INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA
Y BIOQUÍMICA
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
PRÁCTICA #10
“IDENTIFICACION BIOQUIMICA DE ENTEROBACTERIAS POR EL SISTEMA
API 20 E”
(Bucio Rodríguez Andrea, Domínguez Ramírez Karla Daniela, Solis Santos
Alan, Tinoco Barrera Paulette)
RESUMEN
La técnica API 20E es una herramienta que permite identificar a los bacilos Gram negativos no
pertenecientes a las enterobacterias, como Pseudomonas, Acinetobacter, Flavobacterium,
Moraxella, Vibrio y Aeromonas. Esta técnica consiste en realizar 20 pruebas bioquímicas en una
galería conformada por 20 microtubos. Los resultados de estas pruebas se comparan con una carta
de colores para identificar la especie bacteriana.
Para esta prueba básicamente trabaja con 20 diferentes microtubos en una tira plástica, en cada uno
de los cuales se tiene el medio de prueba deshidratado. Se utiliza una suspensión bacteriana con la
muestra que deseamos analizar, para rehidratar los medios de cada uno de los microtubos. Durante
la incubación, el metabolismo de algunas especies bacterianas cambiará de color el medio debido a
diferencias de pH. Otros generarán un producto que debe ser revelado por medio de otros reactivos.
De estos se obtendrá un número de identificación (código de 7 dígitos) en base a la secuencia de
resultados positivos o negativos, este número se busca en un libro de códigos o en un software
(BioMérieux) en el cual existe una correlación entre el número y la especie bacteriana, lo cual permite
la identificación de la muestra.
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RESULTADOS Y DISCUSIÓN
En esta práctica añadimos ciertos reactivos para poder
revelar la presencia o no de un producto generado por el
metabolismo de la bacteria, como se muestra en la
imagen.
En los cuales añadimos TDA en FeCl3, VP en KOH al 40% y
una gota de reactivo VP-2, y esperar durante 10 min en los
que sale si la prueba es positiva o negativa.
IND en el reactivo de Kovacs.
Después implementamos la carta de escala API
para determinar si la prueba era positiva o
negativa para cada uno de los microtúbulos.
Una vez comparando con la escala API
obtuvimos los siguientes resultados, para así
por medio de apiweb, poder saber de qué
microorganismo se trata,
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Demostración de las pruebas bioquímicas que realizamos para saber de qué
microorganismo se trata.
Al tener nuestras pruebas bioquímicas realizadas y
compararlas con el catalogo API, podemos decir que las
bacterias que se veian similares a los resultados obtenidos
son las siguentes:
-Salmonella arizonae
-Salmonella spp.
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CUESTIONARIO
1. Investigar el fundamento de cada una de las pruebas realizadas. Los
microtubos se inoculan con una suspensión de microorganismos, que
rehidrata los medios. Las tiras o galerías se incuban y por efecto del
metabolismo bacteriano se producen cambios de color espontáneos o bien por
la adicción de reactivos. En el siguiente cuadro se menciona para cada prueba
que componentes activos contiene y las reacciones enzimáticas.
TEST Componentes Activos. Reacciones/ Enzimas.
ONPG 2-nitro-fenil-BD-galactopiranosida B-galactosidasa
ADH L-arginina Arginina-dihidrolasa
LDC L-lisina Lisina Decarboxilasa
ODC L- ornitina Ornitina Descarboxilasa
CIT Citrato trisódico Utilización del Citrato
H2S Tiosulfato sódico Producción H2S
URE Urea UREasa
TDA L-Triptófano Triptófano DesAminasa
IND L-Triptófano Producción de índole
VP Piruvato sódico Producción de acetoina
GEL Gelatina (origen bovino) Geltinasa
GLU D-glucosa Fermentación/Oxidación
MAN D-Manitol Fermentación/Oxidación
INO Inositol Fermentación/Oxidación
SOR D-sorbitol Fermentación/Oxidación
RHA L-ramnosa Fermentación/Oxidación
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SAC D-sacarosa Fermentación/Oxidación
MEL D-melibiosa Fermentación/Oxidación
AMY Amigdalina Fermentación/Oxidación
ARA L-arabinosa Fermentación/Oxidación
2. ¿Por qué razón se adiciona agua destilada estéril a la base de la charola
de incubación? Crear una atmósfera húmeda que favorezca el crecimiento y
metabolismo microbiano.
3. ¿Por qué razón debe ser agua destilada y no agua de la llave o purificada
la que se adicione a la base de la charola? El agua sirve para crear una buena
atmósfera para el microorganismo, más sin embargo la utilización de otros
tipos de agua puede ocasionar la liberación de gases tóxicos que inhiban a los
microorganismos o afecten el resultado de la prueba ya que esta se puede llegar
a volatilizar en el tiempo de incubación.
4. ¿Cuál es la función del aceite mineral o de la parafina liquida adicionada?
Proporcionan condiciones anaerobias ya que sellan la entrada de aire a la
muestra.
5. ¿Porque es importante realizar las pruebas bioquímicas? Pruebas
bioquímicas que pueden realizarse con estos sistemas por ejemplo están las
pruebas de fermentacióń de carbohidratos, la determinacióń de la produccióń
de H2S, la determinacióń de la hidrolisis de la gelatina, entre otras y que son
utilizadas en la identificacióń de diferentes tipos de microorganismos, por ello
aunque todos estos sistemas tienen el mismo fundamento, difieren en el
número y tipo de pruebas que permiten realizar, ya que su selección está
directamente relacionada con la actividad metabólica del género al que
pertenece el microorganismo a identificar.
6. Comparando con las pruebas bioquímicas que se realizan en un tubo de
ensaye, ¿qué ventajas tiene emplear prueba API E20? Es una forma más
precisa, para un diagnóstico más acertado ya que da seguridad en el resultado
de las pruebas, facilita el control de calidad de bacteriología, existe y está
disponible una base de datos para poder comparar resultados, es fácil de
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manipular, reduce el espacio de almacenamiento, reduce costos de control de
calidad con una mayor precisión, y mayor confiabilidad.
7. ¿Cuáles son las desventajas de utilizar la prueba API 20E? La técnica
puede tener un costo elevado, requieren métodos de respaldo, discrepancia
con los métodos de referencia, solo para microorganismos que son cepas gran
negativas y oxidasa negativa, el caso de la identificación de Salmonella o
Shigella, debe realizarse una identificación serológica para confirmar la
identificación bacteriana.
8. Tomando en cuenta la transferencia electrónica asociada a la producción
de energía, se puede establecer tres categorías de bacterias ¿Cuáles son?
Los microorganismos obtienen su energía de diversas formas:
Fuente de obtención de nutrientes Categorías
Carbono CO2 Autótrofos
Energía luminosa Fotótrofos
Compuestos inorgánicos Litótrofos
CONCLUSIONES
Paulette Tinoco Barrera
Fue una práctica muy interesante de realizar, ya que para identificar especies microbianas no nos basamos
en sus características físicas pues no son suficientemente distintivas o diferenciales, por lo que se utilizan
pruebas que evalúan la actividad bioquímica o metabólica de la bacteria, permitiendo identificar su género y
especie, para este laboratorio realizamos la prueba API 20e, preparamos, inoculamos e incubamos la prueba
durante dos días y en base a si eran positivos o negativos obtuvimos una secuencia que nos permitió
identificar a la bacteria. Se me hace muy impresionante cuánta información está recopilada y lo útil que es
para identificar bacterias. Aprendimos a identificar y realizar la búsqueda del código.
Alan Daniel Solis Santos
El desarrollo de esta práctica me pareció bastante interesante ya que pudimos determinar de qué
microorganismo se trataba a partir de diferentes pruebas bioquímicas las cuales las hicimos en base a una
secuencia que es la que comparamos con la página api web y así poder darnos idea de que microorganismo
se trataba. En nuestro caso era muy similar a Salmonella ss., lo cual es hasta un poco peligrosos ya que si no
tienes cuidado en la manipulación de la bacteria te puedes enfermar sin siquiera saber con qué estás
trabajando. Estas pruebas pusimos unos reactivos que reaccionaban con productos del metabolismo de la
bacteria y así ver si salían positivas o negativas las pruebas. En general me gusto bastante el laboratorio y
agradezco mucho al profesor por la paciencia que tuvo al grupo además de que sus explicaciones eran
bastantes buenas con las que reforzábamos la teoría con la práctica.
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Karla Daniela Domínguez Ramírez.
En el laboratorio durante la práctica, aprendimos que las pruebas bioquímicas se utilizan para
identificar las características metabólicas de las bacterias, como las actividades enzimáticas y la
producción de metabolitos. También aplicaron los conocimientos adquiridos en prácticas anteriores,
como la esterilización, la preparación de frotis y la tinción de bacterias.
Andrea Bucio Rodríguez.
El sistema API 20E proporciona una identificación específica de enterobacterias al evaluar múltiples
parámetros bioquímicos, como la utilización de diferentes azúcares, la producción de enzimas
específicas y otras características bioquímicas. Es conocido por su rapidez y eficiencia en la
identificación de estos microorganismos, ya que los resultados se obtienen en un tiempo corto. Sin
embargo, el sistema API 20E es una puede tener limitaciones, por lo que en algunos casos, puede ser
necesario realizar pruebas adicionales para obtener resultados definitivos, especialmente en
situaciones críticas.
REFERENCIAS
Avances de la Bacteriología Médica el Sistema API. (s. f.). Recuperado 26 de noviembre de 2022, de
[Link] API20E. “Perfiles numéricos”. Recuperado
el 27 de noviembre del 2022 [perfiles de la base de datos]. Consultado en:
[Link]
API® |
BioMérieux Mexico. (n.d.). bioMérieux Mexico. [Link]
clinico/productos/apir Identificación de microorganismos – SIMED. (n.d.).
[Link]
Identificación de microorganismos – SIMED. (n.d.). [Link]
vitek/
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ANEXO – EVIDENCIAS
Karla Daniela Domínguez Ramírez.
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Paulette Tinoco Barrera
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Alan Daniel Solis Santos
