UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

FACULTAD DE ZOOTECNIA

“ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA IN VITRO DEL NONI

(Morinda citrifolia) SOBRE Escherichia coli Y SU

EFECTO INMUNOMODULADOR EN CUYES, EN TINGO

MARÍA”

TESIS

Para optar el título de:

INGENIERO ZOOTECNISTA

XIOMARA BETETA BLAS

Tingo María – Perú

2018
 DEDICATORIA

A Dios; que me ha permitido vivir

estos momentos de felicidad,
siempre escuchándome y
guiándome hacia un buen camino,
concediéndome la virtud de luchar
por mis metas, aunque se
presenten obstáculos, él ha sabido
guardarme.

A mis padres Elizabeth Blas Rojas y

Ruber Beteta Gonzales; por
siempre brindarme su amor, y
revivir mi niñez en mi cada
momento, por confiar en mí y
apoyarme incondicionalmente, por
ser mi ejemplo a seguir.

A mis hermanos Arbex, Kevin, la

pequeña Katherine y en especial a
mi hermana Dioni; por su confianza,
constante apoyo y brindarme los
consejos que necesitaba para
seguir adelante.

A mis amigos; por su gran calidad

humana, por el apoyo y ánimo
contagioso, los que de gran manera
ayudaron en el cumplimiento de mis
metas.
 AGRADECIMIENTOS

A la Universidad Nacional Agraria de la Selva y docentes de la Facultad de

Zootecnia; por el sólido e invalorable aporte cultural, social y científico.

De manera especial al Dr. Daniel Marco Paredes López, Dr. Rizal Robles

Huaynate y Ing. Wagner Severo Villacorta López; por el apoyo

desinteresado como asesores de este trabajo de investigación. Muchas

gracias por su paciencia, confianza y gran calidad humana.

A los miembros del Jurado de Tesis: Ing. M.Sc. Juan Lao Gónzales, M. V.

Lisandro Roger Tafur Zevallos, Ing. M. Sc. José Eduard Hernández

Guevara; por sus aportes, sugerencias y recomendaciones en la

realización del presente trabajo.

A mi hermana Dioni Beteta Blas; quien desde niña me amo como si fuera una

madre apoyándome y brindándome la confianza que necesitaba, por un

ejemplo de persona y ayudarme a conseguir que este y otros sueños se

vuelvan realidad.

A mis amigos los bachilleres Gerlin y Alex, quienes demostraron la calidad de

personas que son al ayudarme a dar inicio a la ejecución de mi Tesis aun

teniendo poco tiempo de conocernos; consolidamos una gran amistad y

cariño por tan gratos momentos vividos.

A mis amigos Diana, Ida, Yanina, y en especial al bachiller Alexander Jara

Alvarado, por brindarme su apoyo en momentos buenos y malos.

 ÍNDICE GENERAL
Página

I. INTRODUCCIÓN…………………………………………………... 1

II. REVISIÓN DE LITERATURA…………………………………….. 3

2.1. Noni (Morinda citrifolia).……………………………………… 3

2.1.1. Generalidades…………………………………………. 3

2.1.2. Descripción y clasificación botánica………………… 3

2.2. Propiedades biológicas de noni…………………………….. 4

2.3. Componentes del noni……………………………………….. 6

2.3.1. Principios activos del noni……………………………. 7

2.4. Antecedentes de estudios con noni………………………… 10

2.4.1. Actividad antibacteriana……………………………… 10

2.5. Hematología…………………………………………………... 12

2.5.1. Aspectos en patología clínica de animales………… 12

2.6. Hematología de los cuyes…………………………………… 14

2.6.1. Valores hematológicos reportados en cuyes………. 14

III. MATERIALES Y MÉTODOS……………………………………... 22

3.1. Descripción de la zona de estudio………………………….. 22

3.1.1. Lugar de ejecución……………………………………. 22

3.2. Animales experimentales……………………………………. 22

3.3. Tipo de investigación………………………………………… 23

3.4. Insumo en estudio……………………………………………. 23

3.4.1. Obtención de la harina de noni (Morinda citrifolia)… 23

3.5. Instalaciones y equipos……………………………………… 23

 3.6. Manejo…………………………………………………………. 24

3.6.1. Alimentación…………………………………………… 24

3.7. Variable dependiente………………………………………… 24

3.7.1. In vitro…………………………………………………... 24

3.7.2. In vivo…………………………………………………... 25

3.8. Croquis de distribución de los tratamientos y repeticiones. 25

3.8.1. In vitro…………………………………………………... 25

3.8.2. In vivo…………………………………………………... 25

3.9. Variable dependiente………………………………………… 26

3.9.1. Efecto in vitro del noni (Morinda citrifolia) sobre la

Escherichia coli……………………………………….. 27

3.9.2. Efecto in vivo del noni, d ela harina de noni

(Morinda citrifolia) en cuyes…………………………. 28

3.10. Análisis estadístico………………………………………….. 31

3.10.1. In vitro…………………………………………………. 31

3.10.2. In vivo…………………………………………………. 32

IV. RESULTADOS……………………………………………………... 34

4.1. Actividad antibacteriana in vitro del noni (Morinda

citrifolia) sobre Escherichia coli……………………………... 34

4.2. Respuesta celular de los cuyes tratados con noni (Morinda

citrifolia)…………………………………………….. 34

4.3. Perfiles bioquímicos hematológicos de los cuyes tratados

con noni (Morinda citrifolia)………………………………….. 37

V. DISCUSIÓN………………………………………………………… 39
 5.1. Actividad antibacteriana in vitro del noni (Morinda citrifolia)

sobre Escherichia coli……………………………... 39

5.2. Respuesta celular de los cuyes tratados con noni (Morinda

citrifolia)…………………………………………….. 41

5.3. Perfiles bioquímicos hematológicos de los cuyes tratados

con noni (Morinda citrifolia)………………………………….. 49

VI. CONCLUSIONES………………………………………………….. 54

VII. RECOMENDACIONES……………………………………………. 55

VIII ABSTRACT 56

IX. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS……………………………... 57

X. ANEXOS……………………………………………………………. 65
 ÍNDICE DE CUADROS

Cuadro Página

1. Valores hematológicos de Cavia porcellus……………………... 15

2. Constantes hematológicas de Cavia porcellus………….……… 16

3. Valores hematológicos en cobayos infestados y no infestados

con pulgas (Pulex irritans)………………………………………. 16

4. Valores hematológicos en 49 cobayos infestados y no

infestados con Dermanyssus gallinae…………………………… 17

5. Reporte de valores Hematológicos para cobayos……………... 18

6. Valores Hematológicos normales del cobayo………………….. 19

7. Perfiles de bioquímica sanguínea de cuyes machos de 75

días en función de los niveles de harina de Erythrina en la

ración………………………………………………………………... 20

8. Diámetro del halo de inhibición del desarrollo de Escherichia

coli (mm) por el efecto de las concentraciones de extracto 34

acuoso de harina de noni………………………………………….

9. Perfiles de respuesta celular evaluadas en función a

diferentes concentraciones de noni a los 60, 75 y 90 días de

edad de cuyes …………………………………………………….. 36

10. Desdoblamiento de dos factores: Concentración de harina de

noni y edad (días), en el número total de eritrocitos (mm 3)…… 37

11. Desdoblamiento de dos factores: Concentración de harina de

noni y edad (días), nivel de hematocrito………………………… 37

12. Perfiles bioquímicos hematológicos evaluados en función a

diferentes concentraciones de noni a los 60, 75 y 90 días de

edad de cuyes …………………………………………………… 38

 1

RESUMEN

El objetivo del presente estudio fue (1) determinar la actividad antibacteriana in

vitro del extracto acuoso de noni (Morinda citrifolia) sobre Escherichia coli,

medida por el halo de inhibición (mm), (2) evaluar in vivo el efecto de la harina

de noni sobre perfiles de respuesta celular (leucocitos, eritrocitos, hematocrito,

hemoglobina, VCM, HCM y CHCM) y perfiles bioquímicos hematológicos

(proteína total, albumina, globulina y colesterol) en cuyes de la línea Perú. Se

utilizarón 4 tratamientos cada uno con 4 repeticiones por 30 días con 4 cuyes

de 60 días de edad. Para la actividad antimicrobiana in vitro el extracto acuoso

(concentradas en 2%, 4% y 8%) de harina de noni, se utilizó como parámetro

de evaluación el diámetro de halo de inhibición (mm) de los discos de

sensibilidad; para el efecto in vivo se agregó 2%, 4% y 8% de harina de noni en

el alimento. Los resultados de los experimentos in vitro mostraron que el

extracto acuoso de harina de noni a una concentración de 8% inhibe en el

crecimiento de la Escherichia coli un halo de 6.63 mm. Este dato demuestra

que la inhibición del crecimiento de la bacteria por efecto del extracto comienza

a partir del 8% de noni. Los resultados in vivo para los perfiles de respuesta

celular mostrarón efectos a los 75 días para los niveles de eritrocito y

hematocrito, encontrándose diferencias significativas (P <0,05). Sin embargo,

la harina de noni no influyó para leucocitos, VCM, HCM y CHCM (P> 0,05), del

mismo modo para perfiles bioquímicos hematológicos.

Palabras clave: Respuesta celular, perfil bioquímico, halo de inhibición.

 1

I. INTRODUCCIÓN

Los problemas digestivos de cuyes en fase de lactancia o acabado

y en un menor grado en reproductores, son la principal causa de pérdidas

económicas en explotaciones industriales. Las diarreas pueden ser causadas

por una diversidad de microorganismos, pero los principales a mencionar son

coccidias (parásitos) y bacterias entre ellas Escherichia coli, Clostridium y

Salmonella.

Al tener estos problemas patógenos se genera una resistencia que

se desarrolla debido al uso indiscriminado de antibióticos comerciales

comúnmente utilizados para tratar las enfermedades infecciosas. Esta

situación, nos ha llevado a investigar nuevas sustancias antimicrobianas a

partir de plantas consideradas popularmente medicinales, los cuales pueden

actuar sobre el sistema inmune del cuy ofreciendo grandes ventajas en su uso

como moduladores de la respuesta inmune. El noni (Morinda citrifofia) es una

planta nativa del sureste asiático y hoy en día expandida por todo el continente

americano, es reconocida por sus propiedades beneficiosas tanto

antimicrobianas como inmunomoduladores.

El propósito del presente trabajo fue investigar la actividad

antimicrobiana de la harina de noni (Morinda citrifolia) y su efecto en fortalecer

el sistema inmunitario produciendo componentes vitales para defensas

 2

naturales del organismo del cuy. En este contexto nos planteamos la siguiente

pregunta de investigación: ¿Cuáles son los efectos antimicrobianos e

inmunomoduladores del extracto acuoso y harina de frutos de noni (Morinda

citrifolia), respectivamente, en Tingo María?

Hipótesis

El uso de extracto acuoso y harina de frutos de noni (Morinda

citrifolia), generan un efecto antimicrobiano contra la Escherichia coli in y

mejora el perfil hematológico en relación al sistema inmune de los cuyes.

Considerando lo expuesto, los objetivos considerados en la

investigación son los siguientes:

Objetivo general

- Evaluar el efecto de la actividad antimicrobiana in vitro del noni (Morinda

citrifolia) sobre Escherichia coli y su efecto inmunomodulador en cuyes,

en Tingo María.

Objetivos específicos

- Determinar la actividad antibacteriana in vitro de noni (Morinda citrifolia)

sobre Escherichia coli, en Tingo María.

- Determinar los perfiles de respuesta celular de los cuyes tratados con

noni (Morinda citrifolia), en Tingo María.

- Evaluar los perfiles bioquímicos hematológicos de los cuyes tratados con

noni (Morinda citrifolia), en Tingo María.

