Universidad de San Carlos de Guatemala
Facultad de Ciencias Médicas
Unidad Didáctica de Biología
PRACTICA DE LABORATORIO No. 4 UNIDAD I
IDENTIFICACIÓN DEL ENLACE PEPTÍDICO POR REACCIONES QUÍMICAS
Universidad San Carlos de Guatemala
Dr: Jaime Rene Gonzalez Poggio
Unidad didactica: Biologia Molecular y Celular
Número de laboratorio No.4
Nombre: Maria Fidelia Prado Aguirre
Carnet: 202202609
Dia y fecha: 24 de febrero del 2023
Fundamento teórico:
Las proteínas son moléculas formadas por cadenas de aminoácidos que están
unidos por un tipo de enlace conocido como enlace peptídico. Por sus propiedades
físico químicas, las proteínas se pueden clasificar en proteínas simples, formadas
sólo por aminoácidos o sus derivados; proteínas conjugadas, formadas por
aminoácidos acompañados de sustancias diversas, y proteínas derivadas
sustancias formadas por desnaturalización y desdoblamiento de las anteriores.
El enlace peptídico es un enlace covalente que une los aminoácidos en una
molécula de proteína. Esta unión se produce entre el grupo amino (-NH2) de un
aminoácido y el grupo carboxilo (-COOH) de otro aminoácido, liberando una
molécula de agua en el proceso. La identificación del enlace peptídico por
reacciones químicas se basa en la capacidad de estos grupos químicos para
reaccionar con diferentes compuestos y producir cambios químicos específicos.
Se presentan una serie de compuestos para determinar la presencia o ausencia de
proteínas en sus componentes. La concentración de proteínas dentro de las
sustancias no son visibles ya que son incoloras, para identificar su presencia o
ausencia iniciara una prueba de espectrofotometría visible (formar un producto
coloreado mediante la absorcion del espectro visible) sometiendolas a una reaccion
que desarrolle un cambio de color en su presencia. La intensidad del color
desarrollado luego de la reacción colorimétrica será proporcional a la cantidad de
proteínas que se presenten en las muestras.
Mediante la reacción del reactivo de biuret (KOH + CuSO4 = KNaC4O6·4H2O) que
contiene sulfato de cobre en forma acuosa que al contacto con proteinas forma un
complejo de coordinación entre los iones Cu+2 y los pares de electrones no
compartidos del nitrogeno que forma parte de los enlaces peptidicos formando un
compuesto de color violeta. En ausencia de proteínas el reactivo de biuret presenta
un color celeste característico de los iones de Cu+2.
Este reactivo da un ensayo positivo con los enlaces peptídicos entre aminoácidos,
cuando la solución queda de color violeta. Esto se debe a que el cobre tiene la
propiedad de formar iones complejos, especialmente entre enlaces peptídicos.
En conclusión, la identificación del enlace peptídico por reacciones químicas se
basa en la capacidad de los grupos amino y carboxilo de los aminoácidos de
reaccionar con diferentes compuestos y producir cambios químicos específicos.
Materiales y equipo:
Materiales:
10 ml de leche
3 ml de clara de huevo
10 ml de orina
Guantes descartables
Marcador permanente para identificar tubos de ensayo
Agua destilada
Solución de hidróxido de sodio al 10%
Solución de sulfato de cobre al 10%
Equipo:
3 tubos de ensayo
Gradilla para tubos de ensayo
3 pipetas de 5 ml
3 varillas de vidrio
Procedimiento:
1. En un tubo de ensayo ponga 2 ml de agua.
2. Agregue 10 gotas de hidróxido de sodio al 10% y agite con la varilla de
vidrio
3. Agregue 5 gotas de solución de sulfato de cobre al 10%, gota a gota
revolviendo
4. Repita el mismo procedimiento con la leche, la clara de huevo diluida en
5 ml de agua y la orina.
5. Anote sus resultados en el cuadro, y explique a qué se deben los
cambios observados.
Resultados:
➔ En la muestra del Agua se hizo la reacción de Biuret y los materiales
utilizados junto con el agua fueron dos soluciones de hidróxido de sodio y
sulfato de cobre, esta muestra fue negativa gracias a la falta de proteínas
presentes por lo que el color que manifestó la muestra fue azul.
➔ En la muestra de la clara de huevo haciencola reaccionar con el biuret y las
soluciones de hidróxido de sodio y sulfato de cobre, la muestra fue positiva
ya que el huevo es una de las fuentes con más proteínas, la reacción se
torno de color morado que quiere decir que es su estructura hay proteinas
presentes.
➔ En la muestra de Leche fue igual haciéndola reaccionar con las mismas
soluciones para romper los enlaces polipetidos dando esta prueba positiva
de presencia de proteínas en su estructura, manifestando un cambio de color
a violeta, la intensidad de su morado va a ser proporcional a la cantidad de
proteínas que se encuentre.
➔ En la muestra de la orina igualmente al hacerla reaccionar con el biuret y las
soluciones de hidróxido de sodio y sulfato de cobre, la solución se torno de
color azul ya que esta solución no presenta proteínas en su estructura, si la
solución se llegara a tornar de color morado, eso quiere decir con proteínas
en su estructura, quiere decir que pueda haber algún fallo renal.
Análisis de resultados:
En la práctica No. 1 en un principio al agregar hidróxido de sodio al agua se
separan los cationes de sodios y el anión de hidróxido disminuye la acidez del agua;
luego de esto, es depositado el sulfato de cobre; provocando que se sustituya el
cobre por sodio, generando sulfato de sodio que se manifiesta en la parte superior
disuelto con el agua por lo que es una estructura polar con carga, mientras que
abajo se forman pequeñas partículas de hidróxido de cobre, que adopta un color
azul, indicando que se tienen iones de cobre; así mismo, se pudo evidenciar que no
posee enlaces peptídicos y que solo contienen enlaces covalentes en su estructura,
lo que la vuelve negativa a la presencia de proteínas.
En la práctica No.2 Se evidencia la presencia de enlaces peptídicos debido a que
el huevo contiene (ovoalbúmina) una proteína formada por (585 a.a con 17 puentes
de disulfuro entrelazados en su molécula), por lo que al ser mezclado con hidróxido
de sodio y sulfato de cobre se obtuvo una coloración violeta dando un resultado
positivo en proteínas.
En la práctica No.3 se identificó la prueba de biuret, que detectó la presencia de
compuestos de enlaces peptídicos que tienen más de dos aminoácidos, dado a que
la solución acuosa de sulfato cúprico con el hidróxido de sodio que es un medio
alcalino, tornan la solución de color lila porque detectaron dichos enlaces, debido a
que el cobre forma iones complejos entre los enlaces peptídicos. Por ende, esta
solución tiene presencia de proteínas como la caseína.
En la práctica No. 4 se pudo observar un color claro, lo que indica que su resultado
a proteínas fue negativo, con la orina se constató que no presenta evidencia de
enlaces peptídicos característicos de las proteínas, y por lo tanto no se observó la
formación de un precipitado.
Conclusiones:
OBJETIVO No 1: Identificar la presencia del enlace peptídico en diferentes soluciones
mediante la prueba de Biuret.
CONCLUSIÓN No 1: el reactivo de biuret es el que detecta o deja observar más a
detalle, la presencia de proteínas, péptidos y otros compuestos de dos o más enlaces
peptídicos en las sustancias.
ARGUMENTOS QUE SUSTENTAN A LA CONCLUSIÓN: al realizar las diferentes
pruebas con la clara de huevo y la leche se pudo observar que si contenía proteínas todo
esto debido a que estas proteínas son sensibles con las sales metálicas pesadas como lo
son el cobre y el potasio, formando así los precipitados que eran cambios en el estado
físico y es su estructura que son irreversibles.
OBJETIVO No 2: Explicar las diferencias observadas de los resultados obtenidos.
CONCLUSIÓN No 2: las proteínas están constituidas por aminoácidos, por tal motivo que
esta práctica se enfocó en la detección de las mismas, mediante una prueba de
identificación, que permite observar y establecer un resultado
ARGUMENTOS QUE SUSTENTAN A LA CONCLUSIÓN: durante la práctica
observamos resultados dependiendo de la característica y composición de cada uno de
los elementos como la orina, leche, agua, y clara de huevo. Esto mediante la prueba de
biuret permitiendo establecer así un resultado negativo (cuando este no presentaba
alguna coloración) o positivo (cuando existía una coloración y precipitado) ,
OBJETIVO No 3: Explicar el fundamento teórico de la reacción cualitativa.
CONCLUSIÓN No 3 : la reacción de biuret se basa en la formación de un compuesto
violeta, debido a la formación entre los iones de cobre y los del nitrógeno que forman
parte de los enlaces peptídicos.
ARGUMENTOS QUE SUSTENTAN A LA CONCLUSIÓN: ya que esta reacción se
caracteriza por un color violeta tras la adición de sulfato de cobre a todos los compuestos
que contengan dobles enlaces peptídicos unidos ya sea directa o através de un átomo de
carbono intermedio. por eso se usa en la detección de las proteínas y péptidos que tienen
más de dos aminoácidos.
conclusiones:
Se identificó la presencia del enlace peptídico en dos soluciones, en el tubo de
ensayo 2 y 3 la prueba biuret fue positiva en la clara de huevo y en la leche, debido
a que estos alimentos contienen proteínas como la albúmina que se encuentra en la
clara de huevo y la caseína en la leche.
Se observaron diferencias en cada tubo de ensayo, en el tubo 1 donde se
encontraba el agua se formó un precipitado de color celeste a la hora de agregar el
sulfato y el hidróxido de sodio, al igual que en el tubo 4 en el cual se encontraba la
orina se identificó una solución liquida totalmente celeste. En cambio, en el tubo 2
no hubo presencia de precipitado alguno, siendo totalmente liquida y de color
morado ya que en esta se logró observar la presencia de enlaces peptídicos, en el
tubo 3 donde se hallaba el huevo se formó una suspensión de color morada también
confirmando la presencia de enlaces peptídicos.
Se encontraron dos reacciones, en los tubos de ensayo 2 y 3 se halló la presencia
de proteínas gracias al reactivo de Biuret el cual nos indica la presencia de enlaces
peptídicos entre aminoácidos los cuales al ser positivos se tiñen de color violeta, si
la proteína hubiese estado en contacto con calor, radiación o algún detergente
hubiese entrado en un proceso de desnaturalización, por lo cual la prueba de biuret
hubiese presentado un resultado negativo tiñéndose de color celeste. Por otra parte,
en los tubos de ensayo 1 y 4 el color de la solución no cambió debido a la ausencia
de concentración de proteínas.
Anexo:
Referencias:
1. Iwasa, J., Karp, G. y Marshall, W., 2019. Karp, biología celular y molecular .
8ª ed. Ciudad de Guatemala: McGraw-Hill Interamericana.
RÚBRICA PARA EVALUACIÓN DE INFORME DE LABORATORIO UNIDAD I
DESCRIPCIÓN: De forma individual realiza el laboratorio según lo indicado en el documento guía de la práctica de laboratorio y
anota sus resultados, para que posteriormente de forma grupal discutan los resultados y mediante una puesta en común obtengan
las conclusiones y su respectivo argumento.
INSTRUCCIONES: Marque la casilla correspondiente a la calidad del trabajo presentado por el grupo de trabajo y al final sume el
total de cada una de las casillas.
Nota: El valor obtenido es sobre 100 puntos, el cual posteriormente se convertirá a 0.5puntos.
CRITERIOS PARA NO PRESENTA
EXCELENTE (%) ACEPTABLE (%) NECESITA MEJORAR (%)
EVALUAR (%)
10 5 3 0
Informe de El informe es El informe es No cumple con el formato de No presenta
laboratorio presentable, cumple presentable, cumple Informe, ni aparecen todos
con el formato con el formato los elementos requeridos.
establecido, y están establecido, pero no
presentes todos los están presentes todos
elementos requeridos. los elementos
requeridos.
Fundamento teórico 10 5 3 0
El fundamento teórico El fundamento teórico El fundamento teórico es No presenta este
es coherente con lo es coherente con lo incoherente con lo realizado aspecto
realizado en la realizado en la en la práctica de laboratorio,
práctica de laboratorio práctica de laboratorio sin importar si está citado
y está citado y no presenta citas en adecuadamente o no.
adecuadamente. el texto.
Resultados 15 7 3 0
Recopila y ordena los Recopila y ordena los La información corresponde a No presenta este
datos obtenidos datos obtenidos el procedimiento indicado en aspecto
durante la práctica de durante la práctica de la práctica de laboratorio.
laboratorio, laboratorio en
presentándolos en párrafos, cuadros o
párrafos, cuadros o gráficos, sin colocar
gráficos claramente identificación en cada
identificados. uno de ellos.
Discusión de 25 14 7 0
resultados Interpreta y analiza los Interpreta y analiza los La información corresponde a No presenta este
resultados obtenidos resultados obtenidos el procedimiento indicado en aspecto
durante la práctica de durante la práctica de la práctica de laboratorio.
laboratorio dándole laboratorio sin darle
sustento con sustento de fuentes
información de fuentes confiables y presenta
confiables y presenta citas en el texto.
citas en texto. Interpreta y analiza los
resultados obtenidos
durante la práctica de
laboratorio dándole
sustento con
información de fuentes
confiables, sin
presentar citas en
texto.
Conclusiones 20 10 5 0
La conclusión La conclusión la información corresponde al No presenta este
responde al objetivo responde al objetivo análisis de resultados. aspecto
planteado planteado de manera
evidenciando un superficial, aunque
análisis profundo y presente un
presenta un argumento sustentado
argumento sustentado en fuentes confiables
en fuentes confiables citados
citados adecuadamente.
adecuadamente.
La conclusión
responde al objetivo
planteado
evidenciando un
análisis profundo y no
presenta argumento a
la conclusión
Referencias 10 5 2 0
Presenta 3 o más Presenta 2 referencias Sus fuentes de consulta no No presenta este
referencias válidas válidas consultadas y son válidas, y no están aspecto
consultadas y se se encuentran referenciadas según la
encuentran debidamente normativa Vancouver.
debidamente referenciadas según la
referenciadas según la normativa Vancouver.
normativa Vancouver.
Presenta 3 o más
referencias válidas
consultadas que no
están referenciadas
según la normativa
Vancouver.
Cuestionario del 10 5 2 0
fundamento teórico Responde Responde al menos el Responde al menos el 40% No presenta este
correctamente todas 70% las preguntas las preguntas planteadas aspecto
las preguntas planteadas utilizando utilizando fuentes confiables
planteadas utilizando fuentes confiables de de información sin importar si
fuentes confiables de información sin presenta citas en el texto
información y importar si presenta
colocando citas en el citas en el texto
texto
La rúbrica dará un valor en relación a 100 puntos, este posteriormente será convertido a 0.5 que corresponde a la práctica de
laboratorio.
