INSTITUTO SUPERIOR TECNOLOGICO ARZOBISPO LOAYZA

ESPECIALIDAD: LABORATORIO CLINICO Y ANATOMIA PATOLOGICA

METODOS DE ANALISIS
DEL
ESPERMATOZOIDES

PRESENTADO: ARTEAGA R. YONMARIT

DOCENTE: PEÑA PALOMINO WUILLIAN

06 de diciembre de 2023
El objetivo del análisis de semen básico es evaluar los parámetros
descriptivos de eyaculados obtenidos mediante masturbación. Las
cualidades que se evalúan son el aspecto visual, olor, licuefacción,
viscosidad, volumen, concentración espermática y número total de
espermatozoides, movilidad y vitalidad espermática. Además,
también se realiza el recuento diferencial según la morfología
espermática, la estimación de la aglutinación/agregación, y la
evaluación de la presencia de detritus y otros tipos celulares en
semen.
 La muestra de semen

El análisis de un eyaculado, obtenido mediante masturbación,

empieza en el laboratorio 30 minutos después de la eyaculación.
Deben existir habitaciones especiales para la obtención de la
muestra.
El Manual de la OMS recomienda un intervalo máximo de
abstinencia entre 2 y 7 días antes de la recolección de la muestra,
pero recomienda que dicho intervalo sea “lo más constante posible”.
En consecuencia, se aconseja vivamente la estandarización “del
tiempo de abstinencia” a 3-4 días. El tiempo de abstinencia sexual,
expresado en días, es muy impreciso. Resulta ventajoso por tanto
que el tiempo de abstinencia se exprese en horas.
Cuando los resultados han de ser usados en estudios relacionados
con el tiempo de abstinencia es obligatorio registrarlo en horas.
Algunos hombres tienen dificultades para producir una muestra de
semen en el laboratorio. En estos casos, el hombre puede obtener
una primera muestra en casa y entregarla en el laboratorio antes de
1 hora.
En algunos casos puede ser necesario para el hombre usar
preservativos especiales, sin espermicidas, para recoger una
muestra de semen durante el coito.

Detalles del procedimiento

Registrar, pesar y etiquetar el recipiente de muestras Inicialmente,
la muestra ha de registrarse.
El recipiente debe etiquetarse inequívocamente de acuerdo con el
formulario de solicitud, la hoja de registro de la muestra y un
cuestionario opcional.
El etiquetado debería, en general, comprender dos identificadores
únicos, p.ej. nombre y un número único para cada muestra. Si la
muestra se obtiene en el laboratorio, el recipiente ha de ser pesado
y marcado antes de la obtención de la muestra.
Cuando las muestras no se recogen en el laboratorio, el peso de los
recipientes vacíos debe marcarse en los mismos antes de su
distribución a los médicos/clínicos solicitantes, o a los propios
pacientes.
Al recoger la muestra, debe anotarse la hora de la eyaculación de
forma clara en el recipiente, así como en el protocolo.
El peso neto de la muestra (peso total de la muestra y contenedor
menos peso del contenedor vacío) debe anotarse en el protocolo
como volumen seminal (unidad mL; 1 decimal).
Se debe colocar la muestra enseguida sobre la bandeja móvil de un
agitador orbital (37ºC). Es importante comprobar que el recipiente
usado permite una mezcla completa de la muestra con el agitador
usado.
La hora de colocación en el incubador debe escribirse en la hoja de
trabajo. La muestra ha de mantenerse en el incubador hasta unos
25-30 minutos después de la eyaculación, de forma que el examen
pueda empezar 30 minutos después de la eyaculación.
Sacar el contenedor del incubador y comprobar si la muestra está
bien mezclada volteándola en el fondo del recipiente durante unos
20 segundos.
Si la muestra fue producida fuera del laboratorio, ha de atemperarse
en el incubador unos 5-10 minutos antes del examen.