 3

II. REVISIÓN DE LITERATURA

2.1. Noni (Morinda citrifolia)

2.1.1. Generalidades

El noni es el nombre Hawaiano que recibe la fruta de

Morinda citrifolia L. (Rubiaceae). El noni es originario de la región comprendida

desde el sureste asiático hasta Australia y se cultiva en Polinesia, India, el

Caribe, México, América Central y la parte sur de América del Sur. Los

polinesios han usado durante más de 2000 años la planta de noni con

propósitos alimenticios y medicinales.

En la farmacopea tradicional, la fruta es recomendada para

prevenir y curar diversas enfermedades; principalmente se usa para estimular

el sistema inmune y de esa forma combatir bacterias, virus, parásitos e

infecciones fúngicas, así como para prevenir la formación y proliferación de

tumores, incluyendo algunos de tipo maligno (ARMANDO et al., 2012).

2.1.2. Descripción y clasificación botánica

El género Morinda (Rubiaceae), que incluye la especie de

Morinda citrifolia L., está formado por alrededor de 80 especies. El noni es un

arbusto o árbol pequeño, de 3 a 10 m de altura, con abundantes hojas anchas

elípticas (5-17 cm de largo, 10 a 40 cm de ancho). Sus flores aromáticas están

 4

dispuestas en cabezuelas globosas, con el cáliz truncado y la corola tubular de

color blanco. El fruto de noni (3-10 cm largo, 3-6 cm de ancho) es oval, su color

varía de verde a amarillo hasta casi blanco al momento de su recolección, con

una cáscara cubierta de pequeñas protuberancias, cada una de las cuales

contiene una semilla. El fruto maduro despide un fuerte olor a rancio semejante

al del ácido butírico; la pulpa es jugosa y amarga, de color amarillo opaco o

blanco y aspecto gelatinoso, presentando numerosas cavidades triangulares de

color marrón rojizo los cuales contienen cuatro semillas (ARMANDO et al.,

2012).

Basado en el Sistema de Clasificación de CRONQUIST

(1988), el noni se clasifica taxonómicamente de la siguiente manera:

División : Magnoliophyta

Clase : Magnoliopsida (Dicotiledoneae)

Sub-clase : Asteridae

Orden : Rubiales

Familia : Rubiaceae

Género : Morinda

Especie : Morinda citrifolia Linneo

Nombre común : Noni

2.2. Propiedades biológicas del noni

La actividad biológica de Morinda citrifolia ha quedado de

manifiesto a través de sus efectos antimicrobiano, anti cáncer, antioxidante,

 5

antiinflamatorio y en la actividad cardiovascular (WANG et al., 2002 y CHANG -

BLANCO et al., 2006).

Se encontraron evidencias de que el noni inhibe el crecimiento de

ciertas bacterias como Staphylococcus aureus, Bacillus subtilus, Escherichia

coli, Salmonella y Shigella. Se estima que el efecto antimicrobiano puede ser

debido a ciertos compuestos fenólicos como la acubina, alizarina, escopoletina

y otras antraquinonas (ATKINSON, 1956). Al jugo de noni también se le

atribuyen propiedades inmunomodulatorios, es decir, capacidad para mejorar el

sistema inmune (HIRAZUMI et al., 1996).

También, los polisacáridos presentes en el jugo de noni

compuestos de ácido glucurónico, galactosa, arabinosa, y ramnosa han

demostrado contar con efectos inmunomodulatorios y anti tumor contra el

carcinoma pulmonar de Lewis; posee efectos estimuladores de ciertas

sustancias como las citocinas las cuales disminuyen el ciclo celular en tumores,

incrementando la respuesta de células a otras células inmunizadas que luchan

contra el crecimiento del tumor y ejercen una actividad macrófaga potente que

supone un papel importante en la muerte de tumores (HIRAZUMI et al., 1994;

HIRAZUMI y FURUSAWA, 1999).

Las propiedades antioxidantes o de capacidad de captación de

radicales libres del jugo de noni, han quedado demostradas al ejercer una

fuerte inhibición de la oxidación de lípidos comparable al mismo peso de α-

tocoferol e butil-hidroxi-tolueno puros (YANG et al., 2007; 2010). SU et al.

(2001) demostraron que el jugo de noni presenta un efecto en la inhibición

 6

selectiva de enzimas ciclo-oxigenasas implicadas en procesos inflamatorios

logrando resultados equivalentes a los de drogas tradicionales no esteroideas

como la aspirina, indometacina y celebrex. También se atribuyen propiedades

analgésicas y sedativas del jugo de noni las cuales se comprobaron a partir de

experimentos con ratas (WANG et al., 2002).

2.3. Componentes del noni

ARMANDO et al. (2012), mencionan que aproximadamente 160

compuestos fitoquímicos se han identificado en la planta de Noni, de los cuales

los principales son compuestos fenólicos, ácidos orgánicos y alcaloides. Entre

los compuestos fenólicos más importantes están las antraquinonas, acubina,

ácido asperulósido y escopoletina; los principales ácidos orgánicos son el

caproico y caprílico mientras que el principal alcaloide reportado es la xeronina.

Sin embargo, la composición química varía grandemente dependiendo de la

parte de la planta que se analice. La composición fisicoquímica completa de

fruto aún no está disponible y sólo se cuenta con información parcial del jugo

de Noni. La fruta contiene 90% de agua y los componentes mayoritarios de la

materia seca son sólidos solubles, fibra dietética y proteínas. El contenido

proteínico de la fruta es de 11.3% de la materia seca del jugo y los principales

aminoácidos son el ácido aspártico, el ácido glutámico y la isoleucina. El

contenido de minerales es de 8.4% de la materia seca y los más importantes

son potasio, azufre, calcio y fósforo, además de trazas de selenio. Por otra

parte, de los compuestos fenólicos con propiedades funcionales identificados

 7

en el jugo de noni destacan: damnacantal, escopoletina, morindona, alizarina,

acubina, nordamnacantal y rubiadina.

También se han identificado aproximadamente 51 compuestos del

aroma en la fruta madura de Noni, incluyendo ácidos orgánicos, alcoholes,

esteres, cetonas y lactonas.

2.3.1. Principios activos del noni

DE LA TORRE (2001) define los principios activos, como

sustancias químicas encontradas en las plantas que se pueden usar como

remedios terapéuticos. Los principios activos más importantes en el noni, son la

xeronina, proxeronina y proxeroninasa, damnacantal, escopoletina, o

bioflavonoides, y aunque no forme parte del noni, el óxido nítrico, producido de

forma natural en nuestro organismo, ya que está demostrado que el jugo del

Noni estimula la producción de este compuesto, fundamental para el buen

estado de la salud.

Xeronina.- Es un alcaloide existente en todas las células

sanas de los seres vivos, aunque en cantidades muy reducida (DE LA TORRE,

2001). Para HEINICKE (1985), la fruta del Noni contiene un precursor natural

para la Xeronina que denominó Proxeronina y que se convierte en el cuerpo en

el alcaloide Xeronina, debido a la acción de una enzima llamada por él

Proxeroninasa. Su hipótesis refiere que dicha Xeronina podría modificar la

estructura molecular de las proteínas y por tanto, tener una amplia gama de

actividades biológicas ya que cuando una proteína tal como una enzima, un

receptor, o un transductor de señal no tiene la estructura apropiada, no

 8

funcionará adecuadamente pero la Xeronina interactuará entonces con la

proteína y la hará adoptar la estructura adecuada de manera que funcione

correctamente.

Es decir, que según HEINICKE (2001), siempre que surja

un problema en la célula, debido a algún problema estructural de una proteína,

la presencia de Xeronina sería beneficiosa explicando esta hipótesis el por qué

el jugo de la Morinda citrifolia L pudiera ayudar en muchos problemas de salud

de diferentes maneras, puesto que se considera que el ingrediente activo en

muchas de las enzimas farmacológicamente activas y en muchas de las drogas

tradicionales efectivas, es la Xeronina.

Damnacantal.- Es una sustancia que inhibe el crecimiento

de tumores cancerosos. Junto con la xeronina, constituye un equipo que lucha

con probabilidad de éxito contra esta terrible enfermedad. En efecto, el

Damnacantal detiene el crecimiento de los tejidos malignos y una vez detenido

este proceso, la xeronina repara las células del tejido dañado, hasta controlar

su crecimiento aumentando la capacidad del sistema inmunológico, acelerando

la formación de nuevos leucocitos (DE LA TORRE, 2001).

HIRAMATSU et al. (1993), reporta que el Damnacantal, un

compuesto de antraquinona aislado de la raíz del noni actúa como inhibidor del

oncógeno, que se cree está relacionado con la transducción de señal en varias

neoplasias humanas tales como la de pulmón, colon, páncreas y la leucemia,

mientras que HIWASA et al. (1999), demuestran que dicho Damnacantal

 9

provoca un efecto estimulador sobre la apoptosis inducida por rayos

ultravioleta.

Escopoletina.- Para DE LA TORRE (2001) la escopoletina

tiene por misión la dilatación de los vasos sanguíneos y uniéndose a la

serotonina consigue llevar la tensión arterial a sus niveles normales (nunca a

niveles inferiores), mejorando la circulación de la sangre y la oxigenación de la

misma.

Bioflavonoides.- Son poderosos antioxidantes, y por tanto

eficaces aliado contra los radicales libres, responsables del deterioro celular y

del envejecimiento.

Para HEINICKE (1985) el fruto del noni tiene 10

flavonoides. Los flavonoides son las sustancias de pigmentación de las frutas y

los vegetales. Ayudan en la reparación de los capilares, son antinflamatorios y

antivirus.

Óxido nítrico.- DE LA TORRE (2001) detalla que aunque

no está contenido en el Noni, hay que tener en cuenta el que es producido

directamente por las células del cuerpo humano y que cumple innumerables

funciones, como la dilatación de los vasos sanguíneos, mejorando la tensión

arterial y la circulación y oxigenación de la sangre, previniendo la angina de

pecho, mejorando la memoria, ayudando a combatir los radicales libres y

previniendo la oxidación del colesterol “malo”, evitando la coagulación

prematura de la sangre y el bloqueo de las arterias que provocan lo fatales

infartos cardiacos y cerebrales.

 10

Ayuda también al páncreas a mantener los niveles de

insulina en sangre y contribuye a ayudar y prevenir la lucha contra la diabetes.

2.4. Antecedentes de estudios con noni

SHIVANANDA et al. (2009) realizarón un estudio en ratas para

evaluar la actividad de la Morinda citrifolia en la cicatrización de heridas,

Obteniendo como resultado la mejora de contracción de la herida, reducción

del tiempo de epitelización y un mayor contenido en hidroxiprolina. Dando

como conclusión la capacidad de la Morinda citrifolia para promover la actividad

cicatrizante de heridas.

RODRÍGUEZ et al. (2005) realizarón un estudio del tamizaje

fitoquímico al fruto verde y maduro, en la que precisó que en la composición

fitoquímica de la planta estaban presentes, fundamentalmente, triterpenos y/o

esteroides, aminoácidos, carbohidratos reductores, alcaloides y flavonoides; los

cuales pueden ser los responsables de la activación de respuestas inmunes.

Esto sugiere que las variaciones encontradas con los estudios anteriores se

deben a la asimilación de estos componentes como parte de su dieta.

2.4.1. Actividad antibacteriana

TORRES y TORANZO (2009) detallan que numerosos

autores coinciden en haber encontrado diferentes grados de actividad

antibacteriana en los derivados de las partes del noni, y puede resumirse, como

reporta ATKINSON (1956) a la Acubina como el compuesto causante, en

investigaciones más recientes que la escopoletina presente en el noni

 11

asperulósido y la alizarina del fruto, así como otros compuestos de

antraquinona presentes en la raíz, han demostrado luchar contra cepas de

Pseudomonas aeruginosa, Proteus morgaii, Staphylococcus aureus, Baciillis

subtilis, Escherichia coli, Salmonella y Shigela, además DUNCAN et al. (1998)

demuestra que, inhibe la actividad de E. coli y que la Morinda citrifolia L.

también ayuda en el tratamiento de la úlcera gástrica a través de la inhibición

de la bacteria Helicobacter pylori.

