
apilados.
• La formación de pares de bases es muy específica y depende del enlace de hidrógeno de A
con T y de G con C.

La restricción de la formación de
pares de bases (A únicamente forma
para con T , y G sólo puede formar
par con C) explica que en una
molécula de DNA bicatenario el
contenido de A es igual a T, y el de G
es igual al de C.
 UN SEGMENTO DE UNA CADENA DE UNA MOLÉCULA DE DNA
• Las bases purina y pirimidina: guanina (G), citosina (C), timina (T) y adenina (A), se mantienen
juntas mediante un esqueleto fosfodiéster entre las porciones 2’-desoxirribosilo fijas a las
nucleobases por medio de un enlace N-glucosídico.

• Note que el esqueleto tiene una

polaridad (esto es, una dirección).
• Por convención una secuencia de DNA
de una sola cadena está escrita en la
dirección 5’ a 3’ (pGpCpTpA)
• G, C, T y A son las cuatro bases, y “p”
representa los fosfatos que producen
interconexiones).
Unidades monoméricas del DNA se
mantienen en forma polimérica por
medio de enlaces 3ʹ,5ʹ-fosfodiéster
que constituyen una cadena única
• Las dos cadenas de la molécula de doble hélice son antiparalelas, una cadena
corre en dirección 5´ a 3´, y la otra en dirección 3´a 5´.
• En un gen particular la información genética reside en la secuencia de nucleótidos
en una cadena, la cadena plantilla o no codificadora (cadena que se copia
durante la síntesis de RNA).
• A la cadena opuesta se le considera la cadena codificadora porque coincide con la
secuencia del RNA (pero contiene uracilo en lugar de timina) que codifica para la
proteína.
• En el tubo de ensayo el DNA bicatenario puede existir en al menos seis formas( A a
E y Z) . La forma B generalmente se encuentra en condiciones fisiológicas
 LA FORMACIÓN DE PARES DE BASES DE DNA

Entre la adenina y timina ó entre citidina y guanidina.

involucra la formación de dos ó tres enlaces de hidrógeno

respectivamente.

Líneas discontinuas: enlaces de hidrógeno.

• En la molécula bicatenaria, las restricciones impuestas

por la rotación alrededor del enlace fosfodiéster, la
anticonfiguración favorecida del enlace glucosídico, y los
tautómeros predominantes de las cuatro bases (A, G, T
y C) permiten que A únicamente forme par con T, y que
G sólo forme par con C.
 LA DESNATURALIZACIÓN DEL DNA SE USA
PARA ANALIZAR SU ESTRUCTURA
• Se puede dar al aumentar la temperatura o disminuir las cifras de sal
• Hipercromicidad de la desnaturalización: hay un incremento de la absorbancia óptica de
purinas y pirimidinas con la desnaturalización.
• Las cadenas de una molécula de DNA se separan en un rango de temperatura. El punto
medio se llama temperatura de fusión o Tm.
• La Tm está influida por la composición de bases y por la concentración de sal de la
solución.
• El DNA rico en pares GC (3 enlaces de hidrógeno) se fusiona a una temperatura más
alta que el DNA que el rico en pares AT (dos enlaces de hidrógeno)
LA RENATURALIZACIÓN DEL DNA REQUIERE
COINCIDENCIA DE PARES DE BASES
• Bajo condiciones de temperatura y sal apropiadas (llamado hibridación).
• El índice de reasociación depende de la concentración de las cadenas
complementarias
• Cuando la hibridación se combina con electroforesis en gel con separación
de ácidos nucleicos por tamaño, junto con marcado radiactivo o
fluorescente para ver una señal detectable se denomina
electrotransferencia Southern (DNA/DNA) y Northern (RNA-DNA)
respectivamente
 LA MOLÉCULAS DE DNA
TIENEN SURCOS
• Hay un surco mayor y un surco menor,
donde las proteínas reguladoras
pueden interactuar con átomos
expuestos de los nucleótidos
(mediante interacciones hidrofóbicas e
iónicas específicas).
• Esta unión ocurre sin alterar la
formación de pares de bases del DNA
doble hélice
 EL DNA EXISTE EN FORMAS RELAJADA Y
SUPERENROLLADA
• Las enzimas que catalizan cambios topológicos del
DNA se llaman topoisomerasas, las cuáles pueden
relajar o insertar superhélices usando ATP como
fuente de energía.

EL DNA PROPORCIONA UNA PLANTILLA

PARA REPLICACIÓN Y TRANSCRIPCIÓN
• La estructura bicatenaria del DNA y la función de
plantilla de cada cadena vieja (anaranjada) sobre la
cual se sintetiza una nueva cadena complementaria
(azul).
 EL DNA PROPORCIONA UNA PLANTILLA PARA
REPLICACIÓN Y TRANSCRIPCIÓN

Cuando cada cadena de la molécula de DNA bicatenario

madre se separa en el transcurso de la replicación, cada
una sirve de modo independiente como una plantilla en la
cual se sintetiza una nueva cadena complementaria.

