PRACTICA N°10: MITOSIS Y CROMOSOMAS
I. OBJETIVO
Demostrar el proceso de mitosis en células vegetales.
II. FUNDAMENTO
El número de cromosomas de un organismo se mantiene por un proceso de división
celular que recibe el nombre de mitosis. La mitosis se lleva a cabo en una serie de etapas
consecutivas conocidas como interfase, profase, metafase, anafase y telofase. En las
células somáticas, el núcleo se divide por mitosis, de tal manera que cada una de las
células hijas resultantes recibe exactamente el mismo número y tipo de cromosomas
que la célula madre.
III. MATERIALES Y MÉTODOS
1. MATERIALES Y REACTIVOS
• Solución fijadora Farmer
Colorante: acetocarmín (carmín acético) u Orceína acética o Lacto propiónica
(una parte de ácido acético y tres partes de alcohol etílico al 95%)
• Raíces de cebolla o de ajo (Cinco días previos deberán colocar una cebolla o ajo
en un medio húmedo para generar el enraizado)
• Ácido clorhídrico al 10%
• Microscopio
• Porta y cubreobjetos
• Pinzas
• Navajas, cuchilla o bisturí
Gotero
Agujas de disección
• Mechero
2. MÉTODOS
En esta práctica se emplea tejido meristemático de las raicillas de “cebolla” (Allium
cepa) o de “ajo” (Allium sativum), debido a la facilidad con que se produce el
enraizamiento en estas especies, la sencillez de la técnica para observar células en
división y el número cromosómico relativamente bajo (2n = 16).
a. Preparación de fijadores y colorantes
Fijador Farmer: también conocido como etanol acético, se prepara mezclando tres
partes de alcohol etílico y una de ácido acético glacial. Debe prepararse al momento
de usar y ser conservado en un recipiente tapado.
b. Colorante orceína acética
Ácido acético glacial ..................... 65 cc
Agua destilada ............................... 85 cc
Orceína en polvo ............................ 2 g
1) Vierta el ácido acético glacial y el agua en un vaso de precipitado y caliente
hasta ebullición.
2) Deje hervir 1 minuto. Cuando esté tibio agregue la orceína en polvo.
3) Caliente a llama baja sin hervir durante 10 minutos.
4) Filtre y guarde en un frasco oscuro.
A) PROCEDIMIENTO
1. Aproximadamente 125 h antes de realizar la técnica, descarte las raíces viejas
del bulbo e introdúzcalo en un recipiente con agua, de modo que solo se moje
la base, antes de realizar el laboratorio.
2. Dibuja su aspecto una vez transcurridos los cinco días.
3. Retire el bulbo del agua y corte con un bisturí varias raicillas de
aproximadamente 5 cm y ubíquelas en una caja de Petri conteniendo Farmer.
Fije el material durante 15 minutos.
4. Con una pinza traslade las raicillas fijadas a una caja de Petri conteniendo la
solución de ácido clorhídrico al 10%. Deje actuar 15 min. Este paso se realiza
para eliminar el cemento péctico de las paredes celulares y permitir la entrada
del colorante.
5. Tome las raicillas con una pinza y ubíquelas sobre un portaobjeto. Observeen
el microscopio e identifique la región meristemática, la cual se presenta como
una zona blanquecina de unos 40 pocos milímetros antes del extremo apical y
está protegida por una estructura tisular llamada cofia o caliptra.
6. Extraiga la pequeña región donde se ubica el tejido meristemático (descartando
el resto del material). Agregue una o dos gotas de colorante y macere con una
varilla de extremo romo hasta que el material esté lo suficientemente
disgregado, cuide que no se deseque.
7. Ponga el cubreobjetos y con un trozo de papel de filtro realice el Squash o
aplastamiento. Este paso tiene por objeto aplastar las células sobre el
portaobjetos de manera que queden en un mismo plano. Se realiza
sosteniendo el portaobjetos con su cubreobjetos con el pulgar y el índice de
una mano; con un pedazo de papel de filtro y el dedo pulgar de la otra mano se
presiona suave pero firmemente con un movimiento lateral, cuidando que no
se deslice el cubre y que no se rompa el portaobjetos.
8. Exponga el preparado a la llama del mechero con la finalidad de aclarar el
citoplasma. El colorante no debe hervir, por ello la temperatura del portaobjeto
debe ser soportable en el dorso de la mano.
9. Controle los resultados al microscopio, si faltara coloración agregue colorante
por el borde del cubre. Si el material no estuviera suficientemente disgregado
golpee suavemente con la punta de una aguja.
10. Una vez logrados los resultados esperados, selle los bordes del cubreobjetos
con cera o esmalte para uñas. Este preparado temporario puede conservarse
durante algún tiempo en la heladera
11. Observe al microscopio óptico y reconozca los estadios del ciclo de vida de la
célula: interfase (presencia de núcleo y nucleolos) y división celular
(cariocinesis: condensación del material genético en cromosomas, segregación
de cromosomas a los polos; citocinesis).
12. RESULTADOS
13. DISCUSIONES
14. CONCLUSIONES
15. BIBLIOGRAFIA
1. BARSALLO, ET ALL, 2011. Manual de talleres y laboratorios de Biología 10. Segunda
edición. Pearson Educación, México.
16. CUESTIONARIO
1. ¿Qué es mitosis?
2. ¿Cuáles estadios de la mitosis puedes localizar?
3. ¿En qué etapa se encuentran la mayor parte de las células?
4. ¿Qué tamaño tienen las células al final de la telofase respecto de las otras células?
5. ¿Cuántos cromosomas posee la cebolla?
6. ¿Cuál crees que sea la función del fijador empleado para preparar las placas de
cebolla?
7. ¿Cuál es la principal diferencia entre la telofase animal y la vegetal?