Además, un estudio realizado por CASTILLO et al. (2014)

en extracto de hojas y semillas en etanol al 20 % y en extractos secos,

utilizando como flujo el etanol al 20 % concentrando 200 mL a 50 °C con ayuda

de un roto-evaporado posteriormente realizando una extracción en solventes

inmiscibles de polaridad creciente (n-hexano, cloroformo y acetato de etilo)

mediante una extracción sucesiva sólido-líquido, obtuvo diámetros de hasta 10

mm en hojas y de 0 mm en semillas por el primer método, y de 9 mm en hojas

y 7 mm en semillas en el diámetro de inhibición frente a E. coli (ATCC) por el

segundo método; a partir de esto se supone que no sólo la dosis del extracto

influye en la medida del diámetro, sino también el método de extracción y la

parte de la planta en la que se realiza. se demostró la actividad antimicrobiana

de hojas y semillas del árbol de M. citrifolia L (noni), siendo los metabolitos

secundarios quinonas y comarinas los responsables de ésta.

PONCE et al. (2008), plantean que los microorganismos

son sensibles frente a un extracto natural cuando las zonas de inhibición del

crecimiento bacteriano se encuentran entre 9 y 14 mm. Fundamentando esto

 12

DURAN et al. (2013) y RODRÍGUEZ et al. (2007) cuando plantean que sus

actividades se deben a su capacidad de actuar como inhibidores potentes de la

cadena de transporte electrónico, como desacopladores de la fosforilación

oxidativa, como agentes intercaladores en la hélice doble del ADN, como

agentes de alquilación reductiva de biomoléculas, y como productores de

radicales libres de oxígeno (por ciclo redox) bajo condiciones aeróbicas. Por lo

que concluyen que la actividad antibacteriana de los extractos de las hojas y

semillas de M. citrifolia se debe a la presencia de quinonas y cumarinas

HIRAMATSU e IMOTO (1993).

2.5. Hematología

Según MEDWAY et al. (1986) la sangre y los órganos formadores

de sangre participan en el intercambio de oxígeno y dióxido de carbono en los

tejidos periféricos y en el envío del dióxido de carbono a los pulmones para su

eliminación. Este líquido complejo es el medio de transporte para el movimiento

de nutrimentos a las células y la excreción de productos de desechos por los

riñones, intestino, pulmones, hígado y piel. El contenido de agua de las células

corporales y del líquido intersticial es controlado por la sangre. Las variaciones

en la distribución de la sangre ayudan en la regulación de la temperatura

corporal. La sangre distribuye también hormonas para controlar las funciones

del cuerpo y su contenido es, en cambio, afectados por hormonas que obran en

los órganos formadores de sangre. La defensa contra la invasión bacteriana y

los mecanismos de inmunidad son funciones importantes de los componentes

sanguíneos. Puesto que la sangre participa directa o indirectamente en casi

 13

todos los procesos bioquímicos en el cuerpo, sus alteraciones en el estado de

enfermedad ayudan a detectar con frecuencia la lesión o mecanismo

existentes.

2.5.1. Aspectos en patología clínica de animales

A menos que el animal esté bien adaptado a que le saquen

muestras de sangre, lo que no es usual, estará estresado durante el

procedimiento (es decir, por el acercamiento del operador, captura, sujeción,

administración de agentes inmovilizantes, y obtención de la muestra). Como

parte de la reacción de estrés, se producen catecolaminas (adrenalina,

noradrenalina). Una de las acciones de estas hormonas es provocar que se

contraiga el bazo. El bazo es un lugar de almacenamiento de glóbulos rojos, y

en algunas especies, puede almacenar hasta el 25% de los glóbulos rojos del

cuerpo. Cuando se contrae, se liberan glóbulos rojos a la circulación. No es una

reacción anormal pero suministra a la sangre una mayor capacidad de

transporte de oxígeno para afrontar una situación normal de “pelea”. Por lo

tanto, el recuento de hematíes, el hematocrito y los niveles de hemoglobina

estarán artificialmente altos en las muestras de sangre obtenidas de animales

conscientes estresados (SECAL, 1993).

El estado fisiológico del animal en el momento del

muestreo afecta la composición de la sangre. Siempre se debe considerar la

especie, edad, sexo (gestación) y el ejercicio. El sitio de punción debe estar

limpio y libre de patógenos. El grado de desinfección de la piel es determinado

no solo por el temor a la infección sino también a la estructura y sensibilidad de

 14

la piel. En cambio, la esterilización de los instrumentos de punción no tiene

consideraciones atenuantes. Después de la punción, el sitio debe dejarse seco,

limpio y libre de sangre (MEDWAY et al., 1986).

2.6. Hematología de los cuyes

2.6.1. Valores hematológicos reportados en cuyes

MEDWAY et al. (1986) mencionan que, si bien la asunción

de los rangos de referencia supone un patrón de comportamiento constante,

hay que resaltar que lo único constante en la vida es el cambio. Es decir, la

concentración de los componentes de la sangre sufre oscilaciones en forma

permanente. Dichas fluctuaciones controladas del homeostasis, son superadas

en ocasiones por las fluctuaciones no controladas de la enfermedad. (Cuadro

1)

Así que, los análisis sólo serán válidos cuando el clínico se

halle en condiciones de saber interpretar los resultados a partir de un

conocimiento previo de aquellos factores o limitantes que potencialmente

pueden afectarlos (COLES, 1986). Los desacuerdos entre los valores

hematológicos normales obtenidos por diversos autores llevaron a definir que

los principales factores de variación del hemograma se centrarían en el tamaño

y origen de la muestra, el sexo, la raza, la salud, la actividad muscular, la

temperatura ambiental, la altitud, el estado nutritivo y de hidratación de los

animales en estudio, así como el método de recolección de sangre y las

técnicas de laboratorio empleadas (JAIN, 1993).

 15

Los valores reportados por BUSTAMANTE (1993) y

VIDALON (2014), tomados del Primer Curso Nacional de Cuyes Huancayo –

1976, no especifican número de animales muestreados, sexo, edad y solo

reportan los promedios de cada parámetro (Cuadro 2).

Cuadro 1. Valores hematológicos de Cavia porcellus

Valores Cavia porcellus

Eritrocitos (x106/µl) 4.5 - 7.0

Hematocrito % 37.0 - 48.0

Hemoglobina (g/dl) 11.0 - 15.0

Leucocitos (x103/µl) 7.0 - 18.0

Proteínas Totales (g/dl) 4.2 - 6.8

Globulinas (g/dl) NP

Albumina (g/dl) 2.1 - 3.9

Colesterol (mg/dl) 16.0 - 43.0

Fuente: COLVETCADIZ (2015).

LEGUÍA (1995) Y FLORIAN (1995) realizaron experimentos

con Pulex irritans y Dermanyssus gallinae respectivamente, para observar el

efecto de estos ectoparásitos en los animales infestados experimentalmente

comparados con animales control libre de ectoparásitos (Cuadro 3 y Cuadro 4),

solo se observan el promedio de los valores reportados.

El ISIS (International Species Information System, 1999),

reporta valores hematológicos para cobayos sanos provenientes de exámenes

médicos anuales sin especificar edad ni sexo, pertenecientes a diversos

laboratorios y zoológicos del mundo (Cuadro 5). (BENJAMÍN, 1998) menciona

 16

que los resultados pueden variar por la técnica empleada al momento de la

toma de muestra, ya que un mal manejo produciría hemólisis y así el escape de

hemoglobina de los glóbulos rojos con aumento en sus lecturas (Benjamín,

1998). La extracción de sangre del animal y la sujeción física provocan estrés,

lo que puede incrementar el número de hematíes, el valor del hematocrito y de

la hemoglobina (Morales, M. 2009).

Cuadro 2. Constantes hematológicas de Cavia porcellus

Promedio
Parámetros
Machos Hembras

Glóbulos rojos (millones por mm3) 5.52 5.01

Glóbulos blancos (miles por mm3) 3.79 4.08

Hemoglobina (g. por 100 ml) 13.72 13.50

Hematocrito (%) 40.42 40.11

Volumen globular medio (u3) 78.13 83.42

Hemoglobina globular media (uug) 24.86 27.15

Concentración media de hemoglobina globular (%) 3.47 34.71

Fuente: Primer curso nacional de cuyes. Huancayo (1976).

Cuadro 3. Valores hematológicos en cobayos infestados y no infestados con

pulgas (Pulex irritans)

No infestado Infestado
Parámetros
Media Media

Glóbulos Rojos (millones /mm3) 5290 3650

Glóbulos Blancos (miles/mm3) 3620 2787

Hemoglobina (g/100ml) 13.1 8.4

Fuente: LEGUÍA (1995)
 17

Cuadro 4. Valores hematológicos en 49 cobayos infestados y no infestados con

Dermanyssus gallinae

No infestado Infestado
Parámetros
Media Media

Glóbulos Rojos (millones /mm3) 5357 4109

Glóbulos Blancos (miles/mm3) 4840 5126

Hemoglobina (g/100ml) 14.3 12.7

Hematocrito (%) 42.8 39.2

Neutrófilos maduros (%) 30.5 39.6

Neutrófilos inmaduros (%) 7.6 9.5

Linfocitos (%) 57.6 47.7

Monocitos (%) 3.6 1.1

Fuente: FLORIAN (1995)

MEDWAY et al. (1986), reporta valores hematológicos

normales en cobayos, no especifica sexo, edad ni tamaño muestral (Cuadro 6).

Destacando que cuando los leucocitos se concentran grandes cantidades de

animales, los recuentos totales de leucocitos tienden a ser altos. Los animales

libres de patógenos tienden a poseer menores recuentos totales de leucocitos

que los animales criados en condiciones convencionales. Las condiciones de

estrés, antes o durante la extracción de sangre, afectan el hematocrito, aún en

animales relativamente dóciles puede subir hasta en un 20%, similar acción

realiza el ejercicio; contrariamente, la sedación en algunos casos reduce en

forma considerable los parámetros eritrocíticos (DOXEY, 1987).

 18

Cuadro 5. Reporte de valores hematológicos para cobayos

Desviación
Parámetros N° Media Rango
estándar

Glóbulos Blancos (103/µl) 14 7.01 3.46 3.0 - 14.4

Hemoglobina (g/dl) 12 13.10 1.60 10.6 - 16.2

Hematocrito (%) 14 38.00 5.20 28.0 - 46.7

VCM (fL) 12 78.20 8.20 55.2 - 84.0

CHCM (g/dl) 12 34.00 2.00 30.2 - 37.5

HCM (PG) 12 26.50 2.60 20.0 - 29.1

Neutrófilos (%) 14 37.50 31.20 13.3 - 52.0
Linfocitos (%) 14 55.10 27.70 33.0 - 51.0
Monocitos (%) 11 6.80 5.80 3.0 - 9.4
Eosinófilos (%) 8 3.10 3.50 1.0 - 5.2
Basófilos (%) 4 1.00 0.37 0.6 - 1.3
Neutrófilos en Banda (%) 1 1.20 0.00 0.0
Fuente: ISIS VALUES (1999)
VCM: Volumen Corpuscular Medio.
CHCM: Concentración de Hemoglobina Corpuscular Media. HCM:
Hemoglobina Corpuscular Media.

Los cobayos que se encuentran libres de gérmenes tienden

a tener menor recuento de leucocitos totales y un menor número de neutrófilos

que los cobayos convencionales de la misma edad (GORDON, 1959). El

conteo total de leucocitos es significativamente influenciado por el lugar del

drenaje de la sangre, la edad del animal, la actividad muscular, los factores de

estrés y alojamiento (REBAR et al 2002).