• Las dos moléculas de DNA bicatenario

hijas recién formadas, cada una de la
cuales contiene una cadena
(complementaria más que idéntica) de la
molécula de DNA bicatenario madre, a
continuación se separan entre las dos
células hijas durante la mitosis
• Cada célula hija contiene moléculas de
DNA con información idéntica a la que
poseía la célula madre, sin embargo en
cada célula hija la molécula de DNA de
la célula madre únicamente se ha
semiconservado.
 LA NATURALEZA QUÍMICA DEL RNA DIFIERE DE LA DEL DNA
El RNA es un polímero de purinas y pirimidinas ribonucleótidos unidos por enlaces 3´,5´-
fosfodiéster análogos a los que están en el DNA

• Diferencias con el DNA:

• El azúcar es ribosa en lugar de 2´-desoxirribosa del DNA
• En lugar de timina el RNA contiene el ribonucleótido uracilo
• El RNA típicamente existe como una cadena única
• Puesto que el RNA es una cadena única complementaria a sólo
una de las dos cadenas de un gen, su contenido en guanina no
necesariamente es igual a citosina, ni su contenido de adenina es
necesariamente igual al de uracilo.
• El RNA es lábil a álcalis por la presencia de un grupo 2´-hidroxilo.
 RELACIÓN ENTRE LAS SECUENCIAS DE UNA TRANSCRIPCIÓN DE RNA Y SU GEN
LAS CADENAS CODIFICADORA Y PLANTILLA SE MUESTRAN CON SUS POLARIDADES

• La transcripción de RNA con una polaridad 5’ a 3’ es complementaria a la cadena plantilla con su

polaridad 3’ a 5’.
• La secuencia en la transcripción de RNA y su polaridad es la misma que la que hay en la cadena
codificadora, salvo porque la U de la transcripción reemplaza a la T del gen; el nucleótido iniciador de
RNA contiene una terminal 5’-trifosfato (pppA arriba).
• Las dos cadenas de la molécula de doble hélice, cada cual posee una polaridad, son antiparalelas,
una cadena va en dirección 5ʹ a 3ʹ, y la otra de 3ʹ a 5ʹ.
• En las moléculas de DNA bicatenario, la información genética reside en la secuencia de nucleótidos en
una cadena, la cadena plantilla (cadena de DNA que se copia durante la síntesis de RNA).
• A veces se llama cadena no codificadora. La cadena opuesta se considera la cadena codificadora
porque coincide con la secuencia de la transcripción de RNA (pero contiene uracilo en lugar de timina)
que codifica para la proteína
 CASI TODAS LAS ESPECIES DE RNA ESTABLE, ABUNDANTE PARTICIPAN EN
ALGÚN ASPECTO DE LA SÍNTESIS DE PROTEÍNA

• Hay varias clases de RNA: mRNA, rRNA, tRNA

• Ribozimas: peptidil transferasa (cataliza formación de enlaces peptídicos en el ribosoma) y ribozimas
comprendidas en el empalme del RNA

• RNA nuclear pequeño (snRNA) no participa en la síntesis de proteína, pero participa en el procesamiento
del RNA.

• Tamaño de 90 hasta 300 nucleótidos.

• El material genético para algunos virus de animales y vegetales es RNA en lugar de DNA. Algunos virus
RNA nunca transcriben su información hacia una molécula de DNA, muchos virus RNA de animales
retrovirus como HIV, se transcriben mediante DNA polimerasa dependiente de RNA viral (transcriptasa
inversa) para producir una copia de DNA bicatenario de su genoma de RNA.

• En muchos casos, la transcripción de DNA de doble cadena resultante se integra en el genoma del
huésped y sirve como plantilla para la expresión de gen que pueden transcribirse nuevos genomas de RNA
viral y mRNA virales. La inserción genómica de esas moléculas de DNA “proviral” integradoras puede,
dependiendo del sitio afectado, ser mutagénica, lo cual desactiva un gen o altera la regulación de su
expresión.
 RNA MENSAJERO
• RNA mensajero (mRNA)
• Es la de abundancia, tamaño y estabilidad más heterogénea
• En mamíferos la abundancia de RNAm varía en un rango de 104 veces
• Transmite la información de un gen hacia la maquinaria sintetizadora de proteína
• mRNA eucarióticos presentan la terminal 5´cubierta por un 7-metilguanosina
trifosfato enlazado a un 2´-O-metil ribonucleósido adyacente en su 5´-hidroxilo por
medio de 3 fosfatos.
• La cubierta participa en el reconocimiento del RNAm por la maquinaria de
traducción, evita el ataque de las 5´-exonucleasas
 La estructura de la
cubierta fija a la terminal
5’ de casi todas las
moléculas de RNA
mensajero eucariótico.
un 7-metilguanosina trifosfato
está fijo en la terminal 5’ del
Las modificaciones (la mRNA , que por lo general
cubierta y el grupo también contiene un
metilo) se añaden luego nucleótido 2’-O-metilpurina
de que el mRNA se
transcribe desde el DNA.
 RNAm

• El otro extremo del RNAm , 3´hidroxilo terminal tiene un polímero fijo

de residuos adenilato de 20 a 250 nucleótidos de longitud, no
codificante: ”cola” poli A, que impide el ataque de 3´-exonucleasas y
facilita también la traducción
• Tanto la “cubierta”como la “cola” de poli A de RNAm se agregan
luego de la transcripción al pre-RNAm.
• El RNAm representa 2 - 5% del RNA total de células eucarióticas
 tRNA