Evaluación de la licuefacción, apariencia visual y viscosidad

del semen.
Inspeccionar la apariencia visual de la muestra en relación al color
(sin comentarios o rojizo-marrón), opalescente o claro, presencia de
partículas de gel o filamentos mucosos.
Un color amarillento del eyaculado habitualmente es debido a un
contenido aumentado de flavoproteínas que se originan en las
vesículas seminales, indicando un largo período de abstinencia
sexual, o procedente de vitaminas B.
La ictericia también puede ocasionar color amarillo.
Una coloración rojiza o marrón generalmente es debida a presencia
de eritrocitos (hemoglobina).
Comprobar si la licuefacción es completa. Si no es así (partículas de
gel o filamentos mucosos), poner el espécimen de nuevo en el
incubador durante algunos minutos (el examen debe empezar en
cualquier caso en el intervalo de 60 minutos después de la
eyaculación;
Si el olor de la muestra difiere claramente de la mayoría de las
muestras, también se anotará en la hoja de trabajo.
La viscosidad de la muestra se evalúa estimando la rapidez con
que sale de la pipeta. Llenar una pipeta con semen (p.ej. una pipeta
de 5 mL. Si el volumen no se mide por peso, la pipeta usada para
medir el volumen puede servir) y dejar que el semen se vacíe de
nuevo en el contenedor. Si las gotas forman “filamentos” cuya
longitud es >2 cm, anotar “viscosidad aumentada” en la hoja de
trabajo.

Preparación en fresco
Examen de la preparación en fresco:
Colocar 6 µL de semen bien mezclado sobre un portaobjetos limpio
y poner un cubreobjetos encima (18x18 mm, #1.5; si se usa un
cubreobjetos de 22x22, el volumen del semen en el portaobjetos
será de 10 µL). Esto confiere a la preparación una profundidad de
~20 µm. El examen de esta preparación en fresco ha de empezar
tan pronto como cesa el “flujo” en la preparación.
Si el desplazamiento no se ha detenido después de 60 s, hay que
descartar la preparación y realizar una nueva. Es necesaria una
óptica con contraste de fases. Si se encuentra una media de <1
espermatozoide por campo de visión (objetivo 40x con ocular de
campo amplio), la muestra debe ser tratada como sospechosa de
azoospermia.
Para detalles y determinación de la movilidad en monitor de vídeo,
Azoospermia u oligozoospermia severa: Si hay muy pocos o ningún
espermatozoide en la preparación en fresco debe anotarse *
(asterisco) en la hoja de trabajo y, como texto libre, anotar cuantos
espermatozoides móviles e inmóviles se han observado en la
preparación en fresco. Si se encuentran pocos o ningún
espermatozoide móvil en la preparación en fresco hay que
centrifugar la muestra a 1000 g por lo menos durante 15 min. y
examinar el sedimento nuevamente al microscopio (objetivo 40x,
óptica de contraste de fases).
Si se pueden identificar espermatozoides móviles o inmóviles
después de examinar toda la superficie del cubreobjetos (al menos
400 campos en un cubreobjetos de 22x22 mm), se anotarán en la
hoja de trabajo el número de espermatozoides y su movilidad.

Evaluación de la movilidad espermática:

La primera función espermática que hay que evaluar en la
preparación en fresco es la movilidad.
Se debe empezar inmediatamente para evitar la caída de la
temperatura o la deshidratación de la preparación.
. Agregación espermática y aglutinación espermática:
La agregación o aglutinación espermática se determina en 10
campos escogidos al azar, lejos de los bordes del cubreobjetos.
Se realiza una estimación del porcentaje promedio (estimado al 5%
más próximo) de espermatozoides atrapados en grupos.
Aglutinación significa que los espermatozoides se adhieren entre sí,
sin otras células o detritus.
Los anticuerpos antiespermáticos polivalentes causan aglutinación
espermática. Si los grupos son muy grandes, puede ser difícil
determinar si los patrones de unión son específicos (p.ej. cabeza-
cabeza o cola-cola). Si hay células, detritus y espermatozoides
inmóviles incluidos, el aglomerado está probablemente causado por
agregación.
Análisis del semen:
visiones generales están producidas por anticuerpos
antiespermáticos y a menudo contienen una cierta proporción de
espermatozoides móviles, mientras que los agregados
habitualmente contienen sólo espermatozoides muertos.
Los pequeños agregados de espermatozoides muertos y otros
materiales se encuentran con frecuencia en semen de hombres
normales, mientras son anormales los grandes agregados, a
menudo conteniendo centenares de espermatozoides.
Cuando la presencia de agregados o aglutinaciones espermáticas
está claramente aumentada, debe anotarse en forma de comentario
libre en el informe.
Otras células y detritus:
Otras células y detritus que pueden encontrarse en el semen se
evalúan en varios campos y los hallazgos inusuales se expresan
como comentarios libres en el informe mediante diversas
expresiones estandarizadas:
• Ausencia de detritus es una situación muy rara, algún grado de
detritus es típico, pero una contaminación moderada con detritus no
es necesariamente anormal. Mayores cantidades de detritus son,
sin embargo, anormales. Tener cuidado de diferenciar entre
partículas acelulares y bacterias.
• Los glóbulos rojos (eritrocitos) no deben encontrarse en el semen,
aunque pueden encontrase unos pocos sin que ello indique
patología.
• Las células epiteliales (escamosas, cúbicas y transicionales) son
habituales en pequeño número en el semen. Su aumento no está
relacionado con ninguna alteración funcional específica o presencia
de infección.
• Las “células redondas” se observan a menudo en el semen y es
importante diferenciar los leucocitos de los gametos inmaduros o
grandes fragmentos celulares (habitualmente sin núcleo) con
citoplasma exfoliado del túbulo seminífero del testículo.
También, las células de origen prostático tienen un aspecto
redondeado en el eyaculado. Si hay >1x106células redondas/mL,
contadas en la cámara de Neubauer (al mismo tiempo que se
realiza la concentración espermática), debe realizarse la detección
de leucocitos mediante un método específico para identificar la
presencia de “células inflamatorias”.