 19

Cuadro 6. Valores Hematológicos normales del cobayo

Parámetros Media Rango

Glóbulos rojos (106/µl) 6 4-7

Hemoglobina (g/dl) 14 11 - 17

Hematocrito (%) 40 33 - 45

Leucocitos (103/µl) 10 7 - 14
Fuente: MEDWAY et al. (1986)

La investigación realizada por LAGUAQUIZA (2015) en su

estudio demuestra que no existe variación en los valores sanguíneos (biometría

hemática) realizados en las parroquias de Cusubamba y San Miguel. Por medio

de los exámenes de laboratorio se estableció los siguientes valores

hematológicos Leucocitos 6,014- 5,571 Eritrocitos 62,7200- 59,8600,

Hemoglobina 17,6822- 17,036, Hematocrito 47,72- 45,16, VSG 1,66- 1,7, VCM

75,924- 74,842, HCM 28,16- 27,428 CHCM 36,582- 36,71, Segmentados

55,68- 54,08 Linfocitos 40,08- 43,02 Monocitos 2,46- 2,26 Eósinofilos 1,04- 0,5

Basofilo 0,24- 014.

WASHINGTON Y VAN HOOSIER (2012), comentan que,

existen escasos reportes de literatura relacionado con perfiles bioquímicos

sanguíneos en cuyes; pero menciona que la proteína total y albumina en el

suero sanguíneo podría estar relacionado a que el nivel de proteína en la dieta

es un factor que variablemente favorece el incremento de proteína total en

sangre (Cuadro 7).

Esto podría estar relacionado con mecanismos fisiológicos

por los cuales en una alimentación con dietas elevadas en proteínas se eleva
 20

los niveles de proteína total en suero y al mismo tiempo la albumina toda vez

que es la proteína del plasma más abundante a medida que alcanzan la etapa

adulta en las diversas especies (ECKERSALL, 2008). Sin embargo, otro

estudio previo utilizando extracto de Erythrina en ratones mostró disminución

en el perfil de proteína total (ATSAMO et al., 2011).

Cuadro 7. Perfiles de bioquímica sanguínea de cuyes machos de 75 días en

función de los niveles de harina de Erythrina en la ración

Niveles GLU PT ALB AST ALT LDH UREA

Erythrina (g/dL) (g/dL) (g/dL) (g/dL) (g/dL) (mg/dL) (mg/dL)

0% 96,12 4,74 3,69 41,00 26,50 11.22 38.76

7% 88,08 5,07 3,88 54,75 24,25 12,06 39,20

14% 96,30 6,19 4,35 44,25 39,00 12,41 37,57

21% 85,78 4,75 3,53 45,00 23,75 11,48 36,55

28% 96,64 6,50 4,71 38,50 32,75 14,53 39,69

R2 --- 0,40 0,44 --- --- --- 16,34

Regresión NS L (0,088) L (0,057) NS NS NS NS

0%: Sin inclusión de harina de hojas de Erythrina, 7%: Inclusión de 7% de harina de hojas de Erythrina,
14%: Inclusión de 14% de harina de hojas de Erythrina, 21%: Inclusión de 21% de harina de hojas de
Erythrina y 28%: Inclusión de 28% de harina de hojas de Erythrina), R2: Coeficiente de determinación, NS:
No significativo, L: Regresión lineal, p-valor 0,088, pvalor 0,057.

Otra consideración importante es la de las condiciones

climáticas en la que se realiza el experimento; VIDALÓN (2014) en este sentido

refiere que la disponibilidad de oxígeno en la atmósfera, la que se ve

disminuida a medida que aumenta la altura, interfiere directamente en la

cantidad de este elemento que se transporta en la sangre, afectando en la

producción de hematíes
 21

PAREDES et al. (2017) quienes al incluir harina de

Erythrina sp. en la dieta alimenticia de 75 cuyes machos de 13 días de edad,

encontraron una relación positiva entre la dosis suministrada y el nivel de

proteínas (6.19 g/dl a 14% de concentración) y en contraste una relación

negativa con el de albúmina (4.35 g/dl a 14% de concentración.

RODRÍGUEZ et al. (2005) realizarón un estudio del

tamizaje fitoquímico al fruto verde y maduro, en la que precisó que en la

composición fitoquímica de la planta estaban presentes, fundamentalmente,

triterpenos y/o esteroides, aminoácidos, carbohidratos reductores, alcaloides y

flavonoides; los cuales pueden ser los responsables de la activación de

respuestas inmunes. Esto sugiere que las variaciones encontradas con los

estudios anteriores se deben a la asimilación de estos componentes como

parte de su dieta.
 22

III. MATERIALES Y MÉTODOS

3.1. Descripción de la zona de estudio

3.1.1. Lugar de ejecución

El presente trabajo de investigación, se realizó en el

laboratorio de Sanidad Animal y Galpón de cuyes de la Facultad de Zootecnia –

Universidad Nacional Agraria de la Selva, en la ciudad de Tingo María, Distrito

Rupa Rupa, Provincia Leoncio Pardo, Región Huánuco. Geográficamente se

encuentra ubicado a 09° 17’ 08” de latitud sur y 79° 59’ 52” de longitud oeste,

con una altitud de 660 msnm., con una humedad relativa promedio de 84%,

una temperatura promedio de 24° C y una precipitación pluvial media de 3194

mm, considerado como bosque húmedo subtropical húmedo (UNAS 2018)

El experimento se inició en setiembre del 2017 y concluyó

en febrero del 2018.

3.2. Animales experimentales

Se utilizaron 16 cuyes machos de la línea Perú con 60 días de

edad, con un peso promedio de 500 ± g, previamente adaptados una semana

antes de iniciar la evaluación experimental. A los cuales se les brindarón el

confort que necesitan, los cuales son distribuidos al azar en 4 tratamientos, 4

repeticiones y 1 cuy por repetición.

 23

3.3. Tipo de Investigación

El presente trabajo de investigación es de tipo experimental.

3.4. Insumo en Estudio

Se utilizó frutos de noni (Morinda citrifolia) obtenidos de la ciudad

de Tingo María, distrito Rupa Rupa, provincia de Leoncio Prado, región

Huánuco. La obtención se realizó en la época seca en el mes de junio, donde

se recolectó aproximadamente 25 kilogramos de frutos enteros y maduros en

buen estado de conservación, se realizó un lavado con chorros de agua

corriente.

3.4.1. Obtención de la harina de noni (Morinda citrifolia)

Los frutos fueron presecados a 60º C con la finalidad de

alcanzar un contenido en materia seca superior al 10%, posteriormente se llevó

a una estufa a 105 º C, la materia seca se determinó mediante la técnica de

secado hasta obtener peso constante (AOAC, 1990), luego fue llevado al

molino marca THOMAS WILEY “laboratory Mill” modelo 4, con zaranda de 1

mm de diámetro, donde se redujeron el tamaño de partícula posteriormente

almacenado en un recipiente totalmente cerrado, fuera del alcance de la luz

solar.

3.5. Instalaciones y equipos

In vitro

El experimento se realizó en el Laboratorio de Sanidad Animal de

la Facultad de Zootecnia de la UNAS.

 24

In vivo

Se acondicionó un ambiente en el Galpón de cuyes para realizar

el trabajo, provisto de piso de madera entablada y techo de calamina a dos

aguas con claraboya en cuyo interior se cubrió con mantada. Se tenía 1 batería

de bambú, madera y malla metálica de dos pisos; dividida en 16 partes iguales;

los cuales fueron previamente desinfectados con lejía y detergente.

Posteriormente se fumigó con un desinfectante de amplio espectro “Delegol

vet” laboratorio Bayer, a toda el área que se utilizó dejando reposar por tres

días.

3.6. Manejo

3.6.1. Alimentación

La alimentación de los cuyes fue a base de una dieta de

acabado (Anexo 2) preparado cada 10 días, el cual se suministró 50 g por

animal con sus respectivas concentraciones de harina de noni (0%,2%, 4% y

8%), y como fuente de forraje el pasto fresco (King grass verde y morado) 200

g por animal, 2 veces por día. Registrándose los datos de respuesta biológica

(Anexo 1)

3.7. Variable Independiente

Tratamientos:

3.7.1. In Vitro

T1: Agua destilada con 0% de inclusión de harina de noni (M. citrifolia)

T2: Agua destilada con 2% de inclusión de harina de noni (M. citrifolia)

 25

T3: Agua destilada con 4% de inclusión de harina de noni (M. citrifolia)

T4: Agua destilada con 8% de inclusión de harina de noni (M. citrifolia)

3.7.2. In vivo

T1: Alimento balanceado con 0% de inclusión de harina de noni (M. citrifolia)

T2: Alimento balanceado con 2% de inclusión de harina de noni (M. citrifolia)

T3: Alimento balanceado con 4% de inclusión de harina de noni (M. citrifolia)

T4: Alimento balanceado con 8% de inclusión de harina de noni (M. citrifolia)

3.8. Croquis de distribución de los tratamientos y repeticiones

3.8.1. Distribución in vitro

T1R4 T2R1 T3R1 T4R6

T1R3 T2R4 T3R3 T4R2
T1R1 T2R2 T3R7 T4R5
T1R5 T2R3 T3R2 T4R4
T1R2 T2R6 T3R8 T4R1
T1R8 T2R5 T3R6 T4R3
T1R6 T2R8 T3R4 T4R7
T1R7 T2R7 T3R5 T4R8

3.8.2. Distribución in vivo

T1R4 T2R3 T2R4 T2R1

T4R2 T1R3 T4R3 T4R4
T1R1 T2R2 T3R1 T3R4
T4R1 T3R3 T1R2 T3R2
 26

3.9. Variable Dependiente

- Actividad antibacteriana in vitro de noni (M. citrifolia) sobre Escherichia

coli:

Diámetro de halo de inhibición (mm).

- Perfiles de respuesta celular de los cuyes tratados con noni (M. citrifolia):

Hematocrito %

Hemoglobina (g/dL)

Volumen corpuscular medio (fL)

Hemoglobina Corpuscular Medio (pG)

Concentración de Hemoglobina Corpuscular Medio (g/dL)

Leucocitos (103/mm3)

- Perfiles bioquímicos hematológicos de los cuyes tratados con noni (M.

citrifolia):

Concentración de proteína total (g/dL)

Concentración de albumina (g/dL)

Concentración de globulina (g/dL)

Concentración de colesterol (mg/dL)

La metodología que se empleó para determinar cada una de las

variables dependientes fue la siguiente.

 27

3.9.1. Efecto in vitro del noni (M. citrifolia) sobre la Escherichia

coli

La bacteria fue obtenida en el Laboratorio de Sanidad

Animal, cuyo aislamiento se realizó mediante método de difusión de agar

Maconque y el método de resembrado; para así lograr las colonias de

Escherichia coli con la ausencia de otros agentes bacterianos. Se realizó

tinción Gram para observar las bacterias de Escherichia coli en el microscopio

óptico a 100x con aceite de inmersión. Posteriormente se realizó la

identificación de la bacteria mediante el método establecido por el laboratorio

de Sanidad Animal y un patrón cualitativo de turbidez preparado, según el

método estándar de McFarland.

Posterior a las pruebas de identificación se realizó el Agar

Blood y luego se comprobó la sensibilidad de la bacteria ante antibióticos

comerciales con principios activos comprobados como: ceftriaxona,

sulfametoxazol, amikacina, norfloxacina y ciprofloxacina.

Los discos de sensibilidad se elaboraron con papel filtro

Watman N°4 con 0.05 ml de capacidad de absorción. La elaboración de las

concentraciones con harina de noni (Morinda citrifolia) consistió en el método

de dilución, por lo que se diluyo 4gr, 8gr, 16gr, de la harina de Noni (Morinda

citrifolia) en 200ml de agua destilada luego se filtró y se llevó al rotavapor a una

temperatura de 60°C por un lapso de tiempo de 2 horas para obtener la

esencia mínima. Para homogenizar los resultados se establecieron que todos

tendrían 30 ml completando con agua destilada esterilizada dicha medida.