• Longitud: 74 a 95 nt
• También se generan por procesamiento nuclear de una molécula precursora
• Sirve como adaptadora para traducir la información del RNAm hacia aas específicos
• Hay la menos 20 especies de moléculas de tRNA en cada célula por cada uno de
los 20 aa requeridos para formar proteínas.
• La estructura primaria permite plegado y complementariedad intracadena para
generar una estructura secundaria en forma de hoja de trébol
• Contienen 4 brazos principales
T RNA aa
• El brazo aceptor termina en los
nucleótidos CpCpAOH. Una
enzima nucleotidil transferasa
específica añade estos tres
nucleótidos luego de la
transcripción.
• El aa apropiado para el RNAt se
fija sobre el grupo 3´-OH de la
porción A del brazo aceptor
• Los brazos D,Tψ C extra definen
un tRNA específico
• Los RNAt constituyen 20% del
RNA celular total
 RNA RIBOSÓMICO (R RNA)
• Polisoma: ribosomas más RNAm
• El ribosoma de mamífero contiene 2 subunidades: una de mayor tamaño 60S y una de
menor tamaño 40S
• La subunidad 60S contiene una RNAr 5S, un RNAr 5.8S y un RNAr 28S, además de
más de 50 polipéptidos específicos
• La subunidad 40S contiene un RNAr 18s único y cerca de 30 cadenas polipeptídicas
distintas
• Todas las moléculas de RNAr (excepto el RNAr 5S) se procesan a partir de una molécula
de RNA precursora 45S única en el nucléolo.
• El componente RNAr grande tiene actividad peptidiltransferasa siendo una ribozima
• Los RNAr (28s + 18S) representan 70% del RNA celular total.
RNA PEQUEÑO

• En células eucarióticas, forman complejos con proteínas para formar

ribonucleoproteínas en el núcleo , citoplasma o ambos.
• Tamaño de 20 a 1000 nt
• Están presentes de 100 000 a 1 000 000 de copias por célula (<=5%
del RNA celular)
RNA NUCLEAR PEQUEÑO (SN RNA)

• Participan en procesamiento de RNAr y RNAm y en la regulación de gen

• U1,U2,U4,U5 yU6 participan en eliminación de intrón y procesamiento de
precursores de RNAm hacia RNAm maduro
• El U7 participa en la producción de los extremos 3´correctos del RNAm de
histona, que carece de cola poliA
• El 7SK forma un complejo de ribonucleoproteína denominado P-TEFb que
modula el alargamiento de la transcripción del gen de RNAm por la RNA
polimerasa II
RNA REGULADORES NO CODIFICANTES GRANDES Y
PEQUEÑOS: MICRO-RNA (MIRNA), RNA SILENCIADORES
(SIRNA) Y RNA NO CODIFICANTES LARGOS (LNCRNA)
• RNAnc: grandes (50 a 1000 nt) y pequeños (20 a 22 nt)
• Los RNAnc pequeños: miRNA y siRNA inhiben la expresión de gen
• Tanto los miRNA como los siRNA se hibridan RNA-RNA a sus RNAm objetivo
• Aprox 1000 genes codifican para miRNA en humanos
• RNAnc largos (desde 300 hasta miles de nt de largo)
• > 90% DNA genómico eucarionte es transcrito
• Los RNAnc su rol varía desde contribuir a la estructura de la cromatina hasta la
regulación de la transcripción de gen que codifica para RNAm por la RNA
polimerasa II.
NUCLEASAS ESPECÍFICAS DIGIEREN ÁCIDOS
NUCLEICOS
• Desoxirribonucleasas: degradan DNA
• Ribonucleasas:degradan RNA
• Endonucleasas: producen terminales 5´-hidroxilo y 3´fosforilo
• Endonucleasas de restricción: endonucleasas que reconocen secuencias
específicas en el ADN
• Exonucleasas: hidrolizan un nucleótido únicamente cuando está presente
en una terminal de una molécula y sólo actúan en una dirección (3’->5´o 5´-
>3´)
ORGANIZACIÓN, REPLICACIÓN Y REPARACIÓN DEL DNA
• Diversos factores como virus, sustancias químicas, luz ultravioleta y radiación
ionizante aumentan el índice de mutación.
• La cromatina está constituída por moléculas de DNA bicatenario, histonas,
proteínas no histonas (ácidas) y una pequeña cantidad de RNA.
• Las proteínas no histona incluyen enzimas de replicación, de DNA y proteínas
de síntesis, procesamiento y transporte de RNA.
• Histonas: condensan el DNA, regulación de gen
• H1 menos unidas a cromatina, se eliminan con facilidad en solución salina.
• La Unidad organizacional de la cromatina es el Nucleosoma (Histonas+DNA)
• Nucleosomas: DNA envuelto alrededor de moléculas de histona, son la unidad
organizacional de la cromatina
 NUCLEOSOMAS
• Los nucleosomas contiene 4 tipos de histonas:
H2A, H2B, H3 y H4
• Estas 4 histonas centrales están sujetas al menos
a 6 tipos de modificación covalente de
modificaciones posttraduccionales (PTM):
acetilación, metilación, fosforilación, ADP-
ribosilación, monoubiquitilación y sumoilación, que
tienen importancia en la estructura y función de la
cromatina.
• H3 y H4 forman un tetrámero que contiene dos
moléculas de cada una
• H2A y H2B forman dímeros
• En condiciones fisiológicas forman el octámero de
histonas (H3-H4) 2 -(H2A-H2B)2
EL NUCLEOSOMA CONTIENE HISTONA Y DNA
• En la cromatina las partículas centrales (nucleosoma) están separadas por
una región de DNA de alrededor de 30bp denominado “enlazador”
 Extensión de la aglomeración de DNA en cromosomas en
metafase hasta DNA dúplex desnudo.
El DNA cromosómico aglomerado
y organizado en varios niveles