CONCENTRACION ESPERMÁTICA
La concentración de espermatozoides (106/Ml semen), se calcula
dividiendo el número de espermatozoides contados en la cámara de
recuento por un factor que depende de la dilución y del número de
cuadros contados. El número total de espermatozoides
(106/eyaculado) es el producto del volumen de eyaculado y de la
concentración espermática.
Determinación de la dilución adecuada
En una preparación en fresco se estima la concentración y se
selecciona la dilución más apropiada.
Con el método recomendado para realizar la preparación en fresco
(6 µL semen, cubre 18x18 mm, “grosor” # 1.5), la profundidad del
volumen de muestra, observada en un campo de visión, es
aproximadamente de 20 µm.
Teniendo en cuenta que el diámetro estimado del campo de visión
es de 500 µm, el número estimado de espermatozoides observados
por campo de visión, se puede utilizar para elegir la dilución más
apropiada de la muestra. El área exacta del campo microscópico se
puede calcular con un micrómetro, usando para ello un portaobjetos
de microscopio con una escala graduada.
En los microscopios más antiguos, el diámetro del campo puede
ser bastante más pequeño y por ello, se observan menos
espermatozoides por campo de visión (por ejemplo, si el diámetro
es 250 µm, un espermatozoide por campo de visión corresponde a
1x106espermatozoides/mL, así el “espermatozoide por campo de
visión” observado en el microscopio debe multiplicarse por cuatro.
Las diluciones estándar son 1 + 19 y 1 + 9; para preparaciones de
swim upcon <10x106/mL, debería usarse una dilución 1 + 1.
Cuando se sospecha azoospermia, se debe examinar el sedimento
(después de la centrifugación) para determinar la presencia de
espermatozoides móviles e inmóviles en dicho sedimento.
Las diluciones pueden ser conservadas por un máximo de cuatro
semanas en viales a 4ºC, pero deberían ser evaluadas
preferentemente el mismo día.
Los problemas que pueden aparecer por el almacenamiento
prolongado son las agregaciones de espermatozoides y la adhesión
de los espermatozoides a las paredes del vial.
Procedimiento
1. Para todas las muestras de semen, preparar una dilución según
la Tabla I. El volumen exacto de semen licuado se toma de la
muestra de semen bien mezclada con una pipeta de
desplazamiento positivo y se añade al diluyente en un tubo con
tapón hermético.
2. Montar el cubreobjetos (éste debe ser un cubreobjetos grueso,
especial para hemocitómetros, para conseguir la profundidad
correcta) sobre la cámara de recuento (hemocitómetro de Neubauer
mejorado). Los patrones de interferencia (>10 anillos de
Newton/bordes o líneas iridiscentes) deberían verse entre las
superficies de cristal de los dos lados donde el cristal del
cubreobjetos se sujeta a la superficie de la cámara de Neubauer.
Si se observan pocas líneas, la distancia entre el cristal del
cubreobjetos y la superficie de la cámara Neubauer está
aumentada, por lo que el volumen de la cámara es mayor y el
resultado de la evaluación será incorrecto.
3. Los tubos que contienen la muestra diluida deberán mezclarse,
al menos 10 segundos (en un agitador vortex), inmediatamente
antes de rellenar cada cámara del hemocitómetro. Después de
mezclar, se toma una alícuota de ~ 6-10 µL con una pipeta y se
rellena una cámara del hemocitómetro de Neubauer mejorado.
El volumen exacto depende del volumen necesario para cubrir
adecuadamente el área.
Una cámara del hemocitómetro de Neubauer mejorado consta de
25 “cuadros grandes” Cada cuadro “grande” está rodeado de líneas
triples y contiene 16 cuadros pequeños. Estos cuadros pequeños
pueden usarse cuando hay demasiados espermatozoides para
contarlos en un cuadro grande.
Con un objetivo de 40x, únicamente se puede observar un cuadro
grande en el mismo campo de visión. Cada cámara de recuento (25
cuadros grandes) mide 1 x 1 mm y tiene una profundidad de 0,1 mm
(100 µm). Así el volumen total en una cámara es 0,1 mm3= 0,1
µL= 100 nL. (Una cámara de Makler también mide 1 x 1 mm, pero
tiene una profundidad de únicamente 0,01 mm. Así el volumen total
en una cámara de Makler es un décimo de la Neubauer = 0,01 µL=
10 nL).
Concentración espermática cubreobjetos. Después, se toma una
segunda alícuota para la otra cámara del hemocitómetro. Cada
cámara deberá rellenarse completamente.
Sin embargo, si se llena en exceso se debe descartar y rellenar una
nueva. No se debe eliminar el volumen sobrante de la cámara, ya
que se puede alterar la concentración de espermatozoides en ella.
Posteriormente se comparan los recuentos de las dos alícuotas.
4. Dejar el hemocitómetro reposar durante 10-15 minutos en una
cámara húmeda, para permitir a los espermatozoides sedimentar en
la cuadrícula. 5. Contar los espermatozoides con un objetivo de 20-
40x (contraste de fase) según el siguiente criterio: un “cuadro
grande” en una cámara de Neubauer está limitado, en todos los
lados, por líneas triples.
Para definir cada cuadro grande, deben usarse como límite las
líneas situadas más arriba y más a la izquierda. Hay que tener en
cuenta que se necesita un objetivo de 40x con una distancia de
trabajo grande cuando usamos una cámara de Neubauer.
• Determinar el número de cuadros que se deben contar.
Primero, contar el número de espermatozoides en el cuadro
superior de la esquina izquierda. Si hay < 10 espermatozoides,
contar toda la cuadrícula (25 cuadros en cada cámara). Para 10-40
espermatozoides, contar 10 cuadros en cada cámara. Para > 40
espermatozoides, contar 5 cuadros en cada cámara (por ejemplo,
las cuatro esquinas y el centro).
El objetivo es contar 200 espermatozoides en cada cámara y que
este número sea suficiente para comparar los dos recuentos.
• Si se observa con claridad una cabeza de espermatozoide, se
recomienda que sea incluida en el recuento de espermatozoides.
Las “cabezas de alfiler” deberán contarse aparte y ser comentadas
en el informe. No deben contarse células germinales inmaduras
(serán valoradas en el recuento diferencial de la morfología), no
obstante, las células redondas y las células inflamatorias deberían
contarse independientemente en el hemocitómetro.
• “Células en el borde de línea”: únicamente los espermatozoides
cuya cabeza esté localizada sobre las líneas limitantes más
superiores o izquierdas deberán contarse como “pertenecientes” al
cuadro. De este modo, no se contarán los espermatozoides
localizados en las líneas limitantes más inferiores o derechas.

