UNIVERSIDAD JUÁREZ DEL ESTADO DE

DURANGO
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
INGENIERO EN CIENCIAS DE MATERIALES
ANÁLISIS QUÍMICO DE MATERIALES
DC.MIGUEL ANGEL ESCOBEDO BRETADO
MELISSA DE BELEM GARCIA JARA
MICROSCOPÍA ÓPTICA Y
MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA
MELISSA DE BELEM GARCIA JARA
¿QUE ES LA
MICROSCOPÍA
ÓPTICA Y CUALES
SON SUS
FUNDAMENTOS?
La microscopía es una herramienta esencial en la investigación científica, que nos
permite observar y analizar muestras a un nivel microscópico que es invisible a simple
vista. A lo largo de los años, la microscopía ha experimentado avances significativos en
tecnología y técnicas, lo que resulta en una amplia gama de aplicaciones en diversos
campos científicos.La microscopía juega un papel crucial en diversas disciplinas
científicas, como la biología, la medicina, la ciencia de los materiales y la ingeniería. En
biología, se utiliza para observar estructuras celulares y moleculares, interacciones
entre células y el estudio de procesos biológicos. En medicina, la microscopía se utiliza
para diagnosticar enfermedades y desarrollar tratamientos. La ciencia de los
materiales se basa en la microscopía para investigar las propiedades y características
de los materiales, mientras que la ingeniería la utiliza para el control de calidad, las
pruebas y la inspección de componentes y productos.
 HISTORIA DE LA MICROSCOPÍA ÓPTICA
La historia de la microscopía óptica se
En el siglo 19, los avances en la
remonta al siglo 17 cuando el científico
fabricación de lentes y el desarrollo de la
holandés Antonie van Leeuwenhoek
teoría de difracción de Abbe por Ernst
desarrolló el primer microscopio práctico.
Abbe permitieron la creación de
Leeuwenhoek utilizó un microscopio simple
microscopios de alta resolución. Estos
que consistía en una sola lente para observar
microscopios utilizaron lentes de
organismos microscópicos, incluyendo
inmersión en aceite y sistemas de
bacterias y protozoos. Su trabajo allanó el
iluminación mejorados para lograr un
camino para el desarrollo de microscopios
mayor aumento y resolución.
ópticos más avanzados, incluidos los
microscopios compuestos, que utilizan
múltiples lentes para magnificar objetos.
En el siglo 20, la introducción de la
microscopía electrónica y otras técnicas de
imagen amenazaron con hacer obsoleta la
microscopía óptica. Sin embargo, los
avances en tintes fluorescentes y técnicas
como la microscopía confocal y la
microscopía de súper resolución han
renovado el interés en la microscopía óptica
y han ampliado sus capacidades.

Con la ayuda de la microscopía, los

investigadores pueden visualizar y analizar
muestras con alta resolución y precisión, lo
que les permite hacer nuevos
descubrimientos y avances en sus
respectivos campos.
 APLICACIONES DE LA MICROSCOPÍA
ÓPTICA
La microscopía óptica tiene una amplia gama de aplicaciones en muchas disciplinas
científicas. En biología, la microscopía óptica se utiliza para estudiar células, tejidos y
microorganismos. También se utiliza en la investigación médica y entornos clínicos para
diagnosticar enfermedades y estudiar sus mecanismos. En ciencia de materiales, la
microscopía óptica se utiliza para estudiar la microestructura y las propiedades de los
materiales, incluidos los metales, la cerámica y los polímeros. La microscopía óptica
también se utiliza en la industria de semiconductores para el análisis de defectos, y en la
industria electrónica para la inspección y el análisis de fallas de placas de circuitos
impresos y circuitos integrados.
 TIPOS DE MICROSCOPIOS
Hay varios tipos de microscopios disponibles en la *Microscopios compuestos: Los microscopios
actualidad, cada uno con su conjunto único de compuestos utilizan dos o más lentes para ampliar
capacidades y aplicaciones. Estos son algunos de un objeto. Se utilizan comúnmente en biología y
los tipos de microscopios más utilizados: ciencia de materiales para observar células, tejidos
y microestructuras.
Microscopios ópticos
*Microscopios estéreo: Los microscopios
Los microscopios ópticos utilizan luz visible para estereoscópicos proporcionan una vista
producir imágenes de muestras. Son el tipo de tridimensional de un objeto y se usan comúnmente
microscopio más utilizado y son adecuados para en la disección e inspección de especímenes más
estudiar muestras biológicas, así como algunos grandes, como insectos o productos electrónicos.
materiales.
*Microscopios polarizadores: Los microscopios
Hay varios tipos de microscopios ópticos, cada polarizadores utilizan luz polarizada para observar
uno con sus propias fortalezas y limitaciones. Los la interacción entre la luz y la materia, como la
tipos más comunes de microscopios ópticos birrefringencia de los cristales.
incluyen:
*Microscopios de contraste de fase: Los *Microscopios de superresolución: Los
microscopios de contraste de fase utilizan una microscopios de superresolución utilizan técnicas
placa de fase para crear contraste entre como el agotamiento de emisiones estimuladas
regiones de un objeto con diferentes índices de (STED) y la microscopía de localización de
refracción, como las células vivas. molécula única (SMLM) para superar el límite de
difracción de la luz y lograr imágenes de mayor
*Microscopios de fluorescencia: Los
resolución.
microscopios de fluorescencia utilizan tintes
fluorescentes para etiquetar moléculas o
estructuras específicas en una muestra, lo que
permite obtener imágenes de alta resolución
de los procesos biológicos.