Cromatina inactiva: densamente aglomerada y se denomina

heterocromatina: bandas densas, alto contenido de meC y las histonas
con bajos niveles de PTM activadoras y altos niveles de PTM
represores
Cromatina activa: eucromatina, bandas claras
Heterocromatina: constitutiva (siempre está condensada, cerca a los
centrómeros y telómeros) y facultativa (a veces está condensada, pero
a veces se transcribe y se convierte en eucromatina)
• Estructuras de orden superior mantienen condensada la cromatina: fibrilla
de 10 nm y la fibrilla de cromatina de 30 nm
• Algunas regiones de cromatina son “activas” y otras ”inactivas”
• El DNA en cromatina activa contiene grandes regiones (alrededor de 100
000 pb) que son más sensible a la digestión por una nucleasas como la
DNasa I, por falta 5-metildesoxicitidina (meC) en el DNA y modificaciones
covalentes de histona o PTM (fosforilacióm, acetilación,etc).
• Sitios hipersensibles a la Dnasa I son la ubicación de factores de
transcripción
• El centrómero rico en A-T y secuencias repetidas de DNA
• Los centrómeros están unidos por nucleosomas que contienen la variante de histona H3
CENP-A y otras proteínas de unión formando el cinetocoro
• Los extremos son los telómeros que constan de repeticiones ricas en TG cortas (5´-
TTAGGG-3´)
• La telomerasa se encarga de la síntesis de telómero y mantener la longitud del mismo
• El acortamiento del telómero se ha asociado a cáncer y envejecimiento, la enzima
telomerasa se ha convertido en un blanco atractivo
• El genoma haploide de humanos costa de 3 x 109 bp y 1.7 x 107 nucleosomas
LAS REGIONES CODIFICADORAS A MENUDA ESTÁN
INTERRUMPIDAS POR SECUENCIAS INTERPUESTAS
• Casi todas las secuencias codificadoras para un RNAm único están
interrumpidos por intrones (secuencias no codificadoras)
• Casi siempre los intrones son mucho más largos que los exones.
• La función de las secuencias interpuestas o intrones no está del todo
clara.
Las relaciones entre DNa y mRNa
cromosómicos.
La totalidad de DNA haploide
humano de 3 × 109 pares de bases
(bp) esta distribuido entre 23
cromosomas.
Los genes estan agrupados en
estos cromosomas. un gen
promedio tiene 2 × 10 4bp de
longitud, incluso la región
reguladora (areas rojas), que por lo
general esta localizada en el
extremo 5′ del gen
 MÁS DE LA MITAD DEL DNA EN EUCARIOTAS ESTÁ EN
SECUENCIAS ÚNICAS O NO REPETITIVAS
• En el DNA de humano, 30% del genoma consta de secuencias repetitivas.
• Las secuencias muy repetitivas están presentes en 1 a 10 millones de copias por
cada genoma haploide, suelen estar agrupadas en centrómeros y telómeros del
cromosoma y casi todas son inactivas en el aspecto transcripcional y algunas tienen
una función estructural.
• Las secuencias moderadamente repetitivas están presentes en menos de 1 millón
de copias por genoma haploide, no están agrupadas sino entremezcladas con
secuencias únicas largas o cortas.
• Se clasifican como LINE o SINE (retrotransposones).
• De los SINE en humanos la familia Alu explica 10% del genoma humano.
• Los RNA SINE Alu,B1 y B2 regulan la producción de RNAm (transcripción y
empalme)
SECUENCIAS REPETIDAS DE MICROSATÉLITE
• Constan de 2-6 bp repetidas hasta 50 veces. Generalmente se encuentran como
repeticiones de dinucleótido AC, CG,AT y CA.
• En cualquier locus el número de estas repeticiones puede variar en los dos
cromosomas: heterocigosidad del número de copias.
• Las secuencias de trinucleótido que aumentan de número (inestabilidad de
microsatélites) pueden causar enfermedad.ejm:
• Sd Xfrágil (CGG)inestable
• Corea de Huntington (CAG)
• Distrofia miotónica (CTG)
• Atrofia muscular espinobulbar (CAG)
• Enfermedad de Kennedy (CAG)
 1% DEL DNA CELULAR ESTÁ EN LAS MITOCONDRIAS
• Casi todos los péptidos en mitocondrias (alrededor de 54 de 67) están
codificados por genes nucleares, en tanto que el resto está codificado por
genes que se encuentran en DNA mitocondrial (mt).
• En el ser humano, las mitocondrias contienen 2 a 10 copias de una pequeña
molécula de dsDNA circular que constituye alrededor de 1% del DNA celular
total.
• Este mtDNA codifica para RNA ribosómico y de transferencia específicos para
mt, y para 13 proteínas que desempeñan funciones clave en la cadena
respiratoria.