MOVILIDAD ESPERMÁTICA

La movilidad espermática se determinará contando todos los

espermatozoides móviles e inmóviles en varios campos, elegidos de
forma aleatoria, evitando los campos cercanos a los extremos del
cubreobjetos, utilizando un objetivo de 40x. Si más del 25% de los
espermatozoides se encuentran agregados, la valoración de la
movilidad se realizará sólo con espermatozoides libres, haciendo
constar en el informe este inconveniente. Las cabezas sueltas, “sin
flagelo” no deben contarse.

Procedimiento
Preparación en fresco Disponer 6 µL de semen mezclado sin diluir
a 37ºC en un portaobjetos limpio y atemperado, (37ºC), y cubrir con
un cubreobjetos de 18x18 mm y # 1,5 de grosor. Esto proporciona
una profundidad a la preparación de ∼20 µm. El examen de esta
“preparación en fresco” debe realizarse tan pronto como haya
cesado el desplazamiento de los espermatozoides.
Si éste permanece tras 60s debe prepararse y examinarse una
nueva alícuota. Si el cubreobjetos es de 22x22 mm, el volumen
debe ser de 10µLpara obtener una profundidad de ∼20 µm.
Recuento
Se clasificarán al menos 200 espermatozoides por duplicado, es
decir al menos 400 espermatozoides en total,
Se han de contar en al menos cinco campos para cada valoración.
En cada campo se deben contar todos los espermatozoides
progresivos rápidos, (clase a de la OMS) y los espermatozoides
progresivos lentos, (clase b de la OMS). Se debe ser cuidadoso en
contar todas, y solamente, las células que están presentes en el
mismo campo al mismo tiempo.
Nota: Si el número de espermatozoides móviles progresivos en el
campo es muy elevado, debe utilizarse una parte más pequeña del
mismo; es de gran ayuda una retícula en el ocular.
Cuando se han contado todos los espermatozoides progresivos,
contar en el mismo campo los espermatozoides no progresivos,
(clase c de la OMS) y los espermatozoides inmóviles, (clase d de la
OMS).
Las cuatro categorías se expresan como porcentajes (rápido, lento,
no progresivo e inmóviles).
Es importante el recuento por duplicado para detectar y minimizar
los errores aleatorios debidos a la variación obtenida al realizar
alícuotas de la muestra de semen y a la valoración de la 15 ESHRE.
Por tanto, la observación de la movilidad espermática debe
repetirse en una segunda alícuota preparada de la misma forma.
Deben calcularse las medias de los dos recuentos y dar ésta como
resultado. Si las diferencias entre los dos recuentos de movilidad
son demasiado elevadas, se ha detectado un error al azar y se
deben realizar dos nuevas valoraciones.

VITALIDAD ESPERMÁTICA

Principios básicos:
Una célula con la membrana celular intacta no se tiñe con eosina
Y, mientras que una célula muerta, p.ej. con la membrana celular
dañada, absorbe el colorante rojo. La nigrosina se utiliza como
tinción de fondo para contrastar las células vivas sin teñir, blancas.