*Microscopios confocales: Los microscopios

confocales utilizan un agujero de alfiler para
eliminar la luz desenfocada, lo que permite
obtener imágenes tridimensionales de alta
resolución de estructuras marcadas con
fluorescencia.
 M
I
C
R
O
S
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Experimento I
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T
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C
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¿QUE ES UN MICROSCOPIO ÓPTICO?
Un microscopio es un instrumento científico diseñado y fabricado para examinar muestras, que
a simple ojo no podemos ver, como bacterias y microorganismos.

El microscopio está diseñado con piezas muy concretas, como pueden ser las lentes de aumentos,
cristales reflectores y objetivos, que tienen la finalidad de aumentar el tamaño de las muestras,
para que el ojo humano sea capaz de verlas.

Aunque veremos los tipos de microscopios que existen, y la utilidad de cada tipo, nos
centraremos en analizar y ver modelos de microscopios basados en el microscopio óptico.

Son los mayormente utilizados en el sector académico y profesional de la biología y la medicina, y

los más asequibles para los que se inician, ya sea con fines de estudios profesionales o como mero
hobby.
P
A
R
T
E
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 PARTES Y FUNCIONES
Las partes del microscopio óptico principales son el pie, tubo, revólver, columna, platina, carro,
tornillo macrométrico y micrométrico, oculares, objetivo, condensador, diafragma y
transformador.
El microscopio óptico es un microscopio basado en lentes ópticos que también es conocido por el
nombre de microscopio de luz o microscopio de campo claro. Puede ser monocular o binocular,
lo que quiere decir que se puede mirar con un ojo o dos.
Con el uso de un microscopio podemos amplificar la imagen de un objeto a través de un sistema
de lentes y fuentes de iluminación. Manipulando el paso de un rayo de luz entre las lentes y el
objeto, podemos conseguir ver la imagen de este amplificada.
Se puede dividir al microscopio en dos partes; el sistema mecánico y el sistema óptico. El
sistema mecánico es la forma en que está construido el microscopio y las piezas en las que van
instaladas las lentes. El sistema óptico es el sistema de las lentes y la forma en que logran
amplificar la imagen.
El microscopio óptico genera una imagen aumentada utilizando varias lentes. En primer lugar, la
lente del objetivo es una ampliación de la imagen real aumentada de la muestra.
Una vez obtenemos esa imagen ampliada, las lentes del ocular forman una imagen virtual
ampliada de la muestra original. Además, necesitamos un punto de luz.
En los microscopios ópticos hay una fuente de luz y un condensador que la focaliza en la muestra.
Cuando la luz ha atravesado la muestra, las lentes se encargan de aumentar la imagen.

SISTEMA MECÁNICO
El pie o base El tubo
Constituye la base del microscopio y su Tiene forma cilíndrica y por dentro es de
apoyo principal, puede tener distintas color negro para evitar las molestias del
formas, siendo las más habituales reflejo de la luz. Al final del tubo es
rectangulares y con forma de Y. donde se colocan los oculares.
El revólver La platina
Es una pieza giratoria en la que se enroscan los La platina es la pieza metálica plana en la que se
objetivos. Cuando giramos este dispositivo, los coloca la muestra a observar. Tiene un orificio en el
objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan eje óptico del tubo que permite que pase el rayo de
en posición de trabajo. Se le llama revólver por luz en dirección a la muestra.
el ruido que hace el piñón al encajar en un La platina puede ser fija o giratoria. Si es giratoria,
lugar fijo. mediante tornillos puede centrarse o moverse con
La columna o brazo movimientos circulares.
La columna o el brazo, en algunos casos El carro
conocida por asa, es la pieza de la parte Permite mover la muestra con un movimiento
posterior del microscopio. Sujeta al tubo en su ortogonal, hacia delante y atrás, o de derecha a
parte superior y en la parte inferior se acopla al izquierda.
pie del aparato. El tornillo macrométrico
El carro El dispositivo enganchado a este tornillo hace que el
Permite mover la muestra con un movimiento tubo del microscopio se deslice verticalmente gracias
ortogonal, hacia delante y atrás, o de derecha a a un sistema de cremallera. Estos movimientos
izquierda. permiten que se enfoque rápidamente la preparación.
El tornillo micrométrico
Este mecanismo ayuda a enfocar la muestra con un enfoque exacto y nítido a través del movimiento
casi imperceptible de la platina. Los movimientos son a través de un tambor que tiene divisiones de
0,001 mm. Y que también sirve para medir el grosor de los objetos acoplados.