• En humanos el DNAmt se transmite por herencia no mendeliana materna

• Algunas enfermedades como miopatías, trastornos neurológicos se deben a
mutaciones del DNAmt.
CARACTERÍSTICAS DEL
DNA MITOCONDRIAL
HUMANO
GENES MITOCONDRIALES HUMANOS
EL MATERIAL GENÉTICO SE PUEDE ALTERAR Y REORDENAR
OCURRE INTEGRACIÓN CROMOSÓMICA CON
ALGUNOS VIRUS
• Algunos virus bacterianos (bacteriófagos)
se pueden recombinar con el DNA de un
huésped bacteriano. Esta integración es
una forma de recombinación.
• El sitio en el cual el genoma del
bacteriófago se integra puede ser por
DNA homólogo o por DNA no
homólogo(específica para sitio)
• La integración del DNA de un virus
animal hacia el genoma del animal
generalmente no es “específica para
sitio”, sino que despliega preferencias
por sitio.
 LA TRANSPOSICIÓN PUEDE PRODUCIR GENES
PROCESADOS
• Elementos móviles de DNA saltador: retrotransposones familia Alu
• Genes procesados (en moléculas de inmunoglobulina,alfa- globulina): No
tienen intrones, transposición de RNAm procesado y luego acción de
transcriptasa reversa .
• Seudogenes : genes procesados que no codifican proteína funcional
• Conversión de gen: secuencias similares en cromosomas homólogos y no
homólogos pueden parearse y eliminar cualquier secuencia desproporcionada
entre ellas, esto puede llevar a la fijación accidental de una variante en una
familia de secuencias repetidas.
LOS GENES QUE CODIFICAN PARA
INMUNOGLOBULINA SE REORDENAN
• Los genes VL y CL que codifican para las porciones variable y
conservada de la cadena ligera de inmunoglobulina G, están bastante
separados en el DNA de la línea germinal.
• En el DNA de la células plasmática diferenciada los mismos genes VL
y CL se han movido físicamente para acercarse en el genoma y hacia
la misma unidad de transcripción
 LA SÍNTESIS Y REPLICACIÓN DE DNA ESTÁN
CONTROLADAS DE FORMA RÍGIDA
• La replicación
únicamente puede
ocurrir a partir de
una plantilla de DNA
monocatenario
(ssDNA)
 ORIGEN DE LA REPLICACIÓN
• Ori: Se forma un complejo de 150 a 250 pb de DNA y multímeros de la proteína de
unión a DNA.
• Esto da lugar al desenrrollado y desnaturalización de una región rica en A+T.
• En levaduras se han identificado ARS (secuencias de replicación aútonoma) que
contiene una secuencia de 11bp llamada elemento de replicación de origen
(ORE).
• El ORE se une a un grupo de proteínas formando el complejo de reconocimiento
de origen (ORC)
• El ORE se ubica adyacente a una secuencia rica en A+T de 80 pb fácil de
desenrollar :elemento desenrrollador de DNA (DUE): origen de la replicación en
levaduras.
 DESENROLLADO DEL DNA

DNA helicasa. pemite el desenrollado procesivo del DNA.

Proteínas de unión a DNA monocatenario (SSB)

estabilizan este complejo para el desenrollamiento,
evitando el retemplado prematuro de DNAss a DNAds
 DESENROLLADO DEL DNA
Formación de la horquilla de replicación:
1) DNA helicasa desenrrolla un segmento corto
2) Una primasa inicia la síntesis de primer RNA
3) La DNA polimerasa inicia la síntesis de la cadena hija naciente
4) Las SSB se unen al DNAss y evitan el retemplado prematuro hacia DNAds
 Replicacion de DNA en
Topoisomerasa: E. coli, (los pasos
desenrrola la hélice y evita generales son similares en
la tensión de apertura (en eucariotas)
la separación de hebras)
 FORMACIÓN DE LA HORQUILLA DE REPLICACIÓN
• Las DNA polimerasas sólo sintetizan DNA en dirección 5´a 3´ y sólo un tipo participa en la
horquilla de replicación.
• En la cadena adelantada el DNA se sintetiza de manera continua
• En la cadena retrasada el DNA se sintetiza en fragmentos cortos
• La helicasa se asocia con la primasa forman un complejo móvil llamado primosoma
• Conforme se completa la síntesis de un fragmento de Okasaki y se libera la polimerasa
se sintetiza un nuevo primer

La misma molécula de polimerasa

permanece asociada con la
horquilla de replicación y sintetisa el
siguiente fragmento de Okasaki.
 INICIO Y ALARGAMIENTO DE LA SÍNTESIS DE DNA
• Requiere un primer de RNA de 10 a 200 nt de largo (DNA polα en eucariotas )
• Ataque nucleofílico del 3´-hidroxilo del primer RNA sobre el fosfato del NTP que entra
primero, con separación de pirofosfato (catalizada por DNA polλ y Є en eucariotas)
• La plantilla de DNA dicta cual desoxirribonucleósido trifosfato es complementario
• Estos segmentos de DNA fijos a un primer RNA son los fragmentos de Okasaki.

