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PRACTICA No. 4
Extracción de ADN. Fecha vigencia:
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1. INTRODUCCION
El Ácido desoxirribonucleico (ADN) es un polímero de unidades más sencillas llamadas nucleótidos, las cuales están
constituidas por una molécula de azúcar desoxirribosa, enlazada a un grupo fosfato y a una base nitrogenada que puede
ser Guanina, citocina Adenina o timina. Estas unidades son las encargadas de codificar la información hereditaria,
contenida en el genoma de los organismos biológicos; por lo que es de gran importancia su extracción de la célula, para
poder estudiar la función biológica.
El proceso de obtención del ADN a partir de material biológico consta de 2 pasos, el primero conocido como extracción
involucra la desestabilización, ruptura y desnaturalización de todas aquellas moléculas que cubren al material genético,
primero por una disrupción mecánica, seguido de una lisis química y finalmente una digestión enzimática. El segundo paso
conocido como purificación permite aislar el ADN de los extractos celulares, para lo cual se realiza una extracción de
contaminantes con solventes, posteriormente una precipitación de proteínas y finalmente una precipitación del material
genético, que se encuentra en solución acuosa.
En esta practica se realizará una extracción de ADN de muestras vegetales, empleando para ello elementos comunes del
hogar; con la finalidad de entender el fundamento que hay detrás de la extracción y purificación de material genético.
2. OBJETIVOS.
Conocer el fundamento de la extracción de ADN de tejido biológico.
Emplear de forma práctica los conocimientos adquiridos sobre el uso de algunos elementos comunes del laboratorio
de biología molecular
3. MATERIALES Y EQUIPOS
- Lavaplatos líquido.
- Agua destilada.
- Sal de cocina (NaCl) y bicarbonato de sodio.
- Alcohol al 70 %.
- Pulpa de tomate.
- Papel filtro, filtro de café o gaza.
- Vaso de precipitado o vaso plástico.
- Cuchara plástica mediana
- Palillos de madera
4. PROCEDIMIENTO
El primer paso es preparara una solución de lisis celular, para lo cual mezclamos unos 100 mL de agua, con una cucharada
de sal y dos cucharadas de bicarbonato de sodio, una vez disueltas estas sales, agregamos dos cucharadas de jabón liquido
de lavar platos y mezclamos suavemente para no generar espumas.
El segundo paso es realizar la lisis celular para ello mezclamos en un vaso limpio una parte del extracto o pulpa vegetal
(tomate), con dos partes de la solución lisis anterior; mezclamos suavemente y dejamos reposar unos 3 minutos, para que
los componentes reaccionen.
El tercer paso es purificar el material genético, para lo cual filtramos en nuevo vaso nuestra mezcla de lisis, con la ayuda
de papel filtro, filtro de café o gaza. Finalmente tomamos 20 mililitros del filtrado, lo agregamos en un tubo falcon y
suavemente agregamos alcohol al 70 %, garantizando que este se deslice suavemente por las paredes del tubo y dejamos
reposar. Después de unos minutos se forma una especie de lana blanca en la superficie del alcohol, que retiraremos con la
ayuda de palillos de madera.
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Extracción de ADN. Fecha vigencia:
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PREGUNTAS
1) ¿En el procedimiento realizado, que función cumplen la sal de mesa (NaCl), el Bicarbonato y el jabón líquido?
2) ¿Por qué es importante el alcohol en el proceso de purificación?
3) ¿En qué parte del proceso se separan las proteínas?
4) ¿Qué modificación harías a este protocolo para mejorar su eficiencia y por qué?