 28

Luego se dejó remojar por 20 minutos los discos de los

cuales se obtuvo las concentraciones de: 0% (T 1), 2% (T2), 4% (T3) y 8% (T4),

de extracto acuoso de noni (Morinda citrifolia) en los discos de sensibilidad, que

seguidamente fueron llevados a la estufa a una temperatura 35°C. Así mismo

los tratamientos que se utilizaron se dividieron en 8 repeticiones.

El estudio del efecto in vitro, de las diferentes

concentraciones de la harina de noni (Morinda citrifolia) se realizó en el

laboratorio, mediante la prueba de sensibilidad de los tratamientos. Las

diferentes concentraciones, se sometieron al método de antibiograma, a fin de

comparar el efecto y se utilizó como parámetro de evaluación el diámetro de

halo de inhibición (mm) de los discos de sensibilidad.

Las evaluaciones de los diferentes tratamientos, se

realizaron a las 24 horas post siembra de la bacteria Escherichia coli, utilizando

el agar nutritivo Muller Hinton.

3.9.2. Efecto in vivo, de la harina de Noni (M. citrifolia) en cuyes

Los cuyes fueron evaluados en un periodo de 30 días,

constando de tres evaluaciones (60, 75 y 90 días de edad), al inicio sin aplicar

las concentraciones de harina de noni en cada tratamiento y luego a los 75 y 90

días aplicando las concentraciones establecidas.

Se extrajó 1mL sangre para cada tubo uno sin

anticoagulante y el otro con anticoagulante; de la vena safena de su

extremidad, previamente limpiado y desinfectado. Se empezó la suministración

alimento con la concentración por tratamiento después de haber extraído la

 29

primera muestra de sangre. Se le brindó alimento balanceado en la que se

suministró las concentraciones de 0 g, 1 g, 2 g y 4 g de harina de noni (Morinda

citrifolia) Tal cual los tratamientos 0%, 2%, 4%, 8% en 50gr de alimento

balanceado con 4 repeticiones.

3.9.2.1. Análisis hematológicos

Las muestras con EDTA fueron analizados como

máximo 5 horas después de su extracción tiempo en el cual estuvieron

debidamente refrigeradas a 4°C en el laboratorio de Sanidad Animal donde se

determinó los valores hematológicos como concentración de hemoglobina (g/dl)

y recuentro eritrocitos (x 106/mm3) de donde se determinará el volumen

corpuscular medio (fL), hemoglobina corpuscular media (pG), y concentración

de hemoglobina corpuscular media (g/dL).

a) Hematocrito

La determinación de hematocrito se realizó mediante el método del

microhematocrito, que consistió en llenar sangre que contiene anticoagulante

aproximadamente hasta tres cuartos de los tubos capilares lisos (1.0 mm x 75

mm), inclinándolo para facilitar el llenado. Luego se llevó a la centrifuga

regulable digital para microhematocrito marca “Hettich EBA20” modelo DTN-

450. Se centrifugó a 10000 rpm por 5 minutos, y finalmente se realizó la lectura

con la ayuda de una tabla micro escala graduada de 0 a 100 (MUÑOZ, 2000).

b) Hemoglobina
 30

La determinación de hemoglobina se realizó por el método de la

cianometahemoglobina, para lo cual se necesitó el reactivo drabkin. Primero se

establece cero en la escala de densidad óptica usando un blanco de solución.

Luego se necesitó de 20 ul de sangre total con anticoagulante, obtenida con la

micropipeta y 5 ml de Drabkin mezclándolos en un tubo de ensayo. Luego se

dejó reposar por 10 minutos, para así luego leer en el espectrofotómetro UV

marca “DiaLab” modelo DTN-450, a 546nm de longitud de onda con factor 36.3

(MUÑOZ, 2000).

c) Leucocitos (103/mm3)

Se utilizó una pipeta Thoma para leucocitos y la sangre se aspiró

hasta la marca 0.5 y diluida a la marca 11 con el dilutor de glóbulos blancos

(solución Turk), esto proporcionó una dilución de 1:200. Luego se desechó de 2

a 3 gotas de la pipeta antes de llenar la cámara de Neubauer. Se dejó un

minuto para que los eritrocitos se lisen y que los leucocitos se sedimenten. Los

leucocitos se observaron con el objetivo de 10x, el resultado se multiplicará por

50 y así se obtuvo el número de leucocitos totales por microlitro (MUÑOZ 2000)

3.9.2.2. Análisis bioquímicos de la sangre

La obtención del suero de las muestras de la

sangre sin anticoagulante se realizó en el Laboratorio de Sanidad Animal

mediante centrifugación a 3500 rpm por 10 minutos. Para su posterior estudio

de las variables bioquímicas.

a) Concentración de proteína total (g/dl)

 31

Por el método calorimétrico de BIURET O Kjendhal Proteínas

totales AA, empleando reactivos de Laboratorio Valtek, en un

espectrofotómetro de marca DiaLab modelo DTN-450.

b) Concentración de albumina (g/dl)

Albumina AA, empleando reactivos de Laboratorio Valtek, en un

espectrofotómetro, por el método de BCF (verde de tetrabromocresolsulfon

ftaleinas) de marca DiaLab modelo DTN-450.

c) Concentración de globulina (g/dl)

Se obtuvo por la diferencia entre proteínas totales y albuminas.

d) Concentración de colesterol (mg/dl)

Por el método enzimático Colesterol total – LS empleando reactivos

del Laboratorio Valtek, en un espectrofotómetro de marca DiaLab modelo DTN-

450.

3.10. Análisis estadístico

3.10.1. In vitro

Las muestras fueron distribuidas en un Diseño

Completamente al Azar (DCA) con 3 niveles de inclusión y un testigo, 8

repeticiones, cuya unidad experimental fue de 1 cultivo. Los análisis de

variancia fueron realizados con el software estadístico Infostat (INFOSTAT,

2017) y los promedios fueron comparados por el test de Student-Newman-

Keuls (5%), cuyo modelo aditivo lineal es

 32

El modelo aditivo lineal es:

Yij = μ + Ni + Eij

Dónde:

Yij = j-ésimo diámetro de halo, del i-ésimo concentración harina de noni

U = Media muestra.

Ni = Efecto de la i-ésima concentración de harina de noni (0%, 2 %, 4

%, cccccccccccc8%)

eij = Error experimental.

3.10.2. In vivo

Para las variables hematológicas y bioquímicas se

evaluaron con el diseño completamente al azar, con arreglo factorial de 4 x 2 +

1 (4 concentraciones de noni x 2 edades del cuy para la toma de muestra de

sangre + 1 edad control). Los análisis de variancia fueron realizados con el

software estadístico Infostat (INFOSTAT, 2017) y los promedios fueron

comparados por el test de Student-Newman-Keuls (5%), cuyo modelo aditivo

lineal es:

Yij= μ + Ni + Ej + (N x E)ij + eij

Yij = i-ésimo concentración de la j-ésima edad

μ= Media general o media de población

Ni = Efecto del i-ésimo concentración de harina de noni (0%, 2%, 4% y

8%)

Ej = Efecto de la j-ésima edad (75 y 90 días)

 33

(N x E)ij = Efecto de la interacción del i-ésimo concentración de harina de

noni y de la j-ésima edad

eij = Error experimental

 34

IV. RESULTADOS

4.1. Actividad antibacteriana in vitro del noni (M. citrifolia) sobre

Escherichia coli

En el Cuadro 8, se muestra la capacidad de inhibición de las

diferentes concentraciones (0%, 2%, 4% y 8%) de harina de noni frente al

desarrollo de la Escherichia coli, observándose que la inhibición comienza a

partir del 8 % de concentración de noni.

Cuadro 8. Diámetro del halo de inhibición del desarrollo de Escherichia coli

(mm) por el efecto de las concentraciones de extracto acuoso de
harina de noni

Concentración de noni Diámetro (mm)*

0% 0.00 b
2% 0.00 b
4% 0.00 b
8% 6.63 ± 0.02 a
p-valor 0.001
C.V 0.94

Letras diferentes dentro de la misma columna, indican diferencia estadística (SNK 5%). *Los datos fueron
transformados por la √ + 1.

4.2. Respuesta celular de los cuyes tratados con noni

En el Cuadro 9, se observan los promedios de Leucocitos (LEU

mm3), Eritrocitos (ERI mm3), Hematocrito (HC %), Hemoglobina (HB g/dL);
 35

VCM (fL): volumen corpuscular medio (VCM fL), Hemoglobina corpuscular

media (HCM pG) y Concentración de hemoglobina corpuscular media (CHCM

g/dL); de cuyes alimentados con diferentes concentraciones (0%, 2%, 4% y

8%) de harina de noni y evaluados a los 60 (control), 75 y 90 días de edad;

notándose diferencia estadística (p<0.05) para VCM.

En el Cuadro 10 y 11, se muestra el desdoblamiento de dos

factores: Concentración de harina de noni y edad (días) para Eritrocitos (mm3),

Hematocrito (%) respectivamente; notándose diferencia estadística (p<0.05).

entre los dos factores estudiados.

 36

Cuadro 9. Perfiles de respuesta celular evaluadas en función a diferentes concentraciones de noni a los 60, 75 y 90 días de

edad de cuyes

Factores LEU (mm3) ERI (mm3) HC (%) HB (g/dL) VCM (fL)* HCM (pG) CHCM (g/dL)
Concentración de noni
0% 5793.8 3351458 30.54 14.22 90.99 b 43.17 47.36
2% 6462.5 3106250 28.25 14.25 90.94 ab 46.93 51.56
4% 7450.0 3438750 31.25 14.70 90.85 a 43.64 48.02
8% 6037.5 3753750 34.13 15.70 90.95 ab 42.93 47.30
Edad en días
60 4268.8 2794375 b 25.625 b 12.52 b 91.18 b 45.11 49.25
75 6637.5 3556250 a 32.313 a 14.45 a 90.91 a 41.95 46.18
90 6615.6 3408125 a 31.000 a 15.42 a 90.91 a 45.90 50.47

p-valor CN 0.336 0.054 0.059 0.099 0.001 0.439 0.468

p-valor Edad 0.071 0.019 0.025 0.001 0.047 0.158 0.183

p-valor CN x Edad1 0.055 0.040 0.045 0.753 0.441 0.062 0.085

C.V. (%)2 24.29 13.79 13.97 7.78 0.01 13.87 14.32

Letras diferentes dentro de la misma columna, indican diferencia estadística (SNK 5%). 1Interacción de factores (Concentración de harina de Noni x Edad de los cuyes).
2Coeficiente de variación. LEU mm3: Leucocitos; ERI mm3: Eritrocitos; HC %: Hematocrito; HB g/dL: Hemoglobina en gramos/decilitros; VCM fL: volumen corpuscular

medio en femtolitro; HCM pG: Hemoglobina corpuscular media en picogramo; CHCM g/dL: Concentración de hemoglobina corpuscular media en gramos/decilitros. *Los
datos fueron transformados por arcseno.
 37

Cuadro 10. Desdoblamiento de dos factores: Concentración de harina de noni y

edad (días), en el número total de eritrocitos (mm3)

Concentración de noni 60 75 90
0% 2794375 b 3795000 aA 3465000 a
2% 2794375 2750000 B 3462500
4% 2794375 3605000 A 3272500
8% 2794375 b 4075000 aA 3432500 ab
Letras minúsculas: Fila
Letras mayúsculas: columnas
Letras diferentes dentro de la misma columna, indican diferencia estadística (SNK 5%)