PARTES DEL SISTEMA ÓPTICO

Oculares
Son los sistemas de lentes más cercanos a la mira del observador. Son cilindros huecos en la parte
superior del microscopio provistos de lentes convergentes.
Dependiendo de si existe uno o dos oculares, los microscopios pueden ser monoculares o binoculares.
Objetivos
Son las lentes que se regulan mediante el revólver. Son un sistema de lentes convergentes en las que se
pueden acoplar varios objetivos.
El acople de los objetivos se realiza de forma creciente según sus aumentos en el sentido de las agujas
del reloj.
Los objetivos llevan su aumento en un lateral y también están distinguidos por un anillo coloreado.
Algunos de los objetivos no enfocan la preparación en el aire y necesitan utilizarse con aceite de
inmersión.
Condensador Diafragma
Es un sistema de lentes convergentes que capta También conocido como iris, se encuentra sobre el
los rayos de luz y los concentra en la muestra reflector de la luz. A través de este se puede
proporcionando mayor o menor contraste. regular la intensidad de la luz abriéndolo o
Tiene un regulador para ajustar la condensación a cerrándolo.
través de un tornillo. La localización de este
tornillo puede variar dependiendo del modelo de
microscopio.
Fuentes de iluminación
La iluminación está constituida por una lámpara
halógena. Dependiendo del tamaño del
microscopio puede tener mayor o menor voltaje.
Los microscopios pequeños más utilizados en
laboratorios tienen un voltaje de 12 V. Esta
iluminación se encuentra en la base del
microscopio. La luz sale de la bombilla y pasa a un
reflector que envía los rayos en dirección a la
platina.
Transformador
Este transformador es necesario para enchufar el microscopio a la corriente eléctrica, ya que
la potencia de la bombilla es menor que la corriente eléctrica.
Algunos de los transformadores también cuentan con un potenciómetro que sirve para
regular la intensidad de la luz que pasa por el microscopio.
Todas las partes del sistema óptico de los microscopios están formadas por lentes corregidas
para las aberraciones cromáticas y esféricas.
Las aberraciones cromáticas se deben a que la luz está compuesta por radiaciones que sufren
una desviación desigual.
Para que no se cambien los colores de la muestra se utilizan lentes acromáticas. Y la
aberración esférica se da porque los rayos que pasan por el extremo convergen en un punto
más cercano, por eso se pone un diafragma para permitir el paso a los rayos en el centro.
¿QUE ES LA
MICROSCOPÍA
ELECTRÓNICA Y
CUALES SON SUS
FUNDAMENTOS?
 HISTORIA DE LA MICROSCOPÍA
ELECTRÓNICA
Debido al limitado poder de resolución del microscopio óptico, se probaron varias fuentes de
iluminación tales como rayos X de muy pequeña longitud de onda (0,5 nrn) sin tener éxito ya que no
pudieron enfocar estos rayos. Sin embargo, las investigaciones que comenzaron en 1923 sobre
difracción electrónica, sentaron las bases para la construcción del primer microscopio electrónico.
Cuando los electrones son acelerados mediante una diferencia de potencial 1,23 de V volt., tienen la
longitud de onda h igual a . Así pues un electrón VTGLT de 50 Kv.
tiene h = 0,0055 nlm.
Si sustituimos este valor en la fórmula de la resolución
R = A obtendremos
R = 0,27 nm.
Esta resolución es 1.000 2 N.
A. veces mayor que la de la luz blanca utilizada para la iluminación en el microscopio óptico. Se puede
conseguir poder de resolución hasta 0,l nm (1 A) con los nuevos diseños del microscopio electrónico.
La tabla núm. 1 resume las unidades de longitud utilizadas en el microscopio.
TIPOS DE MICROSCOPIOS ELECTRONICOS
Microscopios electrónicos

Los microscopios electrónicos utilizan un haz de electrones en lugar de luz para ampliar las
muestras. Proporcionan mayor aumento y resolución que los microscopios ópticos y se utilizan
para estudiar materiales, muestras biológicas y microorganismos.