En mamíferos después de la
formación de muchos fragmentos el
complejo de replicación elimina los
primers RNA, se rellena las brechas
dejadas por su eliminación y luego se
sellan los fragmentos por DNA ligasas
 EL COMPLEJO DE DNA POLIMERASA
Varias polimerasas distintas se encargan de la replicación, propiedades:
1) Alargamiento de cadena
2) Procesividad (número de nt añadidos a la cadena naciente antes que la polimerasa se
separe de la plantilla)

3) Corrección de pruebas
 LA REPLICACIÓN MUESTRA POLARIDAD
• Formación de burbujas de replicación
• El genoma de mamífero completo se replica en aproximadamente 9 horas gracias a que la replicación
en estos organismos es bidireccional y la replicación procede desde orígenes múltiples en cada
cromosoma (hasta 100 oris en seres humanos)

• Este proceso de replicación genera burbujas de replicación

• Hay más replicadores y ORC excesivos que los necesarios para replicar el genoma de mamífero
completo dentro del tiempo de una fase S típica.
• Debe haber una separación de las dos cadenas promovida en mamíferos por RPA (prot de replicación
A)
• El complejo MCM hexamérico desenrrolla el DNA eucariótico
• Se introducen “muescas” en la cadena de doble hélice que se está desenrollando
• Las muescas se vuelven a sellar con rapidez y sin requerir ingreso de energía por :enzima de
resellado de muescas DNA topoisomerasa
• El resellado dependiente de ATP: DNA ligasa
Dos tipos de reacciones de sellado de muescas en el
DNA.
La serie de reacciones a la izquierda es catalizada por
la DNA topoisomerasa I, y la de la derecha por la
DNA ligasa; p, fosfato; R, ribosa; A, adenina
RECONSTITUCIÓN DE LA ESTRUCTURA DE
CROMATINA
• La estructura de la cromatina está involucrada en la regulación e inicio
de síntesis de DNA
• El índice de polimerización en eucariotas es más lento por tener
cromatina y nucleosomas.
• El DNA recién replicado se monta con rapidez en nucleosomas y
cromosomas
EL DNA SE SINTETIZA DURANTE LA FASE S DEL CICLO
CELULAR
• El progreso a través del ciclo celular
de mamífero es monitoreado de
continuo mediante múltiples puntos
• de control del ciclo celular.
• La integridad del DNA, el cromosoma y
la segregacion del cromosoma se
monitorea de manera continua durante
todo el ciclo celular.
• La célula se prepara para la síntesis de
DNA durante G1 y para la mitosis
durante G2.
• La célula regula la síntesis de DNA,
hace que ocurra sólo una vez por ciclo
celular y sólo en momentos específicos.
• Todas las células eucariotas
presentan ciclinas que rigen la
transición desde una fase del
ciclo hacia la otra.
• Las ciclinas activan las CDK
(proteína cinasas dependientes
de ciclina) que fosforilan
sustratos esenciales para la
progresión por el ciclo celular.
• La proteína de retinoblastoma Rb es un sustrato para complejo ciclina D –CDK4 y
CDK6
• Rb es un regulador del ciclo celular porque desactiva el factor de transcripción E2F
necesario para la progresión de G1 a S
• La fosforilación de Rb por CDK4 o CDK6 lo inactiva y tiene lugar la progresión del
ciclo celular.
• El oncogen bcl vinculado a linfoma B, parece ser el gen que codifica para ciclina D1
• Varias oncoproteínas producidas por virus DNA establecen como objetivo el gen Rb
para desactivación y división celular inapropiada
• En el transcurso de la fase S el DNA
nuclear se replica por completo una
vez y sólo una vez.
• Los orígenes sólo se activan una vez
por cada ciclo celular
• Un par dado de cromosomas se
replican de manera simultánea y
dentro de una porción fija de la fase
S en el momento de cada
replicación.
REPARACIÓN DE DNA DAÑADO