Procedimiento
1. Mezclar una gota, 50 µL, de semen licuado, bien mezclado y sin
diluir con una gota, 50 µL, de eosina-nigrosina, p.ej. en un platillo de
porcelana, e incubar durante 30 segundos.
2. Poner 12-15 µL de la solución en un portaobjetos limpio y hacer
la extensión. La gota se extiende deslizando un cubreobjetos
delante de la gota. Pueden prepararse dos extensiones
simultáneamente colocando 20-30 µL entre dos portaobjetos y
separándolos a continuación. No deben realizarse las extensiones
demasiado gruesas porque el color de fondo podría ser demasiado
oscuro y cubrir los espermatozoides.
3. Dejar secar al aire y examinar directamente, o montar el mismo
día y examinar cuando la preparación montada se haya secado,
p.ej. dejándola durante la noche. Los portaobjetos montados se
conservan a temperatura ambiente.
4. Valorar al menos 200 espermatozoides a una magnificación de
1000x, o 1250x, usando un objetivo de alta calidad 100x sin
contraste de fases en aceite de inmersión y con un correcto ajuste
de campo claro, iluminación Köhler. Dado que este método diluye a
la mitad la muestra de semen, es necesario tener paciencia para
encontrar 200 espermatozoides en muestras con baja
concentración. Los espermatozoides blancos, sin teñir, se clasifican
como “vivos”, y los que poseen alguna coloración rosa o roja se
clasifican como “muertos”.
5. La OMS no especifica recuento duplicado para la valoración de la
vitalidad, pero si se hace, la comparación se deberá realizar igual
que en la movilidad o la morfología.
Morfología espermática
Principios básicos La morfología vista con el microscopio no es la
verdadera morfología del espermatozoide vivo, sino una imagen
creada por nosotros. Esta imagen abarca una serie de factores:
espermiogénesis, transporte espermático, maduración y
envejecimiento, tiempo en el plasma seminal, técnica de extensión,
fijación, tinción, montaje y la óptica e iluminación usadas (calidad
del microscopio). Los criterios de clasificación son solo el paso final
por el cual describimos la imagen creada durante la preparación.
Usando métodos estandarizados y controlados, podemos minimizar
las fuentes de error dependientes de la técnica y centrar nuestros
esfuerzos en la clasificación de las variaciones de la morfología
espermática.
Es de gran importancia que las preparaciones (extensión y tinción)
sean de alta calidad ya que, incluso pequeños artefactos
dependientes de la técnica influyen en el aspecto del
espermatozoide. Aunque el espermatozoide humano muestra
grandes variaciones en su morfología, las observaciones de
espermatozoides obtenidos de moco cervical post coital han
ayudado a definir la morfología del espermatozoide ideal.
Presumiblemente, el espermatozoide que fecundará es
seleccionado entre estos espermatozoides ideales.
La tinción de Papanicolau (hematoxilina, naranja G6 (OG6 ) y
EA50) proporciona una clara diferencia entre constituyentes
celulares basófilos y acidófilos, permitiendo así, un examen
detallado del patrón de cromatina lo cual es de utilidad para el
estudio de la presencia de formas inmaduras.
La tinción del citoplasma puede variar entre rojo y verde
dependiendo de la fuerza iónica, el pH y la composición del espacio
celular y del colorante (OG6 y EA50).
Tinción nuclear
Hay muchas hematoxilinas dependiendo del grado de oxidación de
la hematoxilina y del tipo de mordiente utilizado (el reactivo que
facilita la unión del colorante a las estructuras celulares). La
hematoxilina por sí sola es incolora. Es la forma oxidada, hematina,
la que da el color. El color de la hematina depende del pH. En
medio ácido es roja mientras que en medio alcalino es azul.
Consecuentemente, el pH durante la tinción afecta al resultado final.
La oxidación espontánea de la hematoxilina a hematina tarda
semanas en producirse. Por ello la hematoxilina es oxidada
artificialmente añadiendo un agente oxidante; normalmente yodato
sódico u óxido mercúrico. La mayoría de las hematoxilinas
comercialmente disponibles están oxidadas artificialmente y
contienen una mezcla de hematoxilina y hematina.
Puede producirse una sobre oxidación transformándose la hematina
en oxihematina incolora.
Esto explica la atenuación espontánea del color que se observa en
tinciones almacenadas durante largos períodos de tiempo (años).
La hematoxilina y la hematina tienen una carga positiva débil por lo
que es necesario el uso de mordientes que se comportan como
reactivos de unión, ligando la hematoxilina a la célula.
El tipo de mordiente tiene también efecto sobre el color de la célula
teñida.
Los mordientes son compuestos metálicos que se unen
simultáneamente a la hematoxilina y a los componentes tisulares
cargados negativamente, normalmente residuos de ácido fosfórico
del DNA, aunque también a grupos carboxilo. El sulfato de amonio-
aluminio es el más usado y es un componente de las hematoxilinas
de Harris (la habitual en la tinción de Papanicolau). Se conservan
durante años si se guardan en oscuridad. Sin embargo la intensidad
del color va disminuyendo después de un almacenamiento
prolongado, tal como se ha explicado previamente.
Tinción citoplasmática
Se realiza con el naranja G6 (OG6), que es una solución ácida que
permite la unión del OG6 a las proteínas citoplasmáticas cargadas
negativamente.
Tinción citoplasmática y nucleolar El EA50 es una mezcla
policromática de colorantes: verde claro (SF amarillento), eosina Y y
marrón Bismarck Y.
El verde claro y la eosina son colorantes ácidos: el verde claro se
une a las cadenas laterales de la proteínas básicas. La eosina es
una xantina cargada negativamente en soluciones acuosas y que
tiñe los componentes citoplasmáticos, los nucleolos (ausentes en el
espermatozoide) y los cilios. Su absorción máxima es a 515-520
nm.

Consideraciones para la evaluación de la morfología

espermática

Cada espermatozoide sin “defectos” morfológicos es definido como

ideal. Todas las desviaciones de la morfología ideal son clasificadas
como defectos. La presencia de defectos en cada región del
espermatozoide se expresa como “defectos por 100
espermatozoides” para esa región. Un espermatozoide con un
defecto en la cabeza, en la pieza intermedia y en la cola es
registrado como un espermatozoide con tres defectos pero sigue
siendo un único espermatozoide defectuoso. Según esto, el número
total de defectos será mayor al número de células defectuosas.
Sólo se cuentan los espermatozoides completos, con cabeza y
cola. Las cabezas solas se cuentan de forma separada. Si hay
muchas formas “cabeza de alfiler” o colas sueltas (>20% de todos
los espermatozoides) deberá ser anotado aparte. Las células
germinales inmaduras deben ser contadas separadamente, y no
como espermatozoides.
¿Qué es un espermatozoide ideal?
Un espermatozoide maduro ideal, tal como fue adoptado por la
OMS en 1999, tiene una cabeza con forma oval y contorno regular
(4,0-5,0 µm de largo y 2,5-3,5 µm de ancho) con una parte pálida
anterior (acrosoma: 40-70% del área de la cabeza) y una región
más oscura posterior.
La relación largo/ancho de la cabeza debe ser entre 1,5-1,75. La
cola debe estar simétricamente unida a la base de la cabeza. La
base de la cabeza debe ser ancha y no similar a una flecha. Solo
debe haber una cola unida, de aproximadamente 45 µm de largo,
no enrollada, rota ni doblada sobre sí misma. Inmediatamente tras
la cabeza, la primera parte de la cola, la pieza intermedia deberá
ser algo más ancha (1 µm aprox.) y de 7-8 µm de largo.
Una gota citoplasmática normal tiene un contorno liso (no irregular),
aparece en la base de la cabeza y su tamaño es inferior a un tercio
de una cabeza normal.
Todas las formas límite o dudosas deben clasificarse como
defectuosas. Estos criterios se ajustan a los “criterios” estrictos para
formas morfológicamente normales (Menkveld et al, 1990).
Recuento de formas defectuosas
Esta valoración está relacionada con las partes principales del
espermatozoide (cabeza, pieza intermedia y cola). No se realiza
diferenciación entre las diferentes anormalidades. Si predomina una
anormalidad concreta, deberá comentarse en el informe.
Se valoran las siguientes cuatro categorías principales. Defectos de
cabeza Incluyen formas grandes, pequeñas, alargadas (cociente
largo/ancho>2), con forma de pera (piriformes), redondas, amorfas,
vacuoladas (>20% del área de la cabeza ocupada por vacuolas no
teñidas), acrosomas pequeños (<40% del área de la cabeza) o
dobles cabezas, o combinaciones de estos defectos. Los
espermatozoides “cabeza de alfiler” no se cuentan.
Defectos de cuello y de pieza intermedia
Incluyen cola doblada (cuando la pieza intermedia y la cola forman
un ángulo >90º con el eje longitudinal de la cabeza espermática =
originada a partir de un centríolo anormal), con inserción asimétrica,
pieza intermedia ancha, irregular o estrecha (ausencia o
desplazamiento de la vaina mitocondrial) o la combinación de estas
anormalidades.
Defectos de cola
 Incluyen cola corta, doble, horquilla (“hairpin”), rota, doblada
(ángulo >90º), irregular o enrollada, o las combinaciones de estas
anomalías. Las colas sueltas no se cuentan. Una frecuencia alta de
colas enrolladas puede indicar que el espermatozoide ha estado
sometido a estrés hipoosmótico.
La cola enrollada está también relacionada con el envejecimiento
del espermatozoide. Una frecuencia >20% de formas enrolladas
deberá comentarse en el informe.