Los microscopios electrónicos de transmisión (TEM) son el tipo de microscopio electrónico

más utilizado. Utilizan un haz de electrones de alta energía para pasar a través de muestras
delgadas, produciendo una imagen de alta resolución. TEM se utiliza para estudiar muestras
biológicas, materiales y superficies. Proporciona información detallada sobre la estructura
interna de las muestras, incluida su estructura cristalina, morfología y composición química.

TEM es ampliamente utilizado en la ciencia de los materiales para estudiar las propiedades de
los materiales y su microestructura. También se puede utilizar para estudiar la estructura y
función de proteínas y ácidos nucleicos en muestras biológicas.
Los microscopios electrónicos de barrido (SEM) utilizan un haz enfocado de electrones para
escanear la superficie de una muestra, produciendo una imagen 3D. SEM se utiliza para
estudiar la topografía superficial y la morfología de las muestras, proporcionando información
detallada sobre su estructura y propiedades. SEM es ampliamente utilizado en ciencia de
materiales, geología y biología.

En ciencia de materiales, SEM se utiliza para estudiar la microestructura de los materiales y

sus defectos. También se puede utilizar para analizar la composición de la superficie y las
propiedades de los materiales, como su adhesión, rugosidad y conductividad eléctrica.

En biología, SEM se utiliza para estudiar la morfología de la superficie y la ultraestructura de

células y tejidos. También se puede utilizar para analizar la estructura de virus y otros
microorganismos.
Microscopio electrónico de transmisión de barrido (STEM):

STEM combina las capacidades de TEM y SEM, lo que permite a los investigadores estudiar la
estructura interna y superficial de las muestras. Utiliza un haz enfocado de electrones para
escanear la superficie de una muestra, produciendo una imagen de alta resolución. STEM se
utiliza en ciencia de materiales, biología y nanotecnología.

En ciencia de materiales, STEM se utiliza para estudiar la estructura atómica de los materiales
y sus propiedades, incluida su estructura electrónica, defectos e interfaces. También se puede
utilizar para analizar la microestructura y composición de materiales a nanoescala.

En biología, STEM se utiliza para estudiar la estructura y función de las proteínas y otras
macromoléculas biológicas. También se puede utilizar para analizar la estructura interna de
células y tejidos.
Microscopio electrónico de reflexión (REM):

REM utiliza un haz de electrones de alta energía para reflejar la superficie de una muestra,
produciendo una imagen de alta resolución. REM se utiliza para estudiar la estructura
superficial y las propiedades de las muestras, incluida su estructura cristalina y morfología. Es
ampliamente utilizado en ciencia de materiales, ciencia de superficies y física del estado sólido.

En ciencia de materiales, REM se utiliza para estudiar las propiedades de la superficie y la

topografía de los materiales, incluida su estructura cristalina, defectos y estructura electrónica.
También se puede utilizar para analizar la estructura y las propiedades de películas delgadas y
recubrimientos.
PARTES DEL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO
 OBJETIVO
El objetivo es la lente más importante en el microscopio electrónico. La distancia focal de esta
lente está comprendida entre 1 y 5 milímetros, siendo 1,l mm la más frecuente\. Cuanto menor
0s la distancia focal, mayor es la resolución. Debido a que el haz de imagen tiene la máxima
apertura angular en el primer objetivo, esta lente controla la calidad de la imagen producida.
Se puede corregir la aberración esférica usando un "stigmate", que es un dispositivo que
permite ,introducir metal para compensar la inhomogeneidad inherente de la lente, y o~btener
elevada resolución. Otro accesorio importante, permite regular la apertura del objetivo, la cual
limita la dispersión de los electrones, evitando así la degradación de la imagen. Esta apertura
mejora el contraste siendo 20 y 40 micrómetros (pm) los más frecuentes.
 PARTES
*Lente intermedia: puede aumentar o *Cámara de observación: La cámara de observación y la
disminuir la imagen. Se puede conseguir pantalla fluorescente están situadas en el fondo de la
esto, aumentando o disminuyendo la cohma. La imagen se enfoca sobre un punto marcado y
potencia de la corriente a esta lente. el enfoque fino se consigue con unos binoculares de 6 y
20 X. El diámetro del punto de enfoque es de 100 ,pm,
*Lente de proyección :corresponde al ocular por 10 tanto la imagen debe ser mayor que [este
del microscopio óptico. Su función es la de diámetro para ser resuelta. La cámara de observación
proyectar la imagen real sobre la pantalla está protegida por un vidrio grueso de plomo para evitar
fluorescente, y permite una amplia gama de la emisión de rayos X.
aumentos. Se puede variar la ampliación de
100 X hasta 300.000 X usando lentes *Cámara fotográfica :está situada debajo de la pantalla
intermedias y de proyección. fluorescente. La pantalla fluorescente está sujetada por
m lado, y al quitar el paso del haz electrónico la imagen
se centra sobre la película fotográfica. Se pueden usar
varios tipos de películas y placas de vidrio.