Cuadro 11. Desdoblamiento de dos factores: Concentración de harina de noni

y edad (días), nivel de hematocrito

Concentración de noni 60 75 90
0% 25.6 b 34.5 aA 31.5 a
2% 25.6 25.0 B 31.5
4% 25.6 32.8 A 29.8
8% 25.6 b 37.0 aA 21.2 ab
Letras minúsculas: Fila
Letras mayúsculas: columnas
Letras diferentes dentro de la misma columna, indican diferencia estadística (SNK 5%)

4.3. Perfiles bioquímicos hematológicos de los cuyes tratados con noni

(M. citrifolia)

A continuación, en el cuadro 15 se muestra los valores promedio

registrados para proteína total (PT g/dL), Albumina (ALB g/dL), Globulina (GLO

g/dL), Colesterol (CT g/dL); de cuyes alimentados con diferentes

concentraciones (0%, 2%, 4% y 8%) de harina de noni y evaluados a los 60

(control), 75 y 90 días de edad; notándose que no existe diferencia estadística

(p>0.05).
 38

Cuadro 12. Perfiles bioquímicos hematologicos evaluadas en función a

diferentes concentraciones de noni a los 60, 75 y 90 días de edad

de cuyes

Factores PT (g/dL) ALB (g/dL) GLO (g/dL) CT (g/dL)*

Concentración de noni
0% 4.99 3.87 1.11 23.99
2% 4.88 3.67 1.26 21.68
4% 4.57 3.54 1.02 22.39
8% 4.80 3.34 1.46 27.69
Edad en días
60 5.27 a 4.34 a 0.87 26.58
75 5.13 a 3.77 b 1.36 24.87
90 4.42 b 3.32 c 1.12 22.35

p-valor CN 0.566 0.436 0.369 0.274

p-valor Edad 0.001 0.002 0.195 0.371

p-valor CN x
0.986 0.404 0.460 0.175
Edad1
C.V. (%)2 10.08 11.84 40.20 8.33
Letras diferentes dentro de la misma columna, indican diferencia estadística (SNK5%). 1 Interacción de
factores (Concentración de harina de Noni x Edad de los cuyes). 2 Coeficiente de variación. PT g/dL:
Proteína total en gramos/decilitros; ALB g/dL: Albumina en gramos/decilitros; GLO g/dL: Globulina en
gramos/decilitros; CT g/dL: Colesterol en gramos/decilitros. *los datos fueron transformado por logaritmo.
 39

V. DISCUSION

5.1. Actividad antibacteriana in vitro del noni (M. citrifolia) sobre

Escherichia coli

Los resultados obtenidos para la actividad antibacteriana del

extracto acuoso de harina de noni detallan que las concentraciones aplicadas a

los discos de sensibilidad de acuerdo a la prueba de Student (α=0.05)

presentan diferencias altamente significativas (p<0.05) en la inhibición del

desarrollo de la Escherichia coli. El medio de cultivo suspendido en agua

destilada y una inclusión del 8% de extracto acuoso de harina presentó como

diámetro promedio del halo de inhibición de 6.63 mm a diferencia de 0%, 2% y

4% de la dosis que no registraron halos de inhibición a las 24 horas de iniciada

la post siembre de la bacteria.

A partir de esto se infiere que las concentraciones aplicadas de

extracto acuoso de noni persiguen un comportamiento lineal con el diámetro

del halo de inhibición, siendo efectiva su capacidad inhibidora en el crecimiento

de esta bacteria a partir de una concentración del 8% de extracto acuoso; de

esto se infiriere que la actividad inhibitoria de este extracto se desarrolla a partir

de esta concentración; cabe mencionar que si bien se difiere con resultados

obtenidos por PONCE et al. (2008) quienes detallan que los microorganismos

son sensibles frente a un extracto natural cuando las zonas de inhibición del

crecimiento bacteriano se encuentran entre 9 y 14 mm, el bajo promedio

 40

obtenido en el diámetro pudo deberse a la baja concentración del extracto

acuoso planteado en los tratamientos.

En otro estudio realizado por CASTILLO et al. (2014) en extracto

de hojas y semillas de noni en etanol al 20 % y en extractos secos, utilizando

como flujo el etanol al 20 % concentrando 200 mL a 50 °C con ayuda de un

roto-evaporado posteriormente realizando una extracción en solventes

inmiscibles de polaridad creciente (n-hexano, cloroformo y acetato de etilo)

mediante una extracción sucesiva sólido-líquido, obteniendo diámetros de

hasta 10 mm en hojas y de 0 mm en semillas por el primer método, y de 9 mm

en hojas y 7 mm en semillas en el diámetro de inhibición frente a Escherichia

coli por el segundo método; a partir de esto se supone que no sólo la dosis del

extracto influye en la medida del diámetro, sino también el método de

extracción y la parte de la planta en la que se realiza.

En general, se concuerda con diversos autores (TORRES y

TORANZO, 2009) que concluyen haber encontrado actividad inhibitoria en

diversos elementos (hojas, frutos y semillas) de la planta de noni frente al

desarrollo de E. coli; debiéndose esta acción de acuerdo a RODRIGUEZ et al.

(2007) y DURAN et al. (2013) quienes afirman la capacidad inhibidora en la

cadena de transporte electrónico, desacoplación de la fosforilación oxidativa,

intercalación en la hélice doble del ADN, como agentes de alquilación reductiva

de biomoléculas, y como productores de radicales libres de oxígeno (por ciclo

redox) bajo condiciones aeróbicas de sustancias presente en el fruto como; la

escopetina y de los metabolitos secundarios: quinonas y cumarinas,

 41

coincidiendo con las conclusiones de CASTILLO et al. (2014) e HIRAMATSU e

IMOTO (1993).

5.2. Respuesta celular de los cuyes tratados con noni (M. citrifolia)

Previa a la discusión es meritorio conocer los valores

hematológicos normales en la especie; por ello, conociendo que los reportes en

nuestro país se limitan a lo expuesto por BUSTAMANTE (1993) y VIDALÓN

(2014), se hará una comparación numérica entre los promedios que refieren

dichos autores y los obtenidos en el experimento, así como otros registros que

fue debido mencionar.

En los valores hematológicos de la sangre de los cuyes, las

concentraciones aplicadas de harina de noni en la dieta de cuyes influenciaron

(p<0.05) únicamente en el nivel volumen corpuscular medio (VCM.

Entendiéndose que en las demás variables no hubo diferencias significativas

entre sus promedios, lo que supone que las concentraciones provistas para el

experimento no influyen en la disponibilidad de las variables evaluadas.

Respecto a la edad de los cuyes; se muestra otro comportamiento

en los promedios; donde sólo en la hemoglobina corpuscular media (HCM) y en

la concentración de la hemoglobina corpuscular media (CHCM) se encuentran

promedios similares estadísticamente (p>0.05) lo que demuestra que el nivel

en las variables: leucocitos (N°/mm3), eritrocitos (N°/mm3), hematocrito (%),

hemoglobina (g/dL) y volumen corpuscular medio (VCM), la edad afecta

significativamente sus valores, debiéndose básicamente a la capacidad de

 42

cumplir sus actividades fisiológicas lo que se encuentra predispuesta por la

madurez y a la demanda metabólica del individuo.

El nivel de leucocitos (mm3) en la sangre de cuyes no fue

influenciado (p > 0.05) por la inclusión de 0%, 2%, 4% y 8% de harina noni en

sus respectivas dietas concentradas. Cabe destacar que, numéricamente se

observa un incremento gradual desde 0% hasta 4% de concentración de noni;

sin embargo, cuando la dosis fue de 8% los niveles de leucocitos se redujeron,

pudiéndose notar que la disponibilidad de esta célula se ve modificada en cierta

forma con la aplicación de la harina de noni en el alimento. Respecto a la edad

se tiene que el nivel de leucocitos mostró un crecimiento importante de los 60 a

75 días (4268.8-6635.6 leucocitos mm3), registrando para los 90 días un ligero

decrecimiento; por lo que no se encuentran diferencias significativas (p>0.05).

El promedio de eritrocitos (mm3) no mostró diferencias

significativas (p<0.05) por lo que la inclusión al 0%, 2%, 4% y 8% no

influenciaron en esta variable. notando que el que mayor registro se obtuvo al

8% (3753750 leucocitos mm3) de concentración de noni, contrariamente al 2%

de harina de noni se registra un menor valor, por lo que se predispone que a

esa cantidad de harina de noni no afectan en la disponibilidad de estas células.

Respecto a la edad registran diferencias significativas (p<0.05) mostrando el

mayor valor a los 75 días; sin embargo, a los 90 días de edad se observó un

descenso de esta célula, pudiéndose notar que la disponibilidad de esta célula

se ve modificada en cierta forma por la edad del cuy.

En el Cuadro 10, se muestra el desdoblamiento de dos factores:

Concentración de harina de noni y edad (días), en el número total de eritrocitos

 43

(mm3)) notándose diferencia estadística (p<0.05) entre los factores estudiados.

Se observa que según la edad a los 90 dias no hay efecto de la harina de noni

en sus diferentes concentraciones sobre el número de eritrocitos.

Según la concentración de harina de noni, al 0% y 8% de noni

existe una influencia significativa en el nivel de eritrocitos. Contrariamente al

2% y 4% de harina de noni los cuales no mostraron diferencias significativas

(p>0.05) por lo que se predispone que estas cantidades de harina de noni no

afectan en la disponibilidad de estas células. Cabe mencionar, que los

promedios registrados, presentan un ligero crecimiento a los 75 días, en

contraste, para los 90 días donde se vio una reducción en los niveles promedio

en casi totas las concentraciones de noni.

El promedio de hematocrito no mostró diferencias significativas

(p<0.05) por lo que la inclusión al 0%, 2%, 4% y 8% no influenciaron en esta

variable. notando que el que mayor registro se obtuvo al 8% (34.13 %) de

concentración de noni, contrariamente al 2% de harina de noni se registra un

menor valor, por lo que se predispone que a esa cantidad de harina de noni no

afectan en la disponibilidad de esta variable. Respecto a la edad registran

diferencias significativas (p<0.05) mostrando el mayor valor a los 75 días; sin

embargo, a los 90 días de edad se observó un descenso de esta célula,

pudiéndose notar que la disponibilidad de esta célula se ve modificada en cierta

forma por la edad del cuy.

En el Cuadro 11, se muestra el desdoblamiento de dos factores:

Concentración de harina de noni y edad (días), en el nivel de hematocrito (%)

notándose diferencia estadística (p<0.05) entre los factores estudiados. Se

 44

observa que según la edad a los 90 días no hay efecto de la harina de noni en

sus diferentes concentraciones sobre el nivel de hematocrito;

Según la concentración de harina de noni, al 0% y 8% de noni

existe una influencia significativa en los niveles de hematocrito. Contrariamente

al 2% y 4% de harina de noni los cuales no mostraron diferencias significativas

(p>0.05). Cabe mencionar, que los promedios registrados, presentan un ligero

crecimiento a los 75 días, en contraste, para los 90 días donde se vio una

reducción en los niveles promedio en casi totas las concentraciones de noni.

Las concentraciones de harina de noni aplicadas en la dieta de los

cuyes en las condiciones mencionadas no influyeron estadísticamente (p>0.05)

en el promedio de hemoglobina (g/dL). Cabe destacar que, numéricamente se

observa un incremento gradual desde 0% hasta 8% de concentración de noni,

pudiéndose notar que esta variable se ve modificada en cierta forma con la

aplicación de la harina de noni en el alimento. Respecto a la edad se tiene que

el nivel de hemoglobina mostró un crecimiento importante de los 75 hasta 90

días (14.45-15.42 HB g/dL).

Los registros para el volumen corpuscular medio (VCM fL)

mencionan que durante el experimento que las concentraciones de harina de

noni aplicados en la dieta de los cuyes afecta significativamente (p<0.05).