Gotas citoplasmáticas
Pueden permanecer restos citoplasmáticos sobresaliendo de la
base de la cabeza en el cuello-pieza intermedia.
Las gotas con contorno liso, y un tamaño no superior a la tercera
parte de la cabeza del espermatozoide son clasificadas como
normales.
Si el tamaño de la gota es mayor o el contorno es irregular (teñida
verde o roja), se trata de un residuo citoplasmático anormal y se
clasifica como gota citoplasmática.
Algunos espermatozoides inmaduros pueden tener gotas
citoplasmáticas en otras posiciones a lo largo de la cola.
Defectos específicos
Entre los animales domésticos se han descrito diferentes defectos
esterilizantes en los que prácticamente todos los espermatozoides
producidos por un determinado animal tienen un defecto estructural
específico que perjudica la función espermática.
En los hombres se han descrito pocos casos equivalentes; el más
conocido es probablemente el denominado “defecto de cabeza
redonda” o “globozoospermia”. Este defecto se ha visto en algunos
hombres y afecta a todos los espermatozoides en sus eyaculados.

ANTICUERPOS ANTI-ESPERMATOZOIDE
Principios básicos Los espermatozoides desencadenan una
respuesta inmune al entrar en contacto con el sistema inmunológico
del organismo. Por esto, un trauma, en el aparato genital masculino,
como por ejemplo una vasectomía, o reacciones inflamatorias en el
tracto genital masculino o femenino pueden provocar la producción
de anticuerpos dirigidos contra los espermatozoides. Dependiendo
de la naturaleza y de la localización del antígeno espermático y de
la concentración de anticuerpos, se pueden observar diferentes
efectos:
1. Aglutinación: Se observan en la muestra de semen
aglutinaciones de espermatozoides móviles unidos entre sí.
2. Efecto citotóxico: En presencia de suero (con complemento
activo) los espermatozoides pueden morir. La existencia de
anticuerpos, que ejercen un efecto citotóxico, debe sospecharse si
la movilidad y vitalidad disminuyen rápidamente en una muestra de
semen. Se trata de un fenómeno raro y probablemente necesita
altas concentraciones de anticuerpos.
3. Otros efectos: son la dificultad de paso a través del moco
cervical y la unión y penetración de la zona pelúcida.
Los anticuerpos detectados en la superficie espermática no
siempre van dirigidos hacia los antígenos intrínsecos de los propios
espermatozoides, sino que también pueden ir dirigidos contra
moléculas adheridas, originadas en las glándulas sexuales
accesorias.