• Todos los organismos tienen mecanismos complejos , conservados

para reparar el DNA dañado
• Las células eucariotas contiene 5 vías principales de reparación del
DNA:
• Reparación por escisión de nucleótido (NER)
• Reparación de errores de emparejamiento (MMR)
• Reparación por escisión de bases(BER)
• Recombinación homóloga(HR)
• Unión de extremo no homólogo(NHEJ)
• En la reparación de roturas bicatenarias de DNA (DBS) los eucariotes
utilizan dos vías: HR y NHEJ para eliminar DBS.
• Durante la fase Go/G1 se usa la vía NHEJ , mientras que durante la
fase S y G2/M se usa HR.
• Los pasos de la reparación del daño del DNA son catalizados por
moléculas evolutivamente conservadas que incluyen detectores de
daño de DNA, transductores y mediadores de reparación del daño.
• Puede haber retraso del ciclo celular, paro del ciclo celular, apoptosis
o senescencia.
TIPOS DE DAÑO DEL DNA
 VÍAS DE
REPARACIÓN
DEL DNA EN
MAMÍFEROS
 MECANISMO DE MÚLTIPLES PASOS DE
REPARACIÓN DE ROTURA BICATENARIA
DE DNA
El DNA dañado puede:
a) ser reparado directamente (reparación de DNA), o,
por medio de vías mediadas por p53, y
dependiendo de la gravedad del daño del DNA y de
los genes activados por p53 inducidos,
b) las células pueden ser detenidas en el ciclo celular
por p21/WAF1, el potente inhibidor del complejo de
cDK-ciclina para permitir que haya tiempo para que
el DNA extensamente dañado sea reparado, o
c) y d) si el daño del DNA es demasiado extenso
como para que se repare, las células pueden entrar
en apoptosis o en senescencia; estos dos
procesos evitan que la célula que contiene ese
DNA dañado alguna vez se divida y, por ende, que
induzca cáncer u otros resultados biológicos
perjudiciales.
LA INTEGRIDAD DEL DNA Y DE CROMOSOMAS SE
MONITOREA DE PRINCIPIO A FIN DEL CICLO CELULAR
• A través de 4 puntos de control: si se detecta problemas en alguno de estos
puntos la progresión por el ciclo se interrumpe en tanto no se repare el daño.
• El gen supresor tumoral p53: papel clave en la verificación del punto de
control de G1 y G2
• p53 es un factor de transcripción de unión a DNA
• Las concentraciones altas de p53 activan la transcripción de genes que
retrasan el ciclo celular como p21 (potente inhibidor de CDK-ciclina) que
puede inhibir con eficiencia la acción de todas las CDK
• La inhibición de las CDK suspenderá la progresión por el ciclo celular.
LA INTEGRIDAD DEL DNA Y DE CROMOSOMAS SE
MONITOREA DE PRINCIPIO A FIN DEL CICLO CELULAR

• Si el daño del DNA no puede ser reparado se induce la apoptosis.

• En este caso p53 induce la activación de un conjunto de genes que inducen la
apoptosis. Las células que carecen de p53 funcional no pasan por apoptosis
en caso de daño del DNA.
• p53 es uno de los genes mutados con mayor frecuencia en cánceres humanos
• Más del 80% de cánceres humanos portan mutaciones de pérdida de función
de p53
 REPARACIÓN DE ADN
INTRODUCCIÓN
• Las células tienen varios mecanismos para prevenir mutaciones, o cambios
permanentes en la secuencia del ADN.
• Durante la síntesis de ADN, la mayoría de las ADN polimerasas "comprueban su
trabajo" y arreglan la mayoría de las bases mal emparejadas en un proceso
llamado corrección.
• Inmediatamente después de la síntesis de ADN, es posible detectar y
reemplazar cualquier base mal emparejada restante en un proceso
llamado reparación de mal apareamiento.
• Si el ADN se daña, se puede reparar por varios mecanismos, que
incluyen reversión química, reparación por escisión y reparación de ruptura
de la doble cadena.
REVISIÓN

• Las ADN polimerasas son las enzimas que forman el ADN en las células.
Durante la replicación (copiado) del ADN, la mayoría de las ADN
polimerasas pueden "revisar su trabajo" con cada base que añaden.
• Si la polimerasa detecta que ha agregado un nucleótido equivocado
(apareado incorrectamente), lo quita y reemplaza enseguida, antes de
continuar con la síntesis de ADN.
Existen mecanismos que utilizan las
células para corregir los errores de
la replicación y reparar daños al
ADN, como:
• La revisión, que corrige errores
durante la replicación del ADN.
• La reparación de mal
apareamiento, que arregla
bases mal emparejadas justo
después de la replicación del
ADN.
• Las vías de reparación de daño
al ADN, que detectan y corrigen
daños durante todo el ciclo
celular.
 REPARACIÓN DE MAL APAREAMIENTO
• Sucede después de que se ha hecho ADN nuevo, función: es eliminar y
reemplazar las bases mal apareadas. La reparación de mal apareamiento
también puede detectar y corregir pequeñas inserciones y delecciones que
suceden cuando las polimerasas "se resbalan" y pierden su lugar sobre el
molde.
• Primero, un complejo proteico (grupo de proteínas) reconoce y se une a la
base mal apareada. Un segundo complejo corta el ADN cerca de la pareja
errónea y otras enzimas cortan el nucleótido incorrecto junto con un
segmento de ADN circundante.
• Luego, una ADN polimerasa reemplaza la sección faltante con los
nucleótidos correctos y una enzima llamada ADN ligasa sella el espacio.
• En eucariontes, los
procesos que permiten
identificar la cadena
original en la reparación
de mal apareamiento usan
el reconocimiento de
mellas (rupturas en las
cadenas sencillas)
presentes solo en el ADN
recién sintetizado
 MECANISMOS DE REPARACIÓN DE DAÑOS AL ADN
• Reversión directa: algunas reacciones químicas que dañan el ADN pueden ser
"deshechas" directamente por enzimas de la célula.
• Reparación por escisión: el daño a una o unas cuantas bases de ADN se suele arreglar
al eliminar (escindir) y reemplazar la región dañada.
- En la reparación por escisión de bases, solo se quita la base dañada.
- En la reparación por escisión de nucleótidos, se elimina una sección de
nucleótidos.
• Reparación de ruptura de la doble cadena: se utilizan dos vías principales, la unión de
extremos no homólogos y la recombinación homóloga, para reparar rupturas en la doble
cadena del ADN (cuando un cromosoma entero se divide en dos pedazos).
 REVERSIÓN DEL DAÑO
• En algunos casos, una célula puede reparar daños en el ADN al simplemente revertir la reacción
química que los causó. El "daño al ADN" suele implicar solo un grupo extra de átomos que se
unen al ADN mediante una reacción química.
• Por ejemplo, la guanina (G) puede sufrir una reacción que añade un grupo metilo (CH3) a un
átomo de oxígeno de la base. Si no se corrige, la guanina que contiene metilo formará pareja con
timina (T) en lugar de citosina (C) durante la replicación del ADN.
• Los seres humanos y muchos otros organismos tienen una enzima que puede quitar el grupo
metilo, y revertir la reacción para regresar la base a su estado normal.
 REPARACIÓN POR ESCISIÓN DE BASE
• Se usa para detectar y eliminar ciertos tipos de bases dañadas. Un grupo de
enzimas llamadas glicosilasas tiene un papel clave en la reparación por escisión de
bases. Cada glicosilasa detecta y elimina un tipo específico de base dañada.
• En la desaminación puede convertir una base citosina en uracilo, una base que suele
encontrarse solo en el ARN. Durante la replicación del ADN, el uracilo formará
pareja con adenina en lugar de guanina (como lo haría si la base todavía fuera
citosina), por lo que un intercambio de citosina por uracilo sin corregir puede causar
una mutación.
• Para evitar tales mutaciones, una glicosilasa de la vía de reparación por escisión de
base detecta y elimina específicamente citosinas desaminadas. Una vez que se
elimina la base, también se elimina la pieza "vacía" del esqueleto de ADN y otras
enzimas llenan y sellan la brecha.
 REPARACIÓN POR ESCISIÓN DE NUCLEÓTIDOS
• Es otra vía que se usa para eliminar y reemplazar bases dañadas. Detecta y
corrige tipos de daño que distorsionan la doble hélice del ADN. Por ejemplo, esta
vía detecta bases que han sido modificadas con grupos químicos voluminosos, como
los que se unen al ADN cuando se expone a las sustancias químicas del humo de
cigarrillos.
• También se utiliza para reparar algún tipo de daño que causa la radiación UV. La
radiación UV puede causar que la citosina y la timina reaccionen con bases vecinas
que también sean C y T, y se forman enlaces que distorsionan la doble hélice y
causan errores en la replicación del ADN.
• El tipo más común de unión, el dímero de timina, se compone de dos bases de
timina que reaccionan entre sí y se unen químicamente.
• Se elimina el nucleótido (o
nucleótidos) con daño junto con
un segmento circundante de
ADN.
• En este proceso una helicasa
(enzima que abre el ADN)
abre el ADN para formar una
burbuja y enzimas que cortan
el ADN quitan el segmento
dañado de la burbuja.
• Una ADN polimerasa
reemplaza el ADN que falta y
una ADN ligasa sella la brecha
en el esqueleto de la cadena
 REPARACIÓN DE ROTURA DE LA DOBLE CADENA
• Algunos factores ambientales, como la radiación de alta energía, causa roturas en la doble
cadena del ADN (rompen cromosoma). Desastres como Chernobyl.
• Las roturas son peligrosas porque pueden perderse grandes segmentos de cromosomas y los
cientos de genes que contienen si la fragmentación no se repara. Dos vías que participan en
la reparación de rotura del ADN de doble cadena son la vía de unión de extremos no
homólogos y la de recombinación homóloga.
Los dos extremos rotos de un cromosoma
simplemente se vuelven a pegar.
Este mecanismo de reparación es
"desordenado" y resulta en la pérdida, o
a veces adición, de unos cuantos
nucleótidos en el sitio de corte.
Por lo tanto, la unión de extremos no
homólogos tiende a producir una
mutación
 RECOMBINACIÓN HOMÓLOGA
• Se utiliza la información del cromosoma homólogo que coincide con la del dañado (o de
una cromátida hermana si el ADN se ha copiado) para reparar la fragmentación.
• En este proceso se acercan los dos cromosomas homólogos y se utiliza la región sin daños
del homólogo o la cromátida como molde para sustituir la región dañada del cromosoma
roto.

La recombinación homóloga es "más limpia"

que la unión de extremos no homólogos y no
suele causar mutaciones

La región dañada se reemplaza por

recombinación,
usando secuencias dañadas del
homólogo
 REVISIÓN DEL ADN Y REPARACIÓN EN ENFERMEDADES
• El cáncer colorrectal hereditario no polipósico (síndrome de Lynch) es causado por
mutaciones en genes que codifican ciertas proteínas que reparan el mal
apareamiento. Ya que las bases emparejadas erróneamente no se reparan en las
células de las personas con este síndrome, las mutaciones se acumulan con mucho
mayor velocidad que en las células de una persona no afectada. Esto puede conducir
al desarrollo de tumores en el colon.
• Xerodermia pigmentosa son extremadamente sensibles a la luz UV. Lo causan
mutaciones que afectan la vía de reparación por escisión de nucleótidos. Cuando la
vía no funciona, los dímeros de timina y otras formas de daño por luz UV no pueden
repararse. Las personas con xerodermia pigmentosa desarrollan quemaduras graves
con solo unos pocos minutos en el sol y cerca de la mitad desarrollará cáncer de piel
a la edad de 10 años a menos que eviten los rayos UV.