Notando que el que mayor registro se obtuvo al 0% (90.99 fL) de concentración

de noni, contrariamente al 4% de harina de noni se registra un menor valor, por

lo que se predispone que a esa cantidad de harina de noni no afectan en la

disponibilidad de esta variable. Respecto a la edad registran diferencias

significativas (p<0.05) mostrando el mayor registro a los 60 días de edad

 45

reduciéndose linealmente hasta los 75 días a partir del cual mantuvo constante

su valor.

Los promedios para la hemoglobina corpuscular media (HCM pG)

muestran resultados sin diferencias estadísticas (p>0.05) para las

concentraciones de harina de noni aplicadas. Cabe destacar que los mayores

registros se obtuvieron al 2% de harina de noni; observando una disminución

gradual al 4% y 8% de concentración, pudiéndose notar que la disponibilidad

de esta variable se ve modificada en cierta forma con la aplicación de la harina

de noni en el alimento. Respecto a la edad se tiene que el nivel de HCM mostró

un bajo valor a los 75 recuperándose a los 90 días de edad.

Los registros para Concentración de hemoglobina corpuscular

media (CHCM g/dL), mencionan que durante el experimento que las

concentraciones de harina de noni aplicados en la dieta de los cuyes no afecta

significativamente (p>0.05). Notando que el que mayor registro se obtuvo al 2%

(51.56 g/dL) de concentración de noni, contrariamente al 4% de harina de noni

se registra un menor valor, por lo que se predispone que a esa cantidad de

harina de noni no afectan en la disponibilidad de esta variable. Respecto a la

edad se tiene que el nivel de CHCM mostró un bajo valor a los 75

recuperándose a los 90 días de edad.

Los resultados guardan cierta similitud con los reportes de

COLVETCADIZ (2015) donde sin diferenciar sexo y edad muestran para la

hemoglobina un promedio de 11-15 g/dl, difieren sin embargo, con los niveles

de leucocitos por µL (7.0-18.0 x 103), hematíes (4.5-7.0 x 106/µL) y de

hematocrito (37 - 48%); asimismo, al compararse los resultados con

 46

LAGUAQUIZA (2015) quien caracterizó valores hemáticos en cuyes de dos

distintas zonas geográficas mediante la técnica de la punción cardiaca se

encontró similitud con el promedio de hemoglobina (17.36 g/dl) y de leucocitos

(5892.5/µL).

Sin embargo, los registros encontrados son inferiores en el nivel

de glóbulos rojos (75 x 106 / µL) y el de hematocrito (46.44%), y superiores

para el caso de VCM, cuyo autor detalla niveles desde 64.2 hasta 80 fL, para el

HCM un promedio de 27.8 fL y para el CHCM de 36.6 g/dL. Por otro lado, los

reportes de BUSTAMANTE (1993) del Primer Curso Nacional de Cuyes -

Huancayo (1976), sin especificar la edad superan numéricamente a los datos

obtenidos en hematíes (5.52 y 5.01 x 106/µL en machos y hembras) y

hematocrito (40.42 y 40.11%); para el VCM y HCM (80.78 fL y 26 pG en

promedio respectivamente) los datos que muestra la referencia son menores a

los registrados en el experimento; sin embargo, éstos afirman la similitud en el

nivel de leucocitos (3.79 y 4.08 x 103/µL en machos y hembras) y en el de la

hemoglobina (13.72 y 13.50 g/dl).

También se concuerda con VIDALÓN (2014), quien caracterizó el

perfil hematológico de dos líneas de selección de cuyes en condiciones de

altura de 3350 msnm, en los niveles de hemoglobina (16.1 g/dl) y en el VCM

(90.67 fL), en contraste los valores difieren en los demás parámetros

teniéndose valores ampliamente superados para los leucocitos (7.9 x 103/µL),

hematíes (6.08 x 106/µL) y hematocritos (55.1%), en los demás casos los

valores que obtuvo el autor fueron inferiores a los reportados.

 47

Cabe mencionar los reportes de LEGUÍA (1995) quien realizó

evaluaciones hematológicas en cuyes infestados con Pulex irritans registrando

valores similares en el nivel de hematocritos (28%) y eritrocitos (3.65 x 106/µL);

asimismo, los promedios obtenidos para los leucocitos (2787/µL) fueron

inferiores, en contraste los registros en hemoglobina superan numéricamente a

los obtenidos en el presente experimento. También FLORIAN (1995) realizó

evaluaciones hematológicas, pero en cuyes infestados con Dermanyssus

gallinae teniéndose valores similares para el nivel de hematíes (4.1 x 106/µL) y

hemoglobina (12.7 g/dl), en los demás casos los promedios que obtuvo

superan a los registrados en el presente, pudiéndose inferir que la efectividad

de la aplicación de las dosis de harina en el alimento de los cuyes se ve

limitada a ciertos parámetros.

Por otro lado, al comparar los resultados con los reportes del ISIS

(1999), donde se analizó exámenes médicos anuales a cuyes sanos sin

especificar edad ni sexo, pertenecientes a diversos laboratorios y zoológicos

del mundo se encuentra concordancia con los promedios en leucocitos

(7012/µL) y la hemoglobina (13.1 g/dL) de la sangre. Empero, los valores que

registran para los hematíes (4.9 x 106/µL) y hematocrito (38%) superan

ampliamente a los obtenidos en el experimento.

Esta variación entre los resultados deja muchos vacíos en la

interpretación de la efectividad de la M. citrifolia como parte de la dieta

alimenticia en cuyes bajo las condiciones descritas en el experimento; en este

sentido cabe mencionar a JAIN (1993) quien refiere que los desacuerdos entre

los valores hematológicos normales obtenidos por diversos autores llevaron a

 48

definir que los principales factores de variación del hemograma se centrarían

en el tamaño y origen de la muestra, el sexo, la raza, la salud, la actividad

muscular, la temperatura ambiental, la altitud, el estado nutritivo y de

hidratación de los animales en estudio, así como el método de recolección de

sangre y las técnicas laboratoriales empleadas.

A partir de esto se puede inferir considerando estos

planteamientos que las diferencias presentadas pueden deberse al método de

crianza, alimentación y manejo de los individuos, tal como menciona MEDWAY

et al. (1986) quien infiere que los niveles nutricionales en el alimento afectan

directamente en la disponibilidad de la hemoglobina, así como el método de

muestreo de la sangre (BENJAMIN, 1998). Otra consideración importante es la

de las condiciones climáticas en la que se realiza el experimento; VIDALÓN

(2014) en este sentido refiere que la disponibilidad de oxígeno en la atmósfera,

la que se ve disminuida a medida que aumenta la altura, interfiere directamente

en la cantidad de este elemento que se transporta en la sangre, afectando en la

producción de hematíes.

Asimismo, de acuerdo a MORALES (2009) y DOXEY (1987) el

método de extracción y sujeción del animal provoca estrés, afectando el nivel

de hematíes, hematocritos y el de la hemoglobina, así la sedación en algunos

casos reduce en forma considerable de eritrocitos. Por otro lado, el número de

individuos con el que se experimenta tiende a predisponer la disponibilidad de

leucocitos, puesto que a menos individuos los agentes patógenos son

reducidos por lo que la producción de leucocitos sigue el mismo

comportamiento, en contraste, si existen más individuos las enfermedades se

 49

proliferan más rápido, lo que conlleva a mayor producción de glóbulos blancos

como agente de defensa, afianzando este enunciado con lo referido por

GORDÓN (1959) quien afirma que los cuyes que se encuentran libres de

gérmenes tienden a tener menor recuento de leucocitos totales.

REBAR et al. (2002) menciona que el conteo de leucocitos está

estadísticamente influenciado por el lugar del drenaje de la sangre, la edad del

animal, la actividad muscular, los factores de estrés y alojamiento. Asimismo,

VIDALÓN (2014) refiere que los niveles hematológicos (Hemoglobina,

Hematocrito, VCM y HCM) se ve afectado principalmente por la selección

genética y por los cambios fisiológicos generados por un proceso de

adaptación de los individuos, dado que los cuyes son oriundos de climas

andinos el proceso de adaptación a condiciones tropicales afecta en la

disponibilidad de estos parámetros.

5.3. Perfiles bioquímicos hematológicos de los cuyes tratados con noni

(M. citrifolia)

En cuanto a los valores serológicos o perfiles bioquímicos

sanguíneos en cuyes existen escasos reportes en la literatura (WASHINGTON

y VAN HOOSIER, 2012), por lo que nos limitaremos a hacer una comparación

numérica con los valores reportados por COLVETCADIZ (2015).

El análisis estadístico de acuerdo a la concentración de harina de

noni aplicadas detalla los promedios no mostraron significancia (p>0.05) en

ningunos de los perfiles bioquímicos evaluados. Respecto a la edad de los

individuos la prueba de SNK refiere que para el nivel de proteínas (g/dL) y

 50

albúminas (g/dL) se registran promedios estadísticamente distintos, en las

demás variables la edad de los individuos fue irrelevante.

Las concentraciones de harina de noni aplicadas en la dieta de los

cuyes en las condiciones mencionadas no influyeron estadísticamente (p>0.05)

en el promedio de proteínas (g/dL). Cabe destacar que se observó un

decrecimiento gradual desde 0% hasta 8% de concentración de noni,

pudiéndose notar que esta variable no se favorece cuando aplicamos harina de

noni en el alimento. Respecto a la edad se tiene que el nivel de proteína mostró

un decrecimiento importante de los 75 hasta 90 días (5.27-4.42 PT g/dL).

Las concentraciones de harina de noni aplicadas en la dieta de los

cuyes en las condiciones mencionadas no influyeron estadísticamente (p>0.05)

en el promedio de albumina (g/dL). Cabe destacar que se observó un

decrecimiento gradual desde 0% hasta 8% de concentración de noni,

pudiéndose notar que esta variable no se favorece cuando aplicamos harina de

noni en el alimento. Respecto a la edad se tiene que el nivel de albumina

mostró un decrecimiento importante de los 75 hasta 90 días (4.34 - 3.32 g/dL).

Los registros para globulina (g/dL), mencionan que durante el

experimento que las concentraciones de harina de noni aplicados en la dieta de

los cuyes no afecta significativamente (p>0.05). Notando que el mayor registro

para la globulina se observó aplicando al 8% de harina de noni (1.46 g/dL) de

concentración de noni, contrariamente al 4% de harina de noni se registra un

menor valor, por lo que se predispone que a esa cantidad de harina de noni no

afectan en la disponibilidad de esta variable. Respecto a la edad se tiene que el

 51

nivel de globulina mostró un crecimiento a los 75 días y luego disminuyo a los

90 días de edad.

Los registros para colesterol (g/dL), mencionan que durante el

experimento que las concentraciones de harina de noni aplicados en la dieta de

los cuyes no afecta significativamente (p>0.05). Notando que el mayor registro

para la globulina se observó aplicando al 8% de harina de noni (27.69 g/dL) de

concentración de noni, contrariamente al 2% de harina de noni se registra un

menor valor, por lo que se predispone que a esa cantidad de harina de noni no

afectan en la disponibilidad de esta variable. Respecto a la edad se tiene que el

nivel de colesterol mostró descenso en relación a los 75 y 90 días.

Los resultados del experimento se encuentran dentro del rango

propuesto por COLVETCADIZ (2015) para el nivel de proteínas y albúminas a

los 75 y 90 días de edad en la sangre de cuyes, mostrando un rango de 4.2-6.8

g/dL y 2.1 - 3.9 g/dL respectivamente; asimismo, los resultados superan

ligeramente a los 60 días de edad de los cuyes en los niveles de albúmina a los

resultados del mismo autor, quien detalla un promedio 3.0 g/dL.

El colesterol por su parte muestra decrecimiento con la adición de

harina de noni en la dieta lo que refiere un resultado positivo en el cuadro

serológico de los cuyes, puesto que evita la frecuencia de enfermedades

cardíacas y accidentes cerebrovasculares. COLVETCADIS (2015), señala un

rango de 16 - 43 mg/dL en cuyes, datos que superan a los obtenidos en el

presente estudio, lo que supone la efectividad de las dosis aplicadas en

referencia al nivel de este parámetro. Cabe mencionar que, si bien se coincide

numéricamente con los valores de proteínas y albúminas, estos parámetros

 52

durante todo el experimento decrecieron en relación a la concentración y a la

edad del cuy, encontrándose sin embargo dentro de los valores normales

reportados para el cuy como animal de laboratorio (WASHINGTON y VAN

HOOSIER ,2012).

Esto difiere con lo mencionado por ECKERSALL (2008) quien

afirma que en una alimentación con dietas elevadas en proteínas se eleva los

niveles de proteína total en suero y al mismo tiempo la albúmina, toda vez que

es la proteína del plasma más abundante a medida que alcanzan la etapa

adulta en las diversas especies; pudiéndose deber a mecanismos fisiológicos

en los cuyes como también al método en el que se está suministrado la fuente

proteica. Este resultado se confirma con el estudio de PAREDES et al. (2017)

quienes al incluir harina de Erythrina sp. en la dieta alimenticia de 75 cuyes

machos de 13 días de edad, encontraron una relación positiva entre la dosis

suministrada y el nivel de proteínas (6.19 g/dL a 14% de concentración) y en

contraste una relación negativa con el de albúmina (4.35 g/dL a 14% de

concentración).

Por otro lado, nuestros resultados concuerdan con ATSAMO et al.

(2011) quien encontró una correlación negativa al incluir harina de Erythrina sp.

en la dieta de ratones en el perfil de proteína total.

Cabe destacar, que la variación de los resultados en el presente

experimento se debe asimismo a los componentes activos que se encuentran

en el fruto de noni, pues como refiere RODRÍGUEZ et al. (2005) quien realizó

un estudio del tamizaje fitoquímico al fruto verde y maduro, en la que precisó

que en la composición fitoquímica de la planta estaban presentes,

 53

fundamentalmente, triterpenos y/o esteroides, aminoácidos, carbohidratos

reductores, alcaloides y flavonoides; los cuales pueden ser los responsables de

la activación de respuestas inmunes. Esto sugiere que las variaciones

encontradas con los estudios anteriores se deben a la asimilación de estos

componentes como parte de su dieta.

Ante estas diferencias y variaciones obtenidas en los resultados

del presente estudio se debe considerar lo mencionado por COLES (1986)

quien afirma que los resultados de laboratorio solo tendrán valor cuando el

clínico se halle en condiciones de saber interpretar los mismos a partir de un

conocimiento previo de aquellos factores o limitantes que potencialmente

pueden afectarlos.
 54

VI. CONCLUSIONES

- La actividad antibacteriana del extracto acuoso de la harina de frutos de

noni (Morinda citrifolia) sobre el desarrollo de la Escherichia coli, tuvo

efecto antimicrobiano con un promedio de 6.63 mm al incluir 8% de harina

de Morinda citrifolia, contrastándose con las concentraciones de 0%, 2%,

4%, que no mostrarón actividad antimicrobiana.

- Las diferentes concentraciones de inclusión de harina de Morinda citrifolia

en la dieta mostraron efectos a los 75 días para los niveles de eritrocito y

hematocrito donde los niveles de los parámetros fueron superiores a los

resultados de los 60 y 90 días de edad de los cuyes machos en fase de

acabado de la línea Perú.

- Las concentraciones de inclusión de harina de noni (Morinda citrifolia) en la

dieta no mostraron efectos sobre los perfiles bioquímicos hematológicos de

cuyes machos en fase de acabado (60 a 90 días de edad) de la línea Perú.

 55

VII. RECOMENDACIONES

- Realizar investigaciones con extracto acuoso de harina de Noni (Morinda

citrifolia) bajo procesos de liofilización y atomizado, sobre el desarrollo de

diferentes bacterias que afectan la producción de animales domesticos.

- Evaluar el efecto antimicrobiano de harina de Noni (Morinda citrifolia), en

mayores concentraciones, sobre la Escherichia coli.

- Realizar más investigaciones con plantas medicinales Fito farmacológicos

para incorporar en la ración de los animales domésticos.

 56

VIII. ABSTRACT

IN VITRO ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF CHEESE FRUIT (Morinda citrifolia)

ON Escherichia coli AND ITS IMMUNOMODULATOR EFFECT IN GUINEA

PIGS IN TINGO MARÍA

The objectives of the study were: to determine the in vitro antibacterial activity

of the aqueous extract from cheese fruit on Escherichia coli at the in vivo

evaluation of the effect of cheese fruit flour on the cellular response and

hematological biochemical profiles of guinea pigs from the Peru breed. Sixteen

male guinea pigs, at sixty days of age, were distributed in four treatments, four

repetitions and one guinea pig per repetition. For the antimicrobial activity, 0%,

2%, 4% and 8% of the aqueous extract from cheese fruit flour were evaluated,

using the diameter of the inhibition halo (mm) of the sensitivity disks as an

evaluation parameter and for the in vivo evaluation, 0%, 2%, 4% and 8% of

cheese fruit flour were added to the food. The in vitro results showed that the

aqueous extract from cheese fruit flour, at a concentration of 8%, inhibits the

growth of Escherichia coli at a halo of 6.63 mm; also, the in vivo results indicate

that at seventy five days of age, the guinea pigs showed an increase in

erythrocytes and hematocrit, meanwhile, at ninety days, there was no effect

from the inclusion of cheese fruit flour in the respective diets; meanwhile, the

hematological biochemical variables were not affected by the inclusion of

cheese fruit. It is concluded that the aqueous extract from cheese fruit flour at

8% inhibits the growth of E. coli; however, the inclusion of cheese fruit flour in

the diets does not influence (p > 0.05) the cellular response and hematological

biochemical variables.

Keywords: Cellular response, biochemical profile, inhibition halo, acquis extract

 57

IX. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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 65

X. ANEXOS
 66

Anexo 1. Análisis de varianza diámetro de halo de inhibición (mm )

F.V. gl CM F Significación

Tratamientos 3 0.167 1648.745 **

Error 28 0.000101
Total 31

Anexo 2. Análisis de varianza de Leucocitos/mm3de sangre

F.V. DF SC CM F- Valor Pr > F

Edad 2 13957578 6978789 2.92 0.0712

Tratamiento 3 8455234 2818411 1.18 0.3363
Tratamiento*Edad 3 20552734 6850911 2.86 0.0552

Anexo 3. Análisis de varianza de eritrocitos/mm3 de sangre

F.V. DF SC CM F- Valor Pr > F

Edad 2 2.04 1.02 4.62 0.0189

Tratamiento 3 1.91 6368 2.88 0.0541
Tratamiento*Edad 3 2.10 7014 3.18 0.0400

Anexo 4. Análisis de varianza de hematocrito

F.V. DF SC CM F- Valor Pr > F

Edad 2 158.82 79.41 4.23 0.0252

Tratamiento 3 157.34 52.45 2.88 0.0593
Tratamiento*Edad 3 172.84 57.61 3.07 0.0446
C.V.= 13.97% / NS: No significativo al 5% de probabilidad
 67

Anexo 5. Análisis de varianza de hemoglobina

F.V. DF SC CM F- Valor Pr > F

Edad 2 25.10 12.55 9.63 0.0007

Tratamiento 3 8.96 2.99 2.30 0.0999
Tratamiento*Edad 3 1.57 0.52 0.48 0.7533

Anexo 6. Análisis de varianza de VCM

F.V. DF SC CM F- Valor Pr > F

Edad 2 0.19 0.0988 2.92 0.001

Tratamiento 3 0.05 0.0173 1.18 0.0474
Tratamiento*Edad 3 0.02 00 2.86 0.4406

Anexo 7. Análisis de varianza de HCM

F.V. DF SC CM F- Valor Pr > F

Edad 2 147.82 73.91 1.98 0.1578

Tratamiento 3 104.36 34.79 0.93 0.4390
Tratamiento*Edad 3 530.65 176.88 4.74 0.0621

Anexo 8. Análisis de varianza de CHCM

F.V. DF SC CM F- Valor Pr > F

Edad 2 168.79 84.39 1.81 0.1827

Tratamiento 3 121.95 40.63 0.87 0.4675
Tratamiento*Edad 3 631.27 210.42 4.52 0.0853

Anexo 9. Análisis de varianza de proteína total

F.V. DF SC CM F- Valor Pr > F

 68

Edad 2 4.56 2.28 9.63 0.0007

Tratamiento 3 0.48 0.16 0.69 0.5662
Tratamiento*Edad 3 0.03 0.01 0.85 0.9855

Anexo 10. Análisis de varianza de albumina

F.V. DF SC CM F- Valor Pr > F

Edad 2 2.95 1.48 7.96 0.0019

Tratamiento 3 0.52 0.17 0.94 0.4355
Tratamiento*Edad 3 0.56 0.19 1.01 0.4035

Anexo 11. Análisis de varianza de globulina

F.V. DF SC CM F- Valor Pr > F

Edad 2 0.88 0.44 1.74 0.1948

Tratamiento 3 0.76 0.25 1.09 0.3693
Tratamiento*Edad 3 0.62 0.21 0.89 0.4599

Anexo 12. Análisis de varianza de colesterol

F.V. DF SC CM F- Valor Pr > F

Edad 2 91.86 45.53 1.83 0.3711

Tratamiento 3 181.68 60.56 1.37 0.2736
Tratamiento*Edad 3 235.98 78.66 1.78 0.1753
 69

Anexo 13. Registro de datos sobre respuesta biológica de cuyes de la línea Perú en fase de acabado

CONSUMO DE ALIEMENTO + PASTO GANANCIA DE PESO

∑ C. DE CONVERSIÓN
CODIGO CONSUMO C. ALIMENTO/ CONSUMO C. PASTO/ ALIEMENTO GANANCIA G. DE
DE ALIMENTICIA
DIA DE PASTO DIA + DE PESO PESO/DIA
ALIMENTO
PASTO/DIA
T1R1 920 30.667 3793 126.433 157.100 289 9.633 16.308
T1R2 829 27.633 4402 146.733 174.367 325 10.833 16.095
T1R3 841 28.033 4309 143.633 171.667 241 8.033 21.369
T1R4 951 31.700 4294 143.133 174.833 364 12.133 14.409
T2R1 1074 35.800 4546 151.533 187.333 270 9.000 20.815
T2R2 1037 34.567 4641 154.700 189.267 344 11.467 16.506
T2R3 924 30.800 4509 150.300 181.100 324 10.800 16.769
T2R4 807 26.900 4285 142.833 169.733 271 9.033 18.790
T3R1 915 30.500 4661 155.367 185.867 337 11.233 16.546
T3R2 985 32.833 3913 130.433 163.267 410 13.667 11.946
T3R3 1006 33.533 4659 155.300 188.833 376 12.533 15.066
T3R4 940 31.333 4535 151.167 182.500 367 12.233 14.918
T4R1 937 31.233 4598 153.267 184.500 312 10.400 17.740
T4R2 881 29.367 3749 124.967 154.333 309 10.300 14.984
T4R3 983 32.767 4251 141.700 174.467 347 11.567 15.084
T4R4 1142 38.067 3751 125.033 163.100 397 13.233 12.325
 70

Anexo 2. Dieta para cuyes em fase de acabado

INSUMOS ACABADO (%)

Maíz 41.26
Afrecho de trigo 17.14
Torta de soya 18.72
Harina alfalfa 15
Melaza 4
Aceite de palma 1.32
Carbonato de calcio 1.25
Fosfato biclasico 0.25
Sal 0.42
Premix cuyes 0.1
Aflaban 0.05
BHT 0.05
Cloruro de colina 0.1
Lisina 0.14
Metionina 0.17
Treonina 0.04
TOTAL